专利名称：一种复合微生物菌剂及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种复合微生物菌剂及其用途，属于应用微生物领域。
背景技术：
近年来，我国大豆种植业有了长足的发展，并刺激了大豆加工业的迅猛发展。豆渣是大豆加工业的主要副产物，是指做豆腐、豆奶等豆制品的下脚料，其营养成分高于众多糟渣，粗蛋白含量高，干豆渣含粗蛋白质27. 7%，比稻谷多3倍，是猪、鸡、鸭等的好饲料。长期以来，豆渣由于口感差、不耐贮藏等特点，目前豆渣尚未得到充分的开发和利用，豆渣大部分作为废料弃掉，资源浪费极大，同时又造成环境污染。由于豆渣的本身含水量大，且营养丰富，是微生物的良好栖身地，极易腐败，加工要及时，必须在生产过程中直接加工成食品或干燥后才能保存运输，因干燥处理费用大，或干燥后作为原料还没有很好的销路，这严重阻碍了豆渣的综合利用，造成了资源的白白浪费。另外，豆渣不宜直接作为饲料。数据表明，豆渣营养成分非常丰富，纤维素含量约占豆渣干物质的一半。因此，豆渣中的主要成分为膳食纤维，单纯用豆腐渣喂猪，则容易引起猪的消化不良。此外，鲜豆腐渣含粗蛋白质4. 7%，干豆腐渣含粗蛋白质27. 7%，比稻谷多 3倍。但如果单纯用豆腐渣喂猪，同样容易引起猪的消化不良。豆腐渣营养不全，缺乏维生素，矿物质含量也很少，不能满足生猪生长发育需要。经过饲料发酵助剂的微生物发酵处理，生产微生物菌体蛋白饲料，豆渣中蛋白质能够得到有效降解，从而使豆渣中氨基酸态氮的含量得以大量提高，并使豆渣异味、口感、 颗粒细度、营养等方面得到改善，这是一种有效利用豆渣的方法。
发明内容
本发明提供了一种复合微生物菌剂，该菌剂由质量百分比40%_60%的枯草芽孢杆 M (.Bacillus仰力ii/is)、质量百分比20-30%的米曲霉Usper^iV^As orj^ae)、质量百分比20-30%的米根霉(胁办印狀仗尺泌)混合制备而成，具体为豆腐制作中产生的豆渣快速发酵提供微生物菌剂，为解决豆渣微生物发酵处理提供了一种快速、高效发酵的复合微生物菌剂。本发明另一目的是将复合微生物菌剂应用在豆腐制作中产生的豆渣快速发酵中。本发明所述复合微生物菌群的制备方法按照以下的步骤进行
(1)培养基的制备称取600g豆渣，加入900 ml水，搅拌2_3分钟，采用2层纱布过滤，收集滤液并加入1.5 g玉米面，并定溶至1000ml，调节pH值至中性，用于制备固
体和液体培养基，制备固体培养基时，添加18 g琼脂，在121°C条件下灭菌20 min，将灭菌后的培养基分装制作平板培养基，待用；制备液体培养基时，将液体培养基每IOOml分装于 250 ml三角瓶中，在121°C条件下灭菌20 min，待用；
(2)枯草芽孢杆菌OfeciBmsubtilis)的制备从枯草芽孢杆菌斜面接一环菌苔至装有100 ml的液体培养基的三角瓶中，置于控温摇床培养，以37 °C培养温度和120 r/min 的转速，培养36 h，收集培养液并采用8000 r/min的条件离心收集枯草芽孢杆菌的菌体；
(3)米曲霉Us/^r^/BMoryzae)的制备将米曲霉斜面上的菌丝接种(1)中制作的平板培养基上，以37 °C培养温度培养7 d，采用无菌水将平板上生成的刨子洗脱、收集，采用8000 r/min的条件离心收集孢子；
(4)米根霉(胁办印狀oryzae^的制备将米根霉斜面上的菌丝接种(1)中制作的平板培养基上，以37 °C培养温度培养7 d，采用无菌水将平板上生成的刨子洗脱、收集，采用 8000 r/min的条件离心收集孢子。(5)将质量百分比40%_60%的枯草芽孢杆菌菌体、质量百分比20-30%的米曲霉孢子和质量百分比20-30%的米根霉孢子混合制得复合微生物菌剂。本发明具有以下优点1)能快速高效发酵豆渣，降解率高，周期短，适宜条件下仅需8-12天左右；2)蛋白质含量提高达20-61% ；3)可实现豆腐制作中产生的豆渣快速发酵， 提供饲料，豆渣大部分作为废料弃掉，资源浪费极大，同时又造成环境污染，通过本发明可以为豆渣的资源化利用提供新方法。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。实施例1 本复合微生物菌剂组成物及质量百分比为40%枯草芽孢杆菌、30%米曲霉、30%米根霉。制备时按以下具体步骤进行
(1)培养基的制备称取600g豆渣，加入900 ml水，搅拌3分钟，采用2层纱布过滤， 收集滤液并加入1.5 g玉米面，并定溶至1000ml，调节pH值至中性，用于制备固体和
液体培养基，制备固体培养基时，添加18 g琼脂，在121°C条件下灭菌20 min，将灭菌后的培养基分装制作平板培养基，待用；制备液体培养基时，将液体培养基每IOOml分装于250 ml三角瓶中，在121°C条件下灭菌20 min，待用；
(2)枯草芽孢杆菌UaciBm·5油iihi)的制备从枯草芽孢杆菌接种至装有100 ml 的液体培养基的三角瓶中，置于控温摇床培养，以37 °C培养温度和120 r/min的转速，培养36 h，收集培养液并采用8000 r/min的条件离心收集枯草芽孢杆菌的菌体；
(3)米曲霉Us/^r^/BMoryzae)的制备将米曲霉接种于步骤(1)中制作的平板培养基上，37 °C培养7 d后，采用无菌水将平板上生成的孢子洗脱、收集，采用8000 r/min的条件离心收集孢子；
(4)米根霉(胁办印狀oryzae)的制备将米根接种于步骤(1)中制作的平板培养基上，37 °C培养7 d后，采用无菌水将平板培养基上生成的孢子洗脱、收集，采用8000 r/min 的条件离心收集孢子；
(5)将质量百分比40%的枯草芽孢杆菌菌体、质量百分比30%的米曲霉孢子和质量百分比30%的米根霉孢子混合制得复合微生物菌剂。本发明中复合微生物菌剂用于发酵豆渣，将菌剂与豆渣按质量比为1 :500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7个菌体，含水率控制在70%，温度控制在35°C范围进行发酵8天，经检测，豆渣中蛋白质含量由17%提高到40%，膳食纤维由49%下降到25%。实施例2 本复合微生物菌剂组成物及质量百分比为45%枯草芽孢杆菌 {Bacillus sub tills )、25% 米曲霉(Aspergillus oryzae )、30% 米根霉{Rhizopus oryzae )。制备方法中培养基和菌种制备方法同实施例1，最后将质量百分比45%的枯草芽孢杆菌菌体、质量百分比25%的米曲霉孢子和质量百分比30%的米根霉孢子混合制得复合微生物菌剂。本实施例中复合微生物菌剂用于发酵豆渣，将菌剂与豆渣按质量比为1:500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7个菌体，含水率控制在75%，温度控制在30°C范围进行发酵10天，经检测，豆渣中蛋白质含量由15%提高到35%，膳食纤维由48%下降到28%。实施例3 本复合微生物菌剂组成物及质量百分比为60 %枯草芽孢杆菌 {Bacillus 仰办ii/is)、20%米曲霉(Aspergillus oryzae)、20%米根霉(Rhizopus oryzae)。制备方法中培养基和菌种制备方法同实施例1，最后将质量百分比60%的枯草芽孢杆菌菌体、质量百分比20%的米曲霉孢子和质量百分比20%的米根霉孢子混合制得复合微生物菌剂。本实施例中复合微生物菌剂用于发酵豆渣，将菌剂与豆渣按质量比为1:500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7个菌体，含水率控制在72%，温度控制在20°C范围进行发酵12天，经检测，豆渣中蛋白质含量由14%提高到61%，膳食纤维由45%下降到四％。实施例4:本复合微生物菌剂组成物及质量百分比为55 %枯草芽孢杆菌 {Bacillus 仰办ii/is)、20%米曲霉(Aspergillus oryzae)、25%米根霉(Rhizopus oryzae)。制备方法中培养基和菌种制备方法同实施例1，最后将质量百分比55%的枯草芽孢杆菌菌体、质量百分比20%的米曲霉孢子和质量百分比25%的米根霉孢子混合制得复合微生物菌剂。本实施例中复合微生物菌剂用于发酵豆渣，将菌剂与豆渣按质量比为1:500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7个菌体，含水率控制在74%，温度控制在25°C范围发酵 10天，经检测，豆渣中蛋白质含量由18%提高到53%，膳食纤维由45%下降到27%。
权利要求
1.一种复合微生物菌剂，其特征在于组成物及质量百分比为40%-60%枯草芽孢杆菌、 20-30%米曲霉、20-30%米根霉。
2.权利要求1所述复合微生物菌剂在发酵豆渣中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种复合微生物菌剂及其用途，具体为豆腐制作中产生的豆渣快速发酵提供微生物菌剂，该复合微生物菌剂由枯草芽孢杆菌菌体(Bacillussubtilis)、米曲霉孢子(Aspergillusoryzae)、米根霉(Rhizopusoryzae)孢子混合组成，能够快速发酵豆腐制作中产生的豆渣。在豆渣发酵中使用该菌剂，其发酵周期短，仅需8-12d，蛋白质含量提高达20-50%，膳食纤维下降到25-30%，且菌剂的制作方法简单，易于实施，单位原料中菌群含量大，活性高。
文档编号C12N1/14GK102424809SQ20111044694
公开日2012年4月25日 申请日期2011年12月28日 优先权日2011年12月28日
发明者周成, 宁平, 马艳华, 黄兆林 申请人:昆明理工大学