专利名称：一种富集鲍曼不动杆菌的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种富集细菌的培养基，特别涉及富集鲍曼不动杆菌的培养基。
背景技术：
鲍曼不动杆菌是一类广泛分布于自然环境和 医院中的非发酵条件致病菌，存在于人体的皮肤、口腔、呼吸道、胃肠道和泌尿道等。由于该菌一般只引起免疫功能下降者生病，因此常被认为是非致病菌或条件致病菌。近年来其导致的感染在不断增多，且耐药性日益严重，已引起临床和微生物学者的严重关注。鲍曼不动杆菌是属于不动杆菌属的一个菌种，它是一种不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的革兰氏阴性杆菌。菌体大小为fl. 5 ^mX I. Slum，无芽胞无鞭毛，需氧，可在普通培养基上生长良好，最适温度37°C，但44°C条件下亦能生长。在血平板上经18 24h的孵育可形成圆形、灰白色、光滑的菌落。而且鲍曼不动杆菌具有复杂的抗原构造，包括菌体抗原以及荚膜抗原，根据抗原的不同可以将鲍曼不动杆菌分为34个血清型。近年来研究发现鲍曼不动杆菌可降解废水中的某些污染物质，具有很高的研究和应用价值。鲍曼不动杆菌的推广和应用，关键在于需要合适的培养基质，采用目前经典的用于富集鲍曼不动杆菌的常规培养基，其平均富集时间为35 45h，周期长。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种富集鲍曼不动杆菌的培养基，用本发明的培养基培养鲍曼不动杆菌，培养速度快，成本低。本发明采用的技术方案是一种富集鲍曼不动杆菌的培养基，由基础培养基、酵母膏和轻基丁二酸(苹果酸)组成；每IOOOml基础培养基加入0. 5g 4. Og的酵母膏和0. 5g
2.Og的羟基丁二酸。优选的，每IOOOml基础培养基加入2. 5g的酵母膏和I. 5g的羟基丁二酸。基础培养基是鲍曼不动杆菌的常用培养基。可以选用现有技术中经常用的，并已公开的鲍曼不动杆菌培养基。利用上述的培养基富集培养鲍曼不动杆菌的方法调节上述培养基的pH至7. 0 7. 2，121 °C灭菌30min，将鲍曼不动杆菌按5%的接种量接种于培养基中，振荡混匀，置于恒温培养箱中于温度30°C下培养。酵母膏对鲍曼不动杆菌的生长量的影响随着酵母膏的浓度的增加而增加，经过28h的光照培养后，当酵母膏的用量为2. 5g/L时(每IOOOml基础培养基加入2. 5g)，其菌体繁殖速度很快，菌液0D_达I. 9，当酵母膏的用量小于2. 5g/L时，菌液0D_小于I. 9。因此，酵母膏的用量以2. 5g/L的酵母膏为宜。羟基丁二酸对鲍曼不动杆菌的生长量的影响，随着羟基丁二酸的浓度的增加而增力口，经过28h的光照培养后，当羟基丁二酸的用量为I. 5g/L (每IOOOml基础培养基加入1.5g)时，其菌体繁殖速度很快，菌液0D_达I. 9，当羟基丁二酸的用量大于1.5g/L时，菌液OD6tltl小于I. 9。因此,轻基丁二酸的用量以1.5g/L为宜。本发明的有益效果是
I.富集培养速度快。由于在基础培养基中加入了酵母膏、羟基丁二酸等营养成分，为鲍曼不动杆菌创造了一个更好的营养条件，使鲍曼不动杆菌生长速度快，培养28h后，培养其OD6tltl达到I. 9左右。2.鲍曼不动杆菌生长期延长，最大生长量提高。随着培养时间的增加，菌液0D_逐渐增加，培养28h时，其0D_为I. 9，比使用基础培养基培养鲍曼不动杆菌时的0D_有所提高，培养30h时，菌液生长量达最高峰，鲍曼不动杆菌的最大值提前了 5 7小时，对其繁殖更有促进作用。
图I是本发明与常规培养基，在培养基富集培养过程中，光密度0D_的变化图。图中，a代表常规培养基，b代表本发明的培养基。
具体实施例方式实施例I
(一)富集鲍曼不动杆菌培养基的配制
基础培养基磷酸氢二钾3. Sg、磷酸二氢钾lg、氯化钠lg、氯化铵0. lg、硫酸镁0. 2g、葡萄糖2g,用蒸懼水配成1000ml。在上述基础培养基中，加入2. 5g酵母膏和I. 5g羟基丁二酸。(二)鲍曼不动杆菌的培养
将上述培养基的PH调至7，121°C灭菌30min。将鲍曼不动杆菌按5%的接种量接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30 °C。富集培养结果恒温培养28h后，菌液0D_为I. 8，恒温培养30h后，达到最大生长量，菌液OD6tltl为I. 9，使鲍曼不动杆菌的最大生长量提前了 6h。实施例2
(一)富集鲍曼不动杆菌培养基的配制
基础培养基磷酸氢二钾3. Sg、磷酸二氢钾lg、氯化钠lg、氯化铵0. lg、硫酸镁0. 2g、葡萄糖2g,用蒸懼水配成1000ml。在上述基础培养基中，加入0. 5g酵母膏和0. 5g羟基丁二酸。(二)鲍曼不动杆菌的培养
将上述培养基的PH调至7，121°C灭菌30min。将鲍曼不动杆菌按5%的接种量接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30 °C。富集培养结果光照培养28h后，菌液0D_为I. 75，光照培养31h后，达到最大生长量，菌液OD6tltl为I. 9，使鲍曼不动杆菌的最大生长量提前了 5h。实施例3
(一)富集鲍曼不动杆菌培养基的配制
基础培养基磷酸氢二钾3. Sg、磷酸二氢钾lg、氯化钠lg、氯化铵0. lg、硫酸镁0. 2g、葡萄糖2g,用蒸懼水配成1000ml。
在上述基础培养基中，加入4. Og酵母膏和2. Og羟基丁二酸。(二)鲍曼不动杆菌的培养
将上述培养基的PH调至7，121°C灭菌30min。将鲍曼不动杆菌按5%的接种量接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中培养，温度30 °C。富集培养结果光照培养28h后，达到最大生长量，菌液0D_为I. 9，使鲍曼不动杆菌的最大生长量提前了 5h 7h。对比例
分别取实施例I本发明的培养基和实施例I中公开的基础培养基，分别调节培养基的pH为7，121°C灭菌30min。将鲍曼不动杆菌按5%的接种量接种于培养基中，振荡混匀，置于恒温培养箱中培养，温度30°C。光照培养55h,测定培养基富集培养过程中光密度OD6tltl变 化(见图I)。从图I可知，使用常规的基础培养基培养鲍曼不动杆菌，36h左右时菌液0D_为
I.5 ;使用本发明培养基培养鲍曼不动杆菌，随着培养时间的增加，菌液OD6tltl逐渐增加，培养30h左右，其0D_为I. 9，本发明的培养基使鲍曼不动杆菌达到最大生长量的时间提前了5h 7h，并且对其繁殖和快速培养更有促进作用。
权利要求
1.一种富集鲍曼不动杆菌的培养基，其特征在于由基础培养基、酵母膏和羟基丁ニ酸组成；姆IOOOml基础培养基中加入0. 5g 4g的酵母膏和0. 5g 2. Og的轻基丁ニ酸。
2.根据权利要求I所述的ー种富集鲍曼不动杆菌的培养基，其特征在于每IOOOml基础培养基加入2. 5g的酵母膏和I. 5g的羟基丁ニ酸。
3.ー种利用权利要求I或2所述的培养基富集培养鲍曼不动杆菌的方法，其特征在于将权利要求I或2所述的培养基的pH调至7. 0 7. 2，121°C灭菌30min，将鲍曼不动杆菌按5%的接种量接种于培养基中，振荡混勻，置于恒温培养箱中于温度30°C下培养。
全文摘要
本发明涉及一种富集鲍曼不动杆菌的培养基。采用的技术方案是一种富集鲍曼不动杆菌的培养基，由基础培养基、酵母膏和羟基丁二酸组成；每1000ml基础培养基加入0.5g～4.0g的酵母膏和0.5g～2.0g的羟基丁二酸。用本发明的培养基培养鲍曼不动杆菌，培养速度快，成本低。弥补了鲍曼不动杆菌生长期过慢等方面的不足之处，提高了生长速率，使达到最大生长量的时间缩短了5~7个小时。
文档编号C12N1/20GK102732461SQ201210195180
公开日2012年10月17日 申请日期2012年6月14日 优先权日2012年6月14日
发明者包坤, 孟雪莲, 徐成斌, 李瑶瑶, 牟安逸, 邵亮, 马溪平 申请人:辽宁大学