专利名称：一种高保水性微生物培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及微生物培养基及其制备方法，尤其涉及一种具有高保水性的微生物培养基及其制备方法。
背景技术：
自德国细菌学家柯霍首次用明胶作为固体培养基凝固剂进行细菌划线开始，凝固剂在细菌培养、分离、鉴定中担当重要的作用。随后各亲水性凝固剂相继被发现，溶于水后膨胀形成粘稠溶液或凝胶，并用于微生物培养基。目前，现有技术中细菌培养基大部分以琼脂为基质，并添加一些细菌生长所需的营养物质，然后在无菌实验室中按照严格的无菌操作程序对细菌进行培养、观察与测定。琼脂是应用最广泛的凝固剂，但其仍存在问题I)凝胶水分容易挥发；2)凝结水积聚在培养皿壁容易形成菌落间污染；3)冰冻易产生结晶或裂开，不利于菌种传代和长期保藏；4)过分开采导致价格昂贵。
高吸水性树脂是一种具有优异的吸水性和保水性的新型功能高分子材料，能吸收自身重量几百倍或数千倍的水而溶胀呈凝胶状，在一定范围的压力下水也不会吸出，吸水后的树脂凝胶物干燥后可以重新恢复其吸水性能，因而在许多领域都有重要的应用。如在医药卫生方面应用于婴儿纸尿布、妇女卫生巾、药物缓释材料等，在工业及建筑业作为油水分离剂、干燥剂、脱臭剂、电缆及隧道建筑的阻水防水等，在农业上用作土壤改良、沙漠绿化、无土栽培介质、抗旱保水、农药化肥缓释、食品及水果保鲜材料等。由于高吸水性树脂具有这些优点，故将其应用于琼脂培养基可以改善其凝胶水分容易挥发；凝结水积聚在培养皿壁容易形成菌落间污染；冰冻易产生结晶或裂开，不利于菌种传代和长期保藏的缺点；以及使成本降低30%。在高吸水性树脂合成的现有技术中，多采用水溶液聚合法和反相悬浮聚合法。反相悬浮聚合法由于需要使用大量的有机溶剂，主要缺点在于合成工艺的复杂，成本的提高，以及对环境的污染。而水溶液聚合的方法无需有机溶剂是一种环保的合成方法，它多采用的是热分解引发剂，因此在聚合反应的过程中会产生大量的热量。如果这些热量来不及散发，特别是在工业生产中，不可避免的会产生爆聚，不仅会造成产品质量的下降甚至报废，而且还容易酿成危险。现有文献中对于高吸水性树脂合成的报道多为一步法，其中对反应体系温度的控制成为一大难点。而本专利依据聚合反应动力学和热力学的规律性，改善高吸水性树脂的合成工艺，将反应过程分成三步，可有效的避免反应过程中爆聚反应的发生，并提闻广品的质量和稳定性。在一些无菌生产车间中，环境微生物的收集一般分为培养皿自然沉降法和利用采样器自动收集法两种方法。在培养皿自然沉降法的实施过程中，培养皿需敞开暴露在空气中，但由于培养皿中的水分会随着敞开时间的延长逐渐丧失，对沉降在培养基上的微生物的生长产生影响，使可生长的微生物数量减少，最终影响实验数据的准确性。在利用采样器自动收集法的实施过程中，由于气流的作用，同样也会带走培养基上的水分，最终也会使培养皿中的水分会逐渐丧失，最终影响实验数据的准确性。
为了解决在微生物收集、培养过程中培养基失水问题，延长微生物的培养时间，我们研发了一种微生物培养基用高吸水性树脂。将其与琼脂培养基进行复合共混，获得了高吸水性树脂与培养基进行复合的新工艺，并对培养基制备工艺进行改进，最终获得了一种高保水性微生物培养基。由此树脂为骨架配得的培养基除了具有和普通培养基一样的微生物生长性和生物相容性，还具有吸水和保水性，以及适合的凝胶强度和透明性
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种凝胶水分不容易挥发；凝结水不易积聚在培养皿壁故而不易形成菌落间污染；冰冻不易产生结晶或裂开，有利于菌种传代和长期保藏的具有高保水性的微生物培养基及其制备方法。为达到上述目的本发明采用的技术方案是
具有高保水性的微生物培养基包括上下两层，下层为含有高吸水性树脂的树脂凝胶层，上层为覆盖在树脂凝胶层上的普通琼脂培养基层；或者仅为一层即含有高吸水性树脂的供水和供营养物质的树脂凝胶层。所述的上层采用的普通琼脂培养基为细菌培养基、放线菌培养基或霉菌培养基 其中，
细菌培养基的组成为
营养肉汤培养基 18g/L 琼脂20g/L
余量为水
放线菌培养基的组成为
可溶性淀粉20g/L
KNO3:lg/L
K2HPO4:O. 5g/L
MgSO4:O. 5g/L
NaCl:0.5g/L
FeSO4:微量
pH :7. 2 7. 4
琼脂6. 67g/L
余量为水
霉菌培养基的组成为
鹿糖30g/L
NaN03:3g/L
MgS04:0. 5g/L
KCl:0.5g/L
FeS04:微量
K2HP04:lg/L
pH:6. 0 6. 5
琼脂6. 67g/L余量为水
所述下层采用的树脂凝胶组成为
高吸水性树脂水 1:300 1:900 或者
营养成分 O. 5 5%
高吸水性树脂O. I O. 9%
水94. I 99. 4%
或者
琼脂粉O. 5 5%
水93. 5 99. 4%
高吸水性树脂 O. I I. 5%
或者
营养成分O. 5 5%
琼脂粉O. 5 5%
水88. 5 98. 9%
高吸水性树脂 O. I I. 5%
所述仅为一层采用树脂凝胶组成为
营养成分O. 5 5%
琼脂粉O. 5 5%
水88. 5 98. 9%
高吸水性树脂 O. I I. 5%
或者
营养成分O. 5 5%
高吸水性树脂 O. I O. 9%
水94. I 99. 4%
所述营养成分为前面述及的各种培养基中除去琼脂和水之后的营养物质的总和。具有高保水性的微生物培养基的制备方法的步骤如下
I)闻吸水性树脂的制备
(1)首先在冰水浴中将与单体质量比为I: (Γι:ι的碱溶解在水中(或者在主要单体为非酸性单体时不加入碱)；然后缓慢滴入单体将其配置成浓度为5 90%的单体溶液(此单体可以是一种，也可以是与主单体质量比为O. 019Tl%的疏水性单体共同组成的共单体)，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与单体质量比为1:1000(Γ :10的交联剂和l:1000(Tl:10的引发剂，将其溶解在溶液中；
(2)将反应容器放入70 90°C的水浴中加热O.5 5min，同时磁力搅拌，或者将反应容器放入微波炉中O. 5 lOmin，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室温；
(3)放入40 80°C烘箱中反应I 6h;
(4)再升高温度至85 140°C，继续反应10 90min，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂；
(5)将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于100 150°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
将质量比为1:300 1:900的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基 ；
或者按质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. I O. 9%的高吸水性树脂和94. I 99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的琼脂粉和93. 5 99. 4%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；
或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. 5 5%的琼脂粉和88. 5 98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；
或者按照质量百分比将O. 5 5%的营养成分、O. 5 5%的琼脂粉和88. 5 98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基；
或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. I O. 9%的树脂和94. I 99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基。所述的普通琼脂培养基为细菌培养基、真菌培养基、放线菌培养基中的一种或几种。所述的单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、N-羟甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、甲基丙烯酸羟基乙酯、甲基丙烯酸-2-羟乙酯、甲基丙烯酸-2-羟丙酯、顺丁烯二酸、N-乙烯基甲酰胺、4-乙烯基吡啶、丙烯酸正丁酯、丙烯酸-2-乙基己酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟丙酯、2-甲基丙烯酸乙酯、2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸、丙烯酸十六酯、丙烯酸十八酯、甲基丙烯酸十八酯中的一种或多种。所述的交联剂为含有两个以上乙烯基的单体或官能度为两个以上的多官能度化合物中的一种或多种；
所述的乙烯基的单体为N，N'-亚甲基双丙烯酰胺、聚乙二醇双马来酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、二缩三乙二醇二丙烯酸酯、二乙(丙)二醇双(甲基)丙烯酸酯、一缩二乙二醇双(甲基)丙烯酸酯及不同分子量聚醚的双丙烯酸酯、聚乙二醇双(甲基)丙烯酸酯、新戊二醇双(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯或1，6-己二醇双(甲基)丙烯酸酯；所述的多官能度化合物为丙二醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、丙三醇、四甘醇、2，2，4-三甲基-1，3-戊二醇、1，2-环己烷、戊二醇、季戊四醇、山梨糖醇、二乙醇胺、三乙醇胺、聚乙二醇、聚丙三醇、聚丙二醇或乙二醇二缩水甘油醚。所述的引发剂为水溶性引发剂，水溶性引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵、过硫酸钠、V-40 或 V-501。
所述的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠或碳酸钠中的一种或多种。本发明将高吸水性树脂运用于微生物培养基的改性，并通过对培养基制备工艺的优化，获得一种高保水性微生物培养基相对于普通培养基可以改善其凝胶水分容易挥发；凝结水积聚在培养皿壁容易形成菌落间污染；冰冻易产生结晶或裂开，不利于菌种传代和长期保藏的缺点，以及降低产品的成本。解决了琼脂培养基固有的缺点和微生物收集过程中的培养基失水问题。此微生物培养基除了具有和普通培养基一样的微生物生长性和生物相容性，还具有吸水和保水性，以及适合的凝胶强度和透明性。
图I是空白水样在80°C烘箱中的保水性曲线 图2是专利产品吸水后在80°C烘箱中的保水性曲线图； 图3是专利产品吸O. 9%盐水后在80°C烘箱中的保水性曲线 图4是专利产品吸O. 9%营养肉汤溶液后在80°C烘箱中的保水性曲线 图5是TTC显色试验照片，其中左图为专利产品，右图为普通琼脂培养基对照，由图5说明TTC活性平板显示和对照相近；
图6实施例5的放线菌平皿形态照片；
图7实施例5的真菌平皿形态照片；
图8实施例5产品上生长的真菌孢子显微形态照片；
图9作为对照的普通培养基上生长的真菌孢子显微形态照片；
图10实施例5产品上生长的放线菌显微形态照片；
图11作为对照的普通培养基上生长的放线菌显微形态照片。
具体实施例方式具有高保水性的微生物培养基包括上下两层，下层为含有高吸水性树脂的树脂凝胶层，上层为覆盖在树脂凝胶层上的普通琼脂培养基层；或者仅为一层即含有高吸水性树脂的供水和供营养物质的树脂凝胶层。所述的上层采用的普通琼脂培养基为细菌培养基、放线菌培养基或霉菌培养基 其中，
细菌培养基的组成为
营养肉汤培养基 18g/L 琼脂20g/L
余量为水
放线菌培养基的组成为
可溶性淀粉20g/L
KNO3:lg/L
K2HPO4:O. 5g/L
MgSO4:O. 5g/L
NaCl:0.5g/L
FeSO4:微量pH :7· 2 7· 4
琼脂6. 67g/L
余量为水
霉菌培养基的组成为
鹿糖30g/L NaN03:3g/L
MgS04:0. 5g/L
KCl:0.5g/L
FeS04:微量
K2HP04:lg/L
pH:6. (Γ6. 5
琼脂6. 67g/L
余量为水
所述下层采用的树脂凝胶组成为
高吸水性树脂水 1:300 1:900或者
营养成分 O. 5 5%
高吸水性树脂O. I O. 9%
水94. I 99. 4%
或者
琼脂粉O. 5 5%
水93. 5 99. 4%
高吸水性树脂 O. I I. 5%
或者
营养成分O. 5 5%
琼脂粉O. 5 5%
水88. 5 98. 9%
高吸水性树脂 O. I I. 5%
所述仅为一层采用树脂凝胶组成为
营养成分O. 5 5%
琼脂粉O. 5 5%
水88. 5 98. 9%
高吸水性树脂 O. I I. 5%
或者
营养成分O. 5 5%
高吸水性树脂 O. I O. 9%
水94. I 99. 4%
具有高保水性的微生物培养基的制备方法的步骤如下I)闻吸水性树脂的制备(1)首先在冰水浴中将与单体质量比为I: (Γι:ι的碱溶解在水中(或者在主要单体为非酸性单体时不加入碱)；然后缓慢滴入单体将其配置成浓度为5 90%的单体溶液(此单体可以是一种，也可以是与主单体质量比为O. 019Tl%的疏水性单体共同组成的共单体)，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与单体质量比为1:1000(Γ :10的交联剂和l:1000(Tl:10的引发剂，将其溶解在溶液中；
(2)将反应容器放入70 90°C的水浴中加热O.5 5min，同时磁力搅拌，或者将反应容器放入微波炉中O. 5 lOmin，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室温；
(3)放入40 80°C烘箱中反应I 6h;
(4)再升高温度至85 140°C，继续反应10 90min，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂； (5)将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于100 150°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
将质量比为1:300 1:900的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；
或者按质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. I O. 9%的高吸水性树脂和94. I 99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的琼脂粉和93. 5 99. 4%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；
或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. 5 5%的琼脂粉和88. 5 98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基；
或者按照质量百分比将O. 5 5%的营养成分、O. 5 5%的琼脂粉和88. 5 98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基；
或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. I O. 9%的树脂和94. I 99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基。所述的普通琼脂培养基为细菌培养基、真菌培养基、放线菌培养基中的一种或几种。所述的单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、N-羟甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、甲基丙烯酸羟基乙酯、甲基丙烯酸-2-羟乙酯、甲基丙烯酸-2-羟丙酯、顺丁烯二酸、N-乙烯基甲酰胺、4-乙烯基吡啶、丙烯酸正丁酯、丙烯酸-2-乙基己酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟丙酯、2-甲基丙烯酸乙酯、2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸、丙烯酸十六酯、丙烯酸十八酯、甲基丙烯酸十八酯中的一种或多种。
所述的交联剂为含有两个以上乙烯基的单体或官能度为两个以上的多官能度化合物中的一种或多种；
所述的乙烯基的单体为N，N'-亚甲基双丙烯酰胺、聚乙二醇双马来酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、二缩三乙二醇二丙烯酸酯、二乙(丙)二醇双(甲基)丙烯酸酯、一缩二乙二醇双(甲基)丙烯酸酯及不同分子量聚醚的双丙烯酸酯、聚乙二醇双(甲基)丙烯酸酯、新戊二醇双(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯或1，6-己二醇双(甲基)丙烯酸酯；所述的多官能度化合物为丙二醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、丙三醇、四甘醇、2，2，4-三甲基-1，3-戊二醇、1，2-环己烷、戊二醇、季戊四醇、山梨糖醇、二乙醇胺、三乙醇胺、聚乙二醇、聚丙三醇、聚丙二醇或乙二醇二缩水甘油醚。所述的引发剂为水溶性引发剂，水溶性引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵、过硫酸钠、V-40 或 V-501。所述的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠或碳酸钠中的一种或多种。 实施例I :
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与丙烯酸质量比为310的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸将其配置成浓度为30%的丙烯酸溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与丙烯酸质量比为1:1000的N，N' -亚甲基双丙烯酰胺和1:1000的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入70°C的水浴中加热5min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中6min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入45°C烘箱中反应6h ；
④再升高温度至85°C，继续反应30min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于100°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用；
此合成树脂的吸纯水率为668g/g，吸O. 9%盐水率为106g/g，吸O. 9%营养肉汤培养基溶液率为186g/g。2)高保水性微生物培养基的制备
将树脂和水按照质量比1:300配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后按照质量百分比将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，制成具有上下两层结构的微生物培养基。实施例2
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与甲基丙烯酸质量比为2:5的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入甲基丙烯酸将其配置成浓度为40%的甲基丙烯酸溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与甲基丙烯酸质量比为1:500的聚乙二醇双马来酸酯和1:500的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入75°C的水浴中加热4min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中5min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入50°C烘箱中反应5h；
④再升高温度至87V，继续反应50min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于110°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。此合成树脂的吸纯水率为789g/g，吸O. 9%盐水率为113g/g，吸O. 9%营养肉汤培养基溶液率为198g/g。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将1%的营养成分、O. 2%的树脂和98. 8%的水配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后按照质量百分比将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为 顶层，制成具有上下两层结构的微生物培养基。实施例3
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为I:2的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯组成的共单体，将其配置成浓度为50%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为3:1000的三羟甲基丙烷三丙烯酸酯和3:1000的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入60°C烘箱中反应4h；
④再升高温度至90°C，继续反应60min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于120°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。此合成树脂的吸纯水率为845g/g，吸O. 9%盐水率为117g/g，吸O. 9%营养肉汤培养基溶液率为203g/g。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将2%的琼脂粉和97%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入1%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，制成具有上下两层结构的微生物培养基。实施例4
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为I:2的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯组成的共单体，将其配置成浓度为50%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为3:1000的三羟甲基丙烷三丙烯酸酯和3:1000的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入60°C烘箱中反应4h；
④再升高温度至90°C， 继续反应60min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于120°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将2%的琼脂粉和97%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入1%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，制成具有上下两层结构的微生物培养基。实施例5
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为3:5的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的甲基丙烯酸羟基乙酯组成的共单体，将其配置成浓度为60%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:250的二缩三乙二醇二丙烯酸酯和1:250的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入70°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至85°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于100°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。此合成树脂的吸纯水率为912g/g，吸O. 9%盐水率为124g/g，吸O. 9%营养肉汤培养基溶液率为210g/g。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将I. 5%的营养成分、I. 8%的琼脂粉和96%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. 7%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，制成具有上下两层结构的微生物培养基。实施例6:
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为3:5的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的甲基丙烯酸羟基乙酯组成的共单体，将其配置成浓度为60%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:250的二缩三乙二醇二丙烯酸酯和1:250的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入70°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至85°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于100°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将I. 5%的营养成分、I. 8%的琼脂粉和96%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. 7%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭 菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，制成具有上下两层结 构的微生物培养基。 实施例7
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的甲基丙烯酸-2-羟丙酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的N，N'-亚甲基双丙烯酰胺和1:200的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。此合成树脂的吸纯水率为865g/g，吸O. 9%盐水率为127g/g，吸O. 9%营养肉汤培养基溶液率为206g/g。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将2. 5%的营养成分、3%的琼脂粉和93. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入1%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为微生物培养基。将培养基用于微生物的培养，并将其与真菌培养基进行菌落数量对比，结果如表所示。
II_.菌cfu/mL_I α =甘士 W
I_ 专利产品真菌培养基—
i 酵母菌丨 IlXlOe I 1.2X10^ ■NS[TTC平板酿酒酵母菌落计数结果，差异显著水平进行t检测，NS不显著，P>0. 05 实施例8
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的氢氧化钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的甲基丙烯酸-2-羟丙酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的N，N'-亚甲基双丙烯酰胺和1:200的过硫酸钾，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。
2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将2. 5%的营养成分、3%的琼脂粉和93. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入1%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为微生物培养基。实施例9
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为4:5的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的4-乙烯基吡啶将其配置成浓度为80%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为3:1000的二乙二醇双甲基丙烯酸酯和3:1000的过硫酸铵，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热4min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中6min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至88°C，继续反应80min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于120°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。此合成树脂的吸纯水率为1135g/g，吸O. 9%盐水率为118g/g，吸O. 9%营养肉汤培养基溶液率为196g/g。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将4%的营养成分、O. 5%的树脂和95. 5%的水配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为微生物培养基。实施例10
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为4:5的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的4-乙烯基吡啶将其配置成浓度为80%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为3:1000的二乙二醇双甲基丙烯酸酯和3:1000的过硫酸铵，将其溶解在溶液中；②将反应容器放入80°C的水浴中加热4min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中6min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至88°C，继续反应80min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于120°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将4%的营养成分、O. 5%的树脂和95. 5%的水配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，作为微生物培养基。 实施例11
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为I:10的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比0.01%的丙烯酸正丁酯组成的共单体，将其配置成浓度为5%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:10的一缩二乙二醇双甲基丙烯酸酯和1:10的过硫酸铵，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入90°c的水浴中加热5min，同时磁力搅拌，或者将反应容器放入微波炉中lOmin，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室温；
③放入80°C烘箱中反应6h；
④再升高温度至140°C，继续反应90min，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂；
⑤将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于150°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
将质量比为1:300的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将真菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例12
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为I:10的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的丙烯酸正丁酯组成的共单体，将其配置成浓度为5%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:10的一缩二乙二醇双甲基丙烯酸酯和1:10的过硫酸铵，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入90°c的水浴中加热5min，同时磁力搅拌，或者将反应容器放入微波炉中lOmin，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室温；
③放入80°C烘箱中反应6h；
④再升高温度至140°C，继续反应90min，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂；
⑤将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于150°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
将质量比为1:300的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将真菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微 生物培养基。实施例13
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为I:1的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的丙烯酸-2-乙基己酯组成的共单体，将其配置成浓度为90%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:10000的聚乙二醇双甲基丙烯酸酯和1:10000的过硫酸铵，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入70°C的水浴中加热O.5min,同时磁力搅拌，或者将
反应容器放入微波炉中O. 5min，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室
温；
③放入40°C烘箱中反应Ih；
④再升高温度至85°C，继续反应lOmin，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂；
⑤将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于100°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
将质量比为1:900的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将真菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例14
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为I:1的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的丙烯酸-2-乙基己酯组成的共单体，将其配置成浓度为90%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:10000的聚乙二醇双甲基丙烯酸酯和1:10000的过硫酸铵，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入70°C的水浴中加热O.5min,同时磁力搅拌，或者将
反应容器放入微波炉中O. 5min，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室
温；
③放入40°C烘箱中反应Ih；
④再升高温度至85°C，继续反应lOmin，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂；
⑤将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于100°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。
2)高保水性微生物培养基的制备
将质量比为1:900的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将真菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例15
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的丙烯酸十六酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的新戊二醇双甲基丙烯酸酯和1:200的过硫酸钠，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波 炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按质量百分比计，将O. 5%的营养成分、O. 1%的高吸水性树脂和99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将真菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例16
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的丙烯酸十六酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的新戊二醇双甲基丙烯酸酯和1:200的过硫酸钠，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按质量百分比计，将O. 5%的营养成分、O. 1%的高吸水性树脂和99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将真菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例17 I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的丙烯酸十八酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和1:200的过硫酸钠，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按质量百分比计，将5%的营养成分、O. 9%的高吸水性树脂和94. 1%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将放线菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例18
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸氢钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的丙烯酸十八酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和1:200的过硫酸钠，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按质量百分比计，将5%的营养成分、O. 9%的高吸水性树脂和94. 1%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将放线菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例19
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的甲基丙烯酸十八酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的1，6-己二醇双(甲基)丙烯酸酯和1:200的过硫酸钠，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备 按照质量百分比计，将O. 5%的琼脂粉和99. 4%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. 1%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将放线菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例20
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的甲基丙烯酸十八酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的1，6_己二醇双(甲基)丙烯酸酯和1:200的过硫酸钠，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比计，将O. 5%的琼脂粉和99. 4%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. 1%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将放线菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例21
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比O. 01%的丙烯酸-2-乙基己酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的丙三醇和1:200的V-40，将其溶解在溶液中；②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比计，将5%的琼脂粉和93. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将放线菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高 保水性的微生物培养基。实施例22
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸钠溶解在水中；然后缓慢滴入丙烯酸及相对于丙烯酸质量比1%的丙烯酸-2-乙基己酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的丙三醇和1:200的V-40，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比计，将5%的琼脂粉和93. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将放线菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例23
I)闻吸水性树脂的制备
①首先将N-羟甲基丙烯酰胺配置成浓度为70%的N-羟甲基丙烯酰胺溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与N-羟甲基丙烯酰胺质量比为1:200的N，N'-亚甲基双丙烯酰胺和1:200的V-40，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比计，将O. 5%的营养成分、O. 5%的琼脂粉和98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. 1%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例24
I)闻吸水性树脂的制备
①首先将丙烯酰胺及相对于丙烯酰胺质量比O.01%的N-乙烯基甲酰胺配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的N，N'-亚甲基双丙烯酰胺和1:200的V-40，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
或者按照质量百分比计，将5%的营养成分、5%的琼脂粉和88. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例25
I)闻吸水性树脂的制备
①首先将丙烯酰胺及相对于丙烯酰胺质量比1%的N-乙烯基甲酰胺配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的N，N' -亚甲基双丙烯酰胺和1:200的V-40，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
或者按照质量百分比计，将5%的营养成分、5%的琼脂粉和88. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将细菌培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基。实施例26
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸钠溶解在水中；然后缓慢滴入甲基丙烯酸及相对于甲基丙烯酸质量比O. 01%的甲基丙烯酸-2-羟丙酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的乙二醇和1:200的V-501，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温； ③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将5%的营养成分、5%的琼脂粉和88. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入I. 5%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基。实施例27
I)闻吸水性树脂的制备
①首先在冰水浴中将与共单体总量质量比为7:10的碳酸钠溶解在水中；然后缓慢滴入甲基丙烯酸及相对于甲基丙烯酸质量比1%的甲基丙烯酸-2-羟丙酯组成的共单体，将其配置成浓度为70%的共单体溶液，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与共单体总量质量比为1:200的乙二醇和1:200的V-501，将其溶解在溶液中；
②将反应容器放入80°C的水浴中加热3min，同时磁力搅拌。或者将反应容器放入微波炉中3min，并让之旋转，均匀加热。反应结束后立即取出，然后将其放置于室温处，将体系温度缓慢降至室温；
③将其放入80°C烘箱中反应3h；
④再升高温度至90°C，继续反应90min，结束反应，将其取出，降至室温；
⑤将反应结束后得到的凝胶取出，剪碎，再放入敞口容器中，于115°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用。2)高保水性微生物培养基的制备
按照质量百分比将5%的营养成分、5%的琼脂粉和88. 5%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入I. 5%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基。专利产品应用结果如下
I抑菌试验根据卫生部颁布的《消毒技术规范》，选择大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌ATCC10231和黑曲霉ATCC16404四种代表菌株做抑菌试验，考察专利产品的抑菌性。试验结果这些菌种在专利产品周围均能正常生长，无抑菌环出现，并且菌落也可生长。根据《消毒技术规范》，由试验结果可知，专利产品对微生物的生长无抑制作用。2 pH值测定
将高吸水性树脂加 入到去离子水中吸饱水后，pH为5. 4 ;将高吸水性树脂加入到O. 9%的盐水中吸饱水后，pH为5. 6 ;将高吸水性树脂加入到O. 9%的营养肉汤溶液中吸饱水后，pH 为 6. 2。3按照实施例I，吸保水后的闻吸水性树脂专利广品在80 C供箱中的保水性
4微生物唯一碳源生长试验
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌在葡萄糖基本培养基上培养2天后，菌落生长良好，白色念珠菌、酿酒酵母、黑曲霉和桔青霉略有生长。5天时白色念珠菌、酿酒酵母、黑曲霉和桔青霉在葡萄糖基本培养基均长出较好菌落。而在专利产品为唯一碳源的基本培养基上，至培养5天时，上述7种菌仍未生长。结果显示，在短时间内专利产品不能被微生物分解，成为微生物生长的碳源。 5 TTC显色菌落观察(实施例5 )
TTC配方
葡萄糖10g/L
蛋白胨2g/L
酵母膏I. 5g/L
KH2P04 lg/L
MgS04 O. 4g/L pH 5. 5 5. 7
琼脂6. 67g/L
树脂6. 67g/L。
权利要求
1.一种具有高保水性的微生物培养基，其特征在于包括上下两层，下层为含有高吸水性树脂的树脂凝胶层，上层为覆盖在树脂凝胶层上的普通琼脂培养基层；或者仅为一层即含有高吸水性树脂的树脂凝胶层。
2.如权利要求I所述的一种具有高保水性的微生物培养基，其特征在于 所述的上层采用的普通琼脂培养基为细菌培养基、放线菌培养基或霉菌培养基 其中， 细菌培养基的组成为 营养肉汤培养基 18g/L 琼脂20g/L 余量为水 放线菌培养基的组成为 可溶性淀粉20g/L KNO3:lg/L K2HPO4:O. 5g/L MgSO4:O. 5g/L NaCl:0.5g/L FeSO4:微量 pH :7. 2 7. 4 琼脂6. 67g/L 余量为水 霉菌培养基的组成为 鹿糖30g/L NaN03:3g/L MgS04:0. 5g/L KCl:0.5g/L FeS04:微量 K2HP04:lg/L pH:6. 0 6. 5 琼脂6. 67g/L 余量为水 所述下层采用的树脂凝胶组成为 高吸水性树脂水 1:300 1:900 或者营养成分 O. 5 5% 高吸水性树脂O. I O. 9% 水94. I 99. 4% 或者 琼脂粉O. 5 5%水93. 5 99. 4% 高吸水性树脂O. I I. 5% 或者 营养成分O. 5 5% 琼脂粉O. 5 5% 水88. 5 98. 9% 高吸水性树脂O. I I. 5% 所述仅为一层采用树脂凝胶组成为 营养成分O. 5 5% 琼脂粉O. 5 5% 水88. 5 98. 9% 高吸水性树脂 O. I I. 5% 或者 营养成分O. 5 5% 高吸水性树脂 O. I O. 9% 水94. I 99. 4% 所述营养成分为前面述及的各种培养基中除去琼脂和水之后的营养物质的总和。
3.一种具有高保水性的微生物培养基的制备方法，其特征在于它的步骤如下 1)闻吸水性树脂的制备 (1)首先在冰水浴中将与单体质量比为I的碱溶解在水中(或者在主要单体为非酸性单体时不加入碱)；然后缓慢滴入单体将其配置成浓度为5 90%的单体溶液(此单体可以是一种，也可以是与主单体质量比为O. 019Tl%的疏水性单体共同组成的共单体)，保持体系在一定的温度中，不使局部温度过高；再加入与单体质量比为1:1000(Γ :10的交联剂和l:1000(Tl:10的引发剂，将其溶解在溶液中； (2)将反应容器放入70 90°C的水浴中加热O.5 5min，同时磁力搅拌，或者将反应容器放入微波炉中O. 5 lOmin，并旋转，均匀加热，反应结束后立即取出，缓慢降至室温； (3)放入40 80°C烘箱中反应I 6h; (4)再升高温度至85 140°C，继续反应10 90min，反应结束后立即取出，缓慢降至室温，得到凝胶状高吸水性树脂； (5)将凝胶状高吸水性树脂剪碎，再放入敞口容器中，于100 150°C烘箱中烘干，得到高吸水性树脂，经粉碎机粉碎，180目过筛，备用； 2)高保水性微生物培养基的制备 将质量比为1:300 1:900的高吸水性树脂和水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基； 或者按质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. I O. 9%的高吸水性树脂和94. I .99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为下层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为上层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基； 或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的琼脂粉和93. 5 99. 4%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基； 或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. 5 5%的琼脂粉和88. 5 98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，作为底层，之后将普通琼脂培养基灭菌后覆盖在树脂凝胶上作为顶层，得到具有上下两层结构的高保水性的微生物培养基； 或者按照质量百分比将O. 5 5%的营养成分、O. 5 5%的琼脂粉和88. 5 98. 9%的水加热配置成琼脂溶液后，保持温度的状态下加入O. I I. 5%的树脂，继续加热，配置成凝胶灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基； 或者按照质量百分比计，将O. 5 5%的营养成分、O. I O. 9%的树脂和94. I 99. 4%的水配置成树脂凝胶，灭菌后置于培养皿中，铺平，得到具有高保水性的微生物培养基。
4.根据权利要求3所述的一种具有高保水性的微生物培养基的制备方法，其特征在于所述的普通琼脂培养基为细菌培养基、真菌培养基、放线菌培养基中的一种或几种。
5.根据权利要求3所述的一种具有高保水性的微生物培养基的制备方法，其特征在于所述的单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、N-羟甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、甲基丙烯酸羟基乙酯、甲基丙烯酸-2-羟乙酯、甲基丙烯酸-2-羟丙酯、顺丁烯二酸、N-乙烯基甲酰胺、4-乙烯基吡啶、丙烯酸正丁酯、丙烯酸-2-乙基己酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟丙酯、2-甲基丙烯酸乙酯、2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸、丙烯酸十六酯、丙烯酸十八酯、甲基丙烯酸十八酯中的一种或多种。
6.根据权利要求3所述的一种具有高保水性的微生物培养基的制备方法，其特征在于所述的交联剂为含有两个以上乙烯基的单体或官能度为两个以上的多官能度化合物中的一种或多种； 所述的乙烯基的单体为N，N'-亚甲基双丙烯酰胺、聚乙二醇双马来酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、二缩三乙二醇二丙烯酸酯、二乙(丙)二醇双(甲基)丙烯酸酯、一缩二乙二醇双(甲基)丙烯酸酯及不同分子量聚醚的双丙烯酸酯、聚乙二醇双(甲基)丙烯酸酯、新戊二醇双(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯或1，6-己二醇双(甲基)丙烯酸酯； 所述的多官能度化合物为丙二醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、丙三醇、四甘醇、2，2，4-三甲基-1，3-戊二醇、戊二醇、季戊四醇、山梨糖醇、二乙醇胺、三乙醇胺、聚乙二醇、聚丙三醇、聚丙二醇或乙二醇二缩水甘油醚。
7.根据权利要求3所述的一种具有高保水性的微生物培养基的制备方法，其特征在于所述的引发剂为水溶性引发剂，水溶性引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵、过硫酸钠、V-40或V-501。
8.根据权利要求3所述的一种具有高保水性的微生物培养基的制备方法，其特征在于所述的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠或碳酸钠中的一种或多种。
全文摘要
本发明公开了一种具有高保水性的微生物培养基及其制备方法。包括上下两层，下层为含有高吸水性树脂的树脂凝胶层，上层为覆盖在树脂凝胶层上的普通琼脂培养基层；或者仅为一层即含有高吸水性树脂的树脂凝胶层。本发明将高吸水性树脂运用于微生物培养基的改性，并通过对培养基制备工艺的优化，获得的培养基相对于普通培养基改善其凝胶水分容易挥发；凝结水积聚在培养皿壁容易形成菌落间污染；冰冻易产生结晶或裂开，不利于菌种传代和长期保藏的缺点，降低产品的成本。解决了琼脂培养基固有的缺点和微生物收集过程中的培养基失水问题。培养基除了具有和普通培养基一样的微生物生长性和生物相容性，还具有吸水和保水性，以及适合的凝胶强度和透明性。
文档编号C12N1/14GK102796686SQ20121028866
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月14日 优先权日2012年8月14日
发明者沈晓亮, 郭红樱, 陈欢, 叶俊英, 方序 申请人:浙江天科高新技术发展有限公司