专利名称：用于疾病筛查的血样采集卡及含有该血样采集卡的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于疾病，特别是遗传性疾病筛查的血样采集卡及含有该血样采集卡的试剂盒。
背景技术：
新生儿疾病筛查是指对刚出生的宝宝，通过实验室检测技术发现某些危害严重的先天性遗传代谢性疾病，从而早期诊断、早期治疗，避免宝宝因脑、肝、肾等损害导致智力、体力发育障碍甚至死亡。血样采集卡是新生儿疾病筛查主要血液样本保存的载体之一，目前大多使用进口的FTA卡或进口 903滤纸作为载体，价格高昂且受制于国外货源，为避免出现因进口货源紧 张从而影响我国新生儿疾病筛查的血样采集工作开展，亟待开发一种原料易得且价格低廉的遗传性疾病血样采集卡及与其相适用的DNA提取方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于疾病，特别是遗传性疾病筛查的血样采集卡。本发明的另一目的是提供含有上述血样采集卡的用于血样DNA提取的试剂盒。为了实现本发明目的，本发明的一种用于疾病筛查的血样采集卡，包括用于吸附血液样本的吸附材料和纸张，所述吸附材料附着于纸张一侧，吸附材料上印刷有采集圈，所述纸张包含如下信息个人信息登记、采血方法及注意事项；所述用于吸附血液样本的吸附材料可以是任何能够吸附血液的片状材料，包括各种纸张和布料等材料，如棉质布料、书写纸、定性滤纸、定量滤纸、903#滤纸或生活卫生用纸等。其是采用粘贴、装订或缝合等方法使吸附材料附着于纸张上。所述血样采集卡由无菌塑料袋封装,有效防止血样与异物接触或被挤压破损而污染。优选在所述无菌塑料袋内添加少量防潮剂。前述的血样采集卡，所述采集圈的形状为圆形或其它几何形状。优选所述采集圈为直径I. 5cm的圆形，采集圈的数量为3-5个。可将约50 μ I抗凝全血滴至圆形采集圈中心，抗凝全血扩散边缘应不超过采集圈边缘，即全血扩散直径不超过I. 5cm。前述的血样采集卡，记录采样对象相关信息的纸张为无碳复写三联单，记录内容详细具体并有电子版备份，可设有条形码粘贴处，通过条形码扫描便于查找样本记录信息。对于医疗条件比较差的地区，采集的血样不能被及时检测的，可将血液样本滴在血样采集卡上保存，然后运输或邮寄送往具备检测手段和设施的单位进行检测。本发明还提供含有上述血样采集卡述的用于血样DNA提取的试剂盒。该试剂盒还含有组织消化液、LiCl溶液、蛋白酶K和TE溶液。其中，组织消化液为8mMTris-HCl+8mM EDTA+8mM NaCl+0. 5%SDS ；LiCl 溶液 6. 5mol/l ;蛋白酶 K 20mg/ml ;TE 溶液为 IOmMTris-HCl+0. ImM EDTA。本发明还提供上述试剂盒在提取血样DNA中的应用。包括步骤
I)用血样采集卡采集血样，室温保存；2)将干血片置于离心管中；3)向离心管中加入组织消化液，再加入蛋白酶K，震荡；4)置于50°C水浴中消化，消化过程中颠倒混匀；5)消化后，加入LiCl溶液，震荡，冰浴；6) 13000rpm离心10分钟，取500 μ I上清移入另一离心管中；7)加入Iml冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀后室温放置10分钟；8) 13000rpm离心10分钟,弃上清,加入Iml冰预冷70%乙醇,颠倒混勻；
9) 13000rpm离心5分钟，弃上清，瞬时离心I次，去除残留乙醇，室温干燥至乙醇挥发完全；10)用TE溶液或水溶解DNA。具体地，利用上述试剂盒提取血样DNA，包括如下步骤I)用血样采集卡采集血样，每片50 μ 1，室温保存；2)将I片干血片置入I. 5ml离心管中；3)向离心管中加入350 μ I组织消化液，再加入5 μ I蛋白酶K，用涡旋混合器震荡5秒钟；4)置于50°C水浴中消化2小时，分别在消化30分钟、60分钟时颠倒混匀；5)消化2小时后，每管加入300 μ I LiCl溶液，用涡旋混合器震荡5秒钟，冰浴10分钟；6) 13000rpm离心10分钟，取500 μ I上清移入另一离心管中；7)加入Iml冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀后室温放置10分钟；8) 13000rpm离心10分钟,弃上清,加入Iml冰预冷70%乙醇,颠倒混勻；9) 13000rpm离心5分钟，弃上清，瞬时离心I次，去除残留乙醇，室温干燥30分钟至乙醇挥发完全；10)用50 μ I TE溶液或水溶解DNA。相比于现有疾病筛查采集卡，本发明的优点在于(一)样本保存方便室温保存即可，无需低温冷藏条件。(二)样本保存时间长存储于血样采集卡上的样本，室温保存20年以内，仍能用于相关基因及致病基因的分子方法检测。(三)样本运送方便快捷适合于边远地区邮政快递运输。(四)需要的血液样本少，一般采集50微升即可。(五)血样DNA提取效果佳，操作简单，成本低廉。(六)用于吸附血液样本的吸附材料取材广泛，不局限于进口FTA卡或进口 903#滤纸，普通纸张或布料等洁净材料均可用作吸附材料。
图I为本发明实施例I中优选的用于遗传性疾病筛查的血样采集卡的正面示意图。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。实施例I用于遗传性疾病筛查的血样采集卡及其制备
血样采集卡由包括两部分，即用于吸附血液样本的吸附材料和含有个人信息登记表格、采血方法及注意事项说明的纸张。所述吸附材料附着于纸张一侧，吸附材料上印刷有4个直径为I. 5cm的圆形采集圈。这种印刷工艺便于从滤纸上完整无污染的取出血样标本。用于吸附血液样本的吸附材料可以是任何能够吸附血液的片状材料，包括各种纸张和布料等材料，如棉质布料、书写纸、定性滤纸、定量滤纸、903#滤纸或生活卫生用纸等。个人信息登记表格部分折叠完全包覆吸附材料，有效防止血样与异物接触或被挤压破损而污染。收集血液样本方法的说明打印在个人信息登记表格的背面，便于操作者正确、安全、及时的进行血样采集。个人信息登记表格为记录采样对象相关信息的无碳复写三联单，记录内容详细具体并有电子版备份，专设有条形码粘贴处，通过条形码扫描便于查找样本记录信息。血样采集卡外面由无菌塑料自封袋封装，内含防潮剂。本血样采集卡用于抗凝全血的采集、存储和运输。血样标本采集卡所采集、存储的血样可用于DNA提取及PCR检测。将50 μ I抗凝全血滴至圆形采集圈中心，抗凝全血扩散边缘应不超过采集圈边缘，即全血扩散直径不超过I. 5cm。对于医疗条件比较差的地区，采集的血样不能被及时检测的，可将血液样本滴在血样采集卡上保存，然后运输或邮寄送往具备检测手段和设施的单位进行检测。图I为优选的用于遗传性疾病筛查的血样采集卡的正面示意图。实施例2含有血样采集卡的用于血样DNA提取的试剂盒试剂盒组成I、实施例I的血样采集卡；2、组织消化液8mM Tris_HCl+8mM EDTA+8mM NaCl+0. 5% SDS ；3、LiCl 溶液 6. 5mol/l ；4、蛋白酶 K 20mg/ml ；5、TE 溶液10mM Tris-HCl+0. ImM EDTA。实施例3含有血样采集卡的试剂盒用于提取血样DNA利用实施例2的含有血样采集卡的试剂盒进行血样DNA提取，操作如下I)用血样采集卡采集血样，每片约50 μ I，室温保存；2)将I片干血片置入I. 5ml离心管中；3)向离心管中加入350 μ I组织消化液，再加入5 μ I蛋白酶K，用涡旋混合器震荡5秒钟；4)置于50°C水浴中消化2小时，分别在消化30分钟、60分钟时颠倒混匀；5)消化2小时后，每管加入300 μ I LiCl溶液，用涡旋混合器震荡5秒钟，冰浴10分钟；6) 13000rpm离心10分钟，取500 μ I上清移入一个新的离心管中；7)加入Iml冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀后室温放置10分钟；8) 13000rpm离心10分钟,弃上清(不能甩弃,吸弃时勿触及管底部),加入Iml冰预冷70%乙醇，颠倒混匀；
9) 13000rpm离心5分钟，弃上清，重新置于离心机内瞬时离心I次,用移液器将残留乙醇吸弃干净，室温干燥30分钟，至乙醇完全干燥(若乙醇未完全干燥，可能会影响后续PCR扩增)；10)用50 μ I TE溶液或水溶解DNA。实施例4含有血样采集卡的试剂盒在检测耳聋基因中的应用I. I测试方法(I)以10个GJB2基因235位点缺失突变的人和10个GJB2基因235位点正常人
作为受试者。
(2)对所有受试者进行取血50微升，滴到血样采集卡上，晾干。(3)将20个受试者的血片进行DNA提取，方法同实施例3。(4)将提取的20个受试者的DNA样本进行分子技术检测，步骤为取一定量受试者的血样DNA作为模板，采用设计合成的GJB2基因引物进行PCR扩增，反应结束后，分析PCR扩增产物，根据测序结果判断受试者是否为耳聋基因携带者。GJB2基因序列在Genbank上的登录号为 NC_000013. 9，GI: 51511729。表I GJB2基因PCR反应体系
权利要求
1.一种用于疾病筛查的血样采集卡，其特征在于，包括用于吸附血液样本的吸附材料和纸张，所述吸附材料附着于纸张一侧，吸附材料上印刷有采集圈，所述纸张包含如下信息个人信息登记、采血方法及注意事项；其中，所述用于吸附血液样本的吸附材料选自棉质布料、书写纸或生活卫生用纸。
2.根据权利要求I所述的血样采集卡，其特征在于，采用粘贴、装订或缝合的方法使所述吸附材料附着于纸张上。
3.根据权利要求I所述的血样采集卡，其特征在于，所述血样采集卡由无菌塑料袋封装。
4.根据权利要求3所述的血样采集卡，其特征在于，所述无菌塑料袋内还含有防潮剂。
5.根据权利要求I所述的血样采集卡，其特征在于，所述采集圈的形状为圆形或其它几何形状。
6.根据权利要求5所述的血样采集卡，其特征在于，所述采集圈为直径I.5cm的圆形， 采集圈的数量为3-5个。
7.根据权利要求I所述的血样采集卡，其特征在于，所述纸张为无碳复写三联单。
8.含有权利要求1-7任一项所述血样采集卡的用于血样DNA提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有组织消化液、LiCl溶液、蛋白酶K和TE溶液。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，组织消化液为8mMTris-HCl+8mM EDTA+8mM NaCl+0. 5%SDS ；LiCl 溶液 6. 5mol/l ;蛋白酶 K 20mg/ml ；TE 溶液为 IOmM Tris-HCl+0. ImM EDTA0
10.权利要求8或9所述试剂盒在提取血样DNA中的应用，其特征在于，包括步骤1)用血样采集卡采集血样，室温保存；2)将干血片置于离心管中；3)向离心管中加入组织消化液，再加入蛋白酶K，震荡；4)置于50°C水浴中消化，消化过程中颠倒混匀；5)消化后，加入LiCl溶液，震荡，冰浴；6)13000rpm离心10分钟，取500 μ I上清移入另一离心管中；7)加入Iml冰预冷的无水乙醇,颠倒混匀后室温放置10分钟；8)13000rpm离心10分钟,弃上清,加入Iml冰预冷70%乙醇,颠倒混勻；9)13000rpm离心5分钟，弃上清，瞬时离心I次，去除残留乙醇，室温干燥至乙醇挥发完全；10)用TE溶液或水溶解DNA。
全文摘要
本发明提供了一种用于疾病筛查的血样采集卡，包括用于吸附血样的吸附材料和含有个人信息登记、采血方法及注意事项的纸张，该吸附材料附着于纸张一侧，吸附材料上印刷有采集圈，吸附材料选自棉质布料、书写纸或生活卫生用纸等。本发明还提供含有该血样采集卡的用于血样DNA提取的试剂盒。采用本发明的血样采集卡及试剂盒提取血样DNA，从而进行相关基因检测，具有以下优点样本室温保存即可，无需低温冷藏条件；存储于血样采集卡上的样本，室温保存20年以内，仍能用于相关基因的检测，保存时间长；样本运送方便快捷，适合于边远地区邮政快递运输；需要的血液样本少，一般采血量约50μl；血样DNA提取效果佳，操作简单，成本低廉。
文档编号C12Q1/24GK102925346SQ20121043656
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月5日 优先权日2012年11月5日
发明者张志栋, 杨君, 黄茜, 易翔 申请人:中生北控生物科技股份有限公司