饲料添加剂组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合的饲料添加剂组合物；以及用于改善受试者的性能、或改善饲料中的原料的消化率（例如营养物质消化率，如氨基酸消化率）、或改善氮保留量、或改善所述受试者对坏死性肠炎的抗性、或改善饲料转化率(FCR)、或改善受试者中的增重、或改善受试者中的饲料效率、或调节（例如改善）所述受试者的免疫应答、或促进受试者的胃肠道中的有益细菌生长的方法，所述方法包含向受试者施用直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合。
【专利说明】饲料添加剂组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及使用直接饲喂微生物与特定酶组合的组合改善饲料组合物的方法，以及涉及包含直接饲喂微生物与特定酶组合的组合的饲料添加剂组合物。本发明进一步涉及用途和试剂盒。
【背景技术】
[0002]补充酶被作为动物饲料(尤其是家禽和猪饲料)的添加剂、用作改善营养物质利用和生产性能特性的手段。酶共混物可用于改善含有大豆粉、动物蛋白粉或高纤维食物副产品的饲粮的营养价值。
[0003]直接饲喂微生物(DFM)的概念涉及在动物(例如奶牛)处于长期胁迫(疾病、日粮变化、环境或生产攻击)下时给其饲喂有益微生物。益生菌是该类饲料添加剂的另一术语。在受控研究中已显示益生菌或DFM可改善动物性能。DFM包括直接饲喂细菌和或基于酵母的
女口
广叩ο
[0004]尽管已考虑DFM与一些酶的组合，但从来没有完全了解DFM与酶之间的相互作用。本发明涉及新型的特定组合，其令人惊奇地显著改善动物的生产性能特性。
【发明内容】
[0005]本发明的一个开创性发现是，DFM与蛋白酶和植酸酶的组合对动物的性能具有显著的有益效果。
[0006]具体而言，本发明的开创性发现是DFM与蛋白酶和植酸酶的组合对动物的性能具有显著有益效果，包括改善如下中的一种或多种:饲料转化率(FCR)、消化原料的能力(例如营养物质消化率，如氨基酸消化率)、氮保留量、存活率、屠宰率、生长速率、增重、饲料效率、动物对坏死性肠炎的抗性、受试者的免疫应答、有益细菌在受试者胃肠道中的生长。
[0007]本发明的另一惊人效果为其可减少粪肥(manure)中的营养排泄(例如减少受试者的粪肥中的氮和磷含量)。
[0008]在一个方面中，本发明提供饲料添加剂组合物，其包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合(或基本上由其组成或由其组成)。
[0009]在另一方面中，本发明提供用于如下的方法:改善受试者的性能或改善饲料中的原料的消化率(例如营养物质消化率，如氨基酸消化率)、或改善氮保留量、或避免坏死性肠炎的负面影响、或改善饲料转化率(FCR)、或改善受试者的增重、或改善受试者中的饲料效率、或调节(例如改善)受试者的免疫应答、或促进受试者的胃肠道中的有益细菌生长、或减少受试者胃肠道中的致病菌群体、或减少粪肥中的营养排泄，该方法包含向受试者施用直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合。
[0010]本发明的又一另外方面是直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合的用途，其用于改善受试者的性能、或改善饲料中的原料的消化率(例如营养物质消化率，如氨基酸消化率)、或改善氮保留量、或避免坏死性肠炎的负面影响、或改善饲料转化率(FCR)、或改善受试者的增重、或改善受试者中的饲料效率、或调节(例如改善)受试者的免疫应答、或促进受试者的胃肠道中的有益细菌生长、或减少受试者胃肠道中的致病菌群体、或减少粪肥中的营养排泄。
[0011]在本发明的又一方面中，提供包含直接饲喂微生物、蛋白酶、植酸酶(以及任选的至少一种维生素和/或任选的至少一种矿物质)和施用说明书的试剂盒。
[0012]在另一个方面，本发明提供制备饲料添加剂组合物的方法，包括将直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶混合以及(任选地)进行包装。
[0013]在又一另外的方面中，本发明提供包含饲料添加剂组合物的饲料(feed, feedstuff),该饲料添加剂组合物包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合(或基本上由其组成或由其组成)。
[0014]预混物包含饲料添加剂组合物和至少一种矿物质和/或至少一种维生素，该饲料添加剂组合物包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合(或基本上由其组成或由其组成)。
[0015]在另一方面中，本发明提供制备饲料的方法，其包括将饲料组分与饲料添加剂组合物混合，该饲料添加剂组合物包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合(或基本上由其组成或由其组成)。
[0016]在又一个方面，本发明涉及饲料添加剂组合物，其用于预防和/或治疗受试者的球虫病和/或坏死性肠炎。
[0017]本发明还进一步提供预防和/或治疗坏死性肠炎和/或球虫病的方法，其中给受试者施用有效量的根据本发明的饲料添加剂组合物。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1显示，DFM(Enviva Pr0.,可得自丹尼斯克公司(Danisco A/S))与蛋白酶(例
如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)蛋白酶)和植酸酶(例如500FTU/kg的Phyzyme XP(大肠杆菌植酸酶)，可得自丹尼斯克公司)的组合的组合与攻击对照相比显著改善(降低)了动物肠中的坏死性肠炎损伤评分。
[0019]图2示出了第20日至42日龄的与坏死性肠炎(NE)损伤相关的死亡率百分比。
DFM (可得自丹尼斯克公司的Enviva Pflj.)与蛋白酶(例如枯草芽孢杆菌蛋白酶)和植酸
酶(例如500FTU/kg的Phyzyme XP (大肠杆菌植酸酶)，可得自丹尼斯克公司)的组合的组合显著改善(降低)了 NE死亡率。
[0020]图3示出了坏死性肠炎攻击模型中第O至23日肉鸡的体重增加。与攻击对照相t匕，在用产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)攻击的肉鸡中(可得自丹尼斯克公司的
Enviva与蛋白酶(例如枯草芽孢杆菌蛋白酶)和植酸酶(例如500FTU/kg的Phyzyme
XP(大肠杆菌植酸酶)，可得自丹尼斯克公司)的组合的组合显著改善了体重增加(BW增加)。
[0021]图4示出了坏死性肠炎攻击模型中第0-12天肉鸡的体重增加。合并SEM=4.86。
[0022]图5示出了坏死性肠炎攻击模型中肉鸡的饲料转化率。合并SEM=0.026。
[0023]图6示出了坏死性肠炎攻击模型中0-23日肉鸡的饲料转化率。合并SEM=0.022。
[0024]图7示出了在23日龄时所有空肠处理的所关注基因的表达谱的热图。[0025]未攻击对照=未攻击对照+植酸酶
[0026]CC=攻击对照+植酸酶
[0027]CC+蛋白酶=攻击对照+植酸酶+蛋白酶
[0028]CC+EP=攻击对照 + 植酸酶 +Enviva Pro
[0029]CC+EP+蛋白酶=攻击对照+植酸酶+蛋白酶+Enviva Pro。
[0030]图8示出了在23日龄时所有胰腺处理的鸡α淀粉酶的表达谱的热图。
[0031 ]未攻击对照=未攻击对照+植酸酶
[0032]CC=攻击对照+植酸酶
[0033]CC+蛋白酶=攻击对照+植酸酶+蛋白酶
[0034]CC+EP=攻击对照 + 植酸酶 +Enviva Pro
[0035]CC+EP+蛋白酶=攻击对照+植酸酶+蛋白酶+Enviva Pro。
【具体实施方式】
[0036]优选地，本发明中所用酶中的每一者对于DFM而言是外源性的。换而言之，优选将酶添加至DFM中或与其混合。
[0037]除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有本公开所属领域普通技术人员通常理解的含义。Singleton等人，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULARBIOLOGY (《微生物学和分子生物学词典》)，第20版，纽约约翰威立国际出版公司(JohnWiley and Sons, New York) (1994)，以及Hale和Marham，THE HARPER COLLINS DICTIONARYOF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)为本领域技术人员提供关于本发明中所用的多个术语的一般性词典。
[0038]本公开并不受本文公开的示例性方法和材料的限制，任何与本文所述的那些方法和材料相似或等同的方法和材料都可用于本公开的实施例的实施或测试。数值范围包括限定该范围的数字。除非另外指明，否则分别是，任何核酸序列从左至右以5'至3'取向写出；氨基酸序列从左至右以氨基至羧基取向写出。
[0039]本文提供的标题并非是对本公开的各个方面或实施例的限制，这些方面或实施例可通过将说明书作为一个整体来参考而得到。相应地，下面就要定义的术语通过将说明书作为一个整体来参考会得到更完全的定义。
[0040]氨基酸在本文中用氨基酸名称、三字母缩写或单字母缩写来指代。
[0041]本文所用的术语“蛋白质”包括蛋白质、多肽和肽。
[0042]本文所用的术语“氨基酸序列”与术语“多肽”和/或术语“蛋白质”是同义的。在某些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“肽”同义。在某些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“酶”同义。
[0043]术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用。在本公开和权利要求书中，可使用氨基酸残基的常规一字母和三字母代码。氨基酸的3字母代码遵照IUPACIUB生物化学命名联合委员会(Joint Commission on Biochemical Nomenclature, JCBN)的定义。还应理解，由于遗传密码的简并性，多肽可由不止一种核苷酸序列编码。
[0044]术语的其他定义可在整个本说明书中出现。在更详细地描述示例性的实施例之前，应理解本公开并不限于所描述的具体实施例，因为这些实施例当然是可变的。还应理解，本文所用的术语仅出于描述具体的实施例的目的，并不意在具有限制意义，因为本发明的范围将仅受所附权利要求的限定。
[0045]在提供数值范围的情况中，应理解，该范围的上限和下限之间的每个中间数值(至下限的个位的十分之一，除非上下文另有清楚规定)也被具体公开。规定的范围中的任何规定值或中间值与该规定的范围中的任何其他规定值或中间值之间的每个较小范围，被涵盖在本公开内。这些较小范围的上限和下限可独立地被包括或排除在该范围中，而且其中任一个、没有一个或两个界限被包括在较小范围中的每个范围也被涵盖在本公开中，但依据该规定的范围中的任何被具体排除的界限而定。在规定的范围包括界限中的一个或两个的情况中，排除这些被包括的界限中的任一个或两个的范围，也被包括在本公开中。
[0046]必须指出，本文和所附权利要求书中用到的名词既有单数含义也有复数含义，除非上下文另有清楚规定。因此，例如，提到“酶”则包括多个这种候选物质，而提到“饲料”则包括提到一种或多种饲料以及本领域技术人员知道的它们的等同物，以此类推。
[0047]本文论述的出版物只是为了它们在本申请的提交日之前的公开内容而提供。本文的任何内容都不能被解释为承认这些出版物构成本文所附权利要求的现有技术。
[0048]用于本发明的酶可通过固体培养或深层培养来产生，包括分批工艺、补料分批工艺和连续流工艺。培养在培养基中完成，该培养基包含含水矿物盐培养基、有机生长因子、碳和能源物质、分子氧以及当然还有待使用的一种或多种特定微生物物种的起始种菌。
[0049]官梓饲喂微牛物(DFM)
[0050]本文中的术语“微生物(microbial) ”可与“微生物体(microorganism) ”互换使用。
[0051]优选地，DFM包含活微生物。优选地，DFM包含活细菌或活酵母或活真菌。
[0052]优选地，DFM包含活细菌。
[0053]术语“活微生物”意指具有代谢活性或能够分化的微生物。
[0054]在一个实施例中，DFM可为孢子形成细菌并因而，术语DFM可由孢子，例如细菌孢子组成或含有孢子，例如细菌孢子。因此，在一个实施例中，本文所用的术语“活微生物”可包括微生物孢子，如内生孢子或分生孢子。
[0055]在另一个实施例中，本发明的饲料添加剂组合物中的DFM不由微生物孢子，例如内生孢子或分生孢子组成，或不含有微生物孢子，例如内生孢子或分生孢子。
[0056]微生物可为天然微生物或其可为转化微生物。微生物也可为合适的微生物的组
口 ο
[0057]在一些方面中，根据本发明的DFM可为如下中的一种或多种:细菌、酵母、真菌。
[0058]优选地，根据本发明的DFM是益生菌微生物。
[0059]在本发明中，术语直接饲喂微生物(DFM)涵盖直接饲喂细菌、直接饲喂酵母、直接饲喂真菌以及它们的组合。
[0060]优选地，DFM是直接饲喂细菌。
[0061]优选地，DFM是包含两种或更多种细菌(例如三种或更多种或者四种或更多种)的组合；或者DFM为包含两种或更多种细菌菌株(例如三种或更多种或者四种或更多种)的组
八
口 ο
[0062]优选地，细菌是分离的。[0063]合适地，DFM可包含来自一个或多个如下属的细菌:乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)、芽抱杆菌属(Bacillus)、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌(Enterococcus )、明串珠菌属(Leuconostoc)、肉食杆菌属(Carnobacterium)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、梭菌属(Clostridium)和巨球形菌属(Megasphaera)以及它们的组合。
[0064]在一个实施例中，DFM可选自如下芽孢杆菌属物种:枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、腊状芽抱杆菌(Bacillus cereus)、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)和解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
[0065]在一个实施例中，DFM可为包含两种或更多种芽孢杆菌属菌株的组合。
[0066]在一个实施例中，DFM可为枯草芽孢杆菌菌株3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C_P1(PTA-6508),2084(NRRL B-500130)、LSSAOl(NRRL-B-50104)、BS27 (NRRL B-50105)、BS18 (NRRL B-50633)和 BS278 (NRRL B-50634)中的两种或更多种的组合。
[0067]菌株3A-P4 (PTA-6506)、15A-P4 (PTA-6507)和 22C-P1 (PTA-6508)可从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, ATCC)公开获得。
[0068]菌株2084 (NRRL B-500130) ,LSSAOl (NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-50105)可从美国农业研究菌种保藏中心(Agricultural Research Service Culture Collection, NRRL)公开获得。菌株枯草芽孢杆菌LSSAOl有时候称为枯草芽孢杆菌8。
[0069]这些菌株在US 7，754，469B2中进行了教导。
[0070]枯草芽孢杆菌BS 18和枯草芽孢杆菌BS278分别以保藏号NRRL B-50633和NRRLB-50634 由美国(W227 N752 Westmound Dr.Waukesha, WI 53186)的丹尼斯克美国公司(Danisco USA Inc.)的Andy Madisen (W227 N752 Westmound Dr.Waukesha, WI53186, USA)于2012年I月9日按照布达佩斯条约(Budapest Treaty)保藏于美国(1815NorthUniversity Street, Peoria, Illinois61604)的美国农业研究菌种保藏中心(Agricultural Research Service Culture Collection, NRRL)。
[0071]美国(W227N752 Westmound Dr.Waukesha, WI53186)的 Andy Madisen 和美国(W227 N752 Westmound Dr.Waukesha, WI53186)的丹尼斯克美国公司授权丹麦的丹尼斯克公司(Langebrogade I, PO Boxl7, DK-1001, Copenhagen K)在本专利申请中参考这些保藏的生物材料并且无保留地且不可撤销地同意使所述保藏材料成为可公共获得的。
[0072]在一些实施例中，DFM可为包含枯草芽孢杆菌菌株的组合，如下表中详细描述的:
[0073]
【权利要求】
1.一种饲料添加剂组合物，其包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合。
2.根据权利要求1所述的饲料添加剂组合物，其中所述直接饲喂微生物为抗病原体直接饲喂微生物。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的饲料添加剂组合物，其中所述直接饲喂微生物为活细菌。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下属的细菌:乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨球形菌属以及它们的组合。
5.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下物种的细菌:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双岐杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特恩氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双岐杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、蜡状芽孢杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨球形菌、丙酸杆菌属 物种以及它们的组合。
6.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述直接饲喂微生物为如下菌株中的一种或多种:枯草芽孢杆菌菌株3A-P4 (PTA-6506) U5A-P4 (PTA-6507)、22C-P1 (PTA-6508)、2084 (NRRLB-500130)、LSSAOl (NRRL-B-50104)、BS27 (NRRLB-50105)、BS 18(NRRL B-50633)和 BS 278 (NRRL B-50634)。
7.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述直接饲喂微生物是内生孢子的形式。
8.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、中性蛋白酶、碱性丝氨酸蛋白酶或角蛋白酶或拟诺卡氏菌蛋白酶。
9.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述植酸酶为6-植酸酶或3-植酸酶。
10.根据权利要求9所述的饲料添加剂组合物，其中所述植酸酶为6-植酸酶。
11.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述植酸酶为大肠杆菌植酸酶或布丘氏菌植酸酶或哈夫尼菌植酸酶或柠檬酸杆菌植酸酶或曲霉植酸酶或青霉植酸酶或木霉植酸酶或大肠杆菌植酸酶或汉逊酵母植酸酶。
12.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述植酸酶以200FTU/g饲料添加剂组合物至10000FTU/g饲料添加剂组合物之间的剂量存在。
13.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述蛋白酶以1000PU/g饲料添加剂组合物至60000PU/g饲料添加剂组合物之间的剂量存在。
14.根据前述权利要求中任一项所述的饲料添加剂组合物，其中所述DFM以3.75X 107CFU/g饲料添加剂组合物至I X 10nCFU/g饲料添加剂组合物之间的剂量存在。
15.一种方法，其用于改善受试者的性能、或改善饲料中的原料的消化率(例如营养物质消化率，如氨基酸消化率)、或改善氮保留量、或改善所述受试者对坏死性肠炎的抗性、或改善饲料转化率(FCR)、或改善受试者中的增重、或改善受试者中的饲料效率、或调节(例如改善)所述受试者的免疫应答、或促进受试者的胃肠道中的有益细菌生长、或减少受试者的胃肠道中的致病菌群体、或减少粪肥中的营养排泄，所述方法包括向受试者施用直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其包括施用根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述直接饲喂微生物为抗病原体直接饲喂微生物。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中所述直接饲喂微生物是活细菌。
19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下属的细菌:乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨球形菌属以及它们的组合。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的方法，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下物种的细菌:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双岐杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特恩氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双岐杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、蜡状芽孢杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨球形菌、丙酸杆菌属物种以及它们的组合。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的方法，其中所述直接饲喂微生物为如下菌株中的一种或多种:枯草芽孢杆菌菌株3A-P4 (PTA-6506)、15A-P4 (PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508),208 4(NRRL B-500130)、LSSAOl(NRRL-B-50104)、BS27 (NRRL B-50105)、BS 18(NRRL B-50633)和 BS 278(NRRL B-50634)。
22.根据权利要求15-21中任一项所述的方法，其中所述直接饲喂微生物是内生孢子的形式。
23.根据权利要求15-22中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、中性蛋白酶、碱性丝氨酸蛋白酶或角蛋白酶或拟诺卡氏菌蛋白酶。
24.根据权利要求15-23中任一项所述的方法，其中所述植酸酶为6-植酸酶或3-植酸酶。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述植酸酶为6-植酸酶。
26.根据权利要求15-25中任一项所述的方法，其中所述植酸酶为大肠杆菌植酸酶或布丘氏菌植酸酶或哈夫尼菌植酸酶或柠檬酸杆菌植酸酶或曲霉植酸酶或青霉植酸酶或木霉植酸酶或大肠杆菌植酸酶或汉逊酵母植酸酶。
27.直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合的用途，其用于改善受试者的性能、或改善饲料中的原料的消化率(例如营养物质消化率，如氨基酸消化率)、或改善氮保留量、或改善所述受试者对坏死性肠炎的抗性、或改善饲料转化率(FCR)、或改善受试者中的增重、或改善受试者中的饲料效率、或调节(例如改善)所述受试者的免疫应答、或促进受试者的胃肠道中的有益细菌生长、或减少受试者的胃肠道中的致病菌群体、或减少粪肥中的营养排泄。
28.根据权利要求27所述的用途，其中使用根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物。
29.根据权利要求27-28中任一项所述的用途，其中所述直接饲喂微生物为抗病原体直接饲喂微生物。
30.根据权利要求27-29中任一项所述的用途，其中所述直接饲喂微生物为活细菌。
31.根据权利要求27-30中任一项所述的用途，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下属的细菌:乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨球形菌属以及它们的组合。
32.根据权利要求27-31中任一项所述的用途，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下物种的细菌:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双岐杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特恩氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双岐杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、蜡状芽孢杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨球形菌、丙酸杆菌属物种以及它们的组合。
33.根据权利要求27-32中任一项所述的用途，其中所述直接饲喂微生物为如下菌株中的一种或多种:枯草芽孢杆菌菌株3A-P4 (PTA-6506)、15A-P4 (PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508),2084(NRRL B-500130)、LSSAOl(NRRL-B-50104)、BS27 (NRRL B-50105)、BS 18(NRRL B-50633)和 BS 278(NRRL B-50634)。
34.根据权利要求27-33中任一项所述的用途，其中所述直接饲喂微生物是内生孢子的形式。
35.根据权利要求27-34中任一项所述的用途，其中所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、中性蛋白酶、碱性丝氨酸蛋白酶或角蛋白酶或拟诺卡氏菌蛋白酶。
36.根据权利要求 27-35中任一项所述的用途，其中所述植酸酶为6-植酸酶或3-植酸酶。
37.根据权利要求36所述的用途，其中所述植酸酶为6-植酸酶。
38.根据权利要求27-37中任一项所述的用途，其中所述植酸酶为大肠杆菌植酸酶或布丘氏菌植酸酶或哈夫尼菌植酸酶或柠檬酸杆菌植酸酶或曲霉植酸酶或青霉植酸酶或木霉植酸酶或大肠杆菌植酸酶或汉逊酵母植酸酶。
39.一种试剂盒，其包含直接饲喂微生物、蛋白酶、植酸酶和施用说明书。
40.根据权利要求39所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物。
41.根据权利要求39-40中任一项所述的试剂盒，其中所述直接饲喂微生物为抗病原体直接饲喂微生物。
42.根据权利要求39-41中任一项所述的试剂盒，其中所述直接饲喂微生物为活细菌。
43.根据权利要求39-42中任一项所述的试剂盒，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下属的细菌:乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨球形菌属以及它们的组口 ο
44.根据权利要求39-43中任一项所述的试剂盒，其中所述直接饲喂微生物包含来自一个或多个如下物种的细菌:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双岐杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特恩氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双岐杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、蜡状芽孢杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨球形菌、丙酸杆菌属物种以及它们的组合。
45.根据权利要求39-43中任一项所述的试剂盒，其中所述直接饲喂微生物为如下菌株中的一种或多种:枯草芽孢杆菌菌株3A-P4 (PTA-6506)、15A-P4 (PTA-6507)、22C-P1 (PTA-6508) ,2084 (NRRLB-500130)、LSSAOl (NRRL-B-50104)、BS27 (NRRL B-50105)、BS 18(NRRL B-50633)和 BS 278(NRRL B-50634)。
46.根据权利要求39-45中任一项所述的试剂盒，其中所述直接饲喂微生物是内生孢子的形式。
47.根据权利要求39-46中任一项所述的试剂盒，其中所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、中性蛋白酶、碱性丝氨酸蛋白酶或角蛋白酶或拟诺卡氏菌蛋白酶。
48.根据权利要求39-47中任一项所述的试剂盒，其中所述植酸酶为6-植酸酶或3-植酸酶。
49.根据权利要求48所述的试剂盒，其中所述植酸酶为6-植酸酶。
50.根据权利要求39-49中任一项所述的试剂盒，其中所述植酸酶为大肠杆菌植酸酶或布丘氏菌植酸酶或哈夫尼菌植酸酶或柠檬酸杆菌植酸酶或曲霉植酸酶或青霉植酸酶或木霉植酸酶或大肠杆菌植酸酶或汉逊酵母植酸酶。
51.—种制备饲料添加剂组合物的方法，其包括将直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶混合以及(任选地)进行包 装。
52.一种饲料，其包含根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物。
53.根据权利要求52所述的饲料，其中所述植酸酶以400FTU/kg饲料至1000FTU//kg饲料之间的剂量存在。
54.根据权利要求52-53中任一项所述的饲料，其中所述蛋白酶以2000PU/kg饲料至6000PU/kg饲料之间的剂量存在。
55.根据权利要求52-54中任一项所述的饲料，其中所述DFM以7.5 X IO4CFUAg饲料至I X 107CFU/kg饲料之间的剂量存在。
56.一种制备饲料的方法，其包括将饲料组分与根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物混合。
57.一种预混物，其包含饲料添加剂组合物和至少一种矿物质和/或至少一种维生素，所述饲料添加剂组合物包含直接饲喂微生物与蛋白酶和植酸酶的组合。
58.一种预混物，其包含根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物与至少一种矿物质和/或至少一种维生素的组合。
59.根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物，所述组合物用于预防和/或治疗受试者中的球虫病和/或坏死性肠炎。
60.一种预防和/或治疗坏死性肠炎和/或球虫病的方法，其中将有效量的根据权利要求1-14中任一项所述的饲料添加剂组合物施用于受试者。
61.一种饲料添加剂组合物或饲料或试剂盒或方法或用途或预混物，其是如本文中参考附图和实例总体上限定的。
【文档编号】C12R1/125GK103442587SQ201280009315
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2012年1月19日 优先权日:2011年2月18日
【发明者】L·F·R·米兰 申请人:杜邦营养生物科学有限公司