一种木瓜蛋白酶的提纯方法
【专利摘要】本发明公开了一种木瓜蛋白酶的提纯方法,包括如下步骤：1）往木瓜浆中加入水，得到木瓜浆溶液;2）添加复合酶Extyme-A;3）板框过滤：将经过步骤2）处理后的木瓜浆溶液进行板框过滤；4）离心：滤液进行沉降离心，收集离心液；5）添加复合酶Extyme-B;6）粗滤:将离心液采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤；7）精滤:将粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩得到木瓜蛋白酶浓缩液；8）真空干燥，得到木瓜蛋白酶。本发明能够明显改善过滤效果，使得粗滤和超滤变得流畅，缩短过滤时间，提高工作效率和提高酶活收率。
【专利说明】ー种木瓜蛋白酶的提纯方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体涉及ー种木瓜蛋白酶的提纯方法。
【背景技术】
[0002]木瓜蛋白酶是ー类巯基蛋白酶。未成熟青木瓜果实内含量丰富，该酶活力高，热稳定性好，具有天然、卫生、安全等特点，在食品、医药、化妆品、皮革和纺织等领域广泛运用，需求量和价格逐年上升。
[0003]目前，生产木瓜蛋白酶常用提取方法包括:1、烘干或喷雾干燥法，2、絮凝法、3、盐析法、4、超滤精制法。
[0004]方法I所述的エ艺较为简单和原始，缺点是温度高对酶活性破坏大，酶活收率低，杂质多，得到酶活约100万/克左右。
[0005]方法2所述的絮凝法一般采用丹宁和多糖类物质等将蛋白酶等物质沉淀下来，该方法对蛋白酶沉淀专一性不强，沉淀物含杂质多，酶活收率也只有70%，酶活カ为100-150
万/克。
[0006]方法3是用50%以上硫酸铵盐析，得到的酶纯度较高，但高浓度的盐对酶活破坏也较大，产品酶活为200万U/左右，由于产品含盐分较多，灰分増加，生产中脱盐需要较大量水，对环境保护不利。
[0007]方法4是ー种较先进的提取技术，国内生产精制木瓜酶主要采用超滤精制法。该方法提取木瓜蛋白酶纯度高，酶活达250万以上，收率达到90%以上，得到酶活较高，是木瓜蛋白酶精制提取方向。该方法存在问题是，由于木瓜浆含有胶质、脂质、淀粉类物质较多，搅拌提取エ序木瓜酶溶解释放不完全，后续板框过滤渣较多，滤液不清；膜分离过滤阶段由于滤膜孔径非常小，易造成过滤膜堵塞，过滤速度慢，影响木瓜蛋白酶的滤过和分离，生产过程要停机对滤膜进行清洗，导致一定数量的木瓜酶损失，降低酶活收率。
【发明内容】
[0008]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供ー种木瓜蛋白酶的提纯方法，能够明显改善过滤效果，使得粗滤和超滤变得流畅，缩短过滤时间，提高工作效率和提高酶活收率。
[0009]实现本发明的目的可以通过采取如下技术方案达到:
[0010]ー种木瓜蛋白酶的提纯方法，其特征在于包括如下步骤:
[0011]I)往木瓜浆中加入水，搅拌均匀，得到木瓜浆溶液，然后调节木瓜浆溶液的PH值为 6-7;
[0012]2)添加复合酶Extyme-A:按木瓜浆重量的0.2-0.6%添加复合酶Extyme-A到木瓜衆溶液中，搅拌反应5小时；所述复合酶Extyme-A由按酶活力计的以下原料混合制备而成:果胶酶8000U/g、a -淀粉酶2000U/g、^ -葡聚糖酶25000U/g;
[0013]3)板框过滤:将经过步骤2)处理后的木瓜浆溶液进行板框过滤，过滤压力控制在0.6-0.8MPa，收集滤液；所述的板框过滤采用市售产品，佛山金凯地过滤设备有限公司生产的820型板框压滤机。
[0014]4)离心:将步骤3)收集到的滤液进行沉降离心，收集离心液；
[0015]5)添加复合酶Extyme-B:按离心液重量的0.1%_0.2%添加复合酶Extyme-B到离心液中；搅拌至酶完全溶解，混合均匀；所述复合酶Extyme-B由按酶活力计的以下原料混合制备而成:碱性蛋白酶50000U/g、果胶酶6000U/g;
[0016]6)粗滤:将经过步骤5)处理后的离心液采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤(天津爱生膜过滤技术有限公司生产，型号MFOc)，聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um，操作压カ
0.1MPa ；
[0017]7)精滤:将经过步骤6)粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩(天津爱生膜过滤技术有限公司生产，型号USIbl)，聚砜超滤膜的截留分子量为10K，操作压カ0.1MPa ；得到木瓜蛋白酶浓缩液；
[0018]8)真空干燥:将步骤7)得到的木瓜蛋白酶浓缩液进行抽真空干燥，得到木瓜蛋白酶。
[0019]实现本发明的目的还可以通过采取如下技术方案达到:
[0020]实现本发明的一种实施方式是:在步骤I)中，所述木瓜浆与水的重量比为1:5，水温控制在25-35で。
[0021]实现本发明的一`种实施方式是:在步骤2)中，按木瓜浆重量的0.4-0.6%添加复合酶Extyme-A到木瓜衆溶液中。
[0022]实现本发明的一种实施方式是:在步骤2)中，按木瓜浆重量的0.5%添加复合酶Extyme-A到木瓜衆溶液中。
[0023]实现本发明的一种实施方式是:在步骤4)中，控制转速为1500rpm，离心时间为25-30分钟。
[0024]本发明的有益效果在于:
[0025]本发明生产エ艺操作，与现有技术中的超滤精制法生产エ艺比较，具有以下优势:缩短生产时间，工作效率提高，生产过程操作エ艺稳定、易控制，沉降离心液清澈透明，木瓜酶纯度高，成品酶活最高达到350万U/g，提取总收率平均达95%。具体的比较结果可參照表1。
[0026]表1现有常规生产エ艺与实施例1所述的生产エ艺比较
[0027]
【权利要求】
1.ー种木瓜蛋白酶的提纯方法，其特征在于包括如下步骤: 1)往木瓜浆中加入水，搅拌均匀，得到木瓜浆溶液，然后调节木瓜浆溶液的PH值为6-7; 2)添加复合酶Extyme-A:按木瓜衆重量的0.2-0.6%添加复合酶Extyme-A到木瓜衆溶液中，搅拌反应5小时；所述复合酶Extyme-A由按酶活力计的以下原料混合制备而成:果胶酶 8000U/g、a -淀粉酶 2000U/g、β -葡聚糖酶 25000U/g; 3)板框过滤:将经过步骤2)处理后的木瓜浆溶液进行板框过滤，过滤压力控制在0.6-0.8MPa，收集滤液； 4)离心:将步骤3)收集到的滤液进行沉降离心，收集离心液； 5)添加复合酶Extyme-B:按离心液重量的0.1%-0.2%添加复合酶Extyme-B到离心液中；搅拌至酶完全溶解，混合均匀；所述复合酶Extyme-B由按酶活力计的以下原料混合制备而成:碱性蛋白酶50000U/g、果胶酶6000U/g; 6)粗滤:将经过步骤5)处理后的离心液采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤，聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um，操作压カ0.1MPa ； 7)精滤:将经过步骤6)粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓縮，聚砜超滤膜的截留分子量为10K，操作压カ0.1MPa ;得到木瓜蛋白酶浓缩液； 8)真空干燥:将步骤7)得到的木瓜蛋白酶浓缩液进行抽真空干燥，得到木瓜蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的木瓜蛋白酶的提纯方法，其特征在干:在步骤I)中，所述木瓜浆与水的重量比为1:5，水温控制在25-35°C。
3.根据权利要求1所述的木瓜蛋白酶的提纯方法，其特征在于:按木瓜浆重量的0.4-0.6%添加复合酶Extyme-A到木瓜浆溶液中。
4.根据权利要求1所述的木瓜蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤2)中，按木瓜浆重量的0.5%添加复合酶Extyme-A到木瓜浆溶液中。
5.根据权利要求1所述的木瓜蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤4)中，控制转速为1500rpm，离心时间为25-30分钟。
【文档编号】C12N9/50GK103602649SQ201310549707
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】陆祥, 陆超雄, 何维 申请人:陆祥