磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，属于生物医学工程、生物【技术领域】。本发明采用乳化复合技术，在碱性条件下，利用氧化剂氧化亚铁离子聚合形成超微粒子，之后将西黄蓍胶包裹在磁性超微粒表面，制备出Fe3O4-西黄蓍胶复合微球。该微球粒径均一，磁响应性强，在水中分散性良好。以此为载体通过物理吸附法和交联法固定尿激酶，由于磁性固定化尿激酶具有磁响应性，利用体外磁场引导磁性固定化尿激酶在体内向靶向部位移动、定位集中，实现尿激酶在体内的靶向给药，提高药物效率，具有高效速低毒的特点。
【专利说明】磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，属于生物医学工程、生物【技术领域】。
【背景技术】[0002]血栓性疾病是全球高发且致死、致残率很高的疾病。目前虽已有很多的抗血栓类药物，但药物的靶向性、药效、副作用等方面还存在着诸多缺点。因此，开发低价高效、靶向性强、体内半衰期长、副作用小的抗血栓药物成为国内外在研制治疗血栓疾病药物的方向。尿激酶是一种在临床上广泛应用的抗血栓药物，但使用时如果剂量太小，达不到理想的溶栓效果，剂量太大有容易引起组织出血，如何在低剂量的情况下实现理想的溶栓效果，是一个非常有意义的问题。
[0003]磁性-高分子微球是一种利用“复合技术”将两种以上性能不同的材料结合在一起，形成具有多种优良性能的复合微球。现已有一些利用磁性高分子微球固定酶及蛋白的研究，例如利用磁性琼脂糖微球、明胶微球、聚丙烯酰胺微球、多糖微球等进行蛋白及酶的固定，但有些磁性微球的生物相容性差，有些磁响应不理想，有些价格较高、操作繁琐。利用西黄蓍胶包被磁性微粒用于尿激酶的固定，操作简便、价格便宜，具有良好的磁响应性、分散性及生物相容性，相关的技术研究还未见报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种利用磁性西黄蓍胶微球对尿激酶进行固定的方法。
[0005]技术解决方案:
[0006]本发明的具体方法如下:
[0007]①磁性西黄蓍胶微粒的制备
[0008]将0.5-1.5g西黄蓍胶溶于重蒸水中，移入装有搅拌器、冷凝管和氮气入口的四颈瓶中，依次逐滴加入0.1-0.2mol/L的氯化亚铁溶液，充分搅拌，滴加0.01-0.02%的氢氧化钠溶液40-50ml，同时氮气保护，在沸水浴下反应3-6h。重蒸水充分洗涤，之后超声波破碎l-5min,干燥得磁性西黄蓍胶微粒。
[0009]②尿激酶的固定
[0010]称取0.1-1.0g磁性西黄蓍胶微粒，吸附法或交联法固定尿激酶，重蒸水充分洗涤，混合液在强度为100-150GS的磁场中分离，直至无酶蛋白洗出，冷冻真空干燥得到磁性固定化尿激酶。
[0011]本发明采用乳化复合技术，在碱性条件下，利用氧化剂氧化亚铁离子聚合形成超微粒子，之后将西黄蓍胶包裹在磁性超微粒表面，制备出Fe3O4-西黄蓍胶复合微球。此类微球一是具有磁性内核，可利用外加磁场进行分离及定位；二是具有很好的生物相容性，可迅速被机体代谢；四是经过破碎可使微球达到纳米级。因而磁性西黄蓍胶微球在酶的固定化、靶向药物等领域有广泛的应用前景。以此为载体通过物理吸附法和交联法固定尿激酶，由于磁性固定化尿激酶具有磁响应性，利用体外磁场引导磁性固定化尿激酶在体内向祀向部位移动、定位，实现人体内尿激酶低浓度的靶向给药，提高药物效率，具有高效低毒的特点。
[0012]本发明微球粒径均一，磁响应性强，在水中分散性良好。以此为载体通过物理吸附法和交联法固定尿激酶，由于磁性固定化尿激酶具有磁响应性，利用体外磁场引导磁性固定化尿激酶在体内向靶向部位移动、定位集中，实现尿激酶在体内的靶向给药，提高药物效率，具有高效速低毒的特点。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]附图1磁性西黄蓍胶微球的显微照片；
[0014]附图2游离尿激酶体外溶栓效果图；
[0015]附图3尿激酶吸附法与磁性西黄蓍胶微球固定体外溶栓效果图；
[0016]附图4尿激酶交联法与磁性西黄蓍胶微球固定体外溶栓效果图；
【具体实施方式】
[0017]实施例1:
[0018]①磁性西黄蓍胶微粒的制备
[0019]将0.5g西黄蓍胶溶于40ml重蒸水中，移入装有搅拌器、冷凝管和氮气入口的四颈瓶中，依次逐滴加入0.15mol/L的氯化亚铁溶液60mL和0.010%过氧化氢溶液10mL，搅拌(400r/min),滴加3mol/L氢氧化钾溶液40ml,同时氮气保护,在沸水浴下反应4.5h。
[0020]②尿激酶的固定`
[0021]称取0.2g磁性西黄蓍胶微粒，加入ISmg尿激酶，4°C振荡6h，重蒸水充分洗涤，混合液在强度为IOOGs的磁场中分离，直至无酶蛋白洗出，冷冻真空干燥得到磁性固定化尿激酶。
[0022]实施例2:
[0023]①磁性西黄蓍胶微粒的制备
[0024]将1.2g西黄蓍胶溶于40ml重蒸水中，移入装有搅拌器、冷凝管和氮气入口的四颈瓶中，依次逐滴加入0.20mol/L的氯化亚铁溶液70mL和0.012%过氧化氢溶液10mL，搅拌(360r/min),滴加3.5mol/L氢氧化钠溶液45ml,同时氮气保护,在沸水浴下反应3h。
[0025]②尿激酶的固定
[0026]称取0.1g磁性西黄蓍胶微粒经0.2%戊二醛处理lh，再于硼酸缓冲液(pH8.8)与7mg尿激酶交联，室温振荡8h，重蒸水充分洗涤，混合液在强度为120Gs的磁场中分离，直至无酶蛋白洗出。
【权利要求】
1.磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，其特征在于:包含以下步骤: ①磁性西黄蓍胶微粒的制备 将0.5-1.5g西黄蓍胶溶于重蒸水中，移入装有搅拌器、冷凝管和氮气入口的四颈瓶中，依次逐滴加入0.1-0.2mol/L的氯化亚铁溶液，充分搅拌，滴加0.01-0.02 %的氢氧化钠溶液40-50ml，同时氮气保护，在沸水浴下反应3-6h。重蒸水充分洗涤，之后超声波破碎l-5min,干燥得磁性西黄蓍胶微粒。 ②尿激酶的固定 称取0.1-1.0g磁性西黄蓍胶微粒，吸附法或交联法固定尿激酶，重蒸水充分洗涤，混合液在强度为100-150GS的磁场中分离，直至无酶蛋白洗出，冷冻真空干燥得到磁性固定化尿激酶。
2.根据权利要求1所述的磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，其特征在于:西黄蓍胶的量为0.5-1.5g。
3.根据权利要求1所述的磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，其特征在于:氯化亚铁溶液浓度为0.1-0.2mol/L。
4.根据权利要求1所述的磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，其特征在于:滴加氢氧化钠溶液的浓度为0.01-0.02%。
5.根据权利要求1所述的磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，其特征在于:沸水浴下反应时间为3-6h。
6.根据权利要求1所述的磁性西黄蓍胶微球固定尿激酶的方法，其特征在于:磁性西黄蓍胶微球与尿激酶通过吸附法或交联法结合。
【文档编号】C12N11/10GK103710334SQ201310737302
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月30日 优先权日:2013年12月30日
【发明者】巩东辉 申请人:内蒙古科技大学