一种禽脑脊髓炎病毒弱毒疫苗株的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种禽脑脊髓炎病毒YBF02株（禽脑脊髓炎病毒Avian?Encephalomyelitis?virus），该病毒株于2013年11月08日保藏在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC?No.8505。本发明筛选的禽脑脊髓炎病毒弱毒疫苗株通过水平传播感染在鸡体连续传代，均未见毒力返强现象，遗传性稳定，符合禽脑脊髓炎弱毒疫苗株无毒力返强的标准，制成的疫苗能够提供有效的免疫保护，具有很好的商品化开发前景。
【专利说明】一种禽脑脊髓炎病毒弱毒疫苗株
【技术领域】
[0001]本发明属于疫苗抗原选育【技术领域】，具体涉及一种禽脑脊髓炎病毒弱毒疫苗株。【背景技术】
[0002]禽脑脊髓炎(AE)是由禽脑脊髓炎病毒(AEV)引起的一种主要危害4周龄以下雏鸡，以侵害中枢神经系统引起非化脓性脑炎为主要病理特征的病毒性传染病，表现为运动失调、头颈震颤和后趾麻痹等神经症状，特别是头和颈部的震颤。因此，过去常称为“流行性震颤”。4周龄以下雏鸡感染AEV后，发病率一般为20%~60%，死亡率平均为25%，也可超过50% ;成年鸡感染不表现神经症状，但可引起一过性产蛋下降，下降幅度为16%~43%，有的高达60%以上，但不出现神经症状，约两周后产蛋可恢复正常。但此时期所产的种蛋高度带毒，在孵化时呈现两种趋势:一部分鸡胚在孵化后期死亡；另一部分虽可孵化出壳，但在出壳时或出壳后数天内即能表现症状，这些雏鸡的粪便中带有大量病毒，能造成其他雏鸡的感染。禽脑脊髓炎在全世界均有发生，易感鸡群在一年四季均可发病，冬春发生较多。几乎所有鸡群最终都会被病毒感染，但临床发病率较低。
[0003]1930年，Jones首先在2周龄商品代洛岛红鸡发现AE，表现为震颤。1931年观察到两次暴发，发生在不同鸡场的I周龄和4周龄鸡群，这两个群源于同一种鸡群。在以后的两年间，在新英格兰地区多 个州均发现了 AE的暴发，因此又称为“新英格兰病”。1934年，Jones取自然发病鸡的脑组织滤液经脑内接种易感鸡复制出了本病。1938年，Van Roekel等指出:并不是总能观察到震颤，当出现震颤时随后会出现共济失调，因为此病有传染性和主要侵害中枢神经系统，所以提出称为“传染性禽脑脊髓炎”，后来缩为“禽脑脊髓炎”并于1939年被美国兽医协会委员会采用。1958年，Schaaf第一次报道通过免疫成功控制了本病。1960年Calnek等阐明了 AE的流行病学，随后开发出了口服疫苗，成为当今世界商品鸡群控制AE的基础。该病现已遍布世界各地，很多国家和地区都有该病发生的报道。
[0004]我国许多省市，均有发生本病的报道，已给养禽业造成多方面的损失。1980年张泽纪首先在广东的雏鸡群中发现疑似AE。1982年李心平通过病理组织学确诊该病。1983年毕英佐通过流行病学、病理组织学确诊此病。姚大明、秦爱建、赵振华、姚永秀等相继进行了AEV的分离和鉴定工作及疫苗的研制与应用试验。近年来辽宁、江苏、黑龙江、河北、山东、内蒙古、福建、上海、河南、江西、陕西等地陆续出现AE的报道。黄骏明等用鸡脑敏感试验检测了哈尔滨市17个蛋鸡群，发现这些蛋鸡群对AE的污染率为95.1%。由此可见，该病在我国是广泛存在的。
[0005]对急性暴发AE的雏鸡没有有效的治疗方法，在育成期接种疫苗，能控制种鸡群在性成熟后不再发生感染，同时也能防止病毒经蛋途径扩散。此外，母源抗体能保护雏鸡在最易感的头2~3周抵抗AEV感染。商品产蛋鸡群也可以进行免疫接种，以防止由AE引起的一过性产蛋下降。但活疫苗制备中最关键的是获得低毒且具有免疫原性的疫苗株。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种禽脑脊髓炎病毒弱毒疫苗株，用该弱毒疫苗株所制备的疫苗对AEV的攻击能提供良好的免疫保护效力。
[0007]本发明的禽脑脊髓炎病毒YBF02株(禽脑脊髓炎病毒Avian Encephalomyelitisvirus),该病毒株于2013年11月08日保藏在北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为=CGMCC N0.8505。
[0008]本发明筛选的弱毒疫苗株用来制备用于预防禽脑脊髓炎的疫苗。
[0009]本发明筛选的禽脑脊髓炎病毒弱毒疫苗株通过水平传播感染在鸡体连续传代，均未见毒力返强现象，遗传性稳定，符合禽脑脊髓炎弱毒疫苗株无毒力返强的标准，制成的疫苗能提供有效的免疫保护，具有很好的商品化开发前景。
【具体实施方式】
[0010]下面结合具体实施例来进一步描述本发明。
[0011]—、禽脑脊髓炎病毒株的选育
[0012]取患有禽脑脊髓炎雏鸡的脑、胰腺和十二指肠，在无菌条件下研磨，用灭菌生理盐水作1:5稀释、反复冻融3次、4000rpm离心30分钟，取上清液滤器过滤后，脑内接种I日龄SPF雏鸡10只，0.1ml/只，待出现运动失调、头颈震颤等症状后采血致死，无菌取病雏鸡的脑、胰腺和十二指肠，在无菌条件下研磨，用灭菌生理盐水作1:5稀释，反复冻融3次、4000rpm离心30分钟,取上清液作为第I代分离毒(Fl)保存备用。取Fl代同上方法脑内接种I日龄SPF雏鸡传代，制备第2代分离毒(F2)。如此连传4代。鸡胚致病性试验表明分离毒为一株非鸡胚适应性的禽脑脊髓炎病毒弱毒。取I日龄SPF雏鸡传代的F4代种毒，10倍稀释后，卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚，继续在37~38°C孵育至16日龄收毒:吸取胚液，观察胚体活动和发育情况，称胚体重和脑重，检查胚体，胚脑病变(出血，积水，萎缩等)；并取胚脑，胃，肠，胰腺，用胚`液作1:5稀释,加双抗,研磨，反复冻融3次，4000rpm离心30分钟，制成悬液备用。这样连续传至第18代。选取作为疫苗研制的候选毒株，命名为AEVYBF02株，并于2013年11月08日保藏在北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为=CGMCC N0.8505。
[0013]二、AEV YBF02株的安全性检测
[0014]AEV YBF02株毒种安全性试验:分别将基础种子的第5、7、10代毒种稀释，取I~10周龄SPF鸡各10只，每只刺种或口服IO4EID5tl的YBF02株病毒，观察28日，并记录结果。结果表明:AEV YBF02株基础种子第5、7、10代毒种对I~10周龄SPF鸡是安全的，无任何禽脑脊髓炎特异性症状，不影响生长发育。
[0015]表1:毒种安全性试验
[0016]
【权利要求】
1.一种禽脑脊髓炎病毒，所述的禽脑脊髓炎病毒的保藏编号为:CGMCC N0.8505。
2.权利要求1所述的病毒在制备用于预防禽脑脊髓炎的疫苗中的应用。
3.如权利要求1所述的禽脑脊髓炎病毒，为YBF02株。
4.如权利要求1所述 的禽脑脊髓炎病毒的应用，其特征在于，是对雏鸡进行免疫。
【文档编号】C12N7/00GK103710314SQ201410001306
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2014年1月2日 优先权日:2014年1月2日
【发明者】王红, 范根成, 杜元钊 申请人:青岛易邦生物工程有限公司