一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法
【专利摘要】本发明涉及一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法，其处理步骤包括：a.虎杖粉碎过40~60目筛；b.复合酶酶解；c.连续逆流超声波辅助提取；d.上大孔树脂柱；e.结晶。本发明以虎杖为原料，充分利用酶解将原料中的白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，再以连续逆流超声波法提取出白藜芦醇，借以达到提高白藜芦醇收率的目的。本发明具有工艺简单、生产周期短、收率高等优点，适用于规模化生产。
【专利说明】一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然植物提取分离领域，涉及一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法，尤其涉及一种利用酶解-连续逆流超声波法提取白藜芦醇的方法。
【背景技术】
[0002]虎杖为寥科多年生草本植物的干燥根茎及根。味苦、性微寒，具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤的功效，临床应用广泛。近年来，关于虎杖中有效成分已进行了深入研究，白藜芦醇、蒽醌类化合物和黄酮类成分为其主要有效成分，以白藜芦醇含量最高。现代药理学实验证明，白藜芦醇具有抗菌消炎、降血脂、预防心血管病、抗肿瘤、抑制血小板活性等生理作用。
[0003]目前，虎杖中白藜芦醇的提取方法主要有乙醇浸提法、碱提酸沉法、超临界CO2萃取法等，这些技术都存在着不足，如浸提法，浸提时间长、溶剂用量大、提取率低；碱提酸沉法，提取率低、成分复杂；超临界萃取则需要特殊仪器设备，压力大，运行成本高，并且对提取物的极性有一定的要求。
[0004]白藜芦醇在虎杖中主要以苷的形式存在。近年来，纤维素酶在国外广泛应用于各个领域，在国内将其应用于中草药提取尚处于起步阶段。大部分中药材的有效成分都被包裹在植物细胞壁内，细胞壁是由纤维素构成，而纤维素则是由β _匍萄糖以1，4- β -D-匍萄糖苷键连接一个β-D-葡萄糖构成的，纤维素酶解作用将使白藜芦醇苷失去葡萄糖降解生成白藜芦醇苷元，从而提高白藜芦醇的提取率。基于以上原理，本发明为白藜芦醇的提取提供了一种新的方法，并为纤维素酶在中药有效成分提取中的应用提供依据。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种酶解-连续逆流超声提取白藜芦醇的方法，提高了白藜芦醇的溶出率，缩短了提取时间，工艺简单，适合规模化生产。
[0006]本发明包括以下步骤:
a.取原材料虎杖,粉碎,过4(Γ60目筛；
b.向上述粉碎好的虎杖中加入2?4倍的水，醋酸钠/醋酸缓冲溶液调PH值4.(Γ5.0，再加入原料重量的3?5%。的纤维素酶和果胶酶(比例为0.8:0.2)，控温在45飞5°C，搅拌，酶解时间为2?3h ；
c.将酶转化后的物料再加入:Γ5倍的8(Γ90%的乙醇放入超声逆流浸提装置进行提取，超声功率为150?250W，提取时间为6(T90min ；
d.将步骤c中的萃取液离心，取出上清液，上预处理的大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5?7BV的5(Γ70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得粗品；
e.将步骤d中得到的粗品用无水乙醇重复结晶2次，得白藜芦醇。
[0007]本发明步骤d中所述的大孔吸附树脂的预处理方法为先用无水乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗，经常检查流出的乙醇液，当流出的乙醇液与水混合不呈现白色乳浊现象即可，然后以大量的蒸馏水洗去乙醇，至无醇味。
[0008]本发明步骤d中所述的大孔吸附树脂型号为NKA-9、H1020、NKA I1、D-1Ol0
[0009]本发明选用纤维素酶充分破坏植物细胞壁结构，使细胞内的有效成分易于溶出，同时，虎杖中的白藜芦醇苷在纤维素酶的作用下，转化成白藜芦醇，使白藜芦醇的得率大大提高；而果胶酶能将长春花中的果胶质等不溶物溶解。再利用逆流浸提技术和超声波辅助技术加以提取，加速虎杖粉中有效成分的溶解、促进溶剂的扩散和传质，提高了虎杖中白藜芦醇的提取率，缩短了提取时间，减少了溶剂使用量，工艺简单、得率高。
[0010]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0011]【具体实施方式】:
实施例1:
原材料虎杖粉碎，过40目筛，取粉末300g，加入2倍的水，醋酸钠/醋酸缓冲溶液调PH值4.0，再加入原料重量的3%。的纤维素酶和果胶酶(比例为0.8:0.2)，控温在45°C，搅拌，酶解时间为3h，再将酶转化后的物料加入4倍的90%的乙醇放入超声逆流浸提装置进行提取，超声功率为200W，提取时间为80min，萃取液离心，取出上清液，上预处理的NKA II大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5BV的50%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得粗品，用无水乙醇重复结晶2次，得白藜芦醇2.55g，收率为0.85%，纯度为98.1%。
[0012]实施例2:
原材料虎杖粉碎，过40目筛，取粉末300g，加入4倍的水，醋酸钠/醋酸缓冲溶液调PH值5.0，再加入原料重量的4%。的纤维素酶和果胶酶(比例为0.8:0.2)，控温在50°C，搅拌，酶解时间为2.5h，再将酶转化后的物料加入5倍的80%的乙醇放入超声逆流浸提装置进行提取，超声功率为150W，提取时间为90min，萃取液离心，取出上清液，上预处理的NKA-9大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用6BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得粗品，用无水乙醇重复结晶2次，得白藜芦醇2.76g，收率为0.92%，纯度为98.6%。
[0013]实施例3:
原材料虎杖粉碎，过40目筛，取粉末300g，加入3倍的水，醋酸钠/醋酸缓冲溶液调PH值4.5，再加入原料重量的5%。的纤维素酶和果胶酶(比例为0.8:0.2)，控温在55°C，搅拌，酶解时间为2h，再将酶转化后的物料加入3倍的85%的乙醇放入超声逆流浸提装置进行提取，超声功率为250W，提取时间为60min，萃取液离心，取出上清液，上预处理的D-101大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用7BV的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得粗品，用无水乙醇重复结晶2次，得白藜芦醇2.88g，收率为0.96%，纯度为97.9%。
【权利要求】
1.一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于，包括以下步骤: a.取原材料虎杖，粉碎，过4(Γ60目筛； b.向上述粉碎好的虎杖中加入2?4倍的水，醋酸钠/醋酸缓冲溶液调PH值4.(Γ5.0，再加入原料重量的2?4%。的生物酶，控温在45飞5°C，搅拌，酶解时间为2?3h ； c.将酶转化后的物料再加入:Γ5倍的8(Γ90%的乙醇放入超声逆流浸提装置进行提取，超声功率为150?250W，提取时间为6(T90min ； d.将步骤c中的萃取液离心，取出上清液，上预处理的大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5?7BV的5(Γ70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得粗品； e.将步骤d中得到的粗品用无水乙醇重复结晶2次，得白藜芦醇。
2.根据权利要求1所述的一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于:步骤b中所述的生物酶为纤维素酶和果胶酶(比例为0.8:0.2)。
3.根据权利要求1所述的一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于:步骤d中所述的大孔吸附树脂的预处理方法为先用无水乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗，经常检查流出的乙醇液，当流出的乙醇液与水混合不呈现白色乳浊现象即可，然后以大量的蒸馏水洗去乙醇，至无醇味。
4.根据权利要求1所述的一种从虎杖中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于:步骤d中所述的大孔吸附树脂型号为NKA-9、H1020、NKA I1、D_101。
【文档编号】C12P7/22GK104263763SQ201410450303
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司