一种鲜石斛制剂的制备方法与流程

本发明涉及食品保健品领域，尤其涉及一种鲜石斛制剂的制备方法。

背景技术：

鲜药是指用新鲜植物或动物的整体或部分组织，或取其汁液加工处理制成的药物，使用鲜药的方法除了入汤剂以外,经常取自然汁服用。明代《本草纲目》中就有1100多条应用鲜药的附方，古代鲜药的应用到达了一个巅峰。到了现代，由于鲜药的培养、贮藏及运输成本较高，加上加工技术的限制，鲜药保鲜困难，限制了其在临床上的应用，鲜药的应用呈现逐渐萎缩的趋势，未能得到发展。目前临床上主要以干品代替鲜药，而传统的加工技术会造成鲜药活性成分的损失，使得鲜药材的药理作用降低，不能适应临床需求。其中关键问题是鲜药在储存、加工、运输以及使用上极不方便，且易变质失效，采用传统加工技术也会降低其营养成分，采用新的加工方法，以解决其运输、使用上的不便十分必要。

石斛是兰科草本植物，主要有效成分为水溶性多糖、内脂类生物碱、游离氨基酸以及多种微量元素等，可提高人体免疫功能，具有滋阴、解毒、抗癌、抗疲劳、抗辐射、耐缺氧、延缓衰老等作用。“中医用石斛时，讲究鲜品为上”，常取自然汁服用，自然汁保持了天然药物的原有性味,气味俱存,具润燥之性较强的特点。2010版《中国药典》也将石斛干品和鲜品分开介绍。中国中医科学院郝近大教授研究发现，与石斛干品相比，鲜石斛总生物碱、多糖含量均高于干品，其提高免疫功能也优于干药，也验证了石斛“生者优良”的特点。而目前市场上石斛的加工过程大致需要经过整理、烘焙、卷曲加箍、干燥4个工艺步骤，在整个加工环节，涉及到烘培及干燥必定会对一些热敏性的营养物质产生破坏，或降低其含量。因此，有必要开发新的石斛鲜药加工技术,研究开发出服用方便、效果明显、营养价值较高的石斛鲜药。

臭氧以氧原子的氧化作用破坏微生物膜的结构，以实现杀菌作用。臭氧对细菌的灭活反应总是进行的很迅速，与其它杀菌剂不同的是：臭氧能与细菌细胞壁脂类的双键反应，穿入菌体内部，作用于蛋白和脂多糖，改变细胞的通透性，从而导致细菌死亡。臭氧还作用于细胞内的核物质，如核酸中的嘌呤和嘧啶破坏DNA。臭氧首先作用于细胞膜，使膜构成成份受损伤，而导致新陈代谢障碍，臭氧继续渗透穿透膜，而破坏膜内脂蛋白和脂多糖，改变细胞的通透性，导致细胞溶解、死亡。臭氧杀菌处理时不需要加热，使用方便，价格低廉，气体的扩散性使得杀菌无死角，气体降解为氧气，杀菌后处理后无残留，是目前食品安全技术中一项关键技术，在食品工业中得到了广泛的使用。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种鲜石斛制剂的制备方法，以解决现有技术的加工过程会对鲜石斛中的营养物质产生影响的技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种鲜石斛制剂的制备方法，所述鲜石斛制剂为由鲜石斛与辅料混合制备获得的，其制备方法包括以下步骤：

(1)鲜石斛冻干粉的制备：将鲜石斛榨成匀浆，过滤去除不溶性石斛渣后，放入-20℃下预冻2h，再进行真空冷冻干燥，获得鲜石斛冻干粉；

(2)将步骤(1)的鲜石斛冻干粉与辅料混匀，过筛，在真空干燥的条件下制成颗粒；

(3)将步骤(2)的颗粒用臭氧杀菌后密封保存，获得鲜石斛颗粒剂，即为一种鲜石斛制剂；

(4)将步骤(4)的鲜石斛颗粒剂通过常规制药方法进行加工，制备获得不同剂型的鲜石斛制剂。

进一步地，所述步骤(1)中，采用4层纱布进行过滤。

进一步地，所述步骤(2)中，辅料包括润湿剂、增稠剂、矫味剂和填充剂；

进一步地，所述步骤(2)中，润湿剂为体积比为70％的乙醇溶液，增稠剂为糊精，矫味剂和填充剂为蔗糖。

进一步地，所述步骤(2)中，在真空干燥的条件下通过湿法制粒的方式获得鲜石斛颗粒剂。

进一步地，所述步骤(2)中，真空干燥的条件为：真空度为-0.085Mpa，干燥温度为40℃，干燥时间为4h。

进一步地，所述步骤(3)中，臭氧杀菌的浓度为50ppm，杀菌时间为30分钟。

本发明还提供了一种鲜石斛制剂，所述鲜石斛制剂为采用上述方法制备获得的。

本发明的原理为：石斛鲜药的作用价值比干药好，但是很难保存，因此，在制备石斛鲜药制剂的过程中必须要考虑鲜药的有效成分的保留问题，为了保证鲜药有效成分不降解，鲜石斛颗粒剂的制备从原料加工、制粒成型、杀菌处理三个部分入手。冻干、真空减压干燥、臭氧灭菌三种技术贯穿制备过程。保证鲜石斛的氧化性成分损失达到最小，同时避免了高温等灭菌方式对鲜药有效成分的不利影响。

本发明相比现有技术具有以下优点：本发明提供了一种鲜石斛制剂的制备方法，该方法采用冷冻干燥技术先制备鲜石斛冻干粉原料，保留了鲜石斛中的有效成分；制粒过程中采用真空干燥技术，使鲜石斛的氧化性成分损失小，操作简便；臭氧灭菌避免了传统高温等灭菌方式对产品质量带来的不利影响，提高了产品的产量和质量，降低了生产成本。

附图说明

图1为鲜、干石斛颗粒剂的DPPH·自由基清除活性检测结果图；

图2为鲜、干石斛颗粒剂的ABTS·⁺自由基清除活性检测结果图；

图3为鲜、干石斛颗粒剂的·OH自由基清除活性检测结果图。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1

1、材料

本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。

2、方法

2.1鲜石斛冻干粉的制备

将石斛洗净晾干，取100g新鲜石斛茎，切成0.5cm小段后，加纯净水700ml在榨汁机中反复研磨多次，每次时间为20-30s，制成鲜石斛匀浆。

将鲜石斛匀浆用4层纱布过滤，去除其不溶性成分，得到可溶性的鲜石斛匀浆。

将可溶性鲜石斛匀浆放入-20℃的冰箱中预冻2h，再均摊放入真空冷冻干燥机中进行干燥，于-20℃，真空度为0.1pa条件下干燥48-72h，得到鲜石斛冻干粉，将鲜石斛冻干粉放入研磨机中研碎，经精密称定后，为13.92g。根据每人每天鲜石斛的建议食用量为10g，确定每份鲜石斛颗粒剂中冻干粉的质量为1.39g。

2.2鲜石斛颗粒的制备

将1.39g鲜石斛冻干粉、6g食用糊精、4g蔗糖放入研钵中混匀，加入适量体积分数为70％的乙醇溶液润湿，制成软材。将软材过16目尼龙筛，制成湿颗粒。

将湿颗粒放入搪瓷盘中，置于真空干燥箱中，用力振荡使颗粒剂分散均匀。在真空度为-0.085Mpa，温度为40℃的条件下干燥4h，制得颗粒。

将颗粒用1号筛和5号筛进行筛选，选择可以过1号筛不能过5号筛的颗粒作为标准颗粒进入后续灭菌程序。

2.3鲜石斛制剂的制备

鲜石斛颗粒剂的制备：将标准颗粒置于浓度为50ppm的臭氧中杀菌30分钟后，密封包装即可。

鲜石斛片剂的制备：将鲜石斛颗粒剂进行整粒后，加入硬脂酸镁，混匀，直接压片即得到鲜石斛片剂。

鲜石斛胶囊的制备：将鲜石斛颗粒剂装入胶囊，即得鲜石斛胶囊。

3效果验证

3.1对比样品(干石斛制剂)的制备

取新鲜石斛茎10g，用双蒸水洗净，沥干，切成0.5cm小段，均摊放入65℃的鼓风干燥箱进行干燥，经研磨机制成粉末，同60g食用糊精，40g蔗糖混匀后，加入适量体积分数为70％的乙醇润湿，制成软材。将软材过16目尼龙筛制成湿颗粒。将制成的湿颗粒放入搪瓷盘中置于真空干燥箱，用力振荡使颗粒分散均匀。在真空度为-0.085Mpa，干燥温度为40℃的条件下干燥4h，获得颗粒。将1号筛和5号筛叠加，把已经干燥好的颗粒剂放在1号筛上，用力振荡，仅留下能过1号筛不能过5号筛的颗粒作为标准颗粒进行杀菌。将标准颗粒放入臭氧灭菌的仪器中进行灭菌，灭菌条件为臭氧浓度为50ppm，灭菌时间为30分钟，即得干石斛颗粒剂。

3.2样品溶液的制备

取鲜石斛颗粒剂8.14g(8.14g鲜石斛颗粒剂中含原鲜石斛1g)、干石斛颗粒剂10.00g(10.00g干石斛颗粒含原干石斛1g)，分别加入300mL水，50℃超声波处理1.5h，蒸发浓缩至50mL，得20mg/mL浓度的鲜石斛颗粒剂样品溶液和干石斛颗粒剂样品溶液，待测。

3.3DPPH·自由基清除实验

取1.0mL的0.1mmol·L^-1DPPH甲醇溶液，加入1.0mL不同浓度的各样品溶液，立即充分混匀，室温避光反应30min，用紫外分光光度计于517nm波长下测定吸光度值At，等体积的甲醇和去离子水混合溶液作为空白调零；设置Ac管，1.0mL 0.1mmol·L^-1DPPH甲醇溶液和1.0mL去离子水混合，同法处理，测定吸光度为Ac。在人体内，维生素C是高效抗氧化剂，本实验使用维生素C(VitC)作为阳性对照。每个样品浓度做3组平行试验，以计算出的平均值作为结果。DPPH·自由基清除率可以用下面的公式表达：

DPPH·自由基清除率(％)＝(Ac-At)/Ac×100

鲜、干石斛颗粒剂的DPPH·自由基清除活性检测结果如图1所示。

结论：VitC的IC₅₀为11μg·mL^-1，鲜、干石斛颗粒剂样品的IC₅₀分别为2.0mg/mL、3.7mg/mL。可以看出，本发明所述方法制备获得的鲜石斛颗粒剂在DPPH·自由基清除作用方面优于干石斛颗粒剂。

3.4ABTS·⁺自由基清除实验

取7.0mmol·L^-1ABTS溶液与140mmol·L^-1过硫酸钾以1：50的比例进行混合，室温避光反应16h，形成稳定的ABTS·⁺溶液。同时，稀释ABTS·⁺溶液直至用紫外分光光度计于734nm波长下测定的吸光度为0.7±0.02，以得到稳定的测试液。取1.0mL不同浓度的各样品溶液与2.0mL ABTS⁺测试液立即充分混匀，室温避光反应10min，在734nm波长下测定的吸光度为At。去离子水作为空白调零。设置Ac管，1.0mL去离子水与2.0mL ABTS⁺测试液混合，所测吸光度为Ac。VitC作为阳性对照。每个样品浓度做3组平行试验，以计算出的平均值作为结果。ABTS·⁺自由基清除率可以用下面的公式表达：

ABTS·⁺自由基清除率(％)＝(Ac-At)/Ac×100

鲜、干石斛颗粒剂的ABTS·⁺自由基清除活性结果如图2所示。

结论：VitC的IC₅₀为5μg·mL^-1，鲜、干石斛颗粒剂样品的IC₅₀分别为0.2mg/mL、0.48mg/mL。可以看出，本发明所述方法制备获得的鲜石斛颗粒剂在ABTS·⁺自由基清除作用方面优于干石斛颗粒剂。

3.5·OH自由基清除实验

1.0mL 7.5mmol·L^-1FeSO₄加1.0mL 7.5mmol·L^-1邻二氮菲，加2.0mL PH7.4磷酸盐缓冲溶液和1.0mL 8.8mmol·L^-1H₂O₂，立即混匀，再加1.0mL不同浓度各样品溶液和4.0mL去离子水，混匀，在37℃下反应30min，用紫外分光光度计于536nm波长下测定吸光度值At，去离子水作为空白调零。同时，1.0mL去离子水代替样品，同上处理，所测的吸光度为Ac；1.0mL去离子水代替H₂O₂，同上处理，所测吸光度为As。VitC作为阳性对照。每个样品浓度做3组平行试验，以计算出的平均值作为结果。·OH自由基清除率可以用下面的公式表达：

·OH自由基清除率(％)＝[Ac-(At-As)]/Ac×100

鲜、干石斛颗粒剂的·OH自由基清除活性结果如图3所示。

结论：VitC的IC₅₀为3.0mg·mL^-1，鲜、干石斛颗粒剂样品的IC₅₀分别为38mg/mL、28mg/mL。可以看出，本发明所述方法制备获得的鲜石斛颗粒剂在·OH自由基清除作用方面优于干石斛颗粒剂。

以上为本发明一种详细的实施方式和具体的操作过程，是以本发明技术方案为前提下进行实施，但本发明的保护范围不限于上述的实施例。