本发明涉及一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物及其制备方法，属于动物食物加工领域。
背景技术：
：动物免疫系统与动物的各项生理功能息息相关，对于维持动物健康、抵抗各类疾病、保证动物各项代谢顺利进行都有重要意义。提高机体免疫力，增强机体免疫功能是预防各种疾病发生以康复的关键所在。现代营养学研究发现动物摄食蛋白质经消化道的酶解作用后，大多是以小肽的形式消化吸收，以游离氨基酸形式吸收的比例很小。因为小肽与游离氨基酸相比更便于通过肠壁转运，肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多。肽类物质营养作用的另一新认识是蛋白质在酶解过程中可以产生一些具有特殊生理调节功能的生物活性肽。免疫调节肽可通过调节机体免疫器官（组织）的生长发育、免疫细胞的活性与功能、抗体产生、细胞因子的分泌与表达以及免疫相关信号分子的释放等来调节机体免疫功能，在保证动物（人）健康中具有重要作用。目前国内专利中关于蛋白酶解产物的抗氧化、ace抑制及降血糖功能的专利申请较多，但关于提高免疫功能的酶解产物专利申请很少。尤其是既具有提高免疫力又具有抗氧化功能的酶解产物报道很少。鳀鱼是一种生活在温带海洋中上层的小型鱼类，广泛分布于我国的渤海、黄海和东海，是其它经济鱼类的饵料生物，鳀鱼目前是海洋中主要的低值鱼类，产量较大，资源没有得到有效的利用。目前以鳀鱼为原料，制备提高免疫和抗氧化功能的酶解产物的专利文献及相关研究报道还未见到。因此，有必要提出有效的技术方案，解决上述问题。技术实现要素：本发明针对上述现有技术的不足，提供一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物及其制备方法。该鳀鱼酶解物具有较好的提高免疫和抗氧化功能。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物的制备方法，步骤如下：（1）制备鳀鱼浆液：选用冷冻鲜鳀鱼，加入鳀鱼总量1.0～2.0倍的水在121-131℃条件下处理0.5-1小时，然后将温度调整到75-85℃，利用超声波发生器经超声波处理15-25分钟，得到鳀鱼浆液；（2）制备鳀鱼酶解液：调节步骤（1）得到的所述鳀鱼浆液中蛋白质含量为7-10%；再加入蛋白质重量0.1-0.2%的复合蛋白酶进行酶解，在50～60℃条件下进行酶解反应0.5～1.5h，得到鳀鱼酶解液；（3）制备鳀鱼发酵酶解液：将步骤（2）得到的鳀鱼酶解液温度调整到45-50℃，加入鳀鱼酶解液重量0.5-1%葡萄糖，再加入鳀鱼酶解液重量0.1-0.2%保加利亚乳杆菌发酵液；在40-45℃条件下发酵8-12小时，得到鳀鱼发酵酶解液；（4）将步骤（3）得到的鳀鱼发酵酶解液，经过真空浓缩、干燥，得到鳀鱼酶解物。优选地，所述超声波处理频率为40-60kh。优选地，所述复合蛋白酶为质量比为1～2：1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成。本发明还提供一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物，如上述的制备方法制备得到。有益效果：（1）本发明利用酶解同步结合生物发酵技术开发的鳀鱼酶解物制备方法简单，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。（2）开发的鳀鱼酶解物具有提高免疫力和抗氧化功能，生产过程中鳀鱼得到了全利用，没有产生任何副产物。（3）本发明利用特定频率超声波技术处理的鳀鱼蛋白液，可以明显改善鳀鱼蛋白对酶的敏感性，降低酶的使用量。（4）开发的产品安全，本发明采用多种食品级复合蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶）和保加利亚乳杆菌，经在温和条件下，经过适度酶解和生物发酵获得的鳀鱼酶解物。（5）本发明开发的鳀鱼酶解物，具有良好的风味，能广泛应用于动物饲料，提高动物的免疫能力。（6）本发明开发鳀鱼酶解物中分子量小于1500的肽的比例为90%以上。具体实施方式本发明针对低值鱼鳀鱼的原料特点，经过大量的实验，开发了一种具有较好提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物及制备方法。通过对鳀鱼高压、高频超声波等预处理，通过发酵结合酶解技术，结合真空浓缩和干燥技术生产的具有抗疲劳和抗氧化功能的鳀鱼酶解物，建立一套简单高效的鳀鱼酶解物的制备方法。为更好的理解本发明，下面通过具体实施例进行进一步的阐述。实施例1一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物的制备方法，步骤如下：选用冷冻鲜鳀鱼，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,鳀鱼清洗后加入鳀鱼总量1.0倍的水在131℃条件下处理0.5小时，然后将温度调整到75℃，利用超声波发生器经超声波（频率为40kh）处理25分钟，得到鳀鱼浆液。通过浓缩或加水稀释调节鳀鱼浆液中蛋白质含量为7%，加入蛋白重量0.2%的复合蛋白酶进行酶解（碱性蛋白酶、中性蛋白酶组成，它们之间的质量比为2：1），在50℃条件下进行酶解反应1.5h，得到鳀鱼酶解液。将鳀鱼酶解液温度调整到45℃，加入鳀鱼酶解液重量1%葡萄糖，再加入鱼酶解液重量0.1%保加利亚乳杆菌发酵液(活菌数为1-5×1012个/g)；在45℃条件下发酵12小时，得到鳀鱼发酵酶解液。将鳀鱼发酵酶解液，经过真空浓缩、干燥，得到提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物。实施例2一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物的制备方法，步骤如下：选用冷冻鲜鳀鱼，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,鳀鱼清洗后加入鳀鱼总量2.0倍的水在121℃条件下处理1小时，然后将温度调整到85℃，利用超声波发生器经超声波（频率为50kh）处理15分钟，得到鳀鱼浆液。通过浓缩或加水稀释调节鳀鱼浆液中蛋白质含量为8%，加入蛋白重量0.2%的复合蛋白酶进行酶解（碱性蛋白酶、中性蛋白酶组成，它们之间的质量比为2：1），在55℃条件下进行酶解反应0.5h，得到鳀鱼酶解液。将鳀鱼酶解液温度调整到50℃，加入鳀鱼酶解液重量0.5%葡萄糖，再加入鱼酶解液重量0.2%保加利亚乳杆菌发酵液(活菌数为1-5×1012个/g)；在45℃条件下发酵8小时，得到鳀鱼发酵酶解液。将鳀鱼发酵酶解液，经过真空浓缩、干燥，得到提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物。实施例3一种提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物的制备方法，步骤如下：选用冷冻鲜鳀鱼，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,鳀鱼清洗后加入鳀鱼总量1.5倍的水在125℃条件下处理1小时，然后将温度调整到80℃，利用超声波发生器经超声波（频率为50kh）处理20分钟，得到鳀鱼浆液。通过浓缩或加水稀释调节鳀鱼浆液中蛋白质含量为10%，加入蛋白重量0.15%的复合蛋白酶进行酶解（碱性蛋白酶、中性蛋白酶组成，它们之间的质量比为1：1），在60℃条件下进行酶解反应1.0h，得到鳀鱼酶解液。将鳀鱼酶解液温度调整到50℃，加入鳀鱼酶解液重量1%葡萄糖，再加入鱼酶解液重量0.1%保加利亚乳杆菌发酵液(活菌数为1-5×1012个/g)；在45℃条件下发酵10小时，得到鳀鱼发酵酶解液。将鳀鱼发酵酶解液，经过真空浓缩、干燥，得到提高免疫和抗氧化功能的鳀鱼酶解物。试验例1本发明鳀鱼酶解物延缓疲劳功能的测定试验试验样品：样品1、2、3分别为实施例1、2、3制备的鳀鱼酶解物。试验方法：1.1实验动物饲养与分组80只清洁级昆明种小鼠，于洁净动物实验室适应性饲养一周，8～10只/笼，分笼饲养，保持垫料干燥卫生，每三天换洗一次。每天按时打扫，做好消毒灭菌等工作，保证洁净动物实验室干净整洁。室温25±2℃，相对湿度50±5%，光照明暗间隔为12h，以鼠标准饲料常规饲养，自由进食和饮水，每周记录一次小鼠体重。经过一周的适应期后，80只小鼠随机分为4组，即空白组、样品1组、样品2组、样品3组。空白组小鼠灌喂等量的生理盐水，其它3组的剂量设为160mg/kg/d，每天上午9:00-10:30期间灌喂，灌喂20天后，检测受试样品的免疫功效。1.1.1免疫器官指数摘眼球法取血以备检测免疫球蛋白,取血后将上述小鼠进行解剖,摘取胸腺、脾脏,用滤纸吸去表面的血迹,并用电子天平称取小鼠脾脏、胸腺的质量,求脾脏和胸腺指数k值:k=器官重量/体重,每组20只小鼠。1.1.2血清igg、igm、iga含量测定：igg、igm、iga浓度采用elisa试剂盒检测。表1所示为本发明鳀鱼酶解物及对照组对小鼠体重的影响表。表2所示为本发明鳀鱼酶解物对小鼠免疫器官指数和血清抗体水平的影响表。表1本发明鳀鱼酶解物及对照组对小鼠体重的影响（g）样品实验前第一周第二周第三周第四周空白组20.92±0.9632.68±1.0736.78±1.1838.88±1.4939.81±1.03样品120.68±0.8333.55±1.3437.39±1.2239.45±1.7839.98±1.29样品220.67±0.8634.23±1.0937.88±1.2939.05±1.6240.24±1.18样品320.74±0.6934.07±1.4838.18±1.0239.03±1.3940.33±1.25表2本发明鳀鱼酶解物对小鼠免疫器官指数和血清抗体水平的影响样品脾脏指数(%)胸腺指数(%)igg（g/l）igm（g/l）iga（g/l）空白组4.78±0.161.76±0.092.79±0.081.29±0.061.16±0.02样品15.47±0.092.28±0.062.92±0.061.68±0.091.40±0.05样品25.52±0.142.30±0.072.95±0.081.70±0.071.39±0.04样品35.58±0.222.31±0.052.94±0.051.73±0.081.42±0.07从表1和表2可以看出，鱼鳀鱼酶解物对小鼠的生长没有显著的影响，但鳀鱼酶解物能够显著提高小鼠的免疫器官指数（脾脏指数、胸腺指数）及小鼠的血清抗体水平（igg、igm、iga）。试验例2本发明鳀鱼酶解物抗氧化活性的测定试验试验样品：样品1、2、3分别为实施例1、实施例2、实施例3制备的鳀鱼酶解物。试验方法：（1）清除dpph自由基能力：取20μg/ml的抗氧化活性肽1.5ml，加入99.5%乙醇1.5ml和0.02%dpph乙醇溶液0.675ml混合，振荡混匀，室温下避光水浴30min，然后在517nm下检测体系吸光值。吸光值越低，体系的清除dpph自由基能力越强。空白对照即是将样品溶液1.5ml换成去离子水1.5ml。dpph自由基清除能力%=（（空白吸光值-样品吸光值）/空白吸光值）×100（2）还原力测定：取20μg/ml的抗氧化活性肽1ml，加入0.2m磷酸缓冲液（ph6.6）2.5ml和1%（质量分数）的铁氰化钾溶液2.5ml，混匀，然后在50℃水浴加热20min。取出迅速冷却，加入10%（质量分数）三氯乙酸（tca）溶液2.5ml，混合均匀，然后在3000g下离心10min。取上清液2.5ml，加入去离子水2.5ml和1%（质量分数）三氯化铁溶液0.5ml，充分混匀，在室温下反应10min，用700nm波长测定吸光度。还原力即可用700nm波长处吸光值表示。表3所示为本发明鱼鳀鱼酶解物的抗氧化活性试验结果表。表3本发明鱼鳀鱼酶解物的抗氧化活性试验结果从表3可以看出，本发明鳀鱼酶解物具有较好的抗氧化能力，在20μg/ml的条件下，其清除dpph自由基能力达到88%以上；还原力达到0.865以上，是一种较好的抗氧化酶解物；本发明开发鳀鱼酶解物中分子量小于1500的肽的比例为90%以上。本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在本发明的权利要求书的范围内。当前第1页12