专利名称：用反义寡核苷酸调节神经生长并使β/A4淀粉样肽诱导的形态逆转的制作方法
背景技术：
发明领域本发明涉及治疗老年性痴呆症和唐氏先天愚症的方法。更具体地说，本发明涉及开发能够逆转与老年性痴呆症和唐氏先天愚症有关的由A4淀粉样肽引起的有害影响之治疗剂。相关领域综述老年性痴呆症(AD)与公共健康的关系日益密切。Katzman(N.Engl.J.Med.3 14964-973(1 986))认为这种综合症的特征在于成人的智力损伤严重以致于影响了职业或社会活动。Hay和Ernst(Am.J.Pub.Health 771169-1175(1987))认为AD是成人发作性痴呆的最常见形式，而且在美国是导致死亡的第四位的原因。
与AD有关的痴呆在脑中伴有神经病理学改变。Hyman等人(Science 2251168-1170(1984))公开了海马的主要输入和输出路径有很高浓度的衰老斑(SP)和神经原纤维丛(NFT)，它们可能功能性隔离了海马，从而使记忆受到损伤。Mountjoy等人(Aging 41-11(1983))公开了AD大脑中神经元的明显损失。Coyle等人(Science 2191184-1190(1983))发现AD大脑乙酰胆碱阳性位点有所减少。
常与AD有关的一个特征是在大脑中存在含淀粉样肽的衰老斑(SP)。Majocha等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 856182-6186(1988))发现这些衰老斑的直径为约9到50μm，而且形态和密度也不同。Wisniewski和Terry(Progress in Neuropathology，Zimmerman编，Gruneand Stratton，New York，N.Y.pp.1-26(1973))认为SP由细胞外淀粉样肽、反应性细胞、含NFT的退化轴突、溶酶体、异常线粒体和星形细胞突组成。Mertz等人(Acta Neuropathol.60113-124(1983))认为SP的核心是由包括直径为4-8nm原纤维的淀粉样肽形成的。
已确定了SP的淀粉样肽的性质。Glenner和Wong(Biochem.Biophys.Res.Commun.120885-890(1984))公开了4.2KD的AD脑衍生肽，所述肽具有28个氨基酸的特有序列。Glenner和Wong(Biochem.Biophys.Res.Commun.1221131-1135(1984))还从唐氏先天愚症脑血管淀粉样肽中分离出了有相似序列的多肽。在11位上的一个氨基酸取代，Glu代替Gln，使两种蛋白质有所不同。Masters等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 824245-4249(1985))公开了淀粉样肽斑核心衍生的4.2kd肽，其序列与Glenner和Wong的AD衍生肽的序列几乎相同。它在各种溶剂中较不易溶。Castano等人(Biochem.Biophys.Res.Commun.141782-789(1986))发现与4.2kd AD肽有同源性结构的短合成肽表现出相似的聚集特性。Kang等人(Nature 325733-736(1987))发现引起衰老斑的肽为42或43个氨基酸长。该肽是从一个较大蛋白质切下的，现已知这个较大蛋白质是一种淀粉样前体蛋白或APP，是一种由21号染色体上的一个座位确定的普遍性跨膜糖蛋白(Goldgaberet al.，Science 235877-880(1987)；Kang et al.，Nature 325733-736(1987)；Kitaguchi et al.，Nature 331531-534(1988)；Tanzi et al.，Science235880-882(1987)；Tanzi et al.，Nature 331528-530(1988)；Ponte，etal.，Nature 331525-527(1988)；Zain et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85929-933(1988))。本文称所述肽为β/A4肽。
分子克隆实验(Glodgaber et al.，Science 235877-880(1987)；Kanget al.，Nature(London)326733-736(1987)；Robakis et al.，PNAS USA844190-4194(1987)；Tanzi et al.，Science 235880-884(1987)；Kitaguchi et al.，Nature 331530-532(1988)；Ponte et al.，Nature 331525-527(1988)；Tanzi et al.，Nature 331527-530(1980))表明淀粉样β-蛋白是至少三种不同前体(βAPP695、βAPP751、βAPP770)的一部分，所述三种前体由人21号染色体上的一个基因编码(Robakis et al.，Lancet1384-385(1987))。βAPP751和βAPP770均含有βAPP695所没有的与Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KPI)有高度序列同源性的56氨基酸插入片段(Kitaguchi et al.，Nature 331530-532(1988)；Ponte et al.，Nature331525-527(1988)；Tanzi et al.，Nature 331527-530(1988))。在经检测的几乎每种组织中都有βAPP表达(Tanzi et al.，Science 235880-884(1987))，在脑中，βAPP既存在于神经元细胞也存在于非神经元细胞中(Robakis et al.(1988)In“Disorders of the Developing Nervous SystemChanging views on their origins，diagnosis and treatments.”(Swan，J.W.编)Alan R.Liss，Inc.New York，NY)。
正是APP的羧基末端含有约42个氨基酸的产淀粉样蛋白β肽区(Kang et al.，Nature 325733-736(1987))。在β肽内经组成性分泌途径可以切下这个APP区(Esch et al.，Science 2481122-1124(1990))，由于没有留下完整的β淀粉样肽，所述的分泌途径是防止淀粉样蛋白形成的过程。最近证明，4kDa β淀粉样肽是正常的分泌产物，是经高尔基核内体介导的过程产生的，然后从细胞中释放出来(Shoji et al.，Science 258126-129(1992)；Golde et al.，Science 225728-730(1992)；Seubert et al.，Nature 361260-263(1993))。
近来，用分子生物学工具在确定β/A4肽在老年性痴呆症的病理学中所起的作用方面做了相当多的研究。Maestre等人(Brain Res.59964-72(1992))发现，生产β/A4肽的转染的PC12细胞比未转染的对照细胞大，有较长的轴突，而且有明显较大数量的类似气泡和微绒毛的受膜限制的表面延伸部分。发现β/A4定位于这些膜突起物中。Majocha等人(Mol.Chem.Neuropathol.1899-113(1993))发现，表达β/A4肽的转染PC12细胞分泌刺激轴突延长以及使细胞分化成神经元表型的因子。Tate等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 897090-7094(1992))发现，表达β/A4肽的转染细胞在植入大鼠脑中后可明显地改变昼夜活动。
患有唐氏先天愚症(DS)之个体的脑病理学与AD中所见的变化几乎相同。作为AD特征的NFT和SP在40岁以上的DS病例中均能见到。NFT和SP的形态学和免疫组织化学在这两种疾病之间难以区分。神经化学变化也是类似的(参见Ikeda，S.et al.，Lab.Invest.61133-137(1989)；Cole et al.，Acta Neuropathol.85542-552(1993)；Patterson et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.858266-8270(1988)；Ikeda et al.，Prog.Clin.Biol.Res.317313-323(1989)；Beyreuther et al.，Prog.Clin.Biol.Res.379159-182(1992))。
尽管APP广泛分布于真核细胞中，但这种蛋白质的正常功能尚未完全阐明。已有几个方面的证据显示APP和神经生长因子(NGF)之间的关系。用NGF处理后诱导释放含所述蛋白质KPI区，但没有羧基末端部分的125和120kDa APP(Refolo et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.164664-670(1989))。给大鼠脑施用NGF提高了APP mRNA的水平(Refolo et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.164664-670(1989))。给发育中的基底前脑施用NGF时，前体蛋白质(prion protein，PrP)和APP mRNA水平同时也会增加(Mobley et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.859811-9815(1988))。695异构体(isoform)的水平选择性地提高，但较高分子量的APP则不会。用NGF处理PC12细胞后，由于除胞质外APP还定位于生长锥和突，所以会发生APP的重新分布(Fukuyama et al.，Molec.Brain Res.1717-22(1993))。APP的抗体特异性地消除了NGF对轴突长度和分支的影响(Milward et al.，Neuron 9129-137(1992))。
此外，动物研究表明大脑中的上行胆碱能突出物表达低亲和性和高亲和性的NGF受体，而且是NGF敏感性的，可能也是NGF依赖性的。胆碱能损伤会导致认知障碍，但用NGF处理可改善动物的认知行为。此外，在人临床试验中，观察到在老年性痴呆症患者中进行NGF治疗得到阳性结果，表明部分逆转了AD在患者中的影响(LarsOlson，Experimental Neurology 1245-15(1993))。
这些重要发现表明了β/A4肽在AD和DS神经病理学中的活性作用。然而，需要确定可归因于β/A4肽的病理学是否是可逆转的。治疗性化合物而不仅仅是预防剂的开发可能很大程度上取决于β/A4肽诱导的病理学，特别是细胞体积增大、轴突延伸以及细胞分化成神经元表型的可逆转性。另外，还需要在所述潜在治疗性化合物用于临床试验前，测定所述化合物对老年性痴呆淀粉样肽生产的影响的体外检测方法。
发明概述本发明涉及如下发现，即，有可能停止并逆转过度表达的β/A4肽在细胞中的积累。因此，本发明提供逆转β/A4肽对细胞造成的形态变化的方法。在第一方面，本发明方法包括给因β/A4肽而发生形态变化的细胞施用能减少或消除β/A4肽合成的寡核苷酸。可用于本发明方法的修饰的寡核苷酸主要是比常规寡核苷酸磷酸二酯更能耐受核酸降解作用的寡核苷酸，包括具有各种修饰的核苷间连键、混合骨架、核酸酶抗性3’帽结构、形成整合三螺旋的结构或自我稳定结构、或其任何组合的寡核苷酸。所述的寡核苷酸酸优选具有与编码β/A4肽或其前体蛋白APP(见
图13)的核苷酸序列互补或与β/A4肽或APP转译起始密码子互补的核苷酸序列。令人惊奇的是，β/A4肽表达的降低足以逆转由β/A4肽诱导的形态变化，而不明显需要消除可能由β/A4肽引起但随后由其他分子维持的其他作用。因此，需要检测在包括人的哺乳动物中降低β/A4肽水平带来的影响，以测定β/A4肽减少对整个生物的影响。本发明在第二方面提供了进行所述测定的方法。这些研究将优选先在非人哺乳动物中进行。所述研究包括给动物施用前述的修饰的寡核苷酸以逆转β/A4肽对细胞造成的形态变化。
在第三方面，本发明还涉及治疗或预防动物特别是人的老年性痴呆症的方法。
在第四方面，本发明还涉及治疗动物特别是人的唐氏先天愚症的方法。
在第五方面，本发明提供了能降低细胞或动物中的β/A4肽水平并能逆转β/A4肽引起的细胞形态变化的寡核苷酸。本发明第一方面的讨论中已简要描述了这些寡核苷酸。
在第六方面，本发明还涉及药物组合物，所述药物组合物含有有效量的至少一种本发明的抗β/A4寡核苷酸和药物可接受的载体。
在第七方面，本发明涉及含有神经生长因子和抗β/A4寡核苷酸的物质组合物。
在第八方面，本发明提供含有神经生长因子和抗β/A4寡核苷酸的药物组合物。
在第九方面，本发明教导了一种测定APP反义化合物对老年性痴呆淀粉样肽生产的影响的方法，包括增殖表达或优选过度表达β/A4的哺乳动物细胞(如PC12)的第一和第二培养物；将标记的甲硫氨酸加到第一和第二细胞培养物中；将细胞培养物培养一段时间；从第一和第二细胞培养物中收集上清液；候选APP反义化合物。
在第十方面，本发明教导了一种预防、治疗和/或逆转β/A4淀粉样肽诱导的形态的方法，包括给需要的患者施用有效量的药物组合物，所述组合物含有神经生长因子和抗β/A4寡核苷酸。
附图的简要描述图1表示在本发明寡核苷酸的一个实施方案中所用的某些优选帽结构。
图2表示本发明自我稳定的寡核苷酸实施方案的一种形式。
图3表示本发明自我稳定的寡核苷酸实施方案的第二种形式。
图4图示说明含淀粉样肽cDNA的Min载体。所示的插入片段携有β/A4肽(黑色垂直框)、APP编码序列的其余部分(白色垂直框)和非编码区(细垂直线)。
图5A、5B和5C表示未转染细胞(图5A)、含转化载体而没有淀粉样肽插入片段的细胞(图5B)和用编码A4到APP C末端之载体DNA转染的细胞(图5C)的免疫染色图。
图6A、6B、6C和6D表示与未转染细胞(图6A)或用无插入片段载体转染的细胞(图6B)相比较的β/A4转染的AC126(图6C)和AC127(图6D)细胞的光学显微照片。
图7图示说明用无插入片段载体(V120)转染的细胞和β/A4转染细胞(AC126和AC127)的轴突长度和细胞大小。
图8A和图8C表示未转染的(图8A)和β/A4转染的(图8B)PC12细胞的电子显微照片。
图9A、9B、9C和9D表示未转染细胞(图9A)、无插入片段载体转染的细胞(图9B)和β/A4转染的AC126细胞(图9C)和AC127(图9D)细胞之膜突起物的电子显微照片。
图10图示说明在未转染(NN)、无插入片段载体转染的(V120)和β/A4转染的(AC126和AC127)细胞膜中微绒毛和/或气泡样结构的频率。
图11A、11B、11C和11D表示未转染细胞(图11A)、用无插入片段载体转染的细胞(图11B)和β/A4转染的AC126(图11C)和AC127细胞(图11D)的电子显微照片。
图12A和12B用抗核糖核酸酶抑制剂蛋白抗体(图12A)或抗βA/4抗体(图12B)免疫染色细胞的电子显微照片。
图1 3A和1 3B描述Kang等人(Nature 325733-736(1987))公开的APP的cDNA序列(SEQ ID No.12)，从中可构建与相应的mRNA序列互补的抗β/A4寡核苷酸。起始密码子从核苷酸147开始。β/A4蛋白质的编码序列是从核苷酸1935到2060。APP编码序列终止于核苷酸2231。
图14A和图14B描述不存在(图14A)或存在(图14B)具有SEQ IDNo.1之反义寡核苷酸的情况下培养的免疫染色的AC127细胞。
图15A、15B和15C描述加入反义寡核苷酸后PC12细胞的形态。将PC12细胞与各种浓度的与APP mRNA 5’末端区互补的寡核苷酸-1反义寡核苷酸一起保温1周。图15A未处理细胞。图15B加入10μg/ml寡核苷酸-1。图15C加入20μg/ml寡核苷酸-1。固定细胞，然后用0.1％考马斯蓝染色。短横＝50μm。
图16描述影响细胞表面积的反义寡核苷酸量。将寡核苷酸-1反义寡核苷酸和无关的寡核苷酸-2以0、10和20μg/ml加到PC12细胞培养物中，保温1周。随后在细胞体面积的图象分析检测前，固定这些细胞，用0.1％考马斯蓝染色。在用10和20μg/ml寡核苷酸-1处理后，表面积有显著降低(p＜0.01)。寡核苷酸-2的作用不显著。每种类型计数150个细胞。
图17A、17B和17C描述用10μg/ml寡核苷酸-1处理10天后，PC12细胞蛋白质提取物的Westem印迹。用抗APP抗体进行免疫染色。图17A未处理细胞的蛋白质提取物有主要的120-150kD APP条带。标明了分子量标记。图17B用10μg/l寡核苷酸-1处理，与未处理对照相比，按上样总蛋白量计APP水平有33％的降低。图17C用15μg/ml处理使APP水平降低60％。用图象分析进行定量。
图18描述用NGF预处理后，寡核苷酸-1对PC细胞面积的影响。用100ng/ml NGF将细胞处理48小时，然后暴露于浓度为15μg/ml的寡核苷酸-1中0、1和2天，如图所示。在开始NGF处理后，细胞体大小(0天标明的)显著高于(p＜0.05)低于500μm2的未处理细胞的大小。随后加入寡核苷酸-11和2天，对于对NGF的反应没有明显的影响。细胞体面积的图象分析前，固定细胞，然后用0.1％考马斯蓝染色。每个柱代表至少100个观察结果的平均值。
图19描述用NGF预处理后，寡核苷酸-1对PC12轴突长度的影响。条件和资料分析与图18的说明中所述的相同。
图20描述用寡核苷酸-1或寡核苷酸-2预处理后，NGF对PC12细胞面积的影响。将PC12细胞与0、5、10或15μg/ml的寡核苷酸-1一起保温2天，然后在相同寡核苷酸浓度加100ng/ml NGF下再保持4天。在15μg/ml，与未暴露于反义寡核苷酸的细胞相比，寡核苷酸-1对表面积的影响显著(p＜0.01)。用0和15μg/ml寡核苷酸-2重复相同的实验。固定细胞，用0.1％考马斯蓝染色，然后用图象分析评估。每个柱代表至少100个测量结果的平均值。
图21描述用寡核苷酸-1或寡核苷酸-2预处理后，NGF对PC12轴突长度的影响。在不存在寡核苷酸(对照)或存在指明的15μg/ml寡核苷酸-1或寡核苷酸-2的情况下，将PC12细胞培养2天。细胞有突起物伸出并测量轴突长度。与未暴露于寡核苷酸-1的细胞相比，寡核苷酸-1的作用显著(p＜0.01)。每个柱代表至少100个测量结果的平均值。
图22A和22B描述NGF对用反义寡核苷酸预处理的PC12细胞的影响。图22A仅用NGF处理的细胞。图22B将PC12细胞与15ng/ml寡核苷酸-1一起保温2天，然后在相同寡核苷酸浓度加100ng/ml NGF下再保持4天。短横＝50μm。
优选实施方案的详细描述本发明涉及开发治疗老年性痴呆症(AD)和唐氏先天愚症(DS)的方法。本发明提供能预防和逆转用β/A4淀粉样肽作用于细胞而产生之有害影响的潜在治疗剂，所述肽对AD和DS的病理学有重要影响。因此，在本发明中，“治疗”指预防、减轻和/或逆转。
在第一方面，本发明提供逆转因在细胞中表达β/A4肽而诱导的形态变化的方法。在本发明的所述方法中，给表达β/A4肽并因其表达β/A4肽而产生形态变化的细胞施用抗β/A4寡核苷酸。所述的形态变化包括但不限于细胞体积的增大、细胞聚集、气泡和/或微绒毛样膜突起物的形成、轴突长度的增加。
在本发明方法中，“抗β/A4寡核苷酸”指这样一些寡核苷酸，其核苷酸序列通过特异性Watson-Crick或Hoogstein碱基配对与β/A4肽表达所涉及的特异性互补核苷酸序列相互作用从而降低β/A4肽的表达。优选地，所述寡核苷酸与β/A4肽表达所涉及的特异性核酸序列之间的相互作用是经Watson-Crick碱基配对形成双螺旋、经Hoogstein碱基配对形成三螺旋、或这两种情况的结合。β/A4肽表达所涉及的特异性核酸序列是至少编码β/A4肽的基因或RNA分子。在这里，术语“基因”指含有启动子、至少编码β/A4肽之核苷酸序列和被动性终止子的结构。在一个最优选的实施方案中，所述基因是熟知的APP基因。相似地，术语“RNA”包括至少编码β/A4肽的核RNA或信使RNA。所述RNA优选编码APP蛋白质。在本发明方法的某些实施方案中，施用于细胞的寡核苷酸互补于含有β/A4肽转译起始密码子的核苷酸序列。术语“互补于某个核苷酸序列”指与所述序列的互补性足以在细胞中即生理条件下与该序列杂交。实际上，通过确定基因表达是否被降低可以确定所述杂交存在与否。术语“β/A4肽转译起始密码子”指作为转译开始密码子的转译起始密码子，所述的转译产生含有β/A4肽的多聚氨基酸产物。在一个最优选的实施方案中，超始密码子是APP的起始密码子。在某些其他实施方案中，本发明方法施用与编码β/A4肽之核苷酸序列互补的寡核苷酸。另外，所述寡核苷酸也可以与含编码β/A4肽之核苷酸序列的核苷酸序列互补。后一寡核苷酸的一个优选实例是与编码APP之核苷酸序列互补的寡核苷酸。所述寡核苷酸的具体实例包括但不限于1. [SEQ ID NO.1] 5′-CCTCTCTGTTTAAAACTTTATCCAT-3′；2. [SEQ ID NO.2] 5′-TTCATATCCTGAGTCATGTCG-3′；3. [SEQ ID NO.3] 3′-GTCCCAGCGCTACGACGGGCCAAA-5′；4. [SEQ ID NO.4] 3′-GTCCCAGCGCTAC-5′；5. [SEQ ID NO.5] 3′-TACGACGGGCCAAA-5′；6. [SEQ ID NO.6] 3′-GTCCCAGCGCTACGACGGGCC-5′；7. [SEQ ID NO.7] 3′-GTCCCAGCGCTACGACGG-5′；8. [SEQ ID NO.8] 3′-GTCCCAGCGCTACGA-5′；9. [SEQ ID NO.9] 3′-CCAGCGCTACGACGGGCCAAA-5′；10.[SEQ ID NO.10] 3′-GCGCTACGACGGGCCAAA-5′；11.[SEQ ID NO.11] 3′-CTACGACGGGCCAAA-5′；12.[SEQ ID NO.15] 5′-AAACCGGGCAGCATCGCGACCCTG-在下文本发明第三方面的讨论中，将更详细地讨论在本发明本方面方法中有用的优选寡核苷酸。简言之，它们比常规的寡核苷酸磷酸二酯对核酸降解有更强的抗性。在某些优选实施方案中，所述寡核苷酸可以有各种修饰的核苷间连键、混合骨架、核酸酶抗性3’帽结构、形成整合三螺旋的结构或自我稳定结构或其任何组合。
本发明本方面的方法可用于各种目的。尤其是，本方法可提供有关细胞中产生各种形态变化所必需的β/A4肽表达剂量或水平的资料。通过降低施用于细胞的寡核苷酸量，以便只是部分降低β/A4肽的表达，可达到此目的。本方法通过首先完全逆转所述变化，然后除去寡核苷酸并观察再发生所述变化的时间和顺序，也可以提供有关由β/A4肽诱导的形态变化的时间和顺序方面的资料。在应用中，所述方法提供了有关对逆转β/A4肽诱导的形态变化最有效的寡核苷酸的具体性质方面的资料。本发明是基于令人惊奇地发现寡核苷酸可逆转β/A4肽诱导的形态变化。但此外，通过考察剂量要求和形态变化逆转的程度，所述方法可以使本领域专业人员确定用于逆转形态变化的核苷酸序列、骨架组成、二级结构、碱基修饰等的最有效组合。
在第二方面，本发明提供了在动物包括人中降低β/A4肽表达的方法。在本发明本方面的方法中，将寡核苷酸施用于动物从而使β/A4肽表达降低。施用于非人动物时，所述寡核苷酸的核苷酸序列可以与适宜的非人β/A4肽或APP基因互补。在下文本发明第三方面的讨论中，将详细描述所述寡核苷酸的化学组成。这些寡核苷酸的作用方式与对本发明第一方面方法描述的相同。可以将所述寡核苷酸经口、静脉内、鼻内、腹膜内、经肛门、注射到脑脊液中或直接注射到脑中给药。另外，可以将本发明寡核苷酸配制成含有聚合载体的植入物或缓释胶囊的一部分。例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，Osol.(ed.)(1990)中公开了所述的聚合载体。在另一实施方案中，通过一个泵植入体或体外泵可以连续施用本发明的寡核苷酸。
施用寡核苷酸的优选剂量为1-100mg/kg动物体重。
可以作为药物组合物的一部分而施用抗β/A4寡核苷酸，所述的药物组合物含有药物学可接受的载体，例如可以是生理盐水或生理葡萄糖溶液。可含有可提高悬浮液粘度之物质的注射水悬浮液包括例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。悬浮液也可以含有稳定剂。制备和施用所述药物组合物的方法可参见Remington’s PharmaceuticalSciences，18th Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，Osol(ed.)(1990)。
在开始的研究中，优选将所述的寡核苷酸施用于非人动物，最好是哺乳动物。所述的施用过程提供了有关在动物中降低β/A4肽表达的最有效剂量和施用途径的资料。随后，将所述的寡核苷酸施用于患有AD或DS的人。预期所述的施用可逆转因β/A4肽作用于脑细胞而诱导的形态变化，由此产生治疗效果。
在第三方面，本发明提供可用于逆转因β/A4肽作用于细胞而诱导的形态变化的抗β/A4寡核苷酸。本发明的“抗β/A4寡核苷酸”包括具有与表达β/A4肽有关的特定核酸序列相互作用从而降低β/A4肽表达之核苷酸序列的那些寡核苷酸。优选地，寡核苷酸与涉及β/A4肽表达之特定核酸序列间的相互作用是经Watson-Crick碱基配对形成双螺旋结构、经Hoogstein碱基配对形成三螺旋结构或其结合。参见，例如，PCT
发明者C·A·马罗塔, R·E·马佐查, S·阿加拉瓦尔 申请人:综合医院公司, 海布里登公司