专利名称：用抗脂酶抗体降低脂肪吸收的制作方法
技术领域：
本发明涉及可降低哺乳动物中脂肪吸收的食品添加剂。
我们经常久坐不动的生活包括身体活动减少但食物摄入增加，使得我们易于体重过重。这种现象的后果是使几乎40-50％的美国人口的体重超过正常体重的20％。食品及营养科学的进步不仅使我们对所有营养素的功能有了更明确的认识，而且还可应用这些知识产生更小形状的浓缩食品，用该类型食品可降低吃饱后的满足感。即使食物摄取量保持相同，由于此等食品的高能量浓度，我们仍会摄入过量的热量(Bell等人，1997)。目前，与减肥有关的市场充斥着通过抑制脑激素降低食欲的节食丸、抑制营养吸收的药物、据称有增进机能作用的丸剂、增加食物通过速率的丸剂以及其他的时尚食品。这些药物中的大多数具有类似于抑郁、焦虑、成瘾等的副作用。
降低食物热量的新方法是使用脂肪替代品(Gershoff等人，1995)。每克脂肪可产生9卡的热量，而每克碳水化合物和蛋白质仅产生4卡的热量。脂肪替代品主要是长烃链制成的物质，用于制成品的凝乳化(claboration)，以保持制成品中的脂肪性质但降低热量。新型脂肪替代品-Olestra，是由长链脂肪酸制成的，该脂肪酸非常大，以致于消化酶(脂酶)不能将其分解，因此该类型的脂肪不能被吸收。已有人观察到，消耗Olestra可降低可溶性脂肪的吸收，并导致在粪便中出现脂肪。在一项长期研究(12周)中，1/3的食物脂肪用Olestra替代，女性受试者体重减轻，而且没有补偿减少的热量和脂肪摄入(Roy等人，1997)。
在动物工业中，已对降低脂肪在动物体中的积累进行了研究，这是因为该特性首先会对外形产生负面影响，第二是消费者为减少健康风险希望更少的可见到的脂肪。
在鼠、猪、兔和羊中被动给药抗脂肪细胞浆膜的抗体，已由此降低了脂肪在动物体内的积累。抗生长激素的免疫性也可降低鸡的腹部脂肪(Brodic和Hu，1996；Moloney，1995；Flint，1992)。
脂酶是一种由胰腺产生的酶，可将三乙酰甘油酯水解为游离脂肪酸和甘油。这对于在胃肠道中分解摄入的脂肪是非常关键的一步。脂酶在十二指肠(小肠)中的活性更高，在该部分肠道中可在胆盐的帮助下将脂肪分解为胶粒形式，然后被肠粘膜吸收。
因此，在抑制脂酶时，摄入的脂肪就不会被吸收，并降低由脂肪产生的热量，而脂肪本身被分泌出去。本发明的目的在于提供一种抑制哺乳动物中脂肪吸收的方法。
本发明涉及通过口服给药抗脂酶的鸡抗体来降低脂肪吸收的方法。为得到抗体，优选的抗原是包含脂酶的猪胰腺提取物。SigmaChemical Co.商业制造该抗原。脂酶是一个保守分子，其在动物和植物种类之间具有类似的结构，因此，抗猪脂酶的抗体将可以与其他种类的脂酶产生交叉反应。我们已发现，向鼠给药抗脂酶的抗体可使体重下降或者降低饲料的效率。抗体提取物可以包括在饲料中的水悬浮液给药或者以干粉和/或包胶在脂质体中的干粉给药。
以前已有人报道了对鸡抗体有效性的研究；如在猪、牛和奶牛中防止细菌感染(Yokoyama等人，1993；Erhard等人，1993；Coleman，1995)。这些研究也证实了在动物的胃肠道中存在完整的禽抗体。
虽然已知鸡抗体可防止细菌感染，但尚无报道有任何抗体可降低脂肪吸收。
通过以下对本发明的详细描述，本领域技术人员将对上述目的和其他优点有更进一步的了解。实施例1本实施例说明抗脂酶的特异性抗体的制备。向17周龄的母鸡注射2.5mg脂酶(Sigma Chemical Co.)。该接种物是如下制备的将所述酶溶解在0.2ml磷酸盐缓冲盐水(PBS，pH7.3)和0.2ml完全Freund佐剂中。将抗原制剂注射在两个部位中，每个部位0.2ml，分别是左、右胸部肌肉。每只母鸡给药总共0.4ml的抗原制剂。在首次注射后的5-6周(约50％产蛋母鸡形成)进行第二次注射给药。在第二抗原制剂中，使用不完全Freund佐剂替代完全Freund佐剂。每两个月或者在测定抗体效价较低时向母鸡重复注射抗原制剂。抗体效价用ELISA测定。母鸡可自由摄取饲料和水，并将它们饲养在隔离的房间中，以使外部污染最小化。实施例2如下纯制抗体将1体积的实施例1蛋黄与9体积的蒸馏水混合，然后于4℃下放置过夜。在4000rpm下离心含水部分10分钟，然后由干酪布(cheesecloth)过滤，以除去任何过量的脂肪。所述含水部分包含蛋黄中所有的蛋白质，而所述蛋黄包含所有的抗体(IgY)。冷冻该液体，然后进行冻干。用ELISA测定抗体活性。实施例3如下测定抗脂酶的抗体1、用100μl在碳酸盐缓冲液中的脂酶制剂(50μg/ml)涂敷ELISA板。在4℃下使所述板过夜温育，然后用1.5％牛血清白蛋白于室温下阻断4小时。
2、在各孔中添加100μl的0.5mg蛋白质/ml抗体提取物，然后在室温下使所述板温育4小时。
3、用PBS-tween溶液冲洗所述板。在各孔中添加结合在辣根过氧化物酶上的兔抗鸡IgG 100μl。在室温下使所述板温育1小时。
4、用PBS-tween冲洗所述板，然后在各孔中添加100μl的TMB底物，并温育15分钟。
5、用100μl的2M硫酸使反应停止。
6、在ELISA板读数器中于455nm读取所述板。
7、测定效价，其为经免疫的蛋的O.D.值与未经免疫的对照组(O.D.＜0.100)类似时的稀释度的倒数。实施例4本研究表明抗脂酶的鸡抗体体外抑制脂酶的作用。使用特别用于测定血清中脂酶(Sigma Chemical Co.)的实验证实抗体的有效性。如下改进该实验在某体积的磷酸盐缓冲盐水中添加已知量的酶(脂酶)和抗体。所得活性以Sigma-Tietz单
在第二实验中，使用高剂量的抗体提取物。结果如下
实施例5本研究表明抗脂酶的抗体在鼠中的作用。向两组各5只2月龄的小鼠(每只25-34g)给药每ml水5mg抗体(蛋白质提取物)。每日将抗体与水混合。给两个组的小鼠喂以相同量的饲料(约5g/鼠/天)。实验时间为58天。结果如下
实施例7本研究表明用脂质体对抗脂酶的抗体进行包胶。脂质体制剂根据Shimizu等人的方法(1993)进行制备。冷冻最终的脂质体悬浮液，然后冻干。将已知量的冻干脂质体与鼠饲料混合，并在实验期间每日喂以该饲料。实施例8本研究表明抗脂酶的抗体在大鼠中的作用。将12只退休的SpragueDawley繁殖大鼠(Harlan，Wisconsin)单独笼养，并可自由饮水。向它们喂以兔饲料，该饲料添加有玉米油，以将脂肪含量增加至30％。监视1周的饲料摄取量，以测定为保持初始体重所需要的饲料量。将大鼠分为两个组，1个组喂以高脂肪饲料，而另一个组喂以相同的饲料和包含抗脂酶的抗体提取物的冻干脂质体。经处理的饲料包含750mg的抗体/kg饲料。处理1周后的结果如下<
>实施例9因为在实施例8中观察到大鼠增加了体重，所以使用相同的大鼠，但此次的饲料有限制。结果如下
实施例10本研究表明在维持饲料摄取量时向大鼠给药抗脂酶的作用。结果如下
对本领域技术人员显而易见的是，在不偏离如权利要求书所限定的本发明范围的情况下，仍可有许多的改进和变化。
参考资料1、Bell，E.A.；V.A.Castellanos；C.L.Pelkman；M.L.Thorwart和B.J.Rolls(1997)，能量强度对饥饱感的影响(The influence of energy densityon satiation).The Faseb Joumal(Abstracts)11A358.
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3、Coleman，M.(1996)，口服给药鸡蛋黄免疫球蛋白以降低哺乳期之反刍动物的乳液中的体细胞数量(Oral administration of chicken yolkimmunoglobulins to lower somatic cell count in the milk of lactatingruminants)，第5,585,098号美国专利。
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10、Shimizu，M.；Y.Miwa；K Hashimoto和A.Goto(1993)，用脂质体包胶鸡蛋黄免疫球蛋白G(IgY)(Encapsulation of Chicken YolkImmunoglobulin G(IgY)by liposomes)，Biosci.Biotech.Biochem.571445-1449.
11、Yokoyama，H.，R.Peralta，S.Serdo，Y.Ikemori(1993)，用与酶连接的免疫吸附实验和荧光抗体测试检测猪胃肠道中鸡蛋黄免疫球蛋白的通过和吸收(Detection of passage and absorption of chicken egg yolkimmunoglobins in the gastro-intestinal tract of pigs by the use of enzyme-linked immunosorbent assay and fluorescent antibody testing)，Am.J.Vet.Res.JY867-872.
权利要求
1.结合脂酶的抗体在制造用于治疗哺乳动物或禽类肥胖之药物中的应用。
2.结合脂酶的抗体在制造用于降低哺乳动物或禽类脂肪吸收之药物中的应用。
3.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述哺乳动物是人、灵长类动物、单胃动物或反刍动物。
4.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述禽类是鸡、火鸡、鹅、鸭、鹌鹑、野鸡或鸽子。
5.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述结合脂酶的抗体是在禽蛋中产生的。
6.如权利要求5所述的应用，其中，所述禽蛋是鸡、火鸡、鹅、鸭、鹌鹑、野鸡或鸽子的蛋。
7.如权利要求5所述的应用，其中，所述抗体是由完整的未经分离的蛋中得到的。
8.如权利要求5所述的应用，其中，所述抗体是由完整的未经分离的蛋的蛋黄中得到的。
9.如权利要求5所述的应用，其中，所述抗体是通过分离蛋黄形成蛋白质浓缩物或者纯IgY(鸡免疫球蛋白)而得到的。
10.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述结合脂酶的抗体是在产生抗体的动物、植物、细菌或产生单克隆抗体的细胞系中产生的。
11.如任一前述权利要求所述的应用，其中，通过冻干、喷雾干燥或包胶进一步处理所述抗体，以制成药物。
12.如权利要求11所述的应用，其中，所述包胶包括蛋白质包衣、碳水化合物包衣、脂质体、或包衣抗体的其他化学方法。
13.如任一前述权利要求所述的应用，其中，所述药物是口服给药。
14.如任一前述权利要求所述的应用，其中，所述药物为粉末或液体剂型。
15.如权利要求1-14之一所述的应用，其中，所述药物掺入在经处理或制成的食物中。
16.结合胃肠道酶的抗体在制造用于降低动物或人的营养物吸收的药物中的应用，所述营养物例如是蛋白质、碳水化合物和脂质。
17.如权利要求16所述的应用，其中，所述胃肠道酶选自于淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、蛋白酶和吸收营养物时所必须的其他酶。
18.如权利要求16或17所述的应用，其中，所述抗体得自于生产动物或人，所述生产动物或人已用抗原进行免疫，而所述抗原调节胃肠道中的生化过程。
19.一种通过喂以结合脂酶的抗体来降低哺乳动物和禽类中脂肪吸收的方法。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述脂酶是任何水解脂肪以使脂肪被胃肠道粘膜吸收所必须的酶。
21.如权利要求19所述的方法，其中，所述抗体结合脂酶，并因此抑制其在胃肠道中的活性。
22.如权利要求19所述的方法，其中，所述脂酶是哺乳动物、禽类或植物源的脂酶。
23.如权利要求22所述的方法，其中，所述哺乳动物是人、灵长类动物、单胃动物或反刍动物。
24.如权利要求22所述的方法，其中，所述禽类是鸡、火鸡、鹅、鸭、鹌鹑、野鸡或鸽子。
25.如权利要求22所述的方法，其中，所述植物包括细菌、霉菌和酵母。
26.如权利要求19所述的方法，其中，所述抗体是在禽蛋中产生的。
27.如权利要求19所述的方法，其中，所述抗体是在其他商业或实验室之产生抗体的动物中产生的，包括单克隆、植物和细菌产生的抗体。
28.如权利要求26所述的方法，其中，所述禽类是鸡、火鸡、鹅、鸭、鹌鹑、野鸡或鸽子。
29.如权利要求26所述的方法，其中，所述抗体是由完整的未经分离的蛋中得到的。
30.如权利要求26所述的方法，其中，所述抗体是由完整的未经分离的蛋的蛋黄中得到的。
31.如权利要求26所述的方法，其中，所述抗体是通过分离蛋黄形成蛋白质浓缩物或者纯IgY(鸡免疫球蛋白)而得到的。
32.如权利要求19所述的方法，其中，所述抗体以制得时的形式使用，或者通过冻干、喷雾干燥或包胶进一步处理。
33.如权利要求32所述的方法，其中，所述包胶是防止抗体发生灭活或干扰抗体作用之变化的方法。
34.如权利要求32所述的方法，其中，所述所述包胶包括蛋白质包衣、碳水化合物包衣、脂质体、或包衣抗体的其他化学方法。
35.如权利要求19所述的方法，其中，所述抗体或者包含该抗体的物质是口服喂给。
36.如权利要求35所述的方法，其中，经口服喂给的所述抗体或包含该抗体的物质为粉末或液体剂型。
37.如权利要求36所述的方法，其中，所述粉末或液体抗体或者包含该抗体的物质是作为经加工或制成的食物的一部分喂给的。
38.如权利要求37所述的方法，其中，所述经加工或制成的食物是其中包括粉末或液体形式之所述抗体或者含该抗体的物质作为其一部分的食物。
39.如权利要求38所述的方法，其中，所述经加工或制成的食物是任何用于人或动物消费的食物，其包括即食性食物、即混性食物、浓缩物、添加剂、冷藏或冷冻食物。
40.如权利要求19所述的方法，其中，降低脂肪吸收是因为降低了脂酶活性，因此脂肪被排泄，未被胃肠道吸收。
41.一种将动物和人的胃肠道酶抗体转移至其他动物或人中以降低营养物吸收的方法，所述营养物例如是蛋白质、碳水化合物和脂质。
42.如权利要求41所述的方法，其中，所述胃肠道酶选自于淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、蛋白酶和吸收营养物时所必须的其他酶。
43.一种将动物或人的抗体转移至其他动物或人中以改善生化过程的方法，其包括向所述动物或人给药包含所述抗体的物质，所述物质得自于生产动物或人，所述生产动物或人已用抗原进行免疫，而所述抗原调节胃肠道中的生化过程。
全文摘要
本发明涉及降低动物中脂肪吸收的方法,其中向所述动物喂以抗脂酶的抗体,所述脂酶是脂肪吸收所必须的一种酶。
文档编号C12N9/18GK1269728SQ98808769
公开日2000年10月11日 申请日期1998年7月6日 优先权日1997年7月7日
发明者朱利奥·L·皮门特尔 申请人:西麦德集团公开有限公司