专利名称：酶法测定β－羟丁酸试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种酶法测定β-羟丁酸试剂盒。
测定血尿β-羟丁酸对糖尿病酮症酸中毒早期诊断、指导疗效、判定预防有重要意义，对酒精、饥饿、子痫引起的酮症酸中毒也有重要意义。测定β-羟丁酸有滴定法、比重法、比色法，这些测定方法是半定量的，用气相色谱法无特异性，毛细管等速电泳法不适于临床大批量化验。有关文献介绍了酶法测定β-羟丁酸的方法，但这种试剂只能现配现用，不能长期保存。
本发明的目的在于提供一种测定速度快，并能长期保存的酶法测定β-羟丁酸试剂盒。
本发明的技术方案一种酶法测定β-羟丁酸试剂盒，其特征在于含有三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓剂、乙二胺四乙酸二钠、β-羟丁酸脱氢酶、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、氯化镁、叠氮钠、蔗糖。
本发明的有益效果本发明配方中乙二胺四乙酸二钠可有效洛合重金属离子避免对酶的破坏，氯化镁可做为酶的激活剂，叠氮钠可防腐，蔗糖对酶有保护作用。试剂盒使用了酶做催化剂，所以本发明抗干扰能力强，中等程度溶血，乳糜血，血糖20毫摩尔/升以下，胆红素100微毫摩尔/升以下对测定不产生干扰。冻干试剂冷藏一年，试剂盒中酶活力下降小于5％，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸破坏小于10％。测β-羟丁酸线性范围，达5.0毫摩尔/升，回收率97.1-104.2％，X＝0.24毫摩尔/升，n＝20，CV＝6.3％，SD＝0.015，复溶后稳定72小时(室温)，冷藏稳定二周。
下面详述本发明的实施例。
取超纯蒸馏水，用前将水加热至沸，密封备用。将三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓剂、乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、叠氮钠、蔗糖加入前述的蒸馏水溶解，调PH值于8.0，然后加入β-羟丁酸脱氢酶、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，此时，乙二胺四乙酸二钠含量21毫摩尔/升，氯化镁2毫摩尔/升、叠氮钠0.01毫摩尔/升，β-羟丁酸脱氧酶30国际单位/升、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸2.0毫摩尔/升，三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓剂65毫摩尔/升，蔗糖浓度40毫摩尔/升，将该试剂溶液分装为5-10毫升/瓶，经低温冷冻干燥后冷藏，冷冻干燥后水份小于3％，可保存一年以上。使用时，加5-10毫升蒸馏水溶解10分钟即可使用。
权利要求
1.一种酶法测定β-羟丁酸试剂盒，其特征在于含有三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓剂、乙二胺四乙酸二钠、β-羟丁酸脱氢酶、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、氯化镁、叠氮钠、蔗糖。
2.根据权利要求1所述的酶法测定β-羟丁酸试剂盒，其特征在于各组分的含量的摩尔比为三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓剂60-100、乙二胺四乙酸二钠20-30、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸1.8-4.0、氯化镁1.0-5.0、叠氮钠0.009-0.015、蔗糖14.6-43.8。
全文摘要
本发明涉及一种酶法测定β－羟丁酸试剂盒,解决了现有测定试剂不易保存的问题。本发明技术方案:一种酶法测定β－羟丁酸试剂盒,其特征在于:含有三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓剂、乙二胺四乙酸二钠、β－羟丁酸脱氢酶、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、氧化镁、叠氮钠、蔗糖,本发明保存时间长,测定速度快,使用方便。
文档编号C12Q1/32GK1277264SQ9911296
公开日2000年12月20日 申请日期1999年5月28日 优先权日1999年5月28日
发明者于永光, 辛晓敏, 冯磊光 申请人:哈尔滨医科大学第一临床医学院