专利名称：运用bcl-2反义寡聚体治疗bcl-2疾病的方法
1.引言本发明涉及使用bcl-2反义寡聚体来治疗和预防bcl-2的相关疾病。这些疾病包括癌症(cancer)、肿瘤、癌(carcinoma)以及细胞增生性相关疾病。在本发明的一个实施方案中，以高剂量给予bcl-2反义寡聚体。本发明也涉及预防或治疗bcl-2相关疾病的方法，尤其是预防或治疗癌症的方法；所述方法包括短期给予bcl-2反义寡聚体。此外，本发明涉及使用bcl-2反义寡聚体来增加受治疗者对癌症治疗的敏感性。本发明也涉及包含一种或更多种bcl-2反义寡聚体的药用组合物，所述药用组合物可包含治疗一种或更多种癌症治疗剂。
2.发明背景治疗癌症的传统方法有缺乏特异性的缺点。已开发的大多数药物是阻断酶途径、或随机与DNA相互作用的天然产物或衍生物。并且，治疗癌症的大多数药物由于低治疗指数而伴随有限制剂量的严重毒性。例如，如果给予患者抗癌药物，则大多数抗癌药物不仅杀死癌细胞，而且杀死正常的非癌细胞。因为这些有害作用，所以需要对癌细胞更特异性起作用的治疗。
已发现一类基因即癌基因与细胞转化有关，且与癌症状态的保持有关。特别是，破坏这些基因的转录或者抑制其蛋白产物的作用，能得到良好的治疗效果。已于Bishop，1987，“Cellular Oncogenes andRetroviruses(细胞的癌基因与反转录病毒)，”Science，235305-311中，综述了癌基因在人类许多癌的病因学中的作用。在人类癌症的许多类型中，一种称为bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病-2)的基因过量表达；且这种过量表达可能与肿瘤发生能力有关(Tsujimoto等，1985，“Involvementof the bcl-2 gene in human follicular lymphoma(bcl-2基因与人滤泡性淋巴瘤有关)”，Science 2281440-1443)。有人认为bcl-2基因主要是通过延长细胞存活而非通过加速细胞分裂，促使癌症发病以及对治疗的抗性。
人bcl-2基因与某些白血病、淋巴样瘤、淋巴瘤、成神经细胞瘤、以及鼻咽癌、前列腺癌、乳腺癌和结肠癌的病因学有关系(Croce等，1987，“Molecular Basis OfHuman B and T Cell Neoplasia(人B细胞瘤形成和T细胞瘤形成的分子基础)，”载于Advance in Viral Oncology，735-51，G.Klein(编辑)，New YorkRaven Press；Reed等，1991，“Differential expression of bcl-2 protooncogene in neuroblastoma and otherhuman tumor cell lines ofneural origin(bcl-2原癌基因在成神经细胞瘤和其它来自神经的人肿瘤细胞系中的差异表达)”，Cancer Res.516529-38；Yunis等，1989，“Bcl-2 and other genomic alterations in the prognosis oflarge-cell lymphomas(在大细胞淋巴瘤预后方面的bcl-2和其它基因组的改变)”，N.Engl.J.Med.3201047-54；Campos等，1993，“Highexpression of bcl-2 protein in acute myeloid leukemia is associated withpoor response to chemotherapy(急性髓细胞性白血病中的bcl-2蛋白的高表达与对化疗反应差有关)”，Blood 813091-6；McDonnell等，1992，“Expression of the protooncogene bcl-2 and its association withemergence of androgen-independent prostate cancer(原癌基因bcl-2的表达及其与不依靠雄激素的前列腺癌出现的关联)”，Cancer Res.526940-4；Lu等，1993，“Bcl-2 protooncogene expression in Epstein BarrVirus-Associated Nasopharyngeal Carcinoma(bcl-2原癌基因在与EB病毒有关的鼻咽癌中的表达)”，Int.J.Cancer 5329-35；Bonner等，1993，“bcl-2 protooncogene and the gastrointestinal mucosal epithelialtumor progression model as related to proposed morphologic and molecularsequences(与所提出的形态和分子序列相关的bcl-2原癌基因及胃肠粘膜上皮瘤的发展模型)”，Lab.Invest.6843A)。已发现在各种各样的肿瘤中bcl-2过量表达，所述肿瘤包括非Hodgkin氏淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、肾癌以及急性白血病与慢性白血病(Reed，1995，“Regulation of apoptosis by bcl-2 family proteins and its role incancer and chemoresistance(bcl-2家族蛋白调节细胞凋亡及其在癌症和药物抗性方面的作用)”，Curr.Opin.Oncol.7541-6)。
反义寡核苷酸构成潜在的、用于特异性破坏癌基因功能的治疗工具。这些合成的单链短DNA(通常少于30个碱基)具有互补于靶基因的前mRNA或mRNA区的序列，且通过氢键的碱基配对而形成杂种双链体。这种杂交不但能破坏靶mRNA的表达，而且能破坏靶mRNA所编码蛋白的表达；并因此能干扰下游的相互作用和信号传输。因为一种mRNA分子产生多个蛋白拷贝，所以，与在蛋白水平导致破坏例如通过抑制酶的活性位点相比，抑制mRNA能更有效和更具特异性。
已运用合成的、互补于c-myc癌基因之mRNA的寡脱氧核苷酸来特异性地抑制c-myc蛋白的产生，从而在体外抑制人白血病细胞的生长(Holt等，1988，Mol.Cell Biol.8963-73；Wickstrom等，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，851028-32)。也将寡脱氧核苷酸用作包括人免疫缺陷病毒在内的反转录病毒的特异性抑制剂(Zamecnik和Stephenson，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75280-4；Zamecnik等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，834143-6)。
由于反义寡核苷酸靶向和抑制各个癌相关基因的能力，反义寡核苷酸的使用已在临床前癌模型方面显示出前景。这些反义的硫代磷酸寡聚体显示出在体外抑制bcl-2表达以及在具有淋巴瘤异种移植物的小鼠模型中根除肿瘤的能力。已将某些癌对化疗的抗性与bcl-2癌基因的表达联系起来(Grover等，1996，“Bcl-2 expression in malignantmelanoma and its prognostic signiffcance”，Eur.J.Surg.Oncol.22(4)347-9)。给予bcl-2反义寡聚体能选择性地降低实验室小鼠体内肿瘤异体移植物中的bcl-2蛋白水平(Jansen等，1998，“bcl-2 antisense therapychemosensitizes human melanoma in SCID mice”，Nat.Med.4(2)232-4)。此外，给予bcl-2反义寡聚体能使实验室小鼠体内的肿瘤异体移植物对化学治疗剂更加敏感(Jansen等，1998，“bcl-2 antisense therapychemosensitizes human melanoma in SCID mice”，Nat.Med.4(2)232-4)。在小鼠中，用bcl-2反义寡聚体系统治疗则减少bcl-2蛋白，并增加细胞的凋亡。单独用bcl-2反义寡聚体治疗则具有中等抗肿瘤活性，而当将其与DTIC(也称为达卡巴嗪)组合使用时，则观测到增加的抗肿瘤活性。在与DTIC治疗联合给予bcl-2反义寡聚体后，在13只动物里的10只中，没有检测到恶性黑素瘤异体移植物。仍迫切需要扩展这些抗肿瘤治疗而和人类癌症作斗争。
尽管生物学治疗、药物治疗以及联合治疗的可用性增加，但对许多癌症患者的预后还是差的。例如，虽然通常用DTIC来治疗转移性黑素瘤；但是，几乎没患者表现出长期的改善。事实上，当DTIC与顺铂、卡莫司汀及他莫昔芬联合使用时，一个大范围的III期临床试验没有显示出任何更好的存活率(Chapman等，1999，“Phase III multicenterrandomized trial of the Dartmouth regimen versus dacarbazine in patientswith metastatic melanoma”，J.Clin.Oncol.17(9)2745-51)。这些在癌症治疗方面的重大缺点则突出了对新治疗方法的需要。
3.发明概述本发明涉及包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物以及治疗bcl-2相关疾病的方法。本发明部分地基于本申请人的发现，即当给予患者高剂量bcl-2反义寡聚体以治疗bcl-2相关疾病、尤其治疗癌症时，bcl-2反义寡聚体导致显著的治疗反应，包括低毒性、高耐受性及存活延长。本申请人还发现如果短时期即少于14天地以高剂量给予患者bcl-2反义寡聚体，则bcl-2反义寡聚体在治疗癌症患者方面也导致显著的治疗反应。这些治疗方案进一步包括与一种或更多种癌症治疗剂联合短时期以高剂量给予bcl-2反义寡聚体。意想不到的是，当联合短期给予bcl-2反义寡聚体给予癌症治疗剂时，减小剂量的一种或更多种癌症治疗剂在治疗癌症患者方面也显示出显著的治疗反应。因此，本发明的治疗方案提供一种治疗癌症的有效治疗方法，所述方法的持续时间减少和毒性降低，且该方法因此导致改善的耐受性。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗bcl-2相关疾病的方法以及一种单位剂型的药用组合物；所述药用组合物包含剂量特别高的bcl-2反义寡聚体，使得所述药用组合物中的bcl-2反义寡聚体的有效量为有效达到大约10-50mg/kg/天之剂量的剂量。按照本发明的这个实施方案，所述药用组合物的bcl-2反义寡聚体的有效量是一种有效达到最低30nM(毫微摩尔浓度)的bcl-2反义寡聚体循环水平的剂量。在一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体的循环水平为1-10μM(微摩尔浓度)。在另一个实施方案中，在给予bcl-2反义寡聚体大约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10小时后，达到至少30nM的bcl-2反义寡聚体的所需循环水平。在另一个实施方案中，在大约36至48小时内，优选在24至35小时，更优选在12至24小时内，最优选在不到12小时之内，达到至少30nM的bcl-2反义寡聚体的循环水平。
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗bcl-2相关疾病的方法以及一种药用组合物；所述药用组合物包含供短时期(即少于14天)给予的一定剂量的bcl-2反义寡聚体，使得在这短的治疗循环期间给予的bcl-2反义寡聚体的有效量在大约0.01mg/kg/天与50mg/kg/天之间变化。在另一个实施方案中，在这短期治疗循环期间给予的bcl-2反义寡聚体的有效量是有效达到最低30nM(毫微摩尔浓度)的bcl-2反义寡聚体循环水平的剂量。在另外一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体循环水平为1-10μM(微尔浓度)。
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗bcl-2相关疾病的方法以及一种药用组合物；所述药用组合物包含与一种或更多种癌症治疗剂联合的、供短时期(即少于14天)给予的一定剂量的bcl-2反义寡聚体，所述癌症治疗剂在给予bcl-2反义寡聚体之前或随后给予，或者与bcl-2反义寡聚体同时给予。在这短的治疗方案期间给予的bcl-2反义寡聚体的有效量在大约0.01mg/kg/天与50mg/kg/天之间变化。与bcl-2反义寡聚体联合给予的、有效量的癌症治疗剂可以按癌症治疗剂的标准剂量，或者可以按减少的剂量给予。按照本发明的这个实施方案，所述药用组合物的bcl-2反义寡聚体的有效量是有效达到至少30nM的bcl-2反义寡聚体循环水平的剂量。在一个特定的实施方案中，在大约36至48小时内，优选大约在24至35小时内，最优选在24小时之内，达到bcl-2反义寡聚体的所述循环水平。
按照本发明，bcl-2相关疾病包括肿瘤、恶性肿瘤、癌以及细胞增生性疾病。
按照本发明，短时期包括给予bcl-2反义寡聚体少于14天的一段时期，所述时期在2与13天之间变化，最好在3与9天之间、4与7天之间、或5与6天之间变化。
按照本发明，短时期给予的bcl-2反义寡聚体的剂量在0.01mg/kg/天与50mg/kg/天之间变化；优选按4-9mg/kg/天的剂量，且更优选按5-7mg/kg/天的剂量。
本发明也包括包含将按照本发明方法给予的、有效量的一种或更多种bcl-2反义寡聚体的药用组合物。所述药用组合物包含与药学上可接受的一种载体联合在一起的、在0.01mg/kg/天与50mg/kg/天之间变化的bcl-2反义寡聚体的剂量，优选按4-9mg/kg/天的剂量，且更优选按5-7mg/kg/天的剂量。在另一个实施方案中，本发明的药用组合物也包括另外一种或更多种的癌症治疗剂。配制所述药用组合物以便以连续输注形式给予，或是按一次或更多次的大剂量给予，或是在治疗方案期间按一次或更多次给予。
按照本发明，可以分别给予包含bcl-2反义寡聚体的本发明药用组合物和包含癌症治疗剂的药用组合物。
通过参考下面的附图和详细描述，将更好地理解这些方面以及本发明的其它方面。
3.1.定义当用于本文时，短语“bcl-2相关疾病”是指涉及bcl-2基因调节的疾病，包括但不限于与表达bcl-2基因的细胞有关系的疾病。这样的疾病包括与表达bcl-2基因或bcl-2相关基因的细胞或组织有关系的疾病，或者与不再表达bcl-2基因、但通常表达bcl-2基因的细胞或组织有关的疾病。bcl-2相关疾病包括但不限于细胞增生性疾病以及受表达bcl-2基因或bcl-2相关基因的细胞影响的细胞或组织的病理学。
当用于本文时，术语“癌症”描述一类疾病状态，其中一种或更多种致癌因子导致健康的细胞转化成异常细胞，然后这些异常细胞侵袭邻近的组织，接下来可能是这些异常细胞靠淋巴或血液而扩散到局部淋巴结和/或远的位置，即转移。
当用于本文时，术语“肿瘤”或“生长物”意思是由于细胞分裂较快和/或细胞死亡率较低的结果而包含较大数量的细胞的增大的组织块。肿瘤可以是恶性癌症，或是非恶性癌症。
当用于本文时，短语“治疗癌症”或“癌症的治疗”意思是抑制癌细胞的复制、抑制癌扩散、减小肿瘤的体积、缩小或减少体内的癌细胞数、或者改善或减轻由癌症引起的疾病的症状。只要在死亡率和/或发病率方面有所下降，或者，只要由于体内恶性细胞数减少而在疾病负载显示方面有所下降，则认为所述治疗是治疗性的。
当用于本文时，短语“预防癌症”或“癌症的预防”意思是预防癌症病态的发生或复发。因此，阻止或抑制或干扰转移、肿瘤生长或癌增生的治疗具有预防功效。
当用于本文时，短语“反义寡聚体”意思是反义寡核苷酸或其类似物或衍生物，涉及通过与靶序列的核苷酸碱基的Watson和Crick氢键相互作用而识别多核苷酸的靶序列的一系列化学物质。所述靶序列可以是RNA或DNA，且可以为单链或双链。靶分子包括但不限于前mRNA、mRNA和DNA。
当用于本文时，短语“bcl-2基因表达”是指产生bcl-2前mRNA、bcl-2mRNA和/或bcl-2蛋白的bcl2基因的转录。
当用于本文时，术语“衍生物”是指对应于本发明药用组合物的任何药学上可接受的同系物、类似物或片段。
当用于本文时，短语“治疗剂(therapeutics)”或“治疗剂(therapeuticagent)”是指有助于治疗疾病的任何分子、化合物或治疗。因此，癌症治疗剂是帮助治疗肿瘤或癌症的分子、化合物或治疗方案。所述治疗方案包括但不限于放射治疗、食疗、理疗及心理治疗。
当用于本文时，短语“化疗剂(chemoagent)”或“抗癌剂”或“抗肿瘤剂”或“癌症治疗剂”是指有助于治疗肿瘤或癌症的任何分子、化合物或治疗。
当用于本文时，短语“低剂量”或“减少的剂量”是指低于正常给予之范围的剂量，即低于由第54版Physicians′Desk Reference(2000)或类似参考文献建议的标准剂量。这样的剂量可足以抑制细胞增生，或在人体中显示出改善的效果，或与癌症的标准治疗相比显示出具有较少副作用的功效。在第54版Physicians′Desk Reference(2000)中或在CancerPrinciples & Practice of Oncology(DeVita，Jr.，Hellman和Rosenberg(编辑)，第2版，Philadelphia，PAJ.B.Lippincott Co.，1985)中，能找到特定治疗剂所使用的正常剂量范围和用于具体疾病的癌症标准疗法。
当用于本文时，短语“减小的毒性”是指当与其它治疗方案和剂量配方相比时，由于在较短的期间内且/或以较低的剂量给予了反义寡聚体和癌症治疗剂，而观测到的减小了的副作用和毒性；所述其它治疗方案和剂量配方如在第54版Physicians′Desk Reference(2000)中或在CancerPrinciples & Practice of Oncology(DeVita，Jr.，Hellman和Rosenberg(编辑)，第2版，Philadelphia，PAJ.B.Lippincott Co.，1985)中描述的标准治疗方案和剂量配方。
当用于本文时，短语“治疗周期”或“周期”是指给予一种治疗剂或一系列治疗剂的时期。在一个包括高剂量bcl-2反义寡聚体和标准剂量的癌症治疗剂联用的实施方案中，对于一个治疗周期，优选的时期的时间长度是少于14天。本发明考虑了至少一个治疗周期，通常优选多于一个周期。在某些情况下，一个治疗周期可能是所希望的，例如于一个治疗周期后在获得显著治疗效果的情况下。
当用于本文时，短语“药学上可接受的载体”是指不干扰活性成分的生物活性效果的载体介质。所述载体介质基本上是化学惰性的和无毒性的。
当用于本文时，短语“药学上可接受的”意思是由联邦政府或州政府的管理机构批准的、或在《美国药典》或其它普遍公认的药典中列举的可供动物之用的，更特别地是供人之用的。
当用于本文时，术语“载体”是指与治疗剂一起给予的稀释剂、佐剂、赋形剂、或溶媒。这样的载体可以是无菌液体，例如，盐水溶液或油，所述油包括来源于石油、动物、植物或合成的那些油，例如花生油、豆油、矿物油、芝麻油等等。当静脉内给予所述药用组合物时，盐水溶液是一种优选的载体。也可以将盐溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液用作各种液体载体，尤其是对于注射液而言。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油一硬脂酸酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等等。如果需要，也可以使所述载体包含少量的湿润剂或乳化剂、或者pH缓冲剂。这些组合物可以取溶液剂、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、散剂、缓释制剂等等的形式。可以用传统的粘合剂和载体例如甘油三酯，将所述组合物配制成栓剂。在E.W.Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences中，描述了合适的药用载体的实例。合适的药用载体的实例为各种各样的阳离子脂类，包括但不限于N-(1(2，3-二油氧基(dioleyloxy))丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)和二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。脂质体同样是适合于本发明反义寡聚体的合适载体。这样的组合物应该包含治疗有效量的所述化合物以及适量的载体，以便提供适合于给予患者的形式。所述制剂应该适合给药方式。
当用于本文时，短语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的基本无毒的酸和碱制备的盐；所述酸和碱包括无机酸和碱与有机酸和碱。药学上可接受的盐包括与游离氨基形成的那些盐，例如由盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等等衍生的那些盐；以及与游离羧基形成的那些盐，例如由氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等等衍生的那些盐。
4.附图简述
图1在用Bcl-2反义寡聚体治疗5天后，在12号患者黑素瘤活组织检查样品中的Bcl-2的减量调节。
图2在治疗前(a)、在Bcl-2反义寡聚体治疗后(b)以及在Bcl-2反义寡聚体加DTIC治疗后，12号患者(右腿)的肿瘤活组织检查样品的TUNEL染色。
图3在用Bcl-2反义寡聚体加DTIC以6.5mg/kg/天治疗三个周期之前与之后，12号患者的皮肤转移瘤(a)和骨盆区的CT扫描(b)。
5.发明详述本发明提供可供应用bcl-2反义寡聚体预防或治疗bcl-2相关疾病、尤其是癌症的组合物和方法。本发明也提供包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物以及供其用于预防性和治疗性治疗的方法，所述方法包括给药方案和治疗方案。
本发明部分地基于下述的发现，即单独用bcl-2反义寡聚体的短周期治疗以及用bcl-2反义寡聚体联合其它治疗剂的短周期治疗，在患有疾病的患者中有着意想不到的有效改善效果。这种短期治疗方案显示了对受治疗病人的其它好处，例如方便、精神创伤减少以及较好的依从治疗方案的可能。其它的发现包括(1)当与bcl-2反义寡聚体联用时，治疗周期短且减少治疗剂的剂量，(2)包含至少一种bcl-2反义寡聚体、且有或没有其它治疗剂的药用组合物的给药方式简化了，以及(3)临床上对许多类型癌症显著的治疗方案。因此，申请人发现，当短治疗周期内给予bcl-2反义寡聚体时，bcl-2反义寡聚体能在患有bcl-2相关疾病的患者中显示显著的治疗反应；这一发现提供改进而有用的药用组合物、治疗方法以及给药方式。
本发明也部分地基于下述的发现，即单独的高剂量的bcl-2反义寡聚体、以及联合其它治疗剂的高剂量的bcl-2反义寡聚体，在患有疾病的患者中，有着减小的毒性，并具有改善效应；所述减少了的毒性包括在与癌症的大多数标准治疗相比时，意想不到的很小的副作用。一种包括高剂量bcl-2反义寡聚体的治疗方案显现出另外的对受制疗病人的好处，例如较短的治疗周期、较少的治疗、或改善的功效。
在一个实施方案中，将bcl-2反义寡聚体给予人达短的治疗周期，以预防或治疗bcl-2相关疾病。在另一个实施方案中，将bcl-2反义寡聚体以高剂量给予人，以预防或治疗bcl-2相关疾病。除了影响患病的组织外，bcl-2反义寡聚体能保护或治疗正常组织；所述正常组织包括包含正常表达bcl-2基因之细胞的组织。另外，bcl-2反义寡聚体能保护或治疗被患病组织危及的正常组织；尽管所述正常组织不表达bcl-2基因。
在一个特定的实施方案中，本发明进一步包括使用联合疗法来预防或治疗bcl-2相关疾病。这样的疗法包括使用一种或更多种帮助预防或治疗疾病的分子、化合物或治疗。预期的治疗剂的实例包括生物制剂、化学药品、以及治疗处理(例如放射治疗)。
在另一个特定的实施方案中，本发明供给与一种或更多种癌症治疗剂联合给予人以预防或治疗癌症的bcl-2反义寡聚体。这样的癌症治疗剂包括具有抗癌活性的一种或更多种分子、化合物或治疗。预期的癌症治疗剂的实例包括生物制剂、化学药品、以及治疗处理(例如放射治疗)。
在再一个特定的实施方案中，本发明供给与一种或更多种减少了剂量的癌症治疗剂联合给予人以预防或治疗癌症的bcl-2反义寡聚体。这样的治疗可涉及高剂量、标准剂量或低剂量的一种或更多种bcl-2反义寡聚体，治疗周期可以为长周期或短周期。在一个特定的实施方案中，本发明供给与一种或更多种大大减少了剂量的癌症治疗剂于缩短的治疗周期内联合给予人以预防或治疗癌症的特别高剂量的bcl-2反义寡聚体。
5.1 bcl-2反义寡聚体本发明考虑了一种或更多种bcl-2反义寡聚体，或其衍生物、类似物、片段、杂种、模拟物(mimetics)以及其同类物的应用。当用于本文时，术语“衍生物”是指对应于本发明药用组合物的任何药学上可接受的同系物、类似物或片段。适用于本发明的反义寡聚体包括按大小在长度5至10个碱基、10至20个碱基、20至50个碱基、50至75个碱基、或75个至100个碱基范围内变化的核苷酸寡聚体，优选长度为10至40个碱基，更优选长度为15至25个碱基，最优选长度为18个碱基。所述靶序列可以是RNA或DNA，且可以为单链或双链。靶分子包括但不限于前mRNA、mRNA和DNA。在一个实施方案中，靶分子是mRNA。在一个优选的实施方案中，靶分子是bcl-2前mRNA或bcl-2 mRNA。在一个特定的实施方案中，反义寡聚体与bcl-2前mRNA或bcl-2 mRNA任何地方的一部分杂交。所述反义寡聚体最好是选自与bcl-2前mRNA或bcl-2 mRNA的翻译起始位点、供体剪接位点、受体间接位点、转运位点或降解位点杂交的那些寡聚体。
先前已评定了几种bcl-2反义寡聚体，得到不同的结果(参见例如在第5,831,066号美国专利中的SEQ.ID.NO.1-17)。在序号08/217,082的美国专利申请即现在的第5,734,033号美国专利；序号08/465,485的美国专利申请即现在的第5,831,066号美国专利；以及序号09/080,285的美国专利申请即现在的第6,040,181号美国专利中，详细描述了可按照本发明使用的bcl-2反义寡聚体的实例；通过引用，将所述文献中的每个全部结合到本文中。
在一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体与bcl-2前mRNA或bcl-2mRNA的一部分大体上互补，或者与同bcl-2相关的前mRNA或mRNA的一部分大体上互补。在一个优选的实施方案中，bcl-2反义寡聚体与前mRNA编码链的翻译起始位点的一部分杂交。在更优选的一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体与人bcl-2基因的前mRNA编码链上包含翻译起始位点的一部分杂交。更优选的是，bcl-2反义寡聚体包含一段互补于bcl-2前mRNA或RNA的AUG起始序列的TAC序列。
在另一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体与人bcl-2基因的前mRNA编码链的剪接供体位点的一部分杂交。更优选的是，这种核苷酸包含一段CA序列，该序列与bcl-2基因的剪接供体序列GT是互补的；且优选该核苷酸序列另外包括5至50个碱基的侧翼部分，更优选大约10至20个碱基的侧翼部分；所述侧翼部分与bcl-2基因编码链的邻接所述剪接供体位点的部分杂交。
在再一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体与人bcl-2基因的前mRNA编码链的剪接受体位点的一部分杂交。优选的是，这种核苷酸包含一段TC序列，该序列与bcl-2基因的剪接受体序列AG是互补的；且优选该核苷酸序列另外包括5至50个碱基的侧翼部分，更优选大约10至20个碱基的侧翼部分；所述侧翼部分与bcl-2基因编码链的邻接所述剪接受体位点的部分杂交。在另一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体与前mRNA或mRNA中与剪接、转运或降解有关的部分杂交。
本领域的一般技术人员能认识到适用于本发明的反义寡聚体也可以大体上互补于bcl-2前mRNA或mRNA的其它位点，且能形成杂合体。技术人员也将意识到优选与bcl-2前mRNA或mRNA中在来自不相关基因的转录物中通常不存在的一部分杂交，以便保持治疗的特异性。
不管所设计的bcl-2反义寡聚体序列与bcl-2基因、bcl-2前mRNA、bcl-2 mRNA或bcl-2相关核苷酸序列的序列同源性程度或杂交程度有多高，通过经验性测试和评估临床效力，也可以确定bcl-2反义寡聚体序列的设计。本领域普通技术人员会意识到与优选实施方案的那些反义寡聚体相比，具有例如较低的序列同源性、较多或较少的修饰核苷酸、或者较长或较短的长度、但在临床治疗方面仍然显示出反应的bcl-2反义寡聚体，则同样在本发明的范围内。
反义寡聚体可以是RNA或DNA，或是其衍生物。反义寡聚体的特定形式可能影响寡聚体的药代动力学参数例如生物利用度、代谢、半衰期等等。因此，本发明考虑了具有改善细胞吸收、增强对核酸酶的抗性、改善与靶序列的结合、或增加靶序列的切割或降解之特性的反义寡聚体衍生物。所述反义寡聚体可含有包括例如硫代磷酸酯或甲基膦酸酯的碱基。而所述反义寡聚体可以是尤其包含磷酸二酯核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸和/或甲基膦酸酯核苷酸之组合的混合寡聚体。这样的寡聚体可具有各种修饰，所述修饰包括但不限于糖的2-O′-烷基或2-O′-卤代修饰、主链修饰(例如甲基膦酸酯、二硫代磷酸酯衍生物、二硫代亚磷酸酯(phosphordithioate)衍生物)、formacetal衍生物、3′-thioformacetal衍生物、砜衍生物、氨基磺酸酯衍生物、硝基氧主链衍生物、吗啉基衍生物以及肽核酸(PNA)衍生物)、或其中碱基部分已被修饰的衍生物(Egholm等，1992，Peptide Nucleic Acids(PNA)-Oligonucleotide Analogues With An Achiral Peptide Backbone)。在另一个实施方案中，反义寡聚体包括寡核苷酸的缀合物及其衍生物(Goodchild，1990，“Conjugates of oligonucleotides and modifiedotigonucleotidesa review of their synthesis and properties”，Bioconjug.Chem.1(3)165-87)。
至于体内治疗应用，优选bcl-2反义寡聚体的硫代磷酸酯衍生物，至少部分是因为对降解的抗性较大。在一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体是一种含有硫代磷酸酯碱基的杂种寡聚体。在另一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体包含至少一个硫代磷酸酯键。在另一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体包含至少三个硫代磷酸酯键。在再一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体包含至少三个连续的硫代磷酸酯键。在又一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体完全由硫代磷酸酯键组成。制备寡核苷酸衍生物的方法是本技术领域已知的。参见例如，Stein等，1988，Nucl.Acids Res.，163209-21(硫代磷酸酯)；Blake等，1985，Biochemistry 246132-38(甲基膦酸酯)；Morvan等，1986，Nucl.Acids Res.145019-32(α-脱氧核苷酸)；Monia等，1993，“Evaluation of 2′-modifiedoligonucleotides containing 2′deoxy gaps as antisense inhibitors of geneexpression”，J.Biol.Chem.26814514-22(2′-O-甲基-核糖核苷酸)；Asseline等，1984，Proc.Natl Acad.Sci.USA 813297-3301(吖啶)；Knorre等，1985，Biochemie 67783-9；Vlassov等，1986，Nucl.Acids Res.144065-76(N-2-chlorocethylamine)和吩嗪)；Webb等，1986，Nucl.AcidsRes.147661-74(5-甲基-N4-N4-桥亚乙基胞嘧啶)；Boutorin等，1984，FEBS Letters 17243-6(乙二胺四乙酸(EDTA)铁及类似物)；Chi-Hong等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 837147-51(5-甘氨酰氨基(glycylamido)-1，10-o-菲咯啉)；以及Chu等，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82963-7(二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)的衍生物)。
在治疗周期期间给予的bcl-2反义寡聚体的有效剂量，大约从0.01mg/kg/天至0.1mg/kg/天、0.1mg/kg/天至1mg/kg/天、或1mg/kg/天至10mg/kg/天。给予的bcl-2反义寡聚体的剂量可视给药的方式而定。例如，与由含有包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物之局部植入物产生的全身剂量相比，静脉内给予bcl-2反义寡聚体多半会产生显著更高的全身剂量。在一个实施方案中，以0.01-10mg/kg/天的剂量，更优选以4-9mg/kg/天的剂量，最优选以5-7mg/kg/天的剂量，皮下给予bcl-2反义寡聚体。在另一个实施方案中，以0.01-10mg/kg/天的剂量，更优选以4-9mg/kg/天的剂量，最优选以5-7mg/kg/天的剂量，静脉内给予bcl-2反义寡聚体。在再一个实施方案中，以0.01mg/kg/天至10mg/kg/天的剂量，更优选以0.01mg/kg/天至0.1mg/kg/天的剂量，最优选以1mg/kg/天至5mg/kg/天的剂量，局部给予bcl-2反义寡聚体。局部给药能产生较低的全身剂量，这对于本领域技术人员将是显而易见的。例如，局部给药方式例如肿瘤内给予、眼内注射或植入，能产生bcl-2反义寡聚体的局部高浓度；而相对于总体重，则是一种相对低的剂量。因此，在这样的情况下，考虑了局部给予bcl-2反义寡聚体而产生大约0.01-5mg/kg/天的全身剂量。
在另一个实施方案中，在治疗周期期间，给予特别高剂量的bcl-2反义寡聚体；所述剂量大约从10mg/kg/天至20mg/kg/天、20mg/kg/天至30mg/kg/天、或30mg/kg/天至50mg/kg/天。
此外，特定bcl-2反义寡聚体的有效剂量可随其它因素而定，所述其它因素既包括癌的类型、疾病的状态或病期、所述寡聚体的毒性、寡聚体被癌细胞吸收的吸收率，又包括打算给予反义寡聚体的个体的体重、年龄和健康状况。因为体内存在许多可干扰bcl-2反义寡聚体之作用或生物活性的因素，所以本领域普通技术人员能认识到bcl-2反义寡聚体的有效量可由于每个个体而变化。
在另一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体的剂量为导致至少30nM(毫微摩尔浓度)的bcl-2反义寡聚体血浆循环浓度的剂量。根据给药方式，可能优选更低或更高的bcl-2反义寡聚体的血浆浓度；对于技术人员，这一点将是显而易见的。例如，列举几个，在静脉内、皮下、肌内、控制释放以及口服给药方式方面，至少30nM的bcl-2反义寡聚体血浆浓度能是合适的。在另一个实例中，相对低的bcl-2反义寡聚体血浆循环水平可能是理想的；但是当采用局部给药方式例如肿瘤内给予、眼内给予或植入时，它们仍然能产生临床有效的、局部高的bcl-2反义寡聚体浓度。
在再一个实施方案中，在给予bcl-2反义寡聚体大约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10小时后，达到至少30nM(毫微摩尔浓度)的bcl-2反义寡聚体的血浆循环浓度。在又一个实施方案中，在大约36至48小时内，优选在24至35小时，更优选在12至24小时内，最优选在12小时之内，达到至少30nM的bcl-2反义寡聚体的血浆循环浓度。
在一个特定的实施方案中，bcl-2反义寡聚体的剂量为高剂量。在一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体的血浆循环浓度为至少30nM。在另一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体的循环水平为1μM至10μM。在又一个实施方案中，bcl-2反义寡聚体的循环水平是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10μM。而在另外一个实施方案中，在大约36至48小时内，优选在24至35小时，更优选在12至24小时内，最优选在12小时之内，达到1μM至10μM的bcl-2反义寡聚体的循环水平。
通过每个周期的几次给药，可达到高剂量。另一方面，可以以单次的大剂量输注(bolus)给药方式，给予高剂量。单次给予高剂量可导致短暂的、比30nM高得多的bcl-2反义寡聚体血浆循环水平。并且，单次给予特别高剂量的bcl-2反义寡聚体可在大大少于12小时内、甚至在少于1小时内导致1μM至10μM的bcl-2反义寡聚体血浆循环浓度。
另外，bcl-2反义寡聚体的剂量可根据所用的特定bcl-2反义寡聚体而变化。所用的剂量很可能反映所考虑事项的平衡，特定bcl-2反义寡聚体的稳定性、定位、细胞吸收以及毒性，则属所考虑事项之列。例如，特定的化学修饰的bcl-2反义寡聚体可能显示出较大的对降解的抗性，或可能显示出对靶核酸的较高亲和性，或可能显示出被细胞或细胞核的吸收增加；上述所有情况都可允许使用低剂量。而在另一个实例中，特定的化学修饰的bcl-2反义寡聚体可显示出比其它反义寡聚体毒性低的毒性，且因此能以高剂量使用它。因此，对于给定的一种bcl-2反义寡聚体，合适的给予剂量可以是相对高或相对低的。技术人员会知道合适的剂量，且本发明考虑了特定种类的bcl-2反义寡聚体的最适治疗方案的连续评估。可在一个或更多个治疗中给予所述日剂量。
在确定bcl-2反义寡聚体有效剂量方面的待考虑的其它因素包括是否将与其它治疗剂联合给予所述寡聚体。在这样的情况下，所述其它治疗剂的相对毒生可表明以低剂量使用bcl-2反义寡聚体。另一方面，用高剂量的bcl-2反义寡聚体的治疗能导致与减少了剂量的治疗剂的联合治疗。在一个特定的实施方案中，用特别高剂量的bcl-2反义寡聚体的治疗能导致与大大减少了剂量的癌症治疗剂的联合治疗。例如，用10、20、30、40或50mg/kg/天的bcl-2反义寡聚体治疗患者，能另外增加受治疗者对癌症治疗剂的敏感性。在这样的情况下，将特别高剂量的bcl-2反义寡聚体与例如一种大大缩短时间的放射治疗方案联合。在另一个实例中，特别高剂量的bcl-2反义寡聚体导致癌症治疗剂效力的显著增加。
另外，特别高剂量的bcl-2反义寡聚体可进一步缩短给予治疗有效量的bcl-2反义寡聚体和/或癌症治疗剂的周期，以致于治疗周期的长度比14天少得多。
在一个实施方案中，给予一种18个碱基的、序列5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′的硫代磷酸酯bcl-2反义寡聚体达一个限定为少于两周的短治疗周期；该序列互补于bcl-2 mRNA的前6密码子，且与靶RNA的相应碱基杂交。
在一个实施方案中，按0.01mg/kg/天至10mg/kg/天的剂量给予G3139达2至13天。在一个特定的实施方案中，按0.01-1、1-2、3-4、5-6、6-7、7-8、或9-10mg/kg/天的剂量，更优选按4-9mg/kg/天的剂量，且最优选按5-7mg/kg/天的剂量，给予G3139达2至3天、4至5天、6至7天、8至9天、10至11天或12至13天。在另一个实施方案中，按所述的剂量给予G3139达3至9天。在再一个实施方案中，按所述的剂量给予G3139达4至7天。在一个优选的实施方案中，按所述的剂量给予G3139达5至6天。在一个最优选的实施方案中，按5-7mg/kg/天的剂量给予G3139达5至6天。本发明根据所用的特定bcl-2反义寡聚体、或根据特定给药方式、或根据是否将bcl-2反义寡聚体作为联合治疗(例如与一种癌症治疗剂联合)的一部分给予，考虑了其它优选治疗方案。可在一个或更多个治疗中给予所述日剂量。
在另一个实施方案中，以大约10-50mg/kg/天的特别高的剂量，给予G3139。在一个特定的实施方案中，以大约10-15、16-20、21-25、26-30、31-35、36-40、41-45或46-50mg/kg/天的特别高的剂量，给予G3139。在另外一个实施方案中，以所述的剂量给予G3139达1至10天。在再一个实施方案中，按所述的剂量给予G3139达2至7天。在又一个实施方案中，以所述的剂量给予G3139达3至4天。在一个优选的实施方案中，以26-30、3l-35、36-40、41-45或46-50mg/kg/天的剂量，给予G3139达最少1天。本发明根据所用的特定bcl-2反义寡聚体、或根据特定给药方式、或根据是否将bcl-2反义寡聚体作为联合治疗(例如与一种癌症治疗剂联合)的一部分给予，考虑了其它优选治疗方案。可在一个或更多个治疗中给予所述日剂量。
5.2癌症治疗剂本文描述的本发明包括一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的bcl-2反义寡聚体给需要这样的治疗的人，所述治疗有效量的bcl-2反义寡聚体包括但不限于高剂量的寡聚体。本发明还包括短期给予一种bcl-2反义寡聚体的使用法。正常的非癌细胞以一种特定细胞类型特有的频率分裂。如果细胞已被转化成癌的状态，则产生不受控制的细胞增生和减少了的细胞死亡；且因此，杂乱的细胞分裂或细胞生长成为癌细胞类型的一个标志。癌的种类的实例包括但不限于非霍奇金(Hodgkin′s)淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病(例如诸如急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病之类的急性白血病，慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤)、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、膀胱癌、黑素瘤、头颈癌、脑癌、不知原发位点之癌、瘤、周围神经系统之癌、中枢神经系统之癌、肿瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因(Ewing′s)瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯(Wilms′)瘤、小细胞肺癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听觉神经瘤、少突神经胶质细胞瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、以及成视网膜细胞瘤)、重链病、转移瘤、或特征在于不受控制的或异常的细胞生长的任何疾病或紊乱。
在一个优选的实施方案中，本发明进一步包括运用联合治疗来预防或治疗癌症。例如，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合紫杉醇、docetaxel、米托蒽醌和/或雄激素受体拮抗剂(例如氟他胺)，来治疗前列腺癌。作为另一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合docetaxel、紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星和/或VP-16(依托泊苷)，来治疗乳腺癌。作为又一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合氟达拉滨、阿糖胞苷、吉姆单抗(MYLOTARG)、柔红霉素、甲氨蝶呤、长春新碱、6-巯基嘌呤、伊达比星、米托蒽醌、依托泊苷、天冬酰胺酶、泼尼松和/或环磷酰胺，来治疗白血病。作为另一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合地塞米松，来治疗骨髓瘤。作为又一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合达卡巴嗪来治疗黑素瘤。作为另一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合伊立替康，来治疗结肠直肠癌。作为又一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合紫杉酚、docetaxel、依托泊苷和/或顺铂，来治疗肺癌。作为另一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合环磷酰胺、CHOP、依托泊苷、博莱霉素、米托蒽醌和/或顺铂，来治疗非霍奇金淋巴瘤。作为又一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合顺铂，来治疗胃癌。作为另一个实例，可以用包含bcl-2反义寡聚体的药用组合物联合吉西他滨，来治疗胰腺癌。也可以用这些联合疗法来预防癌症或癌症的复发。
联合治疗也包括除了给予bcl-2反义寡聚体外，使用一种或更多种有助于预防或治疗癌症的分子、化合物或治疗；所述分子、化合物或治疗包括但不限于化疗剂、免疫治疗剂、癌疫苗、抗生成血管剂、细胞因子、激素治疗、基因治疗及放射治疗。
在一个实施方案中，除了bcl-2反义寡聚体外，给予一种或更多种化疗剂来治疗癌症患者。本发明所考虑的化疗剂的实例包括但不限于阿糖胞苷、taxoids(例如紫杉醇、docetaxel)、抗微管蛋白剂(例如紫杉醇、docetaxel、Epothilone B、或其类似物)、顺铂、卡铂、多柔比星、替尼泊苷(tenoposide)、米托蒽醌、2-氯脱氧腺苷、烷基化剂(例如环磷酰胺、氮芥、塞替派(thioepa)、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安、二溴甘露醇、链佐星、丝裂霉素C以及顺式二氯二胺铂(II)(DDP)-顺铂、硫替派)、抗生素(例如放线菌素D(从前的放线菌素)、博莱霉素、普卡霉素、安曲霉素)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟达拉滨、吉西他滨、达卡巴嗪、替莫唑胺)、天冬酰胺酶、卡介菌、白喉毒素、六甲蜜胺、羟基脲、LYSODREN、核苷酸类似物、植物生物碱(例如商品紫杉醇制剂、紫杉醇、喜树碱、托泊替康、伊立替康(CAMPTOSAR、CPT-11)、长春新碱、长春花生物碱例如长春碱)、鬼臼毒素(包括衍生物例如表鬼臼毒素、VP-16(依托泊苷)、VM-26(替尼泊苷))、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、丙卡巴肼、氮芥、蒽环霉素(anthracyclines)(例如柔红霉素(以前的道诺霉素)、多柔比星、多柔比星脂质体)、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽醌、普卡霉素、放线菌素D、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、抗有丝分裂剂、相思豆毒素、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织纤溶酶原激活物、阿地白介素、allutamine、阿那曲唑、比卡鲁胺、biaomycin、白消安、卡培他滨、卡铂、苯丁酸氮芥(chlorabusil)、克拉屈滨、阿糖胞苷(cylarabine)、放线菌素D(daclinomycin)、雌莫司汀、氟尿苷(floxuridhe)、吉西他滨、gosereine、伊达比星、异环磷酰胺(itosfamide)、醋酸亮丙立德(lauprolide acetate)、左旋咪唑、洛莫司汀(lomusline)、氮芥、magestrol、乙酸盐、巯基嘌呤、巯乙磺酸钠、二溴卫矛醇(mitolanc)、培门冬酶、喷司他丁(pentoslatin)、普卡霉素(picamycin)、利妥昔单抗(riuxlmab)、campath-l、链佐星(straplozocin)、 硫代鸟嘌呤、维A酸、长春瑞滨，或者其任何片段、家族成员或衍生物，包括其药学上可接受的盐。本发明也考虑了包含一种或更多种化疗剂(例如FLAG、CHOP)的组合物。FLAG包括氟达拉滨、阿糖胞苷(Ara-C)和G-CSF。CHOP包括环磷酰胺、长春新碱、多柔比星和泼尼松。
在一个实施方案中，所述化疗剂为按200-4000mg/m2/周期之剂量的达卡巴嗪。在一个优选实施方案中，所述剂量从700mg/m2/周期至1000mg/m2/周期。在另一个实施方案中，所述化疗剂为按25-50mg/m2/周期之剂量的氟达拉滨。在再一个实施方案中，所述化疗剂为按200-2000mg/m2/周期之剂量的阿糖胞苷(Ara-C)。在另一个实施方案中，所述化疗剂为按1.5-7.5mg/kg/周期之剂量的多西他赛。在另一个实施方案中，所述化疗剂为按5-15mg/kg/周期之剂量的紫杉醇。在再一个实施方案中，所述化疗剂为按5-20mg/kg/周期之剂量的顺铂。在又一个实施方案中，所述化疗剂为按5-20mg/kg/周期之剂量的5-氟尿嘧啶。而在另一实施方案中，所述化疗剂为按2-8mg/kg/周期之剂量的多柔比星。在又一个实施方案中，所述化疗剂为按40-160mg/kg/周期之剂量的表鬼臼毒素。还在另一个实施方案中，所述化疗剂为按50-200mg/kg/周期之剂量的环磷酰胺。在再一个实施方案中，所述化疗剂为按50-75mg/kg/周期、75-100mg/kg/周期、100-125mg/kg/周期或125-150mg/m2/周期之剂量的伊立替康。在又一个实施方案中，所述化疗剂为按3.7-5.4mg/m2/周期、5.5-7.4mg/m2/周期、7.5-11mg/m2/周期或11-18.5mg/m2/周期之剂量的长春碱。在又一个实施方案中，所述化疗剂为按0.7-1.4mg/m2/周期或1.5-2mg/m2/周期之剂量的长春新碱。而在另一实施方案中，所述化疗剂为按3.3-5mg/m2/周期、5-10mg/m2/周期、10-100mg/m2/周期或100-1000mg/m2/周期之剂量的甲氨蝶呤。
在一个优选实施方案中，本发明则进一步包括使用作为bcl-2反义寡聚体治疗方案的一部分给予的低剂量的化疗剂。例如，用bcl-2反义寡聚体的初期治疗增加了肿瘤对后来的用一种剂量化疗剂攻击的敏感性；所述剂量接近或低于当不用bcl-2反义寡聚体时所给予的化疗剂剂量范围的下限。在一个实施方案中，将bcl-2反义寡聚物体和低剂量(例如6-60mg/m2天、或更少)的多西他赛给予癌症患者。在另一个实施方案中，将bcl-2反义寡聚体和低剂量(例如10-135mg/m2/天或更少)的紫杉醇给予癌症患者。在再一个实施方案中，将bcl-2反义寡聚体和低剂量(例如2.5-25mg/m2/天或更少)的氟达拉滨给予癌症患者。在又一个实施方案中，将bcl-2反义寡聚体和低剂量(例如0.5-1.5g/m2/天或更少)的阿糖胞苷(Ara-C)给予癌症患者。
因此，本发明考虑了使用一种或更多种bcl-2反义寡聚体以及低剂量的化疗剂来预防或治疗癌症，在给予低剂量化疗剂之前、之后或同时，给予bcl-2反义寡聚体。
在一个实施方案中，所述化疗剂为顺铂，例如PLATINOL或PLATINOL-AQ(Bristol Myers)，按5-10mg/m2/周期、10-20mg/m2/周期、20-40mg/m2/周期或40-75mg/m2/周期的剂量。在另一个实施方案中，将7.5-75mg/m2/周期之剂量的顺铂给予患有卵巢癌的患者。在再一个实施方案中，将5-50mg/m2/周期之剂量的顺铂给予患有膀胱癌的患者。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为卡铂，例如PARAPLATIN(Bristol Myers)，按2-4mg/m2/周期、4-8mg/m2/周期、8-16mg/m2/周期、16-35mg/m2/周期或35-75mg/m2/周期的剂量。在再一个实施方案中，将7.5-75mg/m2/周期之剂量的卡铂给予患有卵巢癌的患者。在另一个实施方案中，将5-50mg/m2/周期之剂量的卡铂给予患有膀胱癌的患者。在另一个实施方案中，将2-20mg/m2/周期之剂量的卡铂给予患有睾丸癌的患者。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为环磷酰胺，例如CYTOXAN(Bristol Myers Squibb)，按0.25-0.5mg/kg/周期、0.5-1mg/kg/周期、1-2mg/kg/周期、2-5mg/kg/周期、5-10mg/kg/周期、10-20mg/kg/周期、20-40mg/kg/周期的剂量。在另一个实施方案中，将剂量4-40mg/kg/周期的环磷酰胺给予患有恶性癌症的患者。在另一个实施方案中，将剂量0.25-2.5mg/kg/周期的环磷酰胺给予患有非恶性癌的患者。
在一个实施方案中，所述化疗剂为阿糖孢苷，例如CYTOSAR-U(Pharmacia & Upjohn)，按0.5-1、1-4、4-10、10-25、25-50或50-100mg/m2/周期的剂量。在另一个实施方案中，将剂量10-100mg/m2/周期的阿糖孢苷给予患有急性白血病的患者。在另一个实施方案中，将剂量0.5-5mg/m2/周期的阿糖孢苷给予患有脑膜白血病的患者。在另一个实施方案中，将剂量5-50mg/m2/周期的阿糖孢苷脂质体例如DEPOCYT(Chiron Corp.)，给予患有癌症的患者。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为达卡巴嗪，例如DTIC或DTIC-DOME(Bayer Corp.)，按15-250mg/m2/周期或0.2-2mg/m2/周期的剂量。在另一个实施方案中，将剂量15-150mg/m2/周期的达卡巴嗪给予患有霍奇金氏病的患者。在另一个实施方案中，将剂量0.2-2mg/m2/周期的达卡巴嗪给予患有恶性黑素瘤的患者。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为托泊替康，例如HYCAMTIN(SmithKline Beecham)，按0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8或0.8-1.5mg/m2/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为伊立替康，例如CAMPTOSAR(Pharmacia & Upjohn)，按5-10、10-25或25-50mg/m2/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为氟达拉滨，例如FLUDARA(Berlex Laboratories)，按2.5-5、5-10、10-15或15-25mg/m2/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为按200-2000mg/m2/周期之剂量的阿糖胞苷(Ara-C)。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为多西他赛，例如TAXOTERE(Rhone Poulenc Rorer)，按6-10、10-30或30-60mg/m2/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为紫杉醇，例如TAXOL(BristolMyers Squibb)，按10-20、20-40、40-70或70-135mg/kg/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为按0.5-5mg/kg/周期之剂量的5-氟尿嘧啶。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为多柔比星，例如ADRIAMYCIN(Pharmacia & Upjohn)、DOXIL(Adza)、RUBEX(BristolMyers Squibb)，按2-4、4-8、8-15、15-30或30-60mg/kg/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为依托泊苷，例如VEPESID(Pharmacia & Upjohn)，按3.5-7、7-15、15-25或25-50mg/m2/周期的剂量。在另一个实施方案中，将剂量5-50mg/m2/周期的依托泊苷给予患有睾丸癌的患者。在另一个实施方案中，将剂量3.5-35mg/m2/周期的依托泊苷给予患有小细胞肺癌的患者。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为长春碱，例如VELBAN(EliLilly)，按0.3-0.5、0.5-1、1-2、2-3或3-3.7mg/m2/周期的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为长春新碱，例如ONCOVIN(Eli Lilly)，按0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.7mg/m2/周期范围内而变动的剂量。
在另一个实施方案中，所述化疗剂为甲氨蝶呤，按0.2-0.9、1-5、5-10、10-20的剂量。
在另一个实施方案中，联合一种或更多种免疫治疗剂给予bcl-2反义寡聚体，所述免疫治疗剂例如抗体和免疫调节剂，它们包括但不限于rituxan、利妥昔单抗、campath-l、吉姆单抗或曲妥单抗。
在另一个实施方案中，联合一种或更多种抗血管生成剂给予bcl-2反义寡聚体，所述抗血管生成剂包括但不限于血管生长抑素、沙利度胺、kringle 5、内皮生长抑素、Serpin(丝氨酸蛋白酶抑制剂)抗凝血酶、纤连蛋白之29kDa N-末端蛋白水解片段和40kDa的C-末端蛋白水解片段、催乳激素的16kDa的蛋白水解片段、血小板因子-4的7.8kDa的蛋白水解片段、对应于血小板因子-4片段的13个氨基酸之肽(Maione等，1990，Cancer Res.512077-2083)、对应于胶原I片段的14个氨基酸之肽(Tolma等，1993，J.Cell Biol.122497-511)、对应于血小板致敏蛋白I片段的19个氨基酸之肽(Tolsma等，1993，J.Cell Biol.122497-511)、对应于SPARC片段的20个氨基酸之肽(Sage等，1995，J.Cell.Biochem.571329-1334)，或者其任何片段、家族成员或衍生物，包括其药学上可接受的盐。
此外已经描述了抑制血管生成并且对应于层粘连蛋白、纤连蛋白、原胶原和EGF之片段的其它肽(参见Cao的综述1998，Prog.Mol.Subcell.Biol.20161-176)。已证明阻滞与RGD蛋白(即具有肽基序Arg-Gly-Asp)结合的某些整联蛋白的单克隆抗体和环五肽，具有抗血管形成的活性(Brooks等，1994，Science 264569-571；Hammes等，1996，Nature Medicine 2529-533)。此外，用受体拮抗剂抑制尿激酶纤溶酶原激活物的受体而抑制血管生成、肿瘤生长和转移(Min等，1996，CancerRes.562428-33；Crowley等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 905021-25)。本发明也考虑了这样的抗血管生成剂的使用。
在另一个实施方案中，联合放射方案给予bcl-2反义寡聚体。
在另一个实施方案中，联合一种或更多种细胞因子给予bcl-2反义寡聚物体，所述细胞因子包括但不限于淋巴因子、肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子样细胞因子、淋巴毒素-α、淋巴毒素-β，干扰素-α、干扰素-β，巨噬细胞炎性蛋白、粒细胞单核细胞集落刺激因子、白细胞介素(包括但不限于白细胞介素-1、白细胞介素-2、白细胞介素-6、白细胞介素-12、白细胞介素-15、白细胞介素-18)、OX40，CD27、CD30、CD40或CD137配体，Fas-Fas配体、4-1BBL、内皮单核细胞活化蛋白；或者其任何片段、家族成员或衍生物，包括其药学上可接受的盐。
还在另一实施方案中，联合癌疫苗给予bcl-2反义寡聚体。癌疫苗的实例包括但不限于自体的细胞或组织、非自体的细胞或组织、癌胚抗原、甲胎蛋白、人绒毛膜促性腺激素、BCG活疫苗、黑素细胞谱系蛋白(例如gap100、MART-1/MelanA、TRP-1(gp75)、酪氨酸酶、广泛分享的肿瘤特异性抗原(例如BAGE、GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-3、N-乙酰葡糖胺基转移酶-V、p15)、突变的肿瘤特异性抗原(β-连环蛋白、MUM-1、CDK4)、非黑素瘤的抗原(例如HER-2/neu(乳腺癌和卵巢癌)、人乳头瘤病毒-E6、人乳头瘤病毒-E7(宫颈癌)、MUC-1(乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌))。至于由T细胞识别的人肿瘤抗原，通常参见Robbins和Kawakami，1996，Curr.Opin.Immunol.8628-36。癌疫苗可以是纯化的制剂，或者可以不是纯化的制剂。
而在另一个实施方案中，与激素治疗结合使用bcl-2反义寡聚体。激素治疗性治疗包括激素激动剂、激素拮抗剂(例如氟他胺、他莫昔芬、醋酸亮丙立德(LUPRON))以及类固醇(例如地塞米松、类视色素、倍他米松、皮质醇、可的松、泼尼松、去氢睾酮、糖皮质激素、盐皮质激素、雌激素、睾酮、孕酮)。
又在另一个实施方案中，与治疗癌症的基因治疗方案结合使用bcl-2反义寡聚体。
在一个实施方案中，于一个短治疗周期中，将bcl-2反义寡聚体与至少一种癌治疗剂联合给予癌症患者，以治疗癌症。在一个实施方案中，所述治疗周期从2天到13天。在另一个实施方案中，所述治疗周期从3天到9天。在再一个实施方案中，所述治疗周期从4天到7天。在再一个实施方案中，所述治疗周期从5天到6天。用癌治疗剂治疗的周期可根据所用的特定癌治疗剂而变化。本发明也考虑了不连续给药或分成几个部分给予的一日量。技术人员会知道特定的癌治疗剂的合适治疗时间，且本发明考虑了对于每种癌症治疗剂的最佳治疗方案的连续评估。
本发明设想在至少一个周期期间，优选在多于一个周期期间，给予单一的治疗剂或一系列治疗剂。在一个优选实施方案中，该周期少于14天。在一个实施方案中，一个周期长10-13天。在一个优选实施方案中，一个周期长7-9天。在最优选的一个实施方案中，一个周期长5-6天。技术人员会知道一个周期的合适时间，同样会知道总的周期数和周期之间的间隔。本发明考虑了连续评估每种bcl-2反义寡聚体与癌治疗剂的最佳治疗方案。
5.3药用组合物本发明另外供给包含bcl-2反义寡聚体及药学上可接受载体的药用组合物。合适的药学上可接受的载体包括基本上化学惰性的且无毒的、不干扰药用组合物生物活性之效力的组分。合适的药用载体的实例包括但不限于盐水溶液、甘油溶液、乙醇、N-(1(2，3-二油氧)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)、二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)以及脂质体。这样的组合物应该含有治疗有效量的所述化合物以及适量的载体，以便提供可供适当给予患者的形式。该制剂应该适合给药的方式。例如，口服给药需要肠溶衣来保护反义寡聚体，从而在胃肠道内免遭降解。在另一个实例中，可以以脂质体制剂的形式给予所述反义寡聚体，从而使反义寡聚体与降解酶隔离，促进循环系统中的转运，以及实现越过细胞膜而送递到细胞内位点。
在另一个实施方案中，药用组合物包括bcl-2反义寡聚体和一种或更多种治疗剂以及药学上可接受的载体。在一个特定的实施方案中，药用组合物包括bcl-2反义寡聚体和一种或更多种的癌治疗剂以及药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，有或没有其它治疗剂、包含bcl-2反义寡聚体以及药学上可接受载体的药用组合物，是按有效剂量的。
在一个实施方案中，所述药用组合物包括bcl-2反义寡聚体及药学上可接受的一种载体；该bcl-2反义寡聚体按大约0.01-0.1、0.1-1、1-5或6-10mg/g/天的剂量，优选按4-9mg/kg/天的剂量，更优选按5-7mg/Kg/天的剂量。所给予的任何特定反义寡聚体的实际量可随几个因素而定，例如癌的类型、反义寡聚体对机体正常细胞的毒性、反义寡聚体被肿瘤细胞吸收的吸收率以及给予反义寡聚体之个体的体重和年龄。因为体内存在许多可干扰反义寡聚体作用或生物活性的因素，所以，反义寡聚体的有效量可以因各个个体而变化。
在另一个实施方案中，本发明的药用组合物包含特别高剂量的bcl-2反义寡聚物体，所述高剂量大约从10mg/Kg/天到50mg/kg/天。在一个具体的实施方案中，于一个治疗周期期间，给予特别高剂量的bcl-2反义寡聚物体，所述高剂量即11-15、16-20、21-25、26-30、31-35、36-40、41-45或46-50mg/kg/天。
优选有效剂量的选择可以由技术人员基于几种本领域普通技术人员会知道的因素的考虑来确定(例如通过临床试验)。这样的因素包括反义寡聚体的特定形式，所述寡聚体的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等等；所述反义寡聚体的特定形式是在一般采用的开发过程期间、为了获得药用化合物的管理批准而确定的。在考虑剂量方面的另外因素包括所要治疗的疾病、患者体内要获得的益处、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径、反义寡聚体或联合治疗剂的给予是急性的还是慢性的、相伴的药物治疗、以及有技术人员已知的影响所给予药剂效力的其它因素。
可以将本发明的组合物配制成中性形式或盐形式。药学上可接受的盐包括与游离氨基形成的那些盐，例如由盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等等衍生的那些盐；以及与游离羧基形成的那些盐，例如由氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等等衍生的那些盐。
在一个优选实施方案中，按照常规步骤将组合物配制作为一种适合于皮下注射或静脉内给予人的药用组合物。用于皮下注射或静脉内给予的组合物一般是含水的无菌等渗缓冲溶液。必要时，所述组合物也可以包含增溶剂和局部麻醉药例如利多卡因，以减轻注射位点的疼痛。所述成分通常以单位剂型或者分开地、或者混合供应，例如以一种在熔封容器如安瓿或小药囊(sachette)中的、指出了活性剂量的冻干粉或无水浓缩物形式供应。在打算通过输注给予所述组合物的情况下，可以用含有药品级无菌水、无菌盐水或其它可接受无菌稀释剂的输液瓶、袋或其它可接受容器，来配制所述组合物。在通过注射给予所述组合物的情况下，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，以便在给药之前可混合所述成分。
5.4给药方式本发明药用组合物的给予包括但不限于口服、静脉内输注、皮下注射、肌内给予、局部给予、贮存(depo)注射、植入、定时释放方式、腔内给予、鼻内给予、吸入、肿瘤内给予、眼内给予、以及控释。也可以非肠道地、经粘膜(例如经口)、经鼻、经直肠、阴道内、舌下、粘膜下或透皮引入本发明的药用组合物。给药最好是非肠道的，即不通过消化道而是通过其它某些途径，例如通过静脉内、皮下、肌内、腹膜内、眼眶内、囊内、脊柱内、胸骨内、动脉内或真皮内给药。技术人员能意识到在选择给药方式方面将考虑的具体优点与缺点。本发明包括多种给药方式。例如，通过皮下注射给予bcl-2反义寡聚体，而通过静脉内输注给予一种联合治疗剂。此外，一种或多种bcl-2反义寡聚体与其它治疗剂或在没有其它治疗剂的情况下的给予可以同时进行(即共同时给予)或顺序进行。例如，首先给予bcl-2反义寡聚体，来增加肿瘤对随后给予的癌治疗剂或放射治疗的敏感性。在另一个实施方案中，给予一种或更多种bcl-2反义寡聚体以及给予或不给予其它治疗剂的给药时期可以重叠。例如，给予bcl-2反义寡聚体达7天，且在bcl-2反义寡聚体治疗的第五天开始加入第二种治疗剂；而用所述第二种治疗剂的治疗延续至7天的bcl-2反义寡聚体治疗之后。
可提供适合于口服给药的药用组合物，例如，以胶囊或片剂形式，以散剂或颗粒剂形式，以溶液、糖浆或混悬剂形式(用含水或非水液体)，以可食用的泡沫剂(foam)或气泡体(whips)形式，或者以乳剂形式来提供。片剂或硬明胶胶囊可包含例如乳糖、淀粉或其衍生物、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁、硬脂酸或其盐。软明胶胶囊可包含例如植物油、蜡、脂肪、半固体或液态多元醇等等。溶液和糖浆可包含例如水、多元醇和糖。
可以用一种在胃肠道中延迟活性剂分解或影响活性剂吸收的材料(例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯)来给准备用作口服给予的活性剂包衣，或者将准备用作口服给予的活性剂与该种材料混合。因此，例如可实现一种活性剂在许多小时内持续释放；且必要时，可保护该活性剂，使其在胃肠道内免于被降解。可利用沿着胃肠道的不同pH和酶的条件，配制用于口服给予的药用组合物，而便于活性剂在特定的胃肠位置释放。
适合于非肠道给予的药用组合物包括但不限于含水或非水的无菌注射溶液或混悬剂，所述溶液或混悬剂可包含抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂以及使所述组合物变得与预定接受者之血液大体上等渗的溶质。可以存在于这样组合物中的其它组份包括例如水、醇类、多元醇、甘油以及植物油。可以在单位剂量容器或多剂量容器，例如密封的安瓿或管形瓶中，提供适合于非肠道给予的组合物；且可以以冻干(冷冻干燥)状态贮藏适合于非肠道给予的组合物，所述组合物在临用之前需要添加液态的无菌载体，例如注射用的无菌盐水溶液。可以由无菌的散剂、颗粒剂或片剂制备临时的注射溶液和混悬剂。这样的组合物应该包含治疗有效量的bcl-2反义寡聚体或其它治疗剂以及适量的载体，以便提供适合于给予患者的形式。所述制剂应该适合给药的方式。
可以以分开的、计划与表皮保持紧密接触达延长的时期的贴剂形式，提供适合于经皮给予的药用组合物。可以以例如软膏、乳膏、混悬剂、洗剂、散剂、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂或油的形式，提供适合于局部给予的药用组合物。最好将局部用软膏或乳膏用于局部给予皮肤、口、眼睛或其它外部组织。如果以软膏的形式配制，则可以或者与软膏石蜡基质、或者与水可混合的软膏基质一起使用该活性成分。另一方面，可以用具有一种水包油基质或油包水基质的乳膏，来配制该活性成分。
适合于局部给予眼的药用组合物包括例如滴眼剂或注射用组合物。在这些组合物中，可以将活性成分溶解或悬浮于合适的载体中；所述载体包括例如一种有或没有羧甲基纤维素的含水溶剂。适合于口中局部给予的药用组合物包括例如锭剂、软锭剂以及漱口剂。
适合于鼻给药的药用组合物可包括固体载体例如粉末(最好是具有在20至500微米范围内的粒径)。可采用鼻吸药的方式，即靠从拿近鼻的容器经鼻快速吸入散剂，来给予散剂。另一方面，适合于鼻给药的组合物可包括液体载体例如鼻喷雾剂或滴鼻剂。这些组合物可包括所述活性成分的水溶液或油溶液。由吸入而给予的组合物可在特别配合的装置中供应，所述装置包括但不限于加压的气雾剂、喷雾器或吹入器；可以制造这样的装置，以便提供预定剂量的活性成分。
可以以栓剂或灌肠剂的形式，提供适合于直肠给予的药用组合物。可以例如以阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂的形式，提供适合于阴道给予的药用组合物。
在一个实施方案中，通过一个控释系统来送递本发明的药用组合物。例如，可采用静脉内输注、可植入的渗透泵、经皮贴剂、脂质体或其它给药方式，来给予药用组合物。在一个实施方案中，可使用一种泵(参见例如Langer，1990，Science 2491527-33；Sefton，1987，CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14201；Buchwald等，1980，Surgery 88507；Saudek等，1989，N.Engl.J.Med.321574)。在另一个实施方案中，可以用一种载体，特别是用一种脂质体，来送递该化合物(参见例如Langer，Science 2491527-33(1990)；Treat等，1989，载于Liposoms inthe Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein和Fidler(编辑)，Liss，New York，第353-65页；Lopez-Berestein，出处同上，第317-27页；WO 91/04014号国际专利公开说明书，第4,704,355号美国专利)。在另一个实施方案中，可使用聚合材料(参见例如MedicalApplications of Controlled Release，Langer和Wise(编辑)，CRC PressBoca Raton，Florida，1974；Controlled Drug Bioavailability，Drug ProductDesign and Performance，Smolen和Ball(编辑)，WileyNew York(1984)；Ranger和Peppas，1953，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2361；Levy等，1985，Science 228190；During等，1989，Ann.Nettrol.25351；Howard等，1989，J.Neurosurg.71105)。
在再一个实施方案中，可以将控释系统置于靶的附近。例如，微量泵可直接送递所控制的剂量到脑中，因此，仅需要全身剂量的一部分(参见例如Goodson，1984，载于Medical Applications of ControlledRelease，vol.2，第115-138页)。
在一个实施方案中，可能理想的是将本发明的药用组合物局部给予到需要治疗的区域；例如但不限于在外科手术期间通过局部输注、通过局部敷用(例如在外科手术后连同一种伤口敷料一起)、通过注射、用导管、用栓剂或通过植入，可实现这一步。植入物可以是一种多孔材料、非多孔材料或胶状材料，包括例如硅橡胶(sialastic)膜的膜或纤维。
栓剂通常包含在0.5％至10％(重量)范围内的活性成分。口服制剂最好含有10％至95％(重量)的活性成分。
可以在给予一种或更多种治疗剂之前、期间、和/或之后，给予bcl-2反义寡聚体。在一个实施方案中，可以首先给予bcl-2反义寡聚体以减少bcl-2的表达；这增加肿瘤对随后的用癌治疗剂攻击的敏感性。在另一个实施方案中，可以在给予癌治疗剂之后给予bcl-2反义寡聚体，以减少肿瘤的bcl-2表达；这能阻止肿瘤的抗性，且因此防止复发或防止对癌治疗剂的反应最小化。在再一个实施方案中，在给予bcl-2反义寡聚体和给予一种或更多种治疗剂之间，可以有一段重叠期。
本发明进一步提供包含联合一种癌治疗剂的有效量的bcl-2寡聚体的药用试剂盒，来防止或治疗bcl-2相关疾病。在一个实施方案中，可以将有效量的bcl-2寡聚体和药学上可接受的载体包装到单剂量的小瓶或其它容器中。在一个特定的实施方案中，所述bcl-2寡聚体包含G3139(SEQ.ID.NO.17)。所述试剂盒可包含填充有一种或更多种本发明药用组合物成分的一个或更多个容器。这样的容器可以任选地带有由管理药品或生物制品之制造、使用或销售的政府机构规定形式的简介，所述简介反映由制造、使用或销售的管理机构批准给予人类。
通过参考下面非限制性的实施例，可更好地理解本发明；所述实施例仅仅作为本发明的示范而被提供。提供下面的实施例以更充分地阐明本发明优选的实施方案。然而，决不应该把它们认作是限制范围更广的本发明。
6.实施例1BCL-2反义治疗使恶性黑素瘤化学致敏本实施例表明将bcl-2反义寡聚体成功地应用于治疗患有晚期恶性黑素瘤的患者。在这项研究中，联合一种化疗剂，将所述寡聚体按5.3mg/kg/天或6.5mg/kg/天系统性地给予用bcl-2反义寡聚体治疗的六位患者达7天。在这个实施例中报道的研究结果表明如果以高剂量给予bcl-2反义寡聚体达短的时期，则该治疗显示出按通常的毒性标准评价的低毒性，减少肿瘤内的Bcl-2，促进细胞凋亡，且导致目标瘤响应以及患者的生存延长。在有反应的患者之中，包括几位患有“治疗抗性癌”的患者，他们在用标准抗癌剂治疗期间经历了进行性的疾病；在所述标准抗癌剂治疗中，用标准药剂例如单独使用的达卡巴嗪，会得到极小的好处或得不到预期的益处。比较起来，用bcl-2反义寡聚体和达卡巴嗪的联合治疗导致意想不到的持久反应和延长的生存。此外，在5位患者使用较高剂量达较短时期的一个随访研究中，当按7mg/kg/天系统性地给予bcl-2反义寡聚体达5天时，则显示了令人满意的耐受性。因此，所述结果表明以高剂量给予bcl-2反义寡聚体达一个短的时期是一种安全而有效的治疗黑素瘤的疗法。在这项研究中概述的方法，则提供了一个可广泛适用的治疗其它类型癌症的策略。
6.1.材料与方法对于这种I/II期的剂量逐步升级研究，患有IV期转移性黑素瘤的十四位患者，如果他们有可测量的病，且如果皮肤转移瘤便于活组织检查以及根据蛋白质印迹分析BCL-2表达最初是阳性的(表1)，则是合格的。要求患者有正常的肾功能、肝功能以及造血功能，且在进入这项研究之前的四周，没有进行化学治疗或免疫治疗。
以连续静脉输注(CIV)的形式，靠一台非卧床式输注泵(Sims DeltecInc.，St.Paul，MN，USA)，通过中央静脉导管，给予BCL-2反义寡聚体(序列5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′)达14天。在14天BCL-2反义寡聚体治疗的第5天直至第9天，用一条单独的外周静脉导管，按用1小时输注而给予的200mg/m2/天的剂量，给予DTIC达5天。每月一次重复治疗周期。按0.6mg/kg/天，开始剂量的逐步升级；且以1.3、1.7、2.1、3.1、4.1、5.3和6.5mg/kg/天的BCL-2反义寡聚体(ASO)继续。一旦在至少3位患者的人群中确定了在一种给定剂量水平的安全性，则使新的患者群按下一个更高的剂量水平进入研究(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)。重复28天的周期，并在两周的观察期之后，在稳定的或有反应的患者中，允许患者体内剂量的逐步升级。
为了用可替换的途径与方案获得临床经验，以5.3mg/kg/天或6.5mg/kg/天治疗的人群中的六位患者，接受了其第一个通过静脉内输注的周期；然后，使给药方式转变成后来周期中的皮下(SC)给予BCL-2反义寡聚体。这些通过SC途径治疗的患者在第1天一直到第7天接受了通过每日两次SC注射给予的、同样的总一日量；且在第5天，以一小时输注形式联合给予DTIC 800mg/m2。
在每个治疗周期之后，用患有皮肤转移瘤患者的卡尺测量结果和详细的相片记录，来评定抗肿瘤效应；且确证内脏转移瘤，并继之以计算机体层摄影术扫描。使用WHO的标准来进行肿瘤反应的分类，且要求持续至少4周的一系列记录。将完全反应定义为可检测转移瘤的消失。将部分反应定义为可测量转移瘤的50％或更多的减小。在患者于一个器官中显示出数目众多的转移瘤的情况下情况下，记录基线时5个靶病灶的最大值，然后测量反应。可测量疾病超过25％的增强、或者新的转移性病灶出现，被定义为进行性疾病。另外，靶病灶直径消退不足50％但超过25％的情况称为较小反应。所有其它的情况定义为稳定性疾病。从该方案首次治疗时开始，评价存活情况。
毒性以通常的毒性标准来评分，并且在给药期间每日监测，然后在各周期之间每周进行监测。在治疗周期之间的2周内不能消除的任何治疗相关的III级或IV级毒性被认为是剂量限制性毒性。在治疗之前0时，然后在第2、3、5、6、10和14天，在接受2周静脉输注BCL-2ASO的患者中收集血浆样品，以测量BCL-2反义寡聚体的药代动力学；在腹部通过皮下大剂量注射接受BCL-2反义寡聚体的患者中测量BCL-2反义寡聚体的12小时药代动力学分布图。由Pharmanalyt(Baden，Austria)，用HPLC(Chen等，1997，J.Chromatogr.B.Biomed.Sci.Appl.69243-51)分析BCL-2反义寡聚体的血浆水平。
分别采用蛋白质印迹法和TUNEL法(Jansen等，1998，Nat.Med.4(2)232-4)，评价BCL-2的表达和黑素瘤转移瘤的凋亡速率。由于有技术限制，与基线水平相比低于20％的BCL-2降低不被认为是显著性的。与测量反应所用的靶病灶相似，根据大小、位置和临床特征来选择活检的肿瘤。在基线时和在给予DTIC之前的每个BCL-2反义寡聚体剂量水平的第5天，进行皮肤黑素瘤转移瘤的切除活组织检查；获得直到周期的第14天的另外的活检样品，以便提供关于联合的BCL-2反义寡聚体和DTIC治疗的效应的资料。已经调查了每个剂量水平的每位患者的总共2-4个肿瘤活检样品。根据常规组织病理学评估蛋白质印迹和TUNEL分析所用的肿瘤活检样品的部分，以确保一致的肿瘤细胞含量以及限制活检样品中非肿瘤细胞的混淆不清的效应。
6.2结果按照以上概述的两种治疗方案(I.V.或S.C.)，用BCL-2反义寡聚体(0.6-6.5mg/kg/天)与DTIC联合治疗了总共14位患者。
在连续静脉输注1天后，观测到BCL-2反义寡聚体的稳态血浆水平，并且该水平随给予的剂量呈线性增加。BCL-2反义寡聚体剂量＞1.7mg/kg/天，导致一致的超过1μg/μl的稳态血浆水平，这是用动物模型所确定的有生物活性的血浆水平(Raynaud等，1997，J.Pharmacol.Exp.Ther.281420-7)。按6.5mg/kg/天，24小时达到6.47μg/ml+/-SD＝2.51μg/ml的平均稳态血浆水平。每日两次SC大剂量注射给予的BCL-2反义寡聚体的血浆水平在12小时期间为钟形。以12小时的间隔，给予的在SC注射3.25mg/kg剂量后3-4小时，观测到8.6μg/ml+/-SD＝1.26μg/ml的峰浓度。在各次皮下注射之间的12小时期间中的90％以上的时间内，血浆水平超过与生物活性相关的1mg/ml的目标血浆水平。在接受多个治疗周期的患者中，在药代动力学特征方面没有观测到变化；同时进行的DTIC治疗并不影响BCL-2反义寡聚体的稳态血浆水平。
在所有经筛选进行该项研究的14位患者中，通过蛋白质印迹分析证实了在基线时皮肤黑素瘤转移瘤的BCL-2蛋白质表达(Selzer等，1998，8(3)197-203；Cerroni等，1995，Am.J.Dermatopathol.177-11)；配对病灶的系列活组织检查证明在给予BCL-2反义寡聚体期间BCL-2蛋白水平降低(表1)。在10号患者中，系列肿瘤样本由于在活检组织中没有黑素瘤细胞，而不能用蛋白质印迹法评价。通过14天连续输注BCL-2反义寡聚体治疗的患者中，通常截至第5天观察到BCL-2蛋白有最大降低，在第14天时并没有进一步的降低。BCL-2反义寡聚体血浆浓度超过1μg/ml的可评价患者中有83％的患者(12位患者中的10位)表现出BCL-2表达的明显降低(表1)。采用BCL-2反义寡聚体剂量＞1.7mg/kg/天的治疗周期，显示出截至第5天BCL-2蛋白平均减少40％。
通过TUNEL染色观测到在用BCL-2反义寡聚体治疗5天后在肿瘤样本中凋亡细胞增加(从基线的0.85％，+/-SD＝047％；增加至3.17％，+/-SD＝1.16％)(图2B)。然而，在加入凋亡刺激物(DTIC)后所取的活检样品中，可以观察到凋亡性细胞死亡的额外的急剧增加(图2C，19,4％+/-SD＝4,2％)。BCL-2反义寡聚体和DTIC的联合治疗直至6.5mg/kg/天(并包括该剂量)的BCL-2反义寡聚体被很好地耐受，并且无剂量限制性毒性(表2)。
血液学异常是轻度或中度的(I-III级，表2)，并且遵循单一药物DTIC典型的在各治疗周期之间最低值的模式。没有一个患者经历了发热性中性白细胞减少或者其它主要的临床血液学毒性。在该项研究期间，在两位患者中观察到需要输血的II-III级贫血，但在这两位患者中在基线时就有贫血，可能是由先前的治疗引起的。通常观察到II-III级淋巴细胞减少，但没有临床后遗症例如罕见的病毒或真菌感染、或者免疫抑制的其它临床证据，尽管在某些患者中重复周期持续一年以上。在3位患者中观察到一过性II-III级部分促凝血酶原激酶时间延长，但无临床出血。
在表2的下部列出了非血液学副作用。超过4.1mg/kg/天的BCL-2反义寡聚体剂量与大多数患者中的一过性发热相关。这种发热通常在治疗的第2-3天达到38℃，并且或者自发消退，或者通过给予对乙酰氨基酚和继续给予反义寡聚体后消退。在范围为4.1-6.5mg/kg/天的剂量水平下，在4位患者中观察到一过性II-III级转氨酶和/或胆红素升高；然而，并没有在所有患者中确立与BCL-2反义寡聚体有因果关系，因为2位患者分别患有肝炎和酒精中毒，在DTIC以后观察到一过性肝功能异常，DTIC也可能引起这类实验室变化。肝功能异常通常在治疗周期之间的1周内消除，且不认为是临床显著性的或剂量限制性的。皮肤病学副作用包括一过性皮疹和荨麻疹，除一位患者经历II级一过性荨麻疹之外，都为I级；这些皮肤病学反应是对抗组胺药的反应，并不妨碍后续的治疗。没有观察到累积性毒性。某些患者治疗多达10个治疗周期，却不需要修改计划的治疗方案。
虽然毒性是这种剂量逐步升级试验的主要终点，但在14位IV期黑素瘤患者中的6位患者(43％，表1)中明显有抗肿瘤活性，包括在系统性黑素瘤疗法治疗失败后登记进入本项研究的12位患者中观察到的反应。观察到持续1年以上延长的病情稳定的1位完全反应(CR)患者、2位部分反应(PR)患者和2位较小反应(MR)患者(表1)。在进入研究之前明显发展的另外2位病情稳定的患者中，观察到临床抗肿瘤活性。12号患者在骨盆淋巴结和先前的皮肤移植部位中有测量基线水平超过5cm的大转移瘤疾病，该患者在2个周期后表现出快速的反应，而在4个周期后表现出完全反应(表1，图3)。在4个治疗周期后，先前为肿瘤阳性的皮肤区域的活检样品，仅显示出纤维化，而无黑素瘤(病理学完全反应)。2号和3号患者表现出靶病灶的部分反应，并且无发展，存活超过1年。在进入该项研究时，2号和3号患者有进行性转移瘤，尽管先前用卡铂加上干扰素治疗(2号患者)以及用DTIC加上IL-2治疗(3号患者)。5号和9号患者进入该项研究时都有进行性转移性疾病，尽管用DTIC+干扰素或仅用干扰素进行过系统治疗，在BCL-2反义物加上DTIC治疗后产生较小反应。估计的平均存活时间在所有患者中都超过至少1年。
6.3结论该报告证明了在癌症患者中用反义药物与化疗联合治疗的安全性和可行性。BCL-2反义寡聚体治疗被很好地耐受，所述治疗降低了肿瘤内的靶蛋白，促进了细胞凋亡并且在其它疗法治疗失败后进入该项研究的患者中也导致客体肿瘤反应以及延长存活时间(表1)。
本项研究的主要目的是确定与DTIC治疗联合的BCL-2反义寡聚体的毒性。关于非血液学副作用(表2)，直至3.1mg/kg/天(并且包括该剂量水平)的BCL-2反义寡聚体剂量水平，在这项研究中注意到没有除单一药物DTIC治疗所报告的副作用之外的副作用。使用与DTIC联合的4.1mg/kg/天和4.1mg/kg/天以上的BCL-2反义寡聚体剂量，观察到一过性转氨酶和/或胆红素II-III级升高(表2)。在该项研究中，肝功能异常不是剂量限制性的，也与不良的临床后遗症无关。在5.3mg/kg的BCL-2反义寡聚体一日量和高于此剂量时，则注意到αPTT的非剂量限制性变化。
淋巴细胞减少也是在该项研究中观察到的最为常见的血液学副作用。淋巴细胞减少没有临床显著性，并且在用循环疗法治疗并且随访超过1年的患者中没有罕见的感染。相反，用多种硫代磷酸酯反义药物则观察到一定水平的血小板减少，并且这种毒性在NHL患者的BCL-2反义寡聚体的研究中是剂量限制性的(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)。虽然该项研究将BCL-2反义寡聚体与化疗联合，导致在DTIC以后一过性骨髓抑制，并且稳态血浆浓度平超过了在所述NHL研究中所报告的浓度，但我们也没有观察到剂量限制性血小板减少。总之，在这一患者群体中，在DTIC和BCL-2反义寡聚体之间既没有观察到重叠的剂量限制性毒性，也没有观察到累积的剂量限制性毒性。
我们的数据表明，用约2mg/kg/天的BCL-2反义寡聚体剂量可以容易地达到生物相关稳态血浆水平(＞1μg/ml)，并且尚未达到与DTIC化疗联合的最大耐受剂量。
在最近对该项试验所调查的治疗方案的随访中，在每个21天的周期中，在给予1000mg/m2DTIC之前，给予扩大的人群(5位患者)通过输注(7mg/kg/天)5天静脉内给予的BCL-2反义寡聚体，而表现出令人满意的耐受性。
因此，所述结果表明，BCL-2反义寡聚体可以安全地与抗肿瘤药联合给予，以治疗临床环境中的癌症。所述结果不同于先前公开的仅通过连续皮下输注给予14天输液而显示出生物活性和临床反应的数据(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)，因为本文所述的结果表明，多种途径(静脉输注、多次每日皮下注射)和5-7天的较短给药方案也可以产生G3139的生物活性和临床反应。在有反应的患者中，在2-3个周期内很快观察到初始抗肿瘤活性。大多数的患者在含DTIC方案治疗失败后或在转移性黑素瘤的其它标准治疗之后，进入该项研究并患有进行性转移性疾病。然而，在14位患者中的6位患者(43％)中观察到抗肿瘤反应，并且在另外2位患者中观察到病情稳定。估计的所有患者的平均存活时间超过12个月。这些初步结果与在一线系统性疗法治疗失败后在晚期黑素瘤患者中观察到的可忽略的反应率和约4-5个月的平均存活时间相比是有利的。
表1研究一览表
CP＝卡铂；CIS＝顺铂；FOT＝福莫司汀；HEP＝热肢灌注(hyperthermic extremity perfusion)；IFN-α＝干扰素-α；NA＝不可应用；RT＝放射治疗。已经给予了总共47个周期的BCL-2 ASO加上DTIC。*在最初静脉内治疗周期后也接受皮下给予的5.3mg/kg/天和6.5mg/kg/天剂量的BCL-2 ASO的患者。+观察期仍继续。表2治疗期间的副作用
列出了与BCL-2 ASO治疗无因果关系的事项。
7.实施例2在激素难治性前列腺癌患者中的G3139(bcl-2反义寡核苷酸)和多西他赛的I期药代动力学和生物学相关性研究。
本实施例证明了成功应用bcl-2反义寡聚体来治疗抗雄激素去除疗法(androgen ablation therapy)和细胞毒性化疗的激素难治性前列腺癌患者。联合化疗剂以5-7mg/kg/天系统性给予bcl-2反义寡聚体达5天。本项研究报告了用bcl-2反义寡聚体和化疗剂治疗的2位患者表现出对所述治疗的反应。在本实施例中报告的研究结果表明，当以高剂量短时期给予bcl-2反义寡聚体时，所述治疗表现出低毒性，同时表现出客体的临床反应。在本项研究中概述的方法为治疗其它类型癌症提供了广泛适用的策略。
7.1. 材料和方法在本项研究中，每个周期在治疗周期的第1-6天，以连续静脉输注给予5天G3139，然后在第6天静脉内给予多西他赛。每21天重复所述过程。11位激素难治性前列腺癌患者接受范围为5mg/kg/天G3139与60mg/m2多西他赛至7mg/kg/天G3139继之以75mg/m2多西他赛的三种剂量水平的治疗。
7.2. 结果主要的毒性与单独的多西他赛的毒性类似。1位严重的先前治疗过的患者有延长的(＞5天)非并发性的4级中性白细胞减少。其它毒性包括3位患者的1级口炎和1位患者在第2个疗程期间的发热性中性白细胞减少。初步药代动力学结果(HPLC)显示出5mg/kg/天剂量水平下的3.09μg/mL的平均G3139稳态血浆浓度。初步流式细胞术和蛋白质印迹分析表明，在多西他赛治疗前，截至第6天在外周血单核细胞中Bcl-2蛋白的减量调节超过50％。在3位首次接触taxane的可评估患者中的2位中，观察到前列腺特异性抗原和症状反应，包括前列腺特异性抗原降低至九分之一，这种降低可持续超过数个周期。
7.3. 结论G3139可以安全地与多西他赛联合给予，这些结果证实，所述组合在癌症治疗方面有显著的治疗效应。所述结果不同于先前公开的仅通过连续皮下输注给予14天输液而显示出生物活性和临床反应的数据(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)，因为本文所述的结果表明通过一种替代途径(静脉内)在给定的较短期的给药方案(5天)，也可以产生G3139的生物活性和临床反应。G3139治疗在给药5天内有生物活性，表现为外周血单核细胞中Bcl-2蛋白的有效减量调节，并且在激素难治性前列腺癌患者中有令人鼓舞的初步抗肿瘤活性。
8.实施例3bcl-2反义物GENASENSETM(G3139)在顽固性或复发性急性白血病中的I期试验。
本实施例证明了成功应用bcl-2反义寡聚体来治疗急性白血病患者。联合两种化疗剂以4mg/kg/天系统性地给予bcl-2反义寡聚体达10天。本项研究报告了用bcl-2反义寡聚体和一种化疗剂治疗的10位患者中的5位表现出对所述治疗的反应。此外，在给予了剂量低于治疗白血病或其它癌症常用标准剂量的氟达拉滨和阿糖胞苷的患者中，也观察到反应。在本实施例中所报告的研究结果表明，当短时期给予bcl-2反义寡聚体时，可以获得客体的临床反应。
8.1. 材料和方法在治疗周期的第1-10天，给予患者(总共10位患者)G3139(4mg/kg/天)，而在治疗周期的第6-10天给予氟达拉滨(以较低的剂量15mg/m2开始)、阿糖胞苷(Ara-C)(以降低的剂量1000mg/m2开始)和G-CSF(FLAG)，并且在接连的多个人群中使剂量逐步升级。正常的FLAG联合方案包括剂量两倍于本项研究中所用剂量的氟达拉滨和Ara-C。
1(m)，从CR起的月数；2高剂量Ara-C；3(d)，从G3139开始的天数；4NA，不适用；5CR，完全反应；6PR，部分反应；7NR，无反应；8NED，无疾病迹象；REF，顽固性；REL，复发性。
8.2. 结果治疗相关的发热、恶心、呕吐、血钙过少、血磷酸盐过少和体液潴留不是剂量限制性的。血液学毒性正如所预期的。在24小时后达到超过相关目标浓度(1μg/ml)的稳态G3139血浆浓度。3位患者达到完全反应，并且接受第二个疗程；2位患者第53天和第111天持续无疾病迹象。2位患者无疾病迹象，但在第53天和第111天持续中性白细胞减少/血小板减少；其中1位患者持续完全反应，在第76天时无疾病迹象。5位有效者中有3位先前用高剂量Ara-C治疗过，因此确证对本项研究中所述的另一个Ara-C联合程序(尤其是用低于先前治疗方案中所用剂量的剂量)有较大的反应，这是出乎意料的。
8.3. 结论所述结果表明，G3139加入至急性白血病的多周期诱导方案中是可行的，这在本项研究中显示出有效率为50％，包括患有顽固性急性白血病并且先前用高剂量Ara-C治疗过的患者。采用低于正常的剂量水平的氟达拉滨和Ara-C，当将其与bcl-2反义物方案联合时，也观察到较大的反应。
本文所引证的所有参考文献都通过引用具体结合到本文中，如同在本文中全面叙述一样。
在上文公开了本发明的示例性实施方案，本领域技术人员会认识到，这种公开仅仅是示例性的，因此各种替代方案、改变和修改都在本发明的范围内，并且本申请人考虑了这些替代方案、改变和修改。因此，本发明不限于上述的具体实施方案，而是由以下的权利要求书来限定。
序列表<110> Warrell，RaymondKlem，RobertFingert，Howard<120> 运用BCL-2反义寡聚体治疗BCL-2疾病的方法<130> 10412-003-228<140> 待定<141> 2001-08-24<150> 09/709，170<151> 2000-11-10<150> 60/237，009<151> 2000-09-29<160> 29<170> PatentIn vetsion 3.0<210> 1<211> 20<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 1cagcgtgcgc catccttccc20<210> 2<211> 35<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 2cttttcctctt gggaaggatg gcgcacgctg ggaga 35<210> 3<211> 20<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 3gatgcaccta cccagcctcc 20<210> 4<211> 33<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 4acggggtacg gaggctgggt aggtgcatct ggt 33<210> 5<211> 20<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 5acaaaggcat cctgcagttg 20<210> 6<211> 36<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 6cccccaactg caggatgcct ttgtggaact gtacgg 36<210> 7<211> 20<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 7gggaaggatg gcgcacgctg 20<210> 8<211> 17<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 8cgcgtgcgac cctcttg17<210> 9<211> 17<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 9taccgcgtgc gaccctc17<210> 10<211> 17<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 10tcctaccgcg tgcgacc 17<210> 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权利要求
1.一种在人类中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括在一个或更多个治疗周期中，以0.01-50mg/kg/天的剂量，将bcl-2反义寡核苷酸给予需要这样的治疗或预防的所述之人达一段由2至13天构成的时期。
2.权利要求1的方法，其中给予所述bcl-2反义寡核苷酸达一段由3至9天构成的时期。
3.权利要求1的方法，其中给予所述bcl-2反义寡核苷酸达一段由4至7天构成的时期。
4.权利要求1-3中的任一项的方法，所述方法包括给予4-9mg/kg/天的bcl-2反义寡核苷酸。
5.权利要求1-3中的任一项的方法，所述方法包括给予5-7mg/kg/天的bcl-2反义寡核苷酸。
6.权利要求1的方法，所述方法包括另外给予一种或更多种的癌症治疗剂。
7.权利要求6的方法，其中在给予bcl-2反义寡核苷酸之后给予所述癌症治疗剂。
8.权利要求6的方法，其中在给予bcl-2反义寡核苷酸之前给予癌症治疗剂。
9.权利要求6的方法，其中与所述bcl-2反义寡核苷酸同时给予所述癌症治疗剂。
10.权利要求6的方法，其中所述癌症治疗剂为一种化疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂、癌疫苗、抗生成血管剂、细胞因子、基因治疗剂或激素类药。
11.权利要求10的方法，其中所述癌症治疗剂为一种化疗剂；且其中所述化疗剂为达卡巴嗪、多西他赛、紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、环磷酰胺、氟达拉滨、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)。
12.权利要求6或权利要求10的方法，其中以减少的剂量给予所述的癌症治疗剂。
13.权利要求1-3或6的任一项的方法，其中所述给予是通过口服、静脉内输注、皮下注射、肌内注射、局部、贮存(depo)注射、植入、定时释放方式、腔内、鼻内、吸入、肿瘤内或眼内的给予。
14.权利要求1-3或6的任一项的方法，其中所述癌症是造血系统癌、皮肤癌、骨与软组织癌、生殖系统癌、生殖泌尿系统癌、乳腺癌、内分泌系统癌、脑癌、中枢神经系统癌、周围神经系统癌、肾癌、肺癌、呼吸系统癌、胸部癌症、胃肠和消化道癌、淋巴结癌、胰腺癌、肝胆管系统癌或不知原发部位的癌。
15.权利要求1-3或6的任一项的方法，其中所述癌症是非霍奇金(Hodgkin′s)淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、膀胱癌、黑素瘤、头颈癌或脑癌。
16.权利要求1-3或6的任一项的方法，其中所述反义寡核苷酸有10至35个碱基，且互补于编码所述bcl-2基因的前mRNA或mRNA。
17.权利要求16的方法，其中所述反义寡核苷酸包含至少两个硫代磷酸酯键。
18.权利要求17的方法，其中该反义寡核苷酸包含序列TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQ.ID.NO.17)。
19.一种在人类中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括在一个或更多个治疗周期中，将一种或更多种化疗剂和剂量0.01-50mg/kg/天的bcl-2反义寡核苷酸给予需要这样的治疗或预防的所述之人，其中所述的化疗剂为达卡巴嗪、多西他赛、紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、环磷酰胺、氟达拉滨、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)，且其中以减少的剂量给予所述化疗剂。
20.权利要求19的方法，其中所述癌症治疗剂为紫杉醇，且所述剂量是10-135mg/m2/周期。
21.权利要求19的方法，其中所述癌症治疗剂为多西他赛，且所述剂量是6-60mg/m2/周期。
22.权利要求19的方法，其中所述癌症治疗剂为氟达拉滨，且所述剂量是2.5-25mg/m2/周期。
23.权利要求19的方法，其中所述癌症治疗剂为伊立替康，且所述剂量是5-50mg/m2/周期。
24.一种药用组合物，所述组合物包含0.01-50mg/kg/天之剂量的bcl-2反义寡核苷酸以及一种药学上可接受的载体。
25.一种药用组合物，所述组合物包含10-50mg/kg/天之剂量的bcl-2反义寡核苷酸以及一种药学上可接受的载体。
26.权利要求24或权利要求25的药用组合物，其中所述反义寡核苷酸有10至35个碱基，且互补于编码所述bcl-2基因的前mRNA或mRNA。
27.权利要求26的药用组合物，其中所述反义寡核苷酸包含至少两个硫代磷酸酯键。
28.权利要求27的药用组合物，其中该反义寡核苷酸包含序列TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQ.ID.NO.17)。
29.一种药用组合物，所述组合物包括与减少了剂量的癌症治疗剂联合的、0.01-50mg/kg/天之剂量的bcl-2反义寡核苷酸以及一种药学上可接受的载体；其中所述癌症治疗剂是达卡巴嗪、多西他赛、紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、环磷酰胺、氟达拉滨、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)。
30.一种药用组合物，所述组合物包括与减少了剂量的癌症治疗剂联合的、10-50mg/kg/天之剂量的bel-2反义寡核苷酸以及一种药学上可接受的载体；其中所述治疗剂是达卡巴嗪、多西他赛、紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、环磷酰胺、氟达拉滨、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)。
31.权利要求29或权利要求30的药用组合物，其中所述反义寡核苷酸有10至35个碱基，且互补于编码所述bcl-2基因的前mRNA或mRNA。
32.权利要求31的药用组合物，其中所述反义寡核苷酸包含至少两个硫代磷酸酯键。
33.权利要求32的药用组合物，其中该反义寡核苷酸包含序列TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQ.ID.NO.17)。
全文摘要
本发明涉及使用bcl－2反义寡聚体来治疗和预防bcl－2相关疾病。这些疾病包括恶性肿瘤、肿瘤、癌以及细胞增生性疾病。在本发明的一个实施方案中，以高剂量给予bcl－2反义寡聚体。本发明也涉及预防或治疗bcl－2相关疾病的方法，尤其是预防或治疗癌症的方法；所述方法包括短时期地给予bcl－2反义寡聚体。此外，本发明涉及使用bcl－2反义寡聚体来增加受治疗者对癌症治疗剂的敏感性。本发明也涉及包含一种或更多种bcl－2反义寡聚体的药用组合物，所述药用组合物可包含一种或更多种的癌症治疗剂。
文档编号A61K31/337GK1471408SQ01817710
公开日2004年1月28日 申请日期2001年8月23日 优先权日2000年8月25日
发明者R·P·小瓦雷尔, R·E·克勒姆, H·芬格尔特, R P 小瓦雷尔, 克勒姆, 穸 申请人:真塔公司