专利名称：单味竹节参制剂及其总皂苷制备方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂，具体是涉及一种单味竹节参制剂及其总皂苷制备方法。
竹节参为五加科植物竹节参Panax japonicus C.A.May的干燥根茎，具有滋补强壮、散瘀止痛、止血祛痰等功效，现代药理研究证明其总皂苷(下称“J原料”)具有1、抗缺血，抗缺氧作用[6]J原料可明显延长缺血、缺氧状态下小鼠的存活时间，有显著的耐缺血、缺氧作用。还可明显降低脑梗塞率、脑指数、脑含水量。
2、抗氧化作用[3]J原料可显著提高SOD活性，降低MDA含量，降低NOS活性，有较强的清除O2-和OH-作用。
3、扩张冠脉，降低心肌耗氧量[2]J原料可显著减慢麻醉犬心率，降低外周阻力及血压，增加冠状静脉窦流量，升高血浆cAMP，降低cGMP。
4、抗血栓作用J原料可抑制血小板聚集，抑制血栓的形成，减少血栓的湿重和干重。
鉴于脑梗塞是脑血管疾病中的常见病、多发病，约占脑血管病的75％，有一定的病死率，80％的存活者留有程度不等的功能障碍，约40％重度致残。随着我国人口的逐步老龄化，其发病率还会不断上升，病死率和病残率已跃居诸病之首。虽然随着现代中西医学的发展，其诊断与抢救水平有了较明显的提高，但其治愈率，仍然均不满意。因此要特别重视超早期及急性期的治疗，尽早恢复缺血区的血液供应，改善微循环，阻断脑梗死的病理过程，据此开发有效中药制剂，进一步提高疗效。
根据脑血管病的临床表现，一般均认为属于中医学“中风”病的范围，当前按其出血、缺血的不同，分别称之为出血性中风与缺血性中风，后者即系指脑梗塞等而言。中医对中风的病因病机，历代论述颇多，但其病理基础，不外风、火、痰、瘀、虚诸端，对缺血性中风特别强调“血瘀”是其病理特点，在应用活血化瘀法治疗脑梗塞方面，积累了许多经验，这与现代溶栓、抗凝、降低血粘和血小板聚集等颇多相通之处。但尤应重视审症求因，针对血瘀之源，根据病性虚实，辨别“气虚血瘀”、“阴虚风动”、“风痰瘀阻”、“痰热腑实”等不同类型，分症治疗。
早在清·王清任《医林改错》就力倡“气虚血瘀”是中风半身不遂的主要病机病证，并创补阳还五汤名方，成为后人治疗的圭臬，但就中医辨证而言，既可因虚致瘀，亦可见热郁血瘀，血气上逆，瘀阻脑络之实证，治疗又当凉血清热，化瘀通络。临证表明这类“络热血瘀”、“风痰瘀阻”之证，既可见于急性期，亦可发生在恢复期以至后遗症期，从而补充了单一强调益气祛瘀治法的不足，并为本制剂的研制提供了理论基础。
然而目前有关竹节参的研究报道并无其总皂苷提取的详细研究，也没有用其治疗醒脑血管疾病的制剂，故本发明提供了一种单味竹节参制剂及其总皂苷制备方法。
本发明的初步药理药效研究如下1.对急性实验性全脑缺血小鼠的保护作用①取ICR小鼠80只，雌雄兼备，随机分为4组，即生理盐水组1、J原料(po)I(15mg/kg)、J原料(po)II(30mg/kg)、J原料(po)III(60mg/kg)3个剂量组共4组；J原料(po)各组均通过口服给药，给药容积为20ml/kg。口服给药30min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间。结果显示J原料在30mg/kg口服时，与生理盐水组比，即能显著延长急性实验性全脑缺血小鼠的存活时间。见表1。
表1 J原料口服对急性实验性小鼠全脑缺血作用(X±SD)剂量动物数 呼吸维持时间组别(mg/kg) (只) (分钟)生理盐水组 -11 1.89±0.70J原料I(po) 15 11 2.18±0.45J原料II(po) 30 11 3.88±1.41*J原料III(po)60 11 4.66±1.94*与模型组比较*P＜0.05②取ICR小鼠100只，雌雄兼备，随机分为5组，即模型组(给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(尼膜同溶液2mg/kg)、J原料(iv)I(0.75mg/kg)、II(1.5mg/kg)、III(3.0mg/kg)3个剂量组共5组；各组均通过尾静脉给药，给药容积为10ml/kg。静脉给药10min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间。
结果显示，J原料静脉注射各剂量组均能延长急性脑缺血的小鼠存活时间，与模型组比较，差异显著(P＜0.05、P＜0.01)。结果见表2。
表2 J原料静脉注射对小鼠急性脑缺血的保护作用(X±SD)剂量动物数 呼吸维持时间组别(mg/kg) (只) (分钟)模 型 组-20 2.94±0.91尼膜同组220 7.08±3.72**J原料(iv)I 240 20 4.63±3.22*J原料(iv)II 480 20 6.84±3.89料J原料(iv)III960 20 8.71±5.55**与模型组比较*P＜0.05，料P＜0.012.对大鼠动静脉旁路血栓重量及抑制率的影响SD雄性大鼠50只，体重250～350g，随机分为5组，即模型组(给予等容积生理盐水)、阳性药物组(8g/kg的复方丹参注射液)、J原料(iv)I(0.75mg/kg)、II(1.5mg/kg)、III(3.0mg/kg)3个剂量组，给药容积为10ml/kg。以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，仰位固定，分离右颈总动脉及左颈外静脉。取3段聚乙烯管，其中两段管内径为1mm，长约6cm，中间段内径为2mm，长约6.5cm。在三段管的中段放入一根长约5cm的4号手术线。用充满肝素生理盐水(50u/ml)的聚乙烯管的一端插入左颈外静脉，在将聚乙烯管的另一端插入右颈总动脉，给药后30min开放血流，15min后中断血流，迅速取出丝线称重，血栓湿重为总重量减去丝线重。再将血栓充分干燥(60℃，24h)，称重。按下列公式计算血栓抑制率，并采用组间t检验法与模型组进行显著性测定比较
结果显示，J原料(iv)3.0mg/kg对大鼠动静脉短路血栓的湿重具有明显的降低作用，与模型组比较，差异显著(p＜0.05)；J原料(iv)3.0mg/kg剂量组、1.5mg/kg剂量组血栓干重均明显低于模型组，差异显著(p＜0.05、p＜0.01)，干、湿重抑制率亦明显增高。结果见表3。
表3 J原料(iv)对大鼠动静脉血栓干、湿重及抑制率的影响(n＝10，X±s)剂量 血栓湿重湿重抑制率血栓干重 干重抑制率组别(mg/kg) (mg) (％) (mg) (％)生理盐水组 -- 34.41±28.72 --4.66±1.13 --复方丹参组 8g/kg 9.51±4.38* 72.36 1.18±0.54**74.68J原料(iv)I 0.7521.31±8.78 38.07 3.59±1.27 22.96J原料(iv)II 1.5 18.17±7.72 47.20 3.27±1.44* 29.83J原料*(iv)III3.0 14.68±5.14*57.34 2.79±0.92**40.13与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
结果表明J原料口服与静脉注射能显著延长急性实验性全脑缺血小鼠的存活时间。J原料静脉注射对大鼠动静脉短路血栓的湿重、血栓干重具有明显的降低作用；对大鼠动静脉短路血栓干、湿重抑制率亦明显增高。有关其他药理药效正在作进一步研究。
本发明的另一目的是提供了单味竹节参制剂的备方法，该方法包括下列步骤
①、将竹节参药材初粉加1.0％Caco3[1]粉末，再加4倍量水浸泡5-6小时，再将水加至药材10倍量，煮沸2.0小时，过滤，药渣再分别加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)。以上步骤用HPLC控制苷元齐敦果酸。浓缩液备用。
②、将浓缩液用95％乙醇调醇至80％，静置12小时，过滤，回收乙醇至无醇味，用水饱和正丁醇萃取至无总皂苷，合并正丁醇萃取液③、加0.2％NaOH水溶液适量洗涤正丁醇萃取液两次，去碱水层，用正丁醇饱和水洗丁醇层至中性，减压回收正丁醇至干④、加适量30％乙醇完全溶解，缓慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，边加入边搅拌，过滤，沉淀用适量丙酮洗涤，95℃吹风干燥得类白色竹节参总皂苷(J原料)。
⑤、制备单味竹节参制剂粉针J原料取5g，灭菌分装，用注射用水溶解，冻干即得。
用本发明方法制得的单味竹节参制剂检测结果如下一、本品的质量控制a.本品为注射用无菌粉末(内容物为白色粉末状物质)b.装量差异应符合中国药典2000版注射用无菌粉项下的规定c.无菌应符合中国药典2000版注射剂项下的规定d.不溶性微粒应符合中国药典2000版注射剂项下的规定二、半成品的质量控制总皂苷的含量5％香草醛冰乙酸、高氯酸显色，545nm，紫外分光光度法测定J原料中总皂苷大于80％。
本发明还涉及另外一种竹节参总皂苷的提取方法，具体如下大孔吸附树脂法提取总皂甙(J-1原料)将竹节参药材初粉加1.0％Caco3[1]粉末，再加4倍量水浸泡5-6小时，再将水加至药材10倍量，煮沸2.0小时，过滤，药渣再分别加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)。以上步骤用HPLC控制苷元齐敦果酸。浓缩液备用。将浓缩液上D101大孔树脂柱，以水洗至无色，45％乙醇洗脱，TLC控制苷元齐敦果酸。硅胶G，展开剂苯-乙酸乙酯(1∶1)10％硫酸乙醇溶液，105℃加热显色。收集洗脱液，减压回收至干，30％乙醇适量溶解，缓慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，边加入边搅拌，过滤，沉淀用适量丙酮洗涤，95℃吹风干燥得黄白色总皂苷(J-1原料)。5％香草醛冰乙酸，高氯酸显色，545nm，紫外分光光度法测定J原料中总皂苷大于70％。
溶剂法与大孔吸附树脂法提取竹节参总皂苷的比较①薄层鉴别取人参皂苷Rg1、Re各适量用甲醇配成溶液，Rb1、J、J-1各适量分别用甲醇配成溶液。备用。硅胶G，展开剂正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层液，10％硫酸乙醇液，105℃烘约10分钟显色。J、J-1、Rb1于相同Rf处有相同颜色斑点，而在人参皂苷Rg1、Re相应Rf处则无斑点。J、J-1斑点基本一致。但J-1背景色深。J无背景色。
②性状比较J色浅，呈白色，不易吸湿；J-1，色深，呈淡黄色。易吸湿。
实例1、制备单味竹节参粉针剂处方竹节参 500g制成10000支方法将竹节参药材初粉加1.0％Caco3[1]粉末，再加4倍量水浸泡5-6小时，再将水加至药材10倍量，煮沸2.0小时，过滤，药渣再分别加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)。以上步骤用HPLC控制苷元齐敦果酸。浓缩液备用。将浓缩液用95％乙醇调醇至80％，静置12小时，过滤，回收乙醇至无醇味，用水饱和正丁醇萃取至无总皂苷，合并正丁醇萃取液，加0.2％NaOH水溶液适量洗涤正丁醇萃取液两次，去碱水层，用正丁醇饱和水洗丁醇层至中性，减压回收正丁醇至干，加适量30％7醇完全溶解，缓慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，边加入边搅拌，过滤，沉淀用适量丙酮洗涤，95℃吹风干燥得类白色竹节参总皂苷(J原料)。J原料灭菌分装，用注射用水溶解，冻干即得。
实例2、制备单味竹节参粉针剂处方J原料5g制成10000支方法同实例1。
实例3、制备单味竹节参片剂处方J原料100g制成10000粒方法J原料，磨细粉过100目筛，加适量乳糖混匀，用70％乙醇湿润制粒，过24目筛，75℃干燥，整粒，加入硬酯酸镁混匀压片、包衣制成的片剂。
实例4、制备单味竹节参胶囊剂处方J原料100g制成10000粒方法J原料，磨细粉过100目筛，加适量乳糖混匀，用70％乙醇湿润制粒，过24目筛，75℃干燥，整粒，装胶囊制成10000粒。
实例5、制备单味竹节参颗粒剂方法J原料，磨细粉过100目筛，加适量乳糖混匀，用70％乙醇湿润制粒，过24目筛，75℃干燥，整粒分装即得。
权利要求
1.一种单味竹节参制剂，其特征在于该单味竹节参制剂是由将竹节参药材初粉加1.0％Caco3粉末，再加4倍量水浸泡5-6小时，再将水加至药材10倍量，煮沸2.0小时，过滤，药渣再分别加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)。将浓缩液用95％乙醇调醇至80％，静置12小时，过滤，回收乙醇至无醇味，用水饱和正丁醇萃取至无总皂苷，合并正丁醇萃取液，加0.2％NaOH水溶液适量洗涤两次，去碱水层，用正丁醇饱和水洗丁醇层至中性，减压回收正丁醇至干，加适量30％乙醇完全溶解，缓慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，边加入边搅拌，过滤，沉淀用适量丙酮洗涤，95℃吹风干燥得类白色总皂苷(J原料)。以HPLC控制苷元齐敦果酸。5％香草醛冰乙酸，高氯酸显色，545nm，紫外分光光度法测定J原料中总皂苷大于80％。然后与药用载体组成100％得制剂。
2.一种如权利要求1所述的单味竹节参制剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤①、将竹节参药材初粉加1.0％Caco3粉末，再加4倍量水浸泡5-6小时，再将水加至药材10倍量，煮沸2.0小时，过滤，药渣再分别加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)。以上步骤用HPLC控制苷元齐敦果酸。浓缩液备用。②、将浓缩液用95％乙醇调醇至80％，静置12小时，过滤，回收乙醇至无醇味，用水饱和正丁醇萃取至无总皂苷，合并正丁醇萃取液③、加0.2％NaOH水溶液适量洗涤正丁醇萃取液两次，去碱水层，用正丁醇饱和水洗丁醇层至中性，减压回收正丁醇至干④、加适量30％乙醇完全溶解，缓慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，边加入边搅拌，过滤，沉淀用适量丙酮洗涤，95℃吹风干燥得类白色竹节参总皂苷(J原料)。⑤、制备单味竹节参制剂粉针J原料取5g，灭菌分装，用注射用水溶解，冻干即得。
3.根据权利要求1或2的一种单味竹节参制剂及制备方法，其特征在于其中所述的单味竹节参制剂的制备是按提取工艺所得J原料，磨细粉过100目筛，加适量乳糖混匀，用70％乙醇湿润制粒，过24目筛，75℃干燥，整粒，加入硬酯酸镁混匀压片、包衣制成的片剂。
4.根据权利要求1或2的一种单味竹节参制剂及制备方法，其特征在于其中所述的单味竹节参制剂的制备是按提取工艺所得J原料，磨细粉过100目筛，加适量乳糖混匀，用70％乙醇湿润制粒，过24目筛，75℃干燥，整粒，装胶囊制成胶囊剂。
5.本发明还涉及另外一种竹节参总皂苷的提取方法，具体如下大孔吸附树脂法提取总皂甙(J-1原料)将竹节参药材初粉加1.0％Caco3粉末，再加4倍量水浸泡5-6小时，再将水加至药材10倍量，煮沸2.0小时，过滤，药渣再分别加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃)。以上步骤用HPLC控制苷元齐敦果酸。浓缩液备用。将浓缩液上D101大孔树脂柱，以水洗至无色，45％乙醇洗脱，TLC控制苷元齐敦果酸。硅胶G，展开剂苯-乙酸乙酯(1∶1)10％硫酸乙醇溶液，105℃加热显色。收集洗脱液，减压回收至干，30％乙醇适量溶解，缓慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，边加入边搅拌，过滤，沉淀用适量丙酮洗涤，95℃吹风干燥得黄白色总皂苷(J-1原料)。5％香草醛冰乙酸，高氯酸显色，545nm，紫外分光光度法测定J原料中总皂苷大于70％。
全文摘要
本发明涉及中药制剂，具体是涉及一种单味竹节参制剂及其总皂苷制备方法。它可用来治疗心脑血管疾病。本发明提供了制备方法。
文档编号A61P9/00GK1518999SQ0311272
公开日2004年8月11日 申请日期2003年1月23日 优先权日2003年1月23日
发明者丁永芳 申请人:丁永芳