专利名称：一种流行性感冒病毒裂解疫苗及其制备方法
技术领域：
本发明属生物制品领域，具体涉及一种流行性感冒病毒裂解疫苗及其制备方法。
技术领域流行性感冒(简称流感)是由甲、乙、丙三个不同型别的流感病毒引起的急性呼吸道传染病。甲型流感发病急剧，蔓延迅速，常造成世界性大流行。流感通常在每年冬季流行，据估计每年有10-20％的人口会感染流感。流行期间因流感并发症造成的发病率和死亡率均有明显上升，常见的流感并发症有细菌性疾病，如儿童中耳炎和老人的肺炎，慢性心肺疾病的恶化和死亡。每次流感流行，均造成人群不同程度的超额死亡和巨大的经济损失，如著名的1918-1919年的流感世界大流行，仅澳洲未被波及，世界20亿人口50％被感染，死亡人数达4000万，高于第一次世界大战死亡总人数。因此，防治流感已成为重大的社会问题。
具报道，临床常用的清热解毒类药物，不能直接杀灭或抑制病毒的复制，目前采用的抗病毒药物如金刚烷胺和甲基金刚烷胺仅对甲型流感病毒有效，但药物有较多副作用。接种流感疫苗仍是预防流感疾病发生和流行最有效的手段之一。国际上现有纯化全病毒疫苗，裂解疫苗和亚单位疫苗三种流感病毒灭活疫苗。成人接种上述三种疫苗后会引起基本相同的临床反应，但儿童接种全病毒疫苗后会产生较严重的反应，特别是婴幼儿接种全病毒疫苗后常会产生发热和惊厥。纯化裂解疫苗是目前较有效、安全和经济的疫苗，也是一些主要国际大型疫苗制造厂商如GSK公司、巴斯德公司等生产的疫苗。国内尚无流感裂解疫苗的生产报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种国产化、价格低的能扩大接种人群，特别是婴幼儿的流感裂解疫苗及其制备方法。
本发明流行性感冒疫苗为纯化的裂解疫苗，其中包含甲1型、甲3型和乙型流感病毒抗原，所用病毒毒株与世界卫生组织(WHO)颁布的2000-2001年度建议流感毒株一致。分别是甲1型A/New Caledonia/20/99 H1N1 IVR-116株EX/E1来源于WHO墨尔本流感协作中心；甲3型A/Panama/2007/99 H3N2 NIB-41(98/804)E4/E1来源于英国NIBSC；乙型B/Yamanashi/166/98(NIBSC)E4/E1来源于英国NIBSC。
本发明裂解疫苗通过下述方法制备，上述病毒经自动接种机接种鸡胚尿囊腔培养，用自动收获机收获尿囊液(病毒液)，尿囊液经澄清、超滤浓缩、密度梯度超离心后得纯化的流感全病毒，纯化全病毒乙醚裂解后再经蔗糖密梯度超速离心精制，除菌过滤、稀释制备成流感裂解疫苗。
分别对流感毒种的毒力稳定性、外源因子、抗原稳定性及流感裂解疫苗的免疫原性、过敏原性和稳定性进行了检测，试验结果表明流感毒种无外源因子，连续传代后其毒力和抗原性保持稳定，流感裂解疫苗无过敏性，免疫原性和稳定性良好。经中国药品生物制品检定所和本所质检处检定，本发明试制疫苗的质量符合《流行性感冒病毒裂解疫苗制造和检定拟定规程》和WHO规程的要求，其中部分质量指标(如卵白蛋白含量)高于WHO规程的要求。
所述疫苗纯度高，其中卵清白蛋白含量＜0.01ug/人份，低于WHO规定的≤5ug/人份的水平，副反应轻，免疫效果良好，可采用自动化和机械化生产，能保证质量。本发明裂解疫苗由于在纯化工艺上采用创新的方法，产品的血凝素和总蛋白含量比均能保证在0.4±0.05之间，卵白蛋白残留通过2步离心后保持在50ng/ml以内。
采用本发明裂解疫苗对732名不同年龄组的对象进行免疫(其中245名接种法国巴斯德公司的裂解疫苗)，结果无异常不良反应，疫苗的抗体阳转率为81.1-94.9％(进口疫苗为78.4-93.2％)，表明本发明流感裂解疫苗具有很好的临床安全性和免疫原性。
具体实施例方式
实施例1 制备裂解疫苗采用甲1型病毒经自动接种机接种鸡胚尿囊腔培养，用自动收获机收获尿囊液(病毒液)，尿囊液经澄清、超滤浓缩、密度梯度超离心后得纯化的流感全病毒，纯化全病毒乙醚裂解后再经蔗糖密梯度超速离心精制，除菌过滤、稀释制备成流感裂解疫苗。所述疫苗纯度高，其中卵清白蛋白含量＜0.01ug/人份，低于WHO规定的≤5ug/人份的水平，副反应轻，免疫效果良好。表1是质量检定结果。
表1
实施例2制备裂解疫苗采用甲3型病毒经自动接种机接种鸡胚尿囊腔培养，用自动收获机收获尿囊液(病毒液)，尿囊液经澄清、超滤浓缩、密度梯度超离心后得纯化的流感全病毒，纯化全病毒乙醚裂解后再经蔗糖密梯度超速离心精制，除菌过滤、稀释制备成流感裂解疫苗。所述疫苗纯度高，其中卵清白蛋白含量＜0.01ug/人份，低于WHO规定的≤5ug/人份的水平，副反应轻，免疫效果良好。，表1、2、3分别质量是不同批次的检定结果表2
实施例3制备裂解疫苗采用乙型流感病毒经自动接种机接种鸡胚尿囊腔培养，用自动收获机收获尿囊液(病毒液)，尿囊液经澄清、超滤浓缩、密度梯度超离心后得纯化的流感全病毒，纯化全病毒乙醚裂解后再经蔗糖密梯度超速离心精制，除菌过滤、稀释制备成流感裂解疫苗。所述疫苗纯度高，其中卵清白蛋白含量＜0.01ug/人份，低于WHO规定的≤5ug/人份的水平，副反应轻，免疫效果良好。，表1、2、3分别质量是不同批次的检定结果表3
权利要求
1.一种流行性感冒病毒裂解疫苗，其特征是其中包含流感病毒裂解病毒抗原。
2.按权利要求1所述的流行性感冒病毒裂解疫苗，其特征是其中所述的流感病毒抗原是甲1型流感病毒裂解病毒抗原。
3.按权利要求1所述的流行性感冒病毒裂解疫苗，其特征是其中所述的流感病毒抗原是甲3型流感病毒裂解病毒抗原。
4.按权利要求1所述的流行性感冒病毒裂解疫苗，其特征是其中所述的流感病毒抗原是乙型流感病毒裂解病毒抗原。
5.权利要求1所述的流行性感冒病毒裂解疫苗的制备方法，其特征是通过下述步骤，流行性感冒病毒经接种鸡胚尿囊腔培养，收获尿囊液(病毒液)，尿囊液经澄清、超滤浓缩、密度梯度超离心后得纯化的流感全病毒，纯化全病毒乙醚裂解后再经蔗糖密梯度超速离心精制，除菌过滤、稀释制备成流感裂解疫苗。
全文摘要
本发明属生物制品领域，具体涉及一种流行性感冒病毒裂解疫苗及其制备方法。本发明裂解疫苗，以流感病毒裂解病毒为抗原，经接种鸡胚尿囊腔培养，收获病毒液，经澄清、超滤浓缩、密度梯度超离心后得纯化流感全病毒，乙醚裂解后再经蔗糖密梯度超速离心精制，除菌过滤、稀释制备成流感裂解疫苗。本发明裂解疫苗无外源因子，连续传代后其毒力和抗原性保持稳定，无过敏性，免疫原性和稳定性良好。经中国药品生物制品检定所检定，本发明疫苗质量符合《流行性感冒病毒裂解疫苗制造和检定拟定规程》和WHO规程的要求，其中卵白蛋白含量高于WHO要求。
文档编号A61P31/00GK1739801SQ20041005406
公开日2006年3月1日 申请日期2004年8月27日 优先权日2004年8月27日
发明者陈列胜, 马相虎, 蔡明勇 申请人:上海生物制品研究所