专利名称：利用治疗性病毒治疗肝细胞癌的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用治疗性病毒治疗肝细胞癌。
背景技术：
在WO 00/62735中公开了利用病毒治疗癌症。
发明内容
本发明提供了治疗患有肝细胞癌肿瘤的哺乳动物患者的方法，该方法包括对患者施用治疗所述肿瘤有效量的治疗性病毒，其中，所述病毒是干扰素敏感性的有复制能力的RNA病毒。
本发明是基于这样的发现干扰素敏感的有复制能力的RNA病毒(如新城疫病毒)具有有效的抗肝细胞癌细胞类型的抗肿瘤活性。体外的病毒介导的抗瘤形成活性与体内的有效抗肿瘤活性有关。例如，Pecora等(1)披露，新城疫病毒的PV701株能够引起鳞状细胞癌的完全消退和直肠细胞癌的部分消退。而且还在患有间皮瘤、黑素瘤、乳腺癌、胰腺癌和神经内分泌肿瘤的患者中观察到可测量的肿瘤缩小(1)。在体外实验(WO 00/62735)中显示，这些肿瘤类型的每一种都对新城疫病毒(PPMK107)的杀伤作用敏感。其它病毒也显示出体外活性与临床功效的相关性。例如，单纯疱疹病毒的G207株显示在体外抗成胶质细胞瘤细胞的溶瘤活性(2)，并且在患有成胶质细胞瘤的患者中证明具有抗肿瘤活性的迹象(3)。Onyx-015显示出在体外具有抗鳞状细胞癌活性(4)。在抗该相同肿瘤类型的临床试验中，用Onyx-015治疗患者使肿瘤部分或完全消退(5)。类似地，溶瘤病毒CV706在体外(6)和临床试验(7)中显示出抗前列腺肿瘤活性。
图1用中等毒力的新城疫病毒(PPMK107)感染后，对于HepG2细胞的TC50值。
具体实施例方式
在此使用的过渡性术语“包括”是开放性的。使用该术语的权利要求除了包含该权利要求中所叙述的要素之外，可以包含其他要素。因而，例如，只要存在所叙述的要素或它们的对等物，所述权利要求可以继续包括下述治疗方案，该治疗方案还包含本文没有具体描述的其他治疗剂和治疗性病毒剂量。
此处使用的“NDV”是新城疫病毒的缩写。此处使用的“DLT”是剂量相关毒性的缩写。此处使用的“噬斑形成单位”(PFU)意思是一个感染性病毒颗粒。此处使用的“BPFU”意思是十亿个PFU。此处使用的“PP”意思是经过噬斑纯化的。因而，例如PPMK107的意思是经过噬斑纯化的新城疫病毒株MK107。此处使用的“PFU/m2”是表述剂量的标准单位，意思是每平方米患者表面积的PFU。此处使用的术语“有复制能力的”病毒是指在癌细胞中产生感染性后代的病毒。
根据本发明方法，当使用的治疗性病毒是新城疫病毒时，该病毒可以为低毒力(弱毒)、中毒力(中等毒力)或高毒力(强毒)。毒力水平是根据鸡胚平均死亡时间(MDT)测试进行测定的(Alexander，用于分离和鉴定鸟类病原体的实验室手册(Laboratory Mannual for the Isolationand Identification of Avian Pathogens)“第27章新城疫”，第3版，Purchase等编，(Kendall/Hunt，Iowa)，第117页)。通过MDT测试将新城疫病毒分为弱毒(MDT＞90小时)、中等毒力(MDT为60小时～90小时)以及强毒(MDT＜60小时)。
根据本发明，可以使用任何常规的干扰素敏感的有复制能力的RNA病毒治疗患有肝细胞癌肿瘤的哺乳动物患者。在本发明方法的一个实施方案中，干扰素敏感的有复制能力的RNA病毒是负链病毒。在更具体的实施方案中，该负链的RNA病毒是副粘病毒，例如新城疫病毒，并且更为具体的是新城疫病毒的中等毒力株。
根据本发明，可以使用任何常规的途径或技术对患者施用病毒。例如，可以通过以下途径施用病毒含服、舌下施用、肠内施用、直肠施用；和包括皮下施用、经皮施用、皮内施用、肿瘤内施用、肿瘤周围施用、颅内施用、鞘膜内施用、肌肉内施用、吸入、鼻内施用、胸膜内施用、支气管内施用、内窥镜施用、阴道内施用、硬膜外施用、患处施用(local)和局部施用(topical)等在内的肠胃外途径施用；和包括静脉内施用、动脉内施用和腹膜内施用等在内的全身途径施用。当所述病毒为肠道病毒或呼肠孤病毒时，口服途径也是适宜的。在本发明的一个实施方案中，全身施用，优选静脉内施用所述病毒。根据本发明，对于静脉内施用治疗性病毒，优选所述病毒为新城疫病毒的中等毒力株。
已发现可以通过控制病毒的施用速率来降低不需要的副作用。当通过静脉内途径施用中等毒力的新城疫病毒株时，优选所施用病毒的剂量是在至多24小时的施用期内进行施用的；并且在该施用期内在任意10分钟取样间隔中，所施用剂量的速率为每平方米的患者表面积高至7.0×108PFU。更优选地，在施用期内在任意10分钟取样间隔中，所施用剂量的速率为每平方米的患者表面积高至2.0×108PFU。一般地，可以方便地选择施用速率，使得施用期为至少1小时。当施用期为至少3小时时，通常观察到更少的副作用。
在本发明的一个实施方案中，将所述的治疗性病毒对所述患者施用一个或更多周期，其中，至少一个周期包括依次施用一个或一个以上脱敏剂量的所述病毒，然后施用一个或一个以上加大剂量的所述病毒，其中，各加大剂量的病毒量均高于各脱敏剂量的病毒量。在更具体的一个实施方案中，所述周期包括每平方米的患者表面积至少为1.2×1010PFU的一个脱敏剂量，和每平方米的患者表面积至少为2.4×1010PFU的一个或一个以上加大剂量。使用脱敏剂量和加大剂量的施用方案可以与上述控制一个或一个以上剂量的施用速率的技术结合进行。对施用第一次脱敏剂量的病毒的速率进行控制尤其有用。
根据本发明的方法，所述治疗性病毒可以与例如在WO 00/62735(第36页第20行到第37页第10行)中描述的其它抗肿瘤剂选择性地结合进行施用。
根据本发明进行治疗的患者可以是人类患者或非人类的哺乳动物患者。
尽管对治疗进行监测并不是本发明的必须方面，但是存在测定所述治疗的治疗效果的技术。这些技术包括，测定施用所述病毒后肿瘤的尺寸，其中该肿瘤尺寸的减小是阳性结果。
参考以下的实施例将可以更好地理解本发明，所述实施例用于阐明而不是限制本文描述的发明。在以下实施例中，所使用的NDV是新城疫病毒MK107株经过噬斑三重纯化后的减毒(中等毒力)形式，在2000年10月26日出版的国际专利公布WO 00/62735(Pro-Virus，Inc.)中对其进行了更充分地描述。在这里以参考的方式引入WO 00/62735的所有内容。
实施例实施例1细胞毒性分析和TC50测定对肝细胞癌(HepG2)细胞进行对PPMK107杀死作用的敏感性分析。让细胞生长在24孔组织培养皿中，直到大约70％～80％汇合成片。移出生长培养基，并按从1×107pfu/孔到1pfu/孔的10倍稀释方式将PPMK107加到板孔中。在各板中包括没有加入病毒的对照孔。进行90分钟的病毒吸附，移出病毒并换入培养基，然后在37℃和5％的CO2条件下温育5天。用CELLTITER 96非放射性增殖测定(PROMEGA)对细胞存活力进行定量评估。该测定是通过MTT四唑盐[3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基溴化四唑]转化为带有颜色的甲臢(formazan)产物而进行的。将该MTT颜料溶液直接加入各孔中，并在37℃和5％的CO2温育4小时。然后在各孔中加入终止/增溶溶液(1ml)。在37℃和5％的CO2将该板过夜温育，测量570nm的吸光度。信号的量与板孔中存活细胞的数目成正比例。在病毒处理的板孔中的细胞的存活力以占未处理对照板孔中的活性的百分比来表示。将数据以每孔中接种的PFU对占对照百分比的细胞存活力进行作图。将该数据进行四参数逻辑曲线拟合后，通过使平方和最小，通过在图中确定导致细胞存活力为50％的PFU/孔来计算TC50(图1)。
文献目录1.Pecora AL等，临床肿瘤学报(J Clin Oncol)，2002年5月1日；20(9)2251～662.Mineta T等，自然医药(Nat Med)，1995年9月；1(9)938～9433.Markert JM等，基因治疗(Gene Ther)，2000年5月；7(10)867～8744.Heise C等，自然医药(Nat Med)，1997年6月；3(6)639～6455.Nemunaitis J等，临床肿瘤学报(J Clin Oncol)，2001年1月15日；19(2)289～2986.Chen Y等，癌症研究(Cancer Res.)2001年；615453～54607.DeWeese TL等，癌症研究(Cancer Res)2001年10月15日；61(20)7464～747权利要求
1.一种治疗患有肝细胞癌肿瘤的哺乳动物患者的方法，该方法包括对所述患者施用治疗所述疾病有效量的治疗性病毒，其中，所述治疗性病毒是干扰素敏感的有复制能力的RNA病毒。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述病毒为负链RNA病毒。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述病毒为副粘病毒。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述副粘病毒为新城疫病毒。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述病毒为新城疫病毒的中等毒力株。
6.如权利要求1所述的方法，其中，全身施用所述病毒。
7.如权利要求6所述的方法，其中，静脉内施用所述病毒。
8.如权利要求7所述的方法，其中，施用的所述病毒为新城疫病毒的中等毒力株。
9.如权利要求8所述的方法，其中，以至多24小时的施用期施用所述病毒；并且在所述施用期内在任意10分钟取样间隔中，以每平方米的患者表面积高至7.0×108PFU的速率的剂量施用所述病毒。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述的速率为在所述施用期内在任意10分钟取样间隔中，每平方米的患者表面积高至2.0×108PFU。
11.如权利要求9所述的方法，其中，所述施用期为至少1小时。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述施用期为至少3小时。
13.如权利要求8所述的方法，其中，将所述的治疗性病毒对所述患者施用一个或一个以上的周期，其中，至少一个周期包括对该患者依次施用一个或一个以上脱敏剂量的所述病毒，然后施用一个或一个以上加大剂量的所述病毒，其中，各加大剂量的病毒量均高于各脱敏剂量的病毒量。
14.如权利要求1所述的方法，其中，所述周期包括每平方米的患者表面积至少为1.2×1010PFU的一个脱敏剂量，和每平方米的患者表面积至少为2.4×1010PFU的一个或一个以上加大剂量。
15.如权利要求1所述的方法，其中，所述患者为人类患者。
16.如权利要求1所述的方法，其中，所述的患者为非人类的哺乳动物。
17.如权利要求1所述的方法，其中，在施用所述病毒后，肿瘤的尺寸变小。
全文摘要
本发明涉及利用干扰素敏感的有复制能力的RNA病毒来治疗患有肝细胞癌肿瘤的哺乳动物患者。
文档编号A61K35/76GK1780556SQ200480011201
公开日2006年5月31日 申请日期2004年4月14日 优先权日2003年4月25日
发明者迈克尔·S·罗伯茨 申请人:威尔斯达特生物制剂公司