专利名称：一种含乌骨藤苷元的药物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种含乌骨藤苷元的药物及其制备方法和应用。
背景技术：
乌骨藤又名通光散Marsdeniatenacissim(Roxb.)WightetArn.，是萝藦科(Asclepiadaceae)牛奶菜属(MarsdeniaR.Br.)植物，其地方名有通光藤、扁藤、下奶藤及大骨藤等，分布于我国云南、贵州和广西等地区。乌骨藤含有多种甾体酯苷、生物碱、有机酸、多糖、树脂及色素等多种化学成分，传统用于治疗咳嗽哮喘、痰咳嗽喘，主治气管炎，支气管哮喘，亦用于抗癌。
以乌骨藤含有的独特化学成分制备而成的中药消癌平，对胃癌、肝癌、肺癌等多种肿瘤具有确切的抗肿瘤疗效，并可配合放疗、化疗的辅助治疗，是一种很有前途的抗肿瘤中药，但是消癌平注射液有关真正的抗癌活性成分是什么未见报道。申请号为92102027.9的专利公开了消癌平有效成分的提取及制剂制备，该专利提取得有效成分为乌骨藤多糖；申请号为200310121000.9的专利公开了一种消癌平注射制剂及其制备方法，该专利提取得到的有效成分为多糖部位和总苷部位。两个专利提取的有效成分均是混合物而不是单体，而且都是水溶性成分，乌骨藤脂溶性成分中是否存在抗癌成分，目前未见报道。
发明内容
基于上述原因，本发明经过大量实验研究首次从乌骨藤脂溶性部位中提到一主要单体化合物，经UV、IR、MS、NMR等鉴定，确定该单体化合物为二氢肉珊瑚苷元(C21H36O6)(dihydrosarcostin)，即乌骨藤苷元。乌骨藤苷元具有诱导和促使微管蛋白聚合，影响微管装配与微管稳定的独特作用机制，从而抑制肿瘤细胞有丝分裂，其溶液具有显著的抑制肿瘤细胞作用，并能消除疼痛，使病灶稳定或缩小。将该苷元与适宜药用辅料制备的注射制剂与市售的消癌平注射液比较，抗癌治疗效果明显提高，制剂安全性更好、刺激性更小，能显著提高治疗效果。
本发明通过以下技术方案实现一、工艺制法1.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品，粉碎成粗粉，过10-30目筛，加70-90％乙醇加热提取2-4次，每次1-3小时，提取液减压浓缩得浸膏；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取3-5次；再用氯仿萃取3-5次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.01-0.2mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取2-4小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取3-5次，合并萃取液蒸干，加1.0-2.5％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取5-7小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取3-5次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取3-5次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元，其中乌骨藤苷元含量≥90％。
2.包合物的制备取乌骨藤苷元，用适量无水乙醇溶解，滴加入在50-70℃保温的35-50倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌1-3小时，冷却，置0-4℃的冰箱中12-24小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入冻干赋形剂，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得。
本发明乌骨藤苷元粉针制剂的赋形剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一种或两种。
下面通过光谱学数据对本发明的乌骨藤苷元作进一步的说明。
二、检测分析1.乌骨藤苷元纯品的工艺制法称取乌骨藤干品，粉碎成粗粉，过20目筛，加95％乙醇浸泡1小时，加热回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并提取液并减压回收乙醇至干，浸膏加水使溶解，加石油醚提取3次，弃去石油醚液，残渣用氯仿提取2次，每次1小时，合并氯仿液，滤过，滤液蒸干，残渣用丙酮溶解，慢慢加入石油醚至沉淀不再析出，滤取沉淀，加0.1mol/l硫酸溶液并加入同体积的甲醇溶液，置水浴上加热回流2小时，放冷，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，残留液移至分液漏斗中，加醋酸乙酯振摇萃取5次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加2.5％氢氧化钾甲醇溶液，置沸水浴上加热回流5小时，放冷，加10％硫酸调节pH值至7.0，减压蒸出甲醇，加醋酸乙酯提取5次，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣进行硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集洗脱液，合并第25至30流份，回收溶剂至干，得到乌骨藤苷元纯品，测得乌骨藤苷元含量≥99.5％。
2.乌骨藤苷元的结构鉴定1>实验仪器熔点用Yanagimoto显微熔点测定仪器测定(温度未校正)。红外光谱用EQUINOX-55型傅里叶变换红外光谱仪测定，KBr压片。紫外光谱用TU-1901仪测定；甲醇作溶剂。质谱用VG ZAB-HS型色质联用仪器定。核磁共振用INOVA500NB超导核磁共振仪测定，TMS做内标。柱层析硅胶为上海五四化学试剂厂出品，氧化铝为青岛海洋化工厂出品，薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产。
2>理化性质为无色棱状结晶，mp242℃-244℃，[a]17D+32.0°(c0.50，CH3OH)，薄层色谱显示为棕黄色单一斑点。
UV显示末端吸收，UVλmaxEtOHnm201。
IRvmaxKBrCM-13418，3251(br，s)(VO-H)，2927-2856(s)(VC-H)，1451，1377，1232，1114，1040(s)(δO-H)。
MSm/z(％)385(M++1，6)，349([M+H-2H2O]+，12)，331(11)[m/z349-H2O]+，307(22)，289(14)，154(100)，137(66)，136(67)，107(30)，77(28)，51(15)。
1H-NMR(CD3OD)(δppm)4.80(6H，br，s)[羟基信号(OH×6)]；3.94(1H，q，20-H)，3.53(2H，m，3，12-H)，1.91(2H，5，9-H)，1.32-1.75(16H，其余H)，1.17(3H，d，J＝6.5Hz，21-CH3)，1.14(3H，S，19-CH3)和1.00(3H，S，18-CH3)。
13C-NMR数据(δppm)(表1)及DEPT数据，显示有21个碳原子信号(3个甲基CH3，8个亚甲基CH2，5个次甲基CH，5个季碳C)，其中，没有不饱和碳信号，与紫外光谱吻合；在较低磁场(δ97.2-71.8ppm)有3个仲醇(CH-OH)和3个叔醇(C-OH)，符合C21甾体结构特征。由质谱和核磁共振谱确定分子式为C21H36O6。与从萝藦科植物苦绳中分离得到的二氢肉珊瑚苷元(dihydrosarcostin)的1H-NMR、13C-NMR对照完全一致。乌骨藤苷元的质谱给出准分子离子峰m/z385(M+1)+及m/z349[M+H-2H2O]+，m/z331[m/z349-H2O]+等离子碎片也与从萝藦科植物苦绳中分离得到的二氢肉珊瑚苷元的质谱一致，化学结构式如下，(13C-NMR数据见表1)。
乌骨藤苷元(dihydrosarcostin)表1乌骨藤苷元的13C-NMR数据(δppm)
经光谱检索，确定我们所得到的乌骨藤苷元结构与二氢肉珊瑚苷元的结构一致。
三、药理实施例试药、动物与瘤株消癌平注射液(通化神源药业有限公司)；本发明乌骨藤苷元及其注射制剂(按本发明制备工艺制得，由广东天之骄药物开发有限公司实验室制备)；昆明种小鼠，体重18-22g；裸鼠，体重16g-18g；Wistar大鼠，体重180g-220g；肉瘤S-180、人肝癌7721、肝癌H-22、艾氏癌(中国医学科学院肿瘤医院)；人低分化胃腺癌MGC-803细胞株、人肺巨细胞癌PLA801细胞株、肝癌BEL7402细胞株(中国医学科学院肿瘤医院)培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中。MTT(四唑蓝)购自美国Sigma公司；[3H]-TdR购自中国科学院上海原子核研究所；RPMI-1640为美国GIBCOBRL产品；胎牛血清为北京元亨圣马生物技术研究所产品；胰蛋白酶为Difco进口，Giemsa为上海化学试剂厂产品。
1.乌骨藤苷元对胃腺癌、人肺巨细胞癌、肝癌三种细胞株的抑制作用三种肿瘤细胞株分别以1×105·mL-1密度接种于96孔培养板中，100μL/孔，在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下的孵箱培养4h，弃去孔内培养液，加入浓度为0.5mg·L-1的乌骨藤苷元，100μL/孔，设空白对照组(含0.033％DMSO)，每个瘤株设4个平行孔，分别继续培养24、48、72h，培养结束前4h，掺入MTT溶液(5g·L-1)20μL/孔，待培养结束，小心吸弃上清，加入DMSO，100μL/孔，震荡10min，选择492nm波长，在酶联免疫检测仪上测定光吸收值，经SPSS软件统计，用直线回归方程计算乌骨藤苷元作用24、48、72小时IC50值，结果见表2。
表2乌骨藤苷元对胃腺癌、人肺巨细胞癌、肝癌三种细胞株的抑制(n＝4)
注与阳性对照组比较*P＜0.05；结果显示，在相同剂量下，实验组与阳性对照组比较差异有显著性意义，说明乌骨藤苷元对人低分化胃腺癌MGC-803细胞株、人肺巨细胞癌PLA801细胞株、肝癌BEL7402细胞株有明显的抑制作用。
2.对小鼠肉瘤S-180的抑制作用取体重18～22g，小鼠50只，雌雄各半，正常饲养观察3天无异常，常规腋下接种小鼠肉瘤S-180后随机分为生理盐水空白对照组，消癌平注射液阳性对照组和试药组，每组10只，(如表3所示)。静脉给药，给药体积为0.05ml/10g体重，接种次日开始给药，隔日连续给药二天，1次/天，共6次。末次给药后次日处死动物称体重，剥取肿瘤称瘤重，计算肿瘤抑制率，并对数据进行统计学处理。
表3乌骨藤苷元注射制剂对小鼠肉瘤S-180的实验结果(n＝10，x+sd)
注与阳性对照组比较*P＜0.05；结果显示，在相同剂量下，实验组与阳性对照组比较差异有显著性意义，说明乌骨藤苷元注射制剂对小鼠肉瘤S-180的抑制作用显著强于消癌平注射液。
3.对裸鼠人肝癌7721的抑制作用取体重16～18g，雄性裸鼠40只，正常饲养观察3天无异常，常规腋下接种裸鼠人肝癌7721后随机分为生理盐水空白对照组，消癌平注射液阳性对照组和试药组，每组10只，(如表4所示)。静脉给药，给药体积为0.05ml/10g体重，接种次日开始给药，隔日连续给药二天，1次/天，共5次。末次给药后次日处死动物称体重，剥取肿瘤称瘤重，计算肿瘤抑制率，并对数据进行统计学处理。
表4乌骨藤苷元注射制剂对裸鼠肝癌7721的实验结果(n＝10，x+sd)
注与阳性对照组比较*P＜0.05；结果显示实验组与阳性对照组比较有显著性意义，说明乌骨藤苷元注射制剂抑制裸鼠肝癌7721的作用比消癌平注射液的效果更加显著。
4.对小鼠肝癌H-22的抑制作用取体重18～22g，雄性小鼠40只，正常饲养观察3天无异常，常规腋下接种小鼠肝癌H-22后随机分为生理盐水空白对照组，消癌平注射液阳性对照组和试药组，每组10只，(如表5所示)。静脉给药，给药体积为0.05ml/10g体重，接种次日开始给药，隔日连续给药二天，1次/天，共6次。末次给药后次日处死动物称体重，剥取肿瘤称瘤重，计算肿瘤抑制率，并对数据进行统计学处理。
表5乌骨藤苷元注射制剂对小鼠肝癌H-22的实验结果(n＝10，x+sd)
注与阳性对照组比较*P＜0.05；结果显示实验组与阳性对照组比较有显著性意义，说明乌骨藤苷元注射制剂抑制小鼠肝癌H-22的作用比消癌平注射液的效果更加显著。
5.对小鼠艾氏癌的作用取体重18～22g，雄性小鼠40只，正常饲养观察3天无异常，常规腋下接种艾氏癌后随机分为生理盐水空白对照组，消癌平注射液阳性对照组和试药组，每组10只，(如表6所示)。静脉给药，给药体积为0.05ml/10g体重，接种次日开始给药，隔日联系给药二天，1次/天，共6次。末次给药后继续观察动物死亡，记录生存天数，计算生命延长率，并对数据进行统计学处理。
表6乌骨藤苷元注射制剂对小鼠艾氏癌的实验结果(n＝10，x+sd)
注与阳性对照组比较*P＜0.05；
结果显示，在相同浓度下，实验组与阳性对照组比较有显著性意义，说明乌骨藤苷元注射制剂抑制小鼠艾氏癌的作用比消癌平注射液的效果更加显著。
6.急性毒性实验取小鼠80只，体重18-22g，雌雄各半。禁食24h，随机分4组，每组20只。稀释成相同的生药浓度，各组分别尾静脉注射0.1ml/10g，每天给药3次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，结果见表7。
表7小鼠用药、存活情况比较
结论通过上述实验表明，本专利乌骨藤苷元注射制剂与消癌平注射液具有相同的安全性。
四、制备实施例实施例11.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品5kg，粉碎成粗粉，过20目筛，加3倍量的70％乙醇加热提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩得浸膏1500g；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取3次；再用氯仿萃取3次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀0.01mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取2小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取5次，合并萃取液蒸干，加1.0％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取5小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取3次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取3次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元得乌骨藤苷元4500mg。
2.包合物的制备取乌骨藤苷元1000mg，用适量无水乙醇溶解，滴加入在65℃保温的35倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌1小时，冷却，置4℃的冰箱中12小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，用加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得1000支。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入甘露醇，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得1000支。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得500瓶。
实施例21.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品8kg，粉碎成粗粉，过10目筛，加3倍量的75％乙醇加热提取2次，每次3小时，提取液减压浓缩得浸膏2600g；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取4次；再用氯仿萃取4次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.05mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取3小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取4次，合并萃取液蒸干，加1.2％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取6小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取4次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取4次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元得乌骨藤苷元8400mg。
2.包合物的制备取乌骨藤苷元1000mg，用适量无水乙醇溶解，滴加入在60℃保温的40倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌2小时，冷却，置0℃的冰箱中18小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，用加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得1000支。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入葡萄糖，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得1000支。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得500瓶。
实施例31.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品10kg，粉碎成粗粉，过20目筛，加3倍量的80％乙醇加热提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩得浸膏3200g；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取4次；再用氯仿萃取4次，合并氯仿液，滤过，蒸十，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.1mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取4小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干，加1.5％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取6小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取5次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取4次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元得乌骨藤苷元10500mg。
2.包合物的制备取乌骨藤苷元1000mg，用适量无水乙醇溶解，滴加入在50℃保温的45倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌3小时，冷却，置4℃的冰箱中20小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，用加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得1000支。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入乳糖，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得1000支。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得500瓶。
实施例四1.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品1.5kg，粉碎成粗粉，过30目筛，加3倍量的85％乙醇加热提取3次，每次3小时，提取液减压浓缩得浸膏540g；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取4次；再用氯仿萃取5次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.15mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取3小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干，加1.8％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取6小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取4次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取4次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元得乌骨藤苷元1720mg。
2.包合物的制备取乌骨藤苷元1000mg，用适量无水乙醇溶解，滴加入在70℃保温的50倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌2小时，冷却，置2℃的冰箱中24小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，用加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得1000支。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入右旋糖酐，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得1000支。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得500瓶。
实施例五1.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品2kg，粉碎成粗粉，过20目筛，加3倍量的90％乙醇加热提取2次，每次3小时，提取液减压浓缩得浸膏640g；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取4次；再用氯仿萃取4次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.2mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取3小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取5次，合并萃取液蒸干，加2.0％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取6小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取4次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取4次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元得乌骨藤苷元2100mg。
2包合物.的制备取乌骨藤苷元1000mg，用适量无水乙醇溶解，滴加入在55℃保温的38倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌2小时，冷却，置0℃的冰箱中16小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，用加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得1000支。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入葡聚糖，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得1000支。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得500瓶。
实施例六1.乌骨藤苷元的提取、纯化称取乌骨藤干品4.5kg，粉碎成粗粉，过10目筛，加3倍量的75％乙醇加热提取2次，每次3小时，提取液减压浓缩得浸膏1628g；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取4次；再用氯仿萃取4次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.18mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取3小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干，加2.5％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取6小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取5次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取3次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元得乌骨藤苷元5120mg。
2.包合物的制备取乌骨藤苷元1000mg，用适量无水乙醇溶解，滴加入在60℃保温的42倍重量份饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌3小时，冷却，置0℃的冰箱中15小时，滤过，真空干燥，得包合物。
3.制剂制备水针剂的制备取包合物，用加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得1000支。
冻干粉针剂的制备取包合物，加入葡聚糖和乳糖，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得1000支。
输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得500瓶。
权利要求
1.一种含乌骨藤苷元的药物，其特征在于它是由乌骨藤中提取得到的一种脂溶性成分乌骨藤苷元为活性成分，经HP-β-CD包合，添加水溶性药用辅料制备而成的；其特征还在于活性成分中，乌骨藤苷元含量≥90％；乌骨藤苷元HP-β-CD包合物中乌骨藤苷元HP-β-CD的重量份比例为1∶35-50；其特征还在于其剂型为注射制剂，包括水针剂，冻干粉针剂，输液剂。
2.一种含乌骨藤苷元的药物的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)乌骨藤苷元的提取，纯化称取乌骨藤干品，粉碎成粗粉，过10-30目筛，加70-90％乙醇加热提取2-4次，每次1-3小时，提取液减压浓缩得浸膏；浸膏加水使溶解，用石油醚萃取3-5次；再用氯仿萃取3-5次，合并氯仿液，滤过，蒸干，用丙酮溶解，慢慢加入石油醚直至沉淀不再析出，滤取沉淀；沉淀用0.01-0.2mol/l硫酸加相同体积的甲醇溶液加热回流提取2-4小时，放冷，调节pH值至5.0-6.0，减压浓缩，浓缩液用醋酸乙酯萃取3-5次，合并萃取液蒸干，加1.0-2.5％氢氧化钾甲醇溶液加热回流提取5-7小时，放冷，调节pH值至7.0-7.2，回流液用水饱和正丁醇萃取3-5次，减压浓缩，浓缩液用石油醚-丙酮溶液萃取3-5次，合并萃取液蒸干，得乌骨藤苷元，其中乌骨藤苷元含量≥90％。(2)包合物的制备取乌骨藤苷元，用适量无水乙醇溶解，滴加入在50-70℃保温35-50倍重量份的饱和HP-β-CD溶液中，边加边搅拌，滴加完后继续搅拌1-3小时，冷却，置0-4℃的冰箱中12-24小时，滤过，真空干燥，得包合物。(3)制剂制备水针剂的制备取包合物，加入注射用水，用0.1％的活性碳煮沸15min，趁热滤过，滤液继续用0.22μm的微孔滤膜滤过，调pH6.5-7.0，灌装，灭菌，即得。冻干粉针剂的制备取包合物，加入冻干赋形剂，调pH6.5-7.0，滤过，滤液加0.1％的活性碳煮沸15min，稍冷，过滤至澄明，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖，即得。输液剂的制备取包合物，加入适量吐温80，搅匀、冷藏、滤过，加注射用水，过滤，分装，115℃灭菌30分钟，包装，即得。
3.如权利要求1，2的一种含乌骨藤苷元的药物，其特征在于用作抗肿瘤药物。
全文摘要
本发明公开了一种含乌骨藤苷元的药物及其制备方法和应用，本发明经过大量实验研究首次从乌骨藤中提到一主要单体化合物，经UV、IR、MS、NMR等鉴定，确定该单体化合物为二氢肉珊瑚苷元(C
文档编号A61P11/06GK1891223SQ200510082960
公开日2007年1月10日 申请日期2005年7月8日 优先权日2005年7月8日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙