专利名称：一种用于对乙型肝炎进行免疫耐受治疗的蛋白疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蛋白疫苗，特别是涉及一种用于对乙型肝炎进行免疫耐受 治疗的蛋白疫苗。
背景技术：
据有关资料统计显示，乙型肝炎分为平行传播和垂直传播两种传播途径， 两种传播途径各占50%。特别是垂直传播，代代相传，任其发展将贻害子孙后 代的身体健康，给家庭和社会带来巨大经济负担，严重影响"全面奔小康"的 步伐。病毒性肝炎仍是危害人民身体健康的主要疾病之一，而乙型肝炎占全部 肝炎发病之首。当前，对乙型肝炎的治疗，多以对症处理，已形成共识，即抗 病毒、调节免疫、保肝护肝、防纤维化、防癌等措施。而对乙型肝炎免疫耐受 的治疗仍有不同的看法，而乙肝免疫耐受患者占乙肝门诊的40%,对此，国内 许多医疗研究单位进行了大量的研究和探讨，到目前为止，还没有一种理想的 用于对乙型肝炎进行免疫耐受治疗的蛋白疫苗。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种用于对乙型肝炎进行免疫耐受治疗 的蛋白疫苗，所要解决的技术问题是参考美国Akbaer等研究成果，对HBsAg 蛋白疫苗进行大胆的改进组配，组配新的治疗性疫苗，使其设计方法简便、科 学、实用、安全、有效，本发明所釆取的技术方案是采用HB疫苗60畔、卡介 菌多糖核酸2rai 、花生油水乳化剂0. lml混合组成； 本发明在进行临床应用研究之前，曾做了如下几方面的基础性研究工作1. 查阅了国内外相关文库2. 借鉴了美国VIRGINIA CO固DNWEALTH VNVERSITY大学药理毒理研究室 博士研究员，美国MILLNAIR生物公司新药开发等研究成果，最后确定HBsAg 蛋白疫苗治疗HBV感染免疫耐受的治疗应用研究。3. 药理的安全性试验12只大白兔，雌雄各半。实验结東无不良反应。 (方法将大白兔注射部位2周、4周、8周作病理组织学检查)4. 有5位医务志愿者，曾用乙肝疫苗30ug0. 1. 6免疫后无抗体反应，用 HBsAg蛋白疫苗0. 1.6接种全部免疫成功，其抗-HBs p/co值均在14以上(正常值l)见表一。 具体实施方案本发明采用HB60ug、卡介菌素lmg、花生油水乳化剂0. lml混合组配新 的治疗性疫苗，选择代表性的应试对象120例，HBsAg+、 HBeAg+、抗-HBC+、 HBVDNA+、 ALT、 AST正常者，垂直传播平行传播各半，分为三组治疗一组(垂 直传播)"例；治疗二组(平行传播)40例；对照组(平行垂直传播各半)40例。方法HBsAg蛋白疫苗每三周双侧三角肌注射一次xl2个月，HBIG200IU 每三周一针x 12个月，其结果:治疗一组HBeAg治疗前p/co值x16. 394 ± 8. 709, 治疗后x5.536 士 7.927， t值5.831, p<0.001，转阴率为50%, HBVDNA阴转23 例，转阴率为57.5%。治疗二组HBeAg治疗前p/co值xl3.895 士 9.472，治疗后x2. 444 ± 2. 518， t值7.388， p< 0.001,阴转2Q例,阴转率50%, HBVDNA阴转23例，阴转率 57. 5%。 对照组佐旋咪唑片2. 5mg， 2. 5mg/kg/日，每周两次口服x 12个月，HBeAg 治疗前P/'co值x5. 896 ± 10. 430,治疗后xl5. 749 ± 8. 64， t值0.111， p〉0.5， 无显著性差异，阴转2例，阴转率5%， HBVDNA阴转8例，阴转率20%。临床应用本发明对慢性乙型肝炎免疫耐受治疗较为理想，可作为进一步深 层次方面的研究与应用。综合上述研究结果采用HBsAg蛋白疫苗对乙型肝炎免疫耐受临床应用，可 以得出以下几点结论一、 垂直传播与平行传播的患者疗效大致相同，其原因可能是病史收集的不 清，也可能是免疫耐受机理相同，发病机理相似，故疗效相当。二、 HBeAg存在可作为病毒复制指标，e抗原存在与HBVDNA存在也是平行的，故其疗效也较一致。三、 治疗组治疗中期部分患者ALT升高，两组约有16例，但都不超过200u， 也可能是免疫耐受部分解除，机体免疫状况好转所起的清除病毒作用，继续使 用治疗，个别患者用干扰素(安福隆300—500万u)疗效更好。四、 治疗期间HBVM好转部分病人要继续治疗，6例病人使用28个月后，有 4例病人HBVM全部转阴，2例只有抗HBC+，依此可以考虑延长疗程治疗。五、 治疗期间部分病人可能出现ALT升髙，可以是免疫耐受部分解除或全部 解除，细胞免疫可发挥作用。大部分ALT不升高，可能还是通过细胞因子免疫 的作用，两种作用可能同时存在，是因为个人的免疫状况不同，免疫反应也不 尽相同。六、 本课题实验病例，除个别患者注射部位有肿痛外l一2日即止，余无不良反应。七、HBsAg (—)阴转率50%, HBvDNA (核酸)阴转率57. 5%
本项目研究表明HBsAg蛋白疫苗---度性乙型肝炎，治疗性疫苗能够在部分临床试验中激发特异性细胞免疫和非细胞免疫的途径，降低HBVDNA的水平， 改善患者的免疫状况，可使HBeAg的血清全含量明显降低，部分转阴。单纯乙肝疫苗可作为治疗性疫苗使用，作为主动免疫应答基因来调节，对 HBsAg的高位应答和低位应答有不同的MHC表现型，前Sl蛋白有很重要的免疫 原性，在T细胞水平显著高于S2抗原，前S2可激活特异性TH来诱导B细胞产 生抗前S2的抗体，前S1、 S2的调节可提供B细胞克隆的辅助。卡介苗素可提 高抗原递呈细胞，提高T、 B淋巴细胞的功能，高水平的表达MACI、 OMHCII、 活化非特异性巨噬细胞的介导作用和细胞因子的效应。佐剂具有增效缓释作用，花生油水乳化佐剂具有提高细胞免疫和体液免疫作 用。而铝佐剂只能在提高体液免疫同时还有降低细胞免疫作用。因此，本发明设计方法简便、科学、实用、安全、有效，取得成果后，可 以广泛的应用于临床，造福于人类的健康事业。1、患者王建民，男，43岁，于5年前查出患有乙肝"大三阳"、HBV— DHA阳性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，经多方治疗无效，于2005年2月在我 院用乙肝疫苗60mg、卡介苗多糖核酸lmg、佐剂0. lml双侧三角肌肌注治疗， 经过"个月的治疗，患者于今年5月份查HBeAg转阴、HBV—DNA也转阴，肝 功能正常。2、 患者闫红伟，女，"岁，于2005年4月份于我院检查出患有乙肝，HBeAg 阳性，HBV—DNA阳性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，建议其治疗，用乙肝疫苗 90Mg、卡介苗多糖核酸lmg、佐剂0. lml双侧三角肌肌注治疗，经过10个月治 疗后复查乙肝五项HBeAg转阴、HBV-—DNA阴性.3、 郭明全，男，55岁，2005年3月份因乏力、厌油腻饮食、右上腹疼痛到我
院检查为乙肝HBeAg阳性、HBV—DNA阳性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，用乙 肝疫苗120Mg、卡介苗多糖核酸lmg、佐剂O.lml双侧三角肌肌注治疗，经过9 个月治疗后复查HBeAg阴性、HBV—DNA阴性.4、李宗连、女、40岁，于2005年3月份于我院查出患有乙肝HBeAg阳性、HBV 一DNA阳性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，用乙肝疫苗180Mg、卡介苗多糖核酸 lmg、佐剂0. lml，双侧三角肌肌注治疗，经过6个月治疗后复查乙肝五项陽g 转阴、HBV—DNA阴性.
权利要求
1、一种用于对乙型肝炎进行免疫耐受治疗的蛋白疫苗，其特征在于是由HB疫苗60μg、卡介菌多糖核酸2ml、花生油水乳化剂0.1ml混合组成。
全文摘要
本发明公开了一种用于对乙型肝炎进行免疫耐受治疗的蛋白疫苗，是由HB疫苗60μg、卡介菌多糖核酸2ml、花生油水乳化剂0.1ml混合组成，对HBsAg蛋白疫苗进行大胆的改进组配，组配新的治疗性疫苗，使其设计方法简便、科学、实用、安全、有效，本发明HBsAg蛋白疫苗，能够在部分临床试验中激发特异性细胞免疫和非细胞免疫的途径，降低HBVDNA的水平，改善患者的免疫状况，可使HBeAg的血清全含量明显降低，部分转阴。
文档编号A61P31/00GK101125202SQ20061004816
公开日2008年2月20日 申请日期2006年8月15日 优先权日2006年8月15日
发明者马胜录 申请人:马胜录