药物组合物及其在制备抗微生物药物中的应用的制作方法

专利名称：：药物组合物及其在制备抗微生物药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物在制备抗皮肤黏膜微生物和痤痊药物中的应用。具体来说是涉及甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物用于制备治疗人和动物皮肤黏膜细菌、真菌、病毒感染和痤疮药物、消毒剂和曰用化工产品的应用。
背景技术：
：甘草酸或其盐具有非特异性免疫调节作用，其主要增强细胞免疫，可增强吞噬功能，选择性地增强辅助性T淋巴细胞的增殖能力和活性，具有抗微生物、保肝、解毒、抗炎、抗变态反应、抗过敏等多种生物学作用。用甘草酸进行体夕卜抗Epstein-Barr病毒实验[Jung-ChungLin.MechanismofactionofglycyrrhizicacidininhibitionofEpstein-Barrvirusreplicationinvitro[J].^〃",a〃",2003,59:41-47],发现甘草酸干扰病毒的早期复制，但不影响病毒的吸附，也不会使病毒质粒失活；体外实验还表明，甘草酸具有抗虫媒病毒的作用[JeanMC，NataleS，AlainJ,"a/.Interferon,ribavirin,6—azauridineandglycyrrhizin:antiviralcompoundsactiveagainstpathogenicflavivi-ruses[J].J/7">/_r<2/ves，2003,58:73-79]。鞣酸作为收敛药，巿面上现有鞣酸软膏用于新生儿和婴儿防治臀红。鞣酸已被证明对艾滋病HIV病毒有抑制作用(Biochem.J1992;288:717-9;J.Nat.Prod.1990;53:134-40)。三氯生为高效安全抗菌消毒剂，可以杀死金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌等多种革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌，对病毒也具有抑制和杀灭作用。皮肤黏膜感染细菌、真菌和病毒微生物是常见病、多发病，目前多用抗生素治疗，但是常常引起耐药，使皮肤黏膜感染经久不愈。另外，与人体表面接触而携带细菌、真菌和病毒，是传染病传播的重要途径，通过杀灭皮肤黏膜的病原性微生物，是预防该类疾病的重要方法。it疮又称青年痤疮，是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症，好发于颜面、胸背，表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿等损害，多见于青年男女。多数认为本病与雄激素、皮脂腺和毛囊内徵生物密切相关。此外，遗传、坎食、胃肠功能、环境因秉，化妆品及精神因素亦与本病的发病有关。疱瘆病毒有有I型、和II型，感染不同区域，可分为口唇疱渗、水痘-带状疱渗、生殖器疱瘆等，病毒可表现为增殖性感染和潜伏性感染。当感染处于潜伏状态时病毒的基因表达受到抑制，而在某些刺激因素作用下又可转为增殖性感染。潜伏和复发感染是疱渗病毒的突出特点。病毒潜伏于三叉神经节、颈上神经节和迷走神经节，当潜伏感染的宿主神经轴受损、发热或受到外伤(如插管等)、紫外线照射等刺激时，病毒可被激活并沿神经纤维轴索至末梢，从而进入神经支配的皮肤和黏膜重新增殖，再度引起病理改变，导致局部疱渗的复尖锐湿疣、寻常疣、扁平疣是由人乳头瘤病毒(HPV)引起的皮肤黏膜病变。中医认为尖锐湿疣的病因病机是由于房事不洁或间接接触污秽之品，湿热淫毒从外侵入阴皮肤粘膜，导致肝经郁势，气血不和，湿热毒邪搏结而成疣。由于湿毒为阴邪，其性粘滞，缠绵难去，容易耗伤正气，正虛邪恋以致容易复发，难以根治。在治疗上多采用扶正固本、清热解毒、活血化瘀、软坚散结等法。尖锐湿疣以局部病变为主，故外治法在治疗中占重要地位。美国专利US438U96公开了鞣酸用于疱渗病毒HSV感染的治疗，但未涉及尖锐湿疣HPV的治疗。目前，治疗尖锐湿疣的药物有鬼臼毒素d，属于化学疗法，优点是疗程短，但存在刺激性、毒副作用大的问题。具体表现是疼痛、水肿、糜烂等。目前，巿场上现有的产品，如阿昔洛韦，治疗口唇疱麥见效慢，往往需要一周才痊愈，扁平疣多采用激光、冷冻疗法等物理治疗手段，缺乏有效治疗药同时能抗细菌、真菌、病毒多种皮肤黏膜微生物感染，兼治痤疮的制剂，在巿面上和文献上尚未见到。皮肤黏膜病变常常不明病因或混合感染，痤雍常常伴有皮肤感染或过敏，是许多皮肤感染或痤疮久治不愈的原因，临床上非常缺乏广谱、高效、低毒、对耐药微生物有效的药物制剂，开发这类制剂是抗感染药物研究方向。
发明内容本发明为甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物作为活性成分。甘草酸从甘草提取，使用甘草酸或其盐，如甘草酸三钾、甘草酸二铵。也可从巿面上购买。鞣酸又称为鞣质，单宁，单宁酸，是分子量大小不同的一类物质，大分子鞣酸可降解为小分子鞣酸，也可以通过人工合成获得。鞣酸可由多种植物提取，首选从五倍子、盐肤木、石榴皮以及香蕉茎杆提取，优选分子量小的鞣酸。三氯生又名三氯新，2,4，4，-三氯-2，-二羟基二苯醚，被添加到消毒剂或曰用化工产品用于抑杀细菌、真菌和病毒，可从巿面上购买。甘草酸及其盐、鞣酸和三氯生按一定比例的组合物，其中甘草酸或其盐为卜50重量份，鞣酸为1-100重量份，三氯生为1-30重量份，优选为甘草酸或其盐为1-30重量份，鞣酸为10-90重量份，三氯生为l-5重量份。近年研究结果表明(陈富强等，肿瘤防治杂志，2001，8(4)342-344;徐成康，中山医科大学学报，1998，19(3):223-226)，29.3%的宫颈糜烂患者HPV阳性,而正常宫颈阳性率只为11.1%。据报道(Ahnwsetal，JCellBiochemSuppl，1997;28-29:133-139),慢性宫颈炎中高危HPV(16、18)型表达率为69%。HPV与多种疾病有关，它分为许多亚型，根据其对组织恶性转化程度的大小，将HPV分为高、中、低危型，其中高危型包括HPV16、18，宫颈糜烂及宫颈癌中HPV16是最常见的亚型，高危型HPV16、18检出率随宫颈糜烂程度的增加呈现递增趋势，颗粒型或乳突型糜烂HPV16、18检出率与正常宫颈比较差异显著，表明宫颈癌与HPV密切相关，与宫颈糜烂密切相关。用PCR可测得85y。-90。/。的宫颈癌中有高危型HPV,宫颈癌中HPV16、18阳性率达83.33%,高危型HPVDNA整合到宿主细胞染色体，可产生E6、E7肿瘤蛋白，它们分别抑制抑癌基因p53和Rb,使细胞逃脱p53和Rb的控制，导致细胞周期控制失常，使通常处于静止状态的细胞增生活跃、肿瘤生长。虽有多数生育年龄妇女主要通过性传播感染，但只有少数发展成宫颈癌，若HPV16持续存在，就可使宫颈病变进展。宫颈HPV感染与外阴感染不同，宫中以HPV16/18型为主，常不发生湿疣改变，而是以隐性感染长期存在，先引起不典型增生，当有其他因子参与时而导致癌变。上述甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物能有效地杀灭和抑制HPV6/11、16/18型，可用于制备治疗HPV病毒感染和的药物，治疗尖锐湿疣、扁平疣、寻常疣、阴道、宫颈炎及宫颈糜烂。本发明通过实时荧光定量PCR检测HPV病毒的量的改变来观察活性成分和产品效果，该方法已在数篇公开发表的文献中应用(蔡有龄等，中国性病艾滋病防治，2002,8:2,108;吴元胜、范瑞强等，实用中西医结合临床，2003，3:2，1)。结果表明，尖锐湿疣的组织匀浆在加入甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物后24小时，FQ-POVR不能再检出病毒，而空白对照管及对照品管却具有很高浓度的HPV病毒量，说明本发明的药物及其有效成分具有能快速有效地灭HPV病毒的能力。实验证明，单独使用鞣酸药液对金葡球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌有抑制，但对白色念珠菌没有抑菌作用。而本发明甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物则对金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌都有抑制。本发明所述甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物在制备能同时预防和治疗人和动物皮肤黏膜细菌、真菌、病毒性疾病和痤疮药物的用途，包括痤疮、单纯疱瘆、生殖器疱瘆、水痘-带状疱渗、尖锐湿疣、扁平疣、细菌性、霉菌性、病毒性阴道炎、宫颈炎和宫颈糜烂，特别是治疗人和动物皮肤黏膜病毒性疾病药物的用途。本发明的组合物对皮肤黏膜无刺激，毒副作用低，治疗皮肤黏膜感染性疾病的种类多，效果明显，治疗尖锐湿疣、扁平疣约4-5天开始逐步脱落。治疗口唇疱瘆、带状疱渗、生殖器疱疹约2-3天结痂。本发明甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物以及含有作为活性成分有效量的甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物，与皮肤黏膜用药的各种辅料配伍在制备各种制剂中的应用，可以是膏剂、凝胶剂、洗剂、片剂、栓剂、膜剂、喷剂。可用于制备治疗人和动物皮肤黏膜细菌、真菌、病毒感染和痤疮的药物或消毒剂或卫生用品。制剂中甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物的固体含量为1-70%，优选为2-20%。在用于制备药用制剂时，可以与不同的药物和可接受的载体组合，以利于制剂的形成，另外，还可以加入各种辅料，如表面活性剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂和透皮吸收促进剂等。这些载体和辅料可以是淀粉、糊精、吐温-80、卡波姆、纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、甘油、丙二醇、聚乙二醇、月桂氮唑酮、异丙醇、三乙醇胺、司盘60,但不限于此。本发明所述甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物制剂的pH为1-7,优选为pH4-6.5。调节pH可用HCl、硫酸、乳酸、NaOH或KCl。以下结合实施例，来进一步说明本发明，但本发明并不局限于这些实施例，任何在本发明基本精神上的改进或替代，仍属于本发明权利要求书中所要求的保护范围。具体实施方式试验用原料和药品来源甘草酸陕西惠科植物开发有限公司甘草酸三钾甘肃金汉伯药业有限公司甘草酸二铵陕西昂盛生物医药科技有限公司鞣酸陕西昂盛生物医药科技有限公司三氯生湖北恒曰化工股份有限公司妇炎净胶囊内容物(本品为苦玄参、地胆草、当归、鸡血藤、两面针等药味经加工制成的胶囊)广西梧州制药集团股份有限公司实施例1复方甘草酸二铵、鞣酸和三氯生的组合物抗HPV病毒泡腾片的制备甘草酸二铵0.20克鞣酸l.OO克三氯生0.IO克酒石酸碳酸氢钠0.45克0.65克情0.02克PEG60000.01克制备方法取甘草酸二铵、鞣酸、三氯生、酒石酸分别过80目筛，以95%乙醇制成软材，过12目筛制湿粒，于5(TC干燥，备用。另取碳酸氢钠加无菌蒸馏水制软材，过12目筛制湿粒，于5(TC干燥，然后与上述干粒混合，整粒，加适量灭菌蒸馏水，烘片刻，加PEG6000、糊精。混匀，压片。实施例2复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液的制备:甘草酸三钾0.10克鞣酸5.00克三氯生0.30克1,2-丙二醇20毫升吐温-8020亳升氮酮3毫升HC1或NaOH调节pH至5.5灭菌蒸馏水加至100亳升实施例3复方甘草酸、鞣酸和三氯生消毒液的制备甘草酸l.OO克鞣酸5.OO克三氯生0.50克1,2-丙二醇15亳升吐温-8015亳升氮酮3毫升HC1或NaOH调节pH至5.5灭菌蒸馏水加至100亳升实施例4复方甘草酸二铵、鞣酸和三氯生凝胶剂的制备甘草酸二铵5.QO克鞣酸30.00克三氯生3.00克卡波姆10克甘油100克灭菌蒸馏水加至1000亳升制备方法取卡波姆分次撒入适量灭菌蒸馏水中，使其缓慢溶胀，加入甘油调匀后，滴加三乙醇胺搅拌成透明基质，PH调至6.0-6.5。量取甘草酸二铵5.0克、鞣酸30.0克、三氯生3.OO克，加入适量热灭菌蒸馏水中，溶解冷却后，再边加入边搅拌于凝胶基质中，最后加入灭菌蒸馏水至1000亳升，搅匀分装即可。实施例5荧光定量PCR检测HPV病毒药敏实验药物样品配制1号鞣酸5克加入蒸馏水50毫升溶解，再加入1,2-丙二醇、吐温-80各20毫升，最后加灭菌蒸馏水至IOO毫升，配制成5%的溶液。2号(复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液)按实施例2配制的消毒液3号妇炎净胶囊内容物5克，加入l，2-丙二醇20毫升，吐温-8020亳升，最后加灭菌蒸馏水至100，配制成5%的溶液。HPV病毒来源来自多位病人临床标准的尖锐湿疣标本，切取后，用生理盐水洗去血液，在无菌条件下，将标本剪碎，加入3倍体积生理盐水混匀、研磨成匀浆备用。主要仪器PE7700型荧光定量PCR仪(包括电脑及软件)。引物及荧光探针达安基因临床诊断中心提供的HPV6,11和16，18型FQ-PCR诊断试剂盒。试验方法取尖锐湿疣组织匀浆50微升，按设定分组分别加入各种待测样品50微升。37。C温育24小时，然后按达安基因诊断中心HPV6,11和16，18型FQ-PCR诊断试剂盒提供的操作步骤进行检测FQ-PCR反应步骤采用常规碱裂解法提取DNAO.2ml入薄壁反应管中，同时加入一定浓度的引物、F-PROBE、DNTP、DNA聚合酶及缓冲液等，用PE7700荧光PCR仪，93。C2min予变性后，按93。C45s,55。C120s，反复进行40个循环，定量结果由电脑软件自动分析计算出初始拷贝数的定量结果。管号空白对照管1号鞣酸病毒HPV6/11(拷贝/ml)1.45x10602号(复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液)3号(妇炎净胶囊内容物管)3.40x105大S锐湿疣的组织勻浆在分别加入鞣酸:HPV16/18(拷贝/ml)1.40x10502.30x104复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消而而空白对照管及妇炎净胶囊内容毒液后24小时，FQ-POVR不能再检出病毒物管具有很高浓度的HPV病毒量，说明本发明的复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液和鞣酸均有能快速有效地杀灭尖锐疣病毒的作用。实施例6细菌和真菌药敏实验体外抑菌试验实验材料菌株金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌。试剂营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、沙氏琼脂培养基。药物样品配制原药液配制分别称量鞣酸5克加入灭菌蒸馏水至100亳升，取0.1亳升为鞣酸原药液和取复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液0.1亳升为复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液原药液。①取原液2ml作为浓度l。②取原液2ml+蒸馏水2ml，混匀，取出2ml作为浓度2。③取②操作中混勻后药液2ml+蒸馏水2ml，混勾，取出2ml作为浓度3。④取③操作中混勻后药液2ml+蒸馏水2ml，混匀，取出2ml作为浓度4。取④操作中混匀后药液2ml+蒸馏水2ml，混勻，取出2ml作为浓度5。取⑤操作中混句后药液2ml+蒸馏水2ml，混勾，取出2ml作为浓度6。实验方法采用平皿二倍稀释法，将已配制好的药液分别加入冷却至55。C左右的灭菌营养琼脂培养基中，混匀，制成不同浓度的药物平板。取金黄色葡萄菌，大肠杆菌，绿脓杆菌、白色念珠菌四种实验菌悬液，分别划种于不同浓度的含药平板，另外再取四个不含药液的平板也接种四种细菌)，37。C培养18h,观察记录最小抑菌浓度MIC。鞣酸药液结果见下表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液结果见下表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实验结果1、鞣酸组对实验的3种细菌(金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌)均有不同程度的抑制作用(见下表)。但对白色念珠菌无抑制。表1鞣酸的抗菌作用菌种最低抑菌浓度(MIC，g/ml)金黄色葡萄菌2.5xl05大肠杆菌2.5xl05绿脓杆菌1.25xl062、复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液对实验的4种细菌(金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌)均有不同程度的抑制作用(见下表)。表2复方甘草酸三钾、鞣酸、三氯生消毒液的抗菌作用菌种最低抑菌浓度(MIC,g/ml)金黄色葡萄菌1.25x106大肠杆菌1.25x106绿脓杆菌1.25x106白色念珠菌1.25x106实施例7外用治疗人体皮肤疱疹病毒感染试验外用治疗各种疱疹病毒感染，3天内结痂为显效，5天内为有效，6天以后为无效。口唇疱瘆口唇疱疹22人次，随机分为外用阿昔洛韦软膏组和复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液组，每组ll人，复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液组显效IO人次，有效l人；而阿昔洛韦软膏组显效l人次，有效4人次，无效6人次，两者有非常显著性差异。带状疱疹带状疱瘆6人，复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液组3人均为显效。阿昔洛韦软膏组l人有效，2人无效，改用复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液后，第二或三天结痂。生殖器疱疹生殖器疱疹5人，均经长期外用阿昔洛韦、咪喹莫特或同时服用阿昔洛韦药物，均无效。经外用复方甘草酸三钾、鞣酸、三氯生消毒液后3-5天痊愈。证明复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生对I和II型疱瘆病毒感染都有见效快的特点。实施例8治疗人体皮肤痤疮试验男性16-30岁8人，女性16-30岁6人，痤疮反复发作，有炎性丘疹、脓疱、结节、脓肿及瘢痕等，其中男性4人、女性2人，经复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液治疗，全部病例的丘參、脓疱、脓肿等炎症在2-3天消退。而另8人外用o.3%维胺酯乳膏，同时服用抗生素，丘疹、脓疱、脓肿等炎症在2-3天消退2人，5天内消退3人，6天以上3人。证明复方甘草酸三钾、鞣酸、三氯生对痤疮，尤其伴有炎症的寻常痤洛效果显著。实施例9治疗人体皮肤扁平疣试验经确诊为皮肤扁平疣的男性16-60岁5人，女性16-60岁3人，曾经外用其他药物无效。经外用复方甘草酸三钾、鞣酸和三氯生消毒液治疗，全部病例3-4天后扁平疣逐步脱落，对周围正常皮肤无刺激。5-15天全部脱落6人，15天以上未脱落完的2人。目前，扁平疣多需要激光或冷冻治疗，巿场上尚无外用药物有相同疗效。权利要求1、甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物在制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜感染药物及日用化工产品中的应用，其特征在于主要含甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物，其中甘草酸或其盐为1-50重量份，鞣酸或其盐为1-100重量份，三氯生为1-30重量份。2、根据权利要求1的制剂，其中甘草酸或其盐为1-30重量份，鞣酸或其盐为10-IOO重量份，三氯生为1-10重量份。3、根据权利要求l,其中甘草酸或其盐选自甘草，鞣酸优选自五倍子鞣酸、或有效剂量的五倍子提取物。4、甘草酸或其盐、輮酸和三氯生的组合物在制备预防和治疗皮肤黏膜细菌、真菌和病毒性感染药物中的应用，其特征在于主要含甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物。5、根据权利要求1所述的甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物用于制备同时预防和治疗人和动物皮肤黏膜细菌、真菌、病毒感染和痤疮药物的用途。6、根据权利要求1所述的甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物用于制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、疱瘆病毒、人乳头瘤病毒感染药物的用途。7、根据权利要求1所述的甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物用于制备预防和治疗人皮肤痤雍药物的用途。8、根据权利要求1所述的甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物用于制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜人乳头瘤病毒引起的疾病药物的用途，包括尖锐湿疣、扁平疣、阴道、宫颈炎和宫颈糜烂。9、根据权利要求l所述的甘草酸或其盐、鞣酸、三氯生的组合物，与皮肤用药的各种辅料配伍在制备各种制剂中的应用，可以是膏剂、凝胶剂、洗剂、片剂、栓剂、膜剂、喷剂和药学能够接受的其他外用制剂。10、根据权利要求l所述的甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物用于制备曰用化工产品、护理用品、化妆品的用途，可以是牙膏、香皂、药皂、纸巾、洗面奶、香波、洗洁精。全文摘要本发明涉及甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物在制备抗皮肤黏膜微生物和痤疮药物中的应用，尤其是在制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜细菌、真菌、病毒感染和痤疮药物、消毒剂及日用化工产品的应用，该类感染包括尖锐湿疣、扁平疣、寻常疣、阴道和宫颈炎及宫颈糜烂、单纯疱疹、带状疱疹、生殖器疱疹、痤疮。所述应用是将甘草酸或其盐、鞣酸和三氯生的组合物与皮肤黏膜用药的各种辅料配伍制备成不同制剂。文档编号A61K9/02GK101301299SQ200710027999公开日2008年11月12日申请日期2007年5月11日优先权日2007年5月11日发明者白大成,蒋光愉申请人:广州洁成生物科技有限公司