诱导骨生长和抑制骨流失的组合物和方法

专利名称：：诱导骨生长和抑制骨流失的组合物和方法
技术领域：
：本发明普遍涉及诱导骨生长和抑制骨流失的组合物和方法，并且特别涉及异黄酮或其代谢产物在诱导骨生长或抑制骨流失中的用途。
背景技术：
：骨重建是连续的循环。该循环开始于破骨细胞介导的骨质吸收并且继之通过成骨细胞进行骨量恢复。骨重建的过程首先通过性激素，特别是雌激素来调节。然而，遗传、营养、和环境因素能够影响骨更新。已经显示，雌激素在男性以及女性的骨重建中发挥重要功能。雌激素通过抑制骨诱裂发生和从骨髓前体的成骨发生来诱导骨重建、通过减少再吸收的细胞因子来抑制骨吸收、和调节成骨细胞的寿命和活性。骨重建循环经常发生调节异常。在老年群体中经常观察到比骨组织重建更快的骨组织溶出和流失的速率。病理性骨流失称为骨质疏+>症。加速的骨流失和骨质疏松更加影响女性。已经广泛承认，由更年期发生带来的雌激素缺乏是这类骨流失的主要原因。然而，在男性中也观察到骨流失和骨质疏松。尽管在男性中没有与更年期相当的生理现象，许多男性在性激素循环和性腺功能减退中的确经历与年龄相关的减少。这些改变被称为雄性更年期(andropause)。性腺功能减退和雌激素减少导致男性中的骨流失和骨质疏松症。因此，更年期和雄性更年期都是骨流失的风险因素。除了更年期和雄性更年期，性器官的手术移除影响性激素例如雌激素的水平。这类移除能够影响骨大小、量和密度。在动物中，经常通过例如生殖器不完全(neutering)、卵巢切除术、卵巢摘除术、阉割等方法进行种群控制。在成熟的雌性动物中性腺切除手术上的操作效果等同于在年老雌性动物中自然发生的更年期，因为该操作有效减少性激素的循环水平。更年期之后，在雌性动物中雌激素的性腺外生物合成依赖于来自肾上腺皮质的甾类前体的利用率。雌激素的性腺外生物合成对于在雄性动物中包括骨的许多组织和系统的正常功能也是重要的。来自睾丸的循环的睾酮显示是性腺外雌激素的生物合成的主要前体。雄性动物终生维持足够浓度的循环的睾酮以支持雌激素的性腺外生物合成。因此，雄性动物通常不患有更年期直至生命极晚时期。然而，在成熟的雄性动物中手术移除性器官导致通过睾丸产生雄激素和雌激素的完全丧失。这样的移除还导致可能在雄性动物中非自然发生的性腺外雌激素生物合成的主要前体的丧失。骨强度大大依赖于骨密度和骨质量。在人中，如果不在儿童期和青年期到达骨峰值，在生命后期可能产生骨质疏松症的风险。在未成熟和正发育的雄性和雌性动物中手术移除性器官通过减少骨矿物质密度和含量的积累阻止动物到达骨峰值。由此，可以认为性腺切除术是防碍在年轻生长中的动物中的骨生长和发育的风险因素。通常使用激素替代疗法和饮食补充来战胜减少的性激素循环对骨重建，特别是对骨流失的影响。关于饮食补充，饮食的植物雌激素可以提高骨量和骨转换，并且在骨生成中起作用。此外，々欠食的植物雌激素被认为具有减緩或抑制骨流失的有益效果。然而，关于植物雌激素，例如大豆异黄酮对骨的有益影响的几乎全部研究是在手术诱导的更年期条件的雌性动物或在绝经后的妇女中进行的。缺少关于在正在生长的动物和雄性动物中异黄酮对骨生长的影响的数据。植物雌激素是由植物产生的化学物质，其具有与哺乳动物雌激素相似的结构。植物雌激素净皮细分为三个主要的类型，即，香豆素类(coumestans)、木酚素类和异黄酮类。已经显示，异黄酮类对骨健康具有正面影响。考虑到在更年期或雄性更年期或已经性腺切除的动物中(特别是当动物在生长和它们的骨骼系统尚未成熟时)的(1)受损的骨生长和发育以及(2)加速的骨流失和骨质疏松症的风险，需要能够促进健康的骨生长和减少或抑制动物中的骨流失而没有与传统的激素替代疗法有关危险的副作用的新的组合物和方法。发明概述因此，本发明的目标是提供诱导骨生长或抑制骨流失的组合物和方法。本发明的另一目标是提供在绝经后、雄性更年期后、性腺切除、卵巢摘除或生殖器不完全的动物中诱导骨生长或抑制骨流失的组合物和方法。本发明的另一目标是以试剂盒的形式提供制造的物品，所述试剂盒含有可以用于在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的本发明的异黄酮或其代谢产物、食物组合物、化合物和装置的组合。使用诱导骨生长或抑制骨流失的新的组合物和方法实现一个或多个的这些其它的目标。通常，该组合物以诱导骨生长或抑制骨流失的有效量包含一种或多种异黄酮或其代谢产物。异黄酮包括大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A或芒柄花素的至少一种。并且，异黄酮或其代谢产物是大豆异黄酮或其代谢产物，例如牛尿酚。组合物可以包含另外的成份，例如促进或维持普通的健康骨生长或抑制骨流失的物质，例如DT56a、雄烯二酮、去氢表雄酮(DHEA)、硅、共轭亚油酸(CLA)或正矽酸。本发明的其它和另外的目标、特征和益处对本领域技术人员是显而易见的。发明详述定义本文可以使用下列缩写CLA，共轭亚油酸；BCS，身体条件分数；BMR，基础代谢速率；MER,维持能量需要；DEXA,双能量x-射线吸收测量；BMC，骨矿物质含量；BMD，骨矿物质密度；BW，体重；和SGM，黄豆胚芽膳食。术语"动物"意指人或其它动物，包括鸟类、牛、犬、马、猫、hicrine、鼠、绵羊和猪的动物，其能够从诱导骨生长或抑制骨流失中受益。术语"骨影响物质"意指除了本发明的异黄酮或其代谢产物之外，对在动物中诱导骨生长或抑制骨流失有用的任何方法、任何化合物、组合物或药物，例如，二磷酸盐(bisphosophonate)、雷洛昔芬、雌激素、降钓素、利塞膦酸盐和阿屈膦酸盐。术语"骨生长"意指按照通过本领域的任何合适的方法所测量的在骨细胞或组织中的任何增长、在骨量中的增加、骨矿物质的增加、骨密度的增加、骨长度的增加或在骨宽度的增加。术语"骨流失"意指按照通过本领域的任何合适的方法测量的在骨细胞或组织中任何减少、在骨量中的减少、骨矿物质的减少或在受试者中骨密度的减少。术语"共轭亚油酸，，或"CLA"是用于命名基础(n-6)脂肪酸亚油酸的位置异构体和几何异构体的混合物集合的术语。术语"陪伴动物，，意指任何家养的动物，包括而不限于猫、狗、兔、豚鼠、雪貂、仓鼠、小鼠、沙鼠、马、母牛、山羊、绵羊、猴子、猪等。术语"完全的和营养平衡的宠物食物"意指基于陪伴动物营养的领域公认的专家推荐，以合适的量和比例含有全部已知需要营养素的宠物食物，并且其因此能够作为单一的饮食摄取来源被提供以维持生命或促进生产而不加入补充剂的营养来源。营养平衡的宠物食物组合物是本领域公知和广泛使用的。术语"饮食补充剂"意指用于在动物的正常饮食之外摄入的产品。术语"有效量，，意指本文所述的化合物、材料、组合物、和/或药物剂型的量，其可以有效获得特定的生物效果。这类效果可以包括，但不限于，在年轻、生长中的性腺切除的动物中诱导健康的骨生长，和在绝经后或雄性更年期后或已经性腺切除的成熟动物中抑制骨流失。可以通过例如才聂入本发明的组合物而获得这类有效活性。术语"性腺切除"意指其生殖器官(睾丸或卵巢)已经被手术移除的动物。术语"人食物组合物"意指通过人摄入的任何组合物。术语"联合"意指异黄酮或其代谢产物、食物组合物、骨影响物质、或本发明的其它化合物或组合物，(l)在食物组合物中一起施用于动物，或(2)以相同或不同的频率使用相同或不同的施用途径在大约相同的时间或周期的分开的施用于动物。"周期的"意指按照特异性物质的可接受的剂量时间表施用该物质和按照适合特定动物的常规饲喂该食物。"大约相同的时间"通常意指在相同时间或在相互的约72小时内施用食物和物质。"联合"特别包括其中骨影响物质被施用预先准备的周期和包含一种或多种的异黄酮或其代谢产物的组合物被不确定的施用的施用时间表。术语"异黄酮"意指3-苯并色酮、黄酮类的异构形式，其中苯基连接于苯并吡喃环的3位置而非2位置，和它们各自的代谢产物。任何时候本文使用的术语"异黄酮，，意指涵盖异黄酮的衍生物和代谢产物，具体实例是本文所述的异黄酮衍生物。异黄酮可以在包括，但不限于大豆的多种来源中发现。异黄酮的非限定性实例包括大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A、芒柄花素或异黄酮的任何代谢产物。异黄酮及其多种健康益处的用途是乂>知的。例如，已经发现大豆减少心血管疾病的风险；减少乳腺和前列腺癌的风险；减轻与更年期雌激素缺乏有关的热潮红；延緩绝经后妇女的骨质疏松症；减少在血浆中胆固醇、LDL胆固醇和甘油三酯类的总量；在绝经后妇女中保持认知功能；改善高血压综合征；和促进体重减轻。术语"L-肉毒碱"意指Y-氨基-P-羟丁酸的三甲铵(甜菜碱)衍生物，由N8，N8,N8-三甲基赖氨酸和，丁基甜菜碱形成。L-肉毒碱是刺激脂肪酸氧化的线粒体膜的酰基载体。它有时被称为维生素Bt或维生素B7。术语"生殖器不完全的"意指缺少或具有不完全发育的或无功能的生殖器的动物，无论这样的情况先天的、通过天然发育过程、或通过介入的手术而发生。术语"口服施用"或"经口施用"意指动物经口摄入食物或其它组合物。术语"宠物食物"或"宠物食物组合物"意指意在通过动物，和优选通过陪伴动物摄入的组合物。术语"单个包装"意指试剂盒的组分在一个或多个容器中或与一个或多个容器物理伴随，并且被认为是制造、分配、销售或使用的单位。容器包括，但不限于，包、盒子、瓶子、收缩包装、钉合的或其它附着的组分或其组合。单个包装可能是物理伴随的个体食物组合物的容器，从而它们被认为是制造、分配、销售或使用的单位。术语"切除卵巢"意指雌性动物卵巢的移除。术语"虚拟的包装"意指试剂盒的组分伴随着关于一个或多个物理的或虚拟的试剂盒组分的向使用者说明如何获得其它组分的指导，例如，在包中含有一个组分和向使用者说明去网站、联系记录的信息、观看可视的信息或联系看护者或指导者以获得如何使用该试剂盒的指导。除非另外具体说明，本文表达的全部百分数是以组合物在干物质基础上的重量计。术语"干物质^出"意指在移除组合物中的任意水份之后测量的组合物中的成份的浓度。如在全文所使用的，使用范围来描述在范围内的每个和全部的数值。可以选择在范围内的任何合适的数值作为范围的较高或较低值。本发明不限于本文所述的具体的方法学、方案和试剂，因为它们可以改变。而且，本文使用的术语仅是出于描述特定的实施方案的目的，而并非意在限制本发明的范围。除非上下文另有清楚指明，如本文和在所附权利要求中使用的，单数形式包括复数指代。类似的，词"包含"被解释为包含在内的，而非唯一的。除非另外定义，本文使用的全部技术和科学术语和任何首字母缩写具有与本发明领域的普通技术人员之一通常理解相同的含义。尽管在本发明的操作中可以使用本文所述的那些相似或相当的任何组合物、方法、制造的物品、或其它方法或材料，优选本文中描述的组合物、方法、制造的物品或其它方法或材料。本文引用或参考的全部专利、专利申请、公开和其它的参考在此参考法律允许的程度被并入。这些参考的讨论仅意在概述本文的主张。未承认任何这样的专利、专利申请、公开或参考、或其任意的部分是有关本发明的现有技术，并且特别保留质疑这样的专利、专利申请、公开和其它参考的准确性和适当性的权利。发明一方面，本发明提供适合在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的组合物。该组合物包含有效量的能够在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的一种或多种异黄酮或其代谢产物。本发明是基于异黄酮或其多种代谢产物能够在动物中有效促进健康的骨生长和发育并且抑制骨流失的发现。本发明对于促进年轻的正在生长的动物中健康的骨生长和减少成熟动物中的骨流失是有利的。已经发现对于在绝经后、雄性更年期后、性腺切除后、切除卵巢、或生殖器不完全的动物中，特别是当动物的骨骼系统仍然在生长或成熟之中时，该组合物对于诱导骨生长或抑制骨流失特别有效。异黄酮或其代谢产物可以作为组分或添加物存在于该组合物中。在一个实施方案中，异黄酮是大豆异黄酮。在另一实施方案中，异黄酮是大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A、或芒柄花素、或其代谢产物。在优选的实施方案中，该异黄酮代谢产物是二氢大豆黄素或牛尿酚。在一个实施方案中，组合物还包含L-肉毒碱和/或共辄亚油酸。在一个实施方案中，组合物是宠物食物组合物。这样的组合物包括意在提供动物必需饮食的食物、动物治疗剂(treats)(例如，饼干)、或饮食添加物。该组合物可以是干的组合物(例如，粗粒食物)、半湿的组合物、湿的组合物或其任意的混合物。在另一实施方案中，该组合物是食物添加物，例如肉汤、饮用水、饮料、酵母乳、粉末、颗粒、糊、悬浮液、咀嚼物、切碎物(morsel)、治疗剂、点心、片剂、丸剂、胶嚢、药片或任何其它适合递送的形式。食物添加物可以包含高浓度的异黄酮或其代谢产物，从而该添加物可以以小量施用于动物，或备选的，可以在向动物施用之前被稀释。食物添加物可能在向动物施用前需要与水混合。组合物可以被冷藏或冷冻。异黄酮或其代谢产物可以与组合物的其它组分预混合以提供所需的有益量，可以被包被进入宠物食物组合物，或可以在提供给动物之前，例如，使用喷洒粉末或混合物加入组合物。在一个实施方案中，本发明的组合物包含诱导动物中骨生长的有效量的异黄酮或其代谢产物。在另一实施方案中，该组合物包含抑制动物中的骨流失的有效量的异黄酮或其代谢产物。优选的，在这些实施方案中，组合物包含从约0.1%至约100%的异黄酮或其代谢产物，最优选从约0.1%至约50%。对于食物组合物，该组合物优选包含从0.01%至约50%,优选约0.01%至约30%。在多种实施方案中，组合物包含该组合物的约1.0%、I.5。/o、2.0o/o、2.50/0、3.0o/o、3.50/o、4.0o/o、4.50/o、5.0o/o、5.50/o、6.0o/o、6.5。/o、7.0o/o、7.50/0、8.0o/o、8.50/0、9.0o/o、9.50/0、10,0o/o、10,5o/o、11.0%、II.5%、12.0%、12.5%、13.0%、13.5%、14.0%、14.5%、15.0%、15.5%、16.0o/o、16.5。/0、17.0o/o、17.50/0、18.0o/o、18.50/0、19.0o/。、19.50/0、20.0o/o、20.5%、21.0%、21.5%、22.0%、22.5%、23.0%、23.5%、24.0%、24.5%、25.0°/o、25.5°/0、26.0o/o、26.5°/0、27.0o/o、27.5°/0、28.0°/o、28.5°/。、29.0o/o、29.5%、30%、40%、50。/。或更多。例如，可以配制々欠食添加物为比典型组合物含有几倍或更高浓度的异黄酮或其代谢产物，从而添加物适合于以药片、胶嚢、浓缩液或其它相似的剂量形式向动物施用，或在施用之前被稀释，例如通过水稀释、喷雾或喷洒到宠物食物，和其它相似方式的施用。这样的添加物可以包含100%异黄酮或代谢产物，但是通常用载体、赋形剂等配制。源。优选的异黄酮来源包括任何含有异黄酮的植物、植物材料、或植物提取物，例如，但不限于，豆类、苜蓿和葛根。优选的异黄酮的豆类来源包括鹰嘴豆、小扁豆、大豆或其它类型含有异黄酮的豆粒或豌豆。也可以使用大豆粉、豆胚粉等。优选的异黄酮的苜蓿来源包括红色三叶草和地三叶。备选的，可以根据本领域任何合适的方法从头合成异黄酮或其代谢产物。L-肉毒碱是天然存在的化合物，其在动物体的能量产生中起到重要功能。在使用脂肪酸作为它们的主要能量来源的組织，例如骨骼肌和心肌中发现与其它组织相比更高浓度的L-肉毒碱。L-肉毒碱可以刺激成骨细胞分化和可以在抑制骨流失中发挥作用。L-肉毒碱的来源可以是任何动物组织，包括从哺乳动物、鱼、鸟类等分离的组织。同样的，L-肉毒碱可以从任何哺乳动物分离的乳汁获得。或者，根据本领域任何适用的方法，可以从头合成L画肉毒碱。CLA在骨重建和生长中发挥作用。此外，在绝经后的女性中已经显示CLA有利于BMD。CLA的来源可以是任何动物组织，包才舌从哺乳动物、鱼、乌类等分离的组织。同样的，可以从任何哺乳动物分离的乳汁获得CLA。也可以从植物或植物油，例如葵花籽油获得CLA。或者，根据本领域任何适用的方法，可以从头合成CLA。CLA还可以衍生自CLA的合成的异构体或合成的类似物。该组合物还可以包含有效量的单独或与本发明的异黄酮或其代谢产物组合在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的骨影响物质。在多个实施方案中，动物是人或陪伴动物，例如绝经后、雄性更年期后、性腺切除后、切除卵巢或生殖器不完全的动物。在其它的实施方案中，动物是年轻或生长中的动物，其正在进行骨发育。组合物可以任选的包含补充的物质，例如矿物质、维生素、盐、调味品、色素和防腐剂。补充的矿物质的非限定的实例包括钩、磷、钾、钠、铁、氯化物、硼、铜、锌、锰、碘、硒等。补充的维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、维生素E和维生素K。还可以包括额外的营养保健品，例如尼克酸、泛酸、菊粉、叶酸、生物素、氨基酸等。组合物可以任选的包含一种或多种促进或维持普通的健康骨生长或抑制骨流失补充的物质。这样的物质包括，但不限于，DT56a、雄烯二酮、去氬表雄酮(DHEA)、硅、CLA和正矽酸。在多个实施方案中，宠物食物或宠物治疗组合物包含从约15%至约50。/。的粗蛋白质。粗蛋白质材料可以包含植物蛋白，例如大豆粉、大豆蛋白浓缩物、玉米凄夫质粉、小麦#夫、棉籽和花生粉，或动物蛋白质，例如酪蛋白、白蛋白、和肉蛋白质。本文使用的肉蛋白质的非限定性的实例包括猪肉、羊肉、马肉、家禽肉、鱼肉及其混合物。组合物还可以包含从约5%至约40%的脂肪。组合物还可以包含糖类的来源。该组合物可以包含从约15%至约60%的糖类。这样的糖类的非限定的实例包括谷物或粮食，例如水稻、玉米、蜀黍(milo)、高梁、紫花苜蓿、大麦、大豆、油菜、燕麦、小麦及其混合物。组合物还可以任选的包含其它的材料，例如干乳清和其它的乳制品。组合物还可以包含至少一种纤维来源。可以利用本领域普通技术人员公知的多种可溶或不可溶的纤维。纤维来源可以是甜菜渣(来自糖萝卜(sugarbeet))、阿拉伯树胶、塔尔哈树胶(gumtalha)、虱草、米糠、角豆胶、柑橘浆、果胶、短链果糖之外的低聚果糖、甘露聚糖果糖、大豆纤维、阿拉伯半乳聚糖、半乳寡聚糖、阿拉伯木聚糖、或其混合物。或者，纤维来源可以是可发酵的纤维。先前已经描述可发酵的纤维提供对陪伴动物的免疫系统的益处。本领域技术人员公知的可发酵的纤维或提供益生组合物以增加肠内益生微生物生长的其它组合物也可以被掺入本发明的组合物以帮助增强由本发明提供的对动物免疫系统的益处。此外，可以将益生微生物，例如肠球菌、乳杆菌、双歧杆菌或酵母菌属加入该组合物中。在优选的实施方案中，组合物是完全的和营养平衡的宠物食物。在这一实施方案中，宠物食物可以是湿的食物、干的食物、或中等含水量的食物，如在宠物食物配方和制造领域中那些技术人员所公认的。"湿的食物，，描述通常在罐子或箔袋中的宠物食物，并且具有通常在范围约70%至约90%的含水量。"干的食物"描述与湿的食物具有相似组合物的宠物食物，但是含有限量的含水量，通常在约5%至约15%的范围，并且因此被提出，例如，作为小饼干类的4且粒。组合物和营养添加物可以特别为成熟动物配制，或为年老或年轻的动物配制，例如，"幼犬粮(puppychow)"、"幼猫粮(kittenchow)"或"老年"配方。通常，专门的配方将包含适合在发育或年龄的不同阶段的动物的能量和营养需要。优选与完全的和平衡的食物组合使用本发明的某些方面。即，优选与高质量的商品化食物使用包含根据本发明的某些实施方案的异黄酮或其代谢产物的组合物。如本文使用的，"高质量的商品化食物"指例如在上述对犬类的国际研究委员会的推荐中，或在由美国食物控制官员协会提出的指导方针中所提出的，制备食物以产生80°/。或更多的关键营养的可消化性。可以使用相似的高营养标准用于其它动物。技术人员应该理解如何确定加入指定组合物的异黄酮或其代谢产物的合适的量。可以考虑的这类因素包括组合物的类型(例如，宠物食物组合物相对饮食添加物)、不同动物对特定类型组合物的平均消费、和制备组合物的制造条件。优选的，基于动物的能量和营养需要计算要加入组合物的异黄酮或其代谢产物的浓度。根据本发明的某些方面，可以在组合物的制备和/或加工期间的任何时间加入异黄酮或其代谢产物。这包括，不限于，作为宠物食物组合物或食物添加物的配方的部分，或作为应用于宠物食物组合物或食物添加物的涂料。可以根据本领域适合的任何方法制备组合物。在另一方面，本发明提供在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的方法。该方法包括向动物施用在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的有效量的一种或多种异黄酮或其代谢产物。在多个实施方案中，异黄酮是大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A、或芒柄花素或其代谢产物。在一个实施方案中，异黄酮代谢产物是二氢大豆黄素或牛尿酚。在一个实施方案中，组合物还包含L-肉毒碱和/或共辄亚油酸。在多个实施方案中，组合物是本文所述的人食物组合物、宠物食物组合物或食物添加物。在多个实施方案中，异黄酮是大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A、或芒柄花素或其代谢产物。在一个实施方案中，异黄酮代谢产物是二氢大豆黄素或牛尿酚。在一个实施方案中，组合物还包含与异黄酮或其代谢产物组合施用L-肉毒碱和/或共轭亚油酸。在另一实施方案中，该方法还包括以在动物中有效诱导骨生长或抑制骨流失的量将异黄酮或其代谢产物与骨影响物质联合施用。在多种实施方案中，动物是人或陪伴动物，例如狗或猫。在某些实施方案中，动物是绝经后、雄性更年期后、或性腺切除的动物。在其它实施方案中，动物是年轻的或正在生长的动物。使用多种的施用途径将异黄酮或其代谢产物施用于动物。这样的途径包括，而不限于，经口、经鼻、静脉内、肌肉内、胃内、经幽门、皮下、直肠等。优选的，经口施用该组合物。可以根据需要或如所期望的基础施用，例如，每月一次、每周一次、每天、或每天超过一次。同样的，可以每两天、每两周或每两月施用，每三天、每三周或每三月施用，每四天、每四周或每四月施用等。施用可以是每天多次。当作为对普通饮食需要的添加物使用时，可以将组合物直接施用或另外的与每日食物或饲料接触或混合。当作为每日食物或詞料使用时，施用是对那些普通技术人员众所周知的。也可以作为动物饮食计划的部分进行施用。例如，饮食计划可以包含使动物规律摄入包含一种或多种异黄酮或其代谢产物的组合物，其以有效量诱导动物中的骨生长，或以有效量抑制动物中的骨流失。在每天基础上，规律的摄入可以每天一次、或每天两次、三次、四次或更多次。规律摄入的目标是为动物提供优选每日剂量的异黄酮或其代谢产物，如本文所举例。异黄酮和/或其代谢产物的优选的每日剂量范围是每只动物从约5mg/天至约5000mg/天。优选异黄酮和/或其代谢产物的每日剂量范围是每只动物从约30mg/天至约500mg/天，并且更优选每只动物从约80mg/天至约300mg/天。可以以每kg动物体重(BW)的异黄酮或其代谢产物克数来衡量异黄酮或其代谢产物的每日剂量。异黄酮或其代谢产物的每日剂量范围可以从约0.001g/每kg动物体重至约50g/每kg动物体重，尽管可能提供更多或更少的剂量。优选的，异黄酮或其代谢产物的每日剂量是从约0.001g/每kg动物体重至约25g/每kg动物体重。更优选异黄酮或其代谢产物的每日剂量是从约0.001g/每kg动物体重至约10g/每kg动物体重。更优选异黄酮或其代谢产物的每日剂量是从约0.001g/每kg动物体重至约5g/每kg动物体重。更优选异黄酮或其代谢产物的每日剂量是从约0.001g/每kg动物体重至约1g/每kg动物体重。更优选异黄酮或其代谢产物的每日剂量是从约0.001g/每kg动物体重至约0.15g/每kg动物体重。L-肉毒碱的每日剂量范围优选每只动物从约50mg/天至约5000mg/天。优选的，L-肉毒碱的每日剂量范围是每只动物从约80mg/天至约500mg/天，和更优选每只动物从约100mg/天至约300mg/天。可以以每kg动物体重(BW)的L-肉毒碱克数来衡量L-肉毒碱的每日剂量。L-肉毒碱的每日剂量范围可以从约0.001g/每kg动物体重至约50g/每kg动物体重，尽管可能提供更多或更少的剂量。优选的，L-肉毒碱的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约25g/每kg动物体重。更优选的，L-肉毒碱的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约10g/每kg动物体重。更优选的，L-肉毒碱的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约5g/每kg动物体重。更优选的，L-肉毒碱的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约1g/每kg动物体重。CLA的每日剂量范围优选每只动物从约50mg/天至约10000mg/天。优选的CLA的每日剂量范围每只动物从约500mg/天至约6000mg/天，且更优选从约1000mg/天至约4000mg/天。可以以每kg动物体重(BW)的CLA克数来衡量CLA的每日剂量。CLA的每日剂量范围可以从约0.001g/每kg动物体重至约50g/每kg动物体重，尽管可能提供更多或更少的剂量。优选的，CLA的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约25g/每kg动物体重。更优选的，CLA的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约10g/每kg动物体重。更优选的，CLA的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约5g/每kg动物体重。更优选的，CLA的每日剂量范围是从约0.001g/每kg动物体重至约1g/每kg动物体重。当配制本发明的组合物时，技术人员可以基于以上的剂量和动物的特征，例如动物的物种、年龄、大小、重量、健康等来确定异黄酮或其代谢产物和其它混合物或组分的量。根据本发明的方法，包括作为饮食计划部分施用的异黄酮或其代谢产物的施用可能跨越从动物分娩到生命成熟的时期。另一方面，本发明提供适合将包含一种或多种异黄酮或其代谢产物的组合物向动物施用的合适的试剂盒。如试剂盒组分所适合的，该试剂盒在单一包装的分开的容器中或在虚拟包装的分开的容器中包含一种或多种异黄酮或其代谢产物，和至少一种的(l)一种或多种适合动物消费的成份，(2)一种或多种适合诱导骨生长或抑制骨流失的骨影响物质，(3)关于如何组合异黄酮或其代谢产物与其它试剂盒组分的说明，特别是如何产生对于向动物施用异黄酮或其代谢产物有用的食物组合物的说明，和(4)关于如何使用异黄酮或其代谢产物和本发明的其它组分的说明，特别是关于如何通过在动物中诱导骨生长或抑制骨流失而有益于动物的说明。当试剂盒包含虚拟包装时，该试剂盒限于虚拟环境中的说明与一种或多种物理试剂盒组分的组合。该试剂盒含有在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的有效量的异黄酮或其代谢产物。通常，异黄酮或其代谢产物和其它合适的试剂盒组分(例如，食物组合物)是在动物消费之前被即刻混合。试剂盒可能以任何的多种组合和/或混合物含有试剂盒组分。在一个实施方案中，试剂盒含有含一种或多种异黄酮或其代谢产物的包和用于动物消费的食物的容器。试剂盒可以含有另外的项目，例如用于混合异黄酮或其代谢产物和成份的装置，或用于含有混合物的装置，例如，食物碗。在另一实施方案中，异黄酮或其代谢产物与另外的营养添加物混合，所述另外的营养添加物例如在动物中促进良好健康的维生素和矿物质。说明书可以指导和/或通知消费者、医生、宠物主人、兽医、食物供应失。说明还可以指导使用者如何在动物的食物或水中应用或混合异黄酮或其代谢产物。另一方面，本发明提供关于以下一种或多种的交流信息或说明的方法，(l)使用异黄酮或其代谢产物在动物中诱导骨生长或抑制骨流失，(2)将异黄酮或其代谢产物与本发明的其它组分(食物组合物)混合，(3)单独的或与本发明的其它元素組合向动物施用异黄酮或其代谢产物，和(4M吏用本发明的试剂盒从而将异黄酮或其代谢产物施用于动物，特别是在动物中^^导骨生长或抑制骨流失。该方法包括含有信息或说明的文档、数字储存介质、光学储存介质、声音呈现、或可视展示。在某些实施方案中，交流的方法是含有这类信息或说明书的展示的网站、可视展示报摊、小册子、产品标签、包装说明书、广告、分发的印刷品、公告栏、录音磁带、录像带、DVD、CD-ROM、计算机可读芯片、计算机可读卡、计算机可读磁盘、计算机存储器或其组合。有用的信息包括一种或多种的(l)用于组合和施用异黄酮或其代谢产物和/或其它组分的方法和技术，和(2)为动物或其医疗护理提供者(如果他们关于本发明及其用途具有问题)交流信息。有用的说明书包括混合的量和施用的量和频率。交流方法对于说明使用本发明的益处和交流向动物施用本发明的已经认可的方法是有用的。另一方面，本发明提供制备含有异黄酮或其代谢产物的食物组合物的方法，包括将一种或多种适合动物消费的成份与异黄酮或其代谢产物混合，或将异黄酮或其代谢产物应用于食物组合物。在更多的方面，本发明提供使用这一方法制备的食物组合物。在另一方面，本发明提供异黄酮或其代谢产物用于制备药物的用途。另外，本发明提供这样的异黄酮或其代谢产物在用于制备在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的药物的用途。通常，通过将化合物或组合物与赋形剂、緩冲液、黏合剂、成形剂、色素、稀释剂、压缩剂、润滑剂、调味剂、湿润剂和本领域技术人员公知的其它成份混合，所述成份对于生产和配制适用于向动物施用的药品是有用的。实施例本发明可以通过下列实施例来进一步说明，尽管应该理解，除非另外明确的指出，这些实施例仅被包括用于说明的目的，而并非意在限制本发明的范围。实施例1饮食的大豆异黄酮在正常的性腺切除的狗中对骨生长的影响狗及其饮食在研究中施用30只正常的、不肥胖的、新近性腺切除的拉布拉多猎犬，4-5月龄。基于同窝出生，将小狗随机分为三组，以最小化对骨骼肌生长和健康的遗传影响l组由10个新近性腺切除的雄性和雌性拉布拉多猎犬组成，其被饲喂包含29至30%蛋白质和20%脂肪(对照饮食)的良好均衡的幼犬饮食。2组由10个新近性腺切除的雄性和雌性拉布拉多猎犬组成，其被饲喂添加了10。/。大豆胚粉(SGM)的对照饮食。3组由10个新近性腺切除的雄性和雌性拉布拉多猎犬组成，其被饲喂添加了10%SGM、100ppmL-肉毒碱、和1.5%CLA的对照饮食。SGM含有下列大豆异黄酮17%染料木黄酮、52%大豆黄素和31%黄豆黄素。通过调节它们的饮食摄取饲喂全部幼犬以维持它们的理想的身体条件分数5。该研究持续70周。对全部的狗给予研究前的MER确定。在研究前，和在研究开始的每周直至研究得出结论，对每只动物测量体重。在研究前，和在研究开始的每两个月直至研究得出结论，对每只动物进行下列测量体脂的DEXA测量、瘦体重、骨化学、扩展的曱状腺谱、完全血细胞计数、BMC、腰推骨矿物质含量和腰推骨矿物质密度。在70周的生长研究后，三组之间在体重、瘦体重或体脂中没有观察到差异。在血液化学、扩展的曱状腺傳和完全血细胞计数中测量的全部参数也被确定在正常范围之内。涉及骨骼生长的结果显示于表1-4。在各个实-睑组的各自幼犬的腰推1-7评估BMC和BMD。在表1-4显示结果。总体上，该表显示异黄酮对BMC和BMD的影响。幼犬被饲喂对照々大食(配给1)，具有29至30%蛋白质和20%脂肪；异黄酮饮食(配给2)(添加了10%SGM的对照饮食)；或混合饮食(配给3)(添加了10%SGM、100ppmL-肉毒碱和1.5。/oCLA的对照饮食)。在表中，配给1=对照，配给2=异黄酮，配给3=异黄酮、CLA和L-肉毒碱。参考图表，表l显示在70周的生长研究期间，^:食的大豆异黄酮对性腺切除的生长中的雄性和雌性幼犬(4月龄)腰椎1-4的BMC的影响。通过调节它们的饮食摄取饲喂幼犬以维持它们的理想身体条件分数5。关于该结果，在超过70周的研究中，在对照犬中的BMC增加，但是发现在几乎每次检测时间和在研究的结束，在消费异黄酮或含有异黄酮的混合物々欠食的幼犬中的BMC高于消费对照饮食的幼犬。这些数据清楚表明现存的良好均衡的高质量幼犬饮食不能促进在切除性腺的生长中的雄性和雌性幼犬中的BMC的最佳增长。表2显示在70周的生长研究期间，在切除性腺的生长中的雄性和雌性幼犬(4月龄)中腰推1-4的BMD中的改变。关于该结果，在超过70周的研究中，在对照犬中腰推1-4的BMD增加，但是消费异黄酮或含有异黄酮的混合物饮食的幼犬具有比消费对照饮食的幼犬更高的BMD。这些数据显示现存的良好均衡的高质量幼犬饮食不能促进在切除性腺的生长中雄性和雌性幼犬中的BMD的最佳增长。表3显示在70周的生长研究期间，饮食的大豆异黄酮对在切除性腺的生长中雄性和雌性幼犬(4月龄)中腰推1-4的BMC的影响。关于该结果，在超过70周的研究中，在对照犬中的BMC增加，但是发现在研究结束时，在消费异黄酮或含有异黄酮的混合物饮食的幼犬中BMC高于消费对照饮食的幼犬。值得注意的是，与在腰推l-4中观察到的结果相反(其中在饲喂混合物和异黄酮饮食的狗之间观察到的BMC—般相同)，在腰推4-7中观察到的结果指示大体上饲喂混合物饮食的狗比饲喂异黄酮饮食的狗具有更高的BMC。表4显示在70周的生长研究期间，在切除性腺的生长中的雄性和雌性幼犬(4月龄)中腰推4-7的BMD的改变。关于该结果，在超过70周的研究中，在对照犬中腰推4-7的BMD增加，但是消费异黄酮或含有异黄酮的混合物饮食的幼犬具有比消费对照饮食的幼犬更高的BMD。这些数据显示现存的良好均衡的高质量幼犬饮食不能补偿在切除性腺之后丧失的雌激素的生长促进作用的损失。如结果所示，当幼犬骨骼系统到达成熟时，其不曾获得BMC和BMD的最佳峰。相反，异黄酮或含有异黄酮的混合BMC和BMD)周L1画L4BMC16Ll丄4BMC26Ll丄4BMC34Ll丄4BMC42L1画L4BMC50Ll-L4BMC58Ll丄4BMC66IJ丄4BMC70配给l13.274122.114224.247125.702526.782327.788328.3579SE11.12231.07151.06371.04341.0541.07081.06561.1022表l配给212.615218.996922.672825.292727.054928.157828.799729.0097SE21.12231.07171.06371.04351.05451.07171.06581.1022配给312.869920.261723.781925.786226.838727.503628.345229.0085SE31.08741.03481.03781.02441.0396l細l1.05741.0956周L1画L4BMD16IJ丄4BMD26Ll丄4BMD34Ll丄4BMD42L1-IABMD50Ll丄4BMD58L1"L4BMD66Ll-L4BMD70配给1SE10.70670.028170.8260.027150.88470.026990.920.026590.94040.02680.95420.027140.96990.027030.98110.02776表2配给2SE20.70490.028170.8360.027150.90720.026990.95430.026590.98310.02680.99920.027141.00810.027031.01160.02776配给3SE30.73410.027220.85610.026160.91070.026240.93990.025990.95550.026310.96950.026750.99380.026731.01350.0275表3<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>在说明书中，已经公开了本发明优选的典型实施方案，并且，尽管使用了特殊的术语，其仅以一般和描述性感觉被使用且并非意在限制权利要求中提出的本发明的范围。鉴于以上教导，很明显，本发明的许多修改和变更是可能的。因此应该理解可以在所附权利要求范围之内，不同于具体描述地实践本发明。权利要求1.组合物，其包含以有效量在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的一种或多种异黄酮或其代谢产物。2.权利要求l的组合物，其中该组合物是人食物组合物、宠物食物组合物、或饮食添加物。3.权利要求2的食物组合物，其中该食物组合物包含从约0.1%至约50%的异黄酮或其代谢产物。4.权利要求l的组合物，其中异黄酮包括大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A、或芒柄花素的至少一种。5.权利要求1的组合物，其中异黄酮或其代谢产物是大豆异黄酮或其代谢产物。6.权利要求5的组合物，其中大豆异黄酮代谢产物是牛尿酚。7.权利要求l的组合物，其中该动物是狗或猫。8.权利要求l的组合物，其中该动物是绝经后、雄性更年期后、性腺切除、卵巢切除、或生殖器不完全的动物。9.权利要求1的组合物，还包含DT56a、雄烯二酮、去氢表雄酮(DHEA)、硅、L-肉毒碱、共轭亚油酸和正矽酸的至少一种。10.在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的方法，包括向动物施用包含以有效量在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的一种或多种异黄酮或其代谢产物的组合物。11.权利要求10的方法，其中该组合物是人食物组合物、宠物食物组合物、或饮食添加物。12.权利要求11的方法，其中该食物组合物包含从约0.1%至约50%的异黄酮或其代ilt产物。13.权利要求10的方法，其中异黄酮包括大豆黄素、6-0-丙二酰大豆黄素、6-0-乙酰基大豆黄素、染料木黄酮、6-0-丙二酰染料木黄酮、6-0-乙酰基染料木黄酮、黄豆黄素、6-0-丙二酰黄豆黄素、6-0-乙酰基黄豆黄素、鹰嘴豆素A、或芒柄花素的至少一种。14.权利要求10的方法，其中异黄酮是大豆异黄酮或其代i射产物。15.权利要求14的方法，其中大豆异黄酮代谢产物是牛尿酚。16.权利要求10的方法，其中该动物是绝经后、雄性更年期后、性腺切除、卵巢切除、或生殖器不完全的动物。17.外又利要求10的方法，其中每天向动物施用该组合物。18.权利要求10的方法，其中该组合物还包含DT56a、雄烯二酮、去氢表雄酮(DHEA)、硅、L-肉毒碱、共轭亚油酸和正矽酸的至少一种。19.权利要求10的方法，其中将异黄酮或其代谢产物与一种或多种骨影响物质联合施用。20.权利要求10的方法，其中该动物是狗或猫。21.适合向动物施用包含一种或多种异黄酮或其代谢产物的组合物的试剂盒，该试剂盒，如对于试剂盒组分所合适的，在单个包装中的分开的容器中或在虚拟包装中的分开的容器中包含一种或多种异黄酮或其代谢产物和以下的至少一种(l)一种或多种适合动物消费的成份，(2)—种或多种适合诱导骨生长或抑制骨流失的骨影响物质，(3)关于如何组合异黄酮或其代谢产物和其它试剂盒组分的说明，和(4)关于如何使用异黄酮或其代谢产物和本发明的其它组分的说明。22.交流以下一项或多项的信息或说明以下一项或多项的方法，(l)使用异黄酮或其代谢产物在动物中诱导骨生长或抑制骨流失，(2)混合异黄酮或其代谢产物与本发明的其它组合物，(3)单独的或与本发明的其它元素组合的向动物施用异黄酮或其代谢产物，和(4)使用本发明的试剂盒向动物施用异黄酮或其代谢产物，所述试剂盒包含含有信息或说明的文档、数字存储介质、光存储介质、声音呈现、或视觉呈现。23.权利要求21的方法，选自以下组成的组展示的网站、可视展示报摊、小册子、产品标签、包装说明书、广告、分发的印刷品、公告栏、录音磁带、录像带、DVD、CD-ROM、计算机可读芯片、计算机可读卡、计算机可读磁盘、计算机存储器或其组合。24.制备含有异黄酮或其代谢产物的食物组合物的方法，包括将一种或多种适合动物消费的成份与异黄酮或其代谢产物混合，或将异黄酮或其代谢产物应用于食物组合物。25.异黄酮或其代谢产物在制备药物中的用途，所述药物用于在动物中诱导骨生长或抑制骨流失。全文摘要在动物中诱导骨生长或抑制骨流失有用的组合物，其包含一种或多种异黄酮或异黄酮代谢产物，和使用这样的组合物在动物中诱导骨生长或抑制骨流失的方法。该组合物和方法对于绝经后、雄性更年期后、性腺切除、切除卵巢或生殖器不完全的动物是特别有用的。文档编号A61K31/382GK101389328SQ200780006289公开日2009年3月18日申请日期2007年2月22日优先权日2006年2月28日发明者潘元龙申请人:雀巢技术公司