选择性vpac2受体肽激动剂的制作方法

专利名称：：选择性vpac2受体肽激动剂的制作方法选择性VPAC2受体肽激动剂本发明涉及选择性VPAC2受体肽激动剂。特别地，本发明涉及包含C-末端延伸的选择性VPAC2受体肽激动剂，其包含^J^,列GGPSSGAPPPK(E-C16)。2型糖尿病，或非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)，是糖尿病最常见的形式，影响90%的糖尿病患者。患有NIDDM的患者具有受损的p-细胞功能，导致胰岛素生产不足和/或降低的胰岛素敏感度。如果不控制NIDDM,血液中会积累过多的葡萄糖，导致高血糖症。随着时间推移，可以产生越来越多严重的并发症，包括肾官能障碍、心血管问题、视力丧失、下肢溃烂、神经病和局部缺血。NIDDM的治疗包括改备坎食、运动、控制体重以及使用多种口服药物。通过服用此类口服药物，患有NIDDM的个体可以初步控制他们的血糖水平。然而，这类药物不能减慢NIDDM患者中P-细胞功能的进行性丧失，因此，不足以在疾病晚期控制血糖水平。而且，用目前可获得的药物进行治疗将NIDDM患者暴露在潜在的副作用下，例如低血糖症、胃肠道问题、液体潴留、水肿和/或体重增加。垂体的腺苷酸环化酶活化肽(PACAP)和血管活性肠肽(VIP)与例如促胰液素和胰高血糖素属于同一个肽家族。PACAP和VIP通过三个G蛋白偶联受体作用，并通过cAMP介导的和其它Ca"介导的信号转导途径发挥作用。这类受体已知如PACAP-优选的l型(PAC1)受体(Isobe等人、户印t，110:213-217(2003);Ogi等人，fii》c/^附.Owiw"".，196:1511-1521(1993))和两种VIP-共享的2型受体(VPAC1和VPAC2)(Sherwood等人，五m^ct.及ev.，21:619-670(2000);Hammar等人，尸/^/7"0/及ev，50:265-270(1998);Couvineau等人，/C7^附"278:24759-24766(2003);Sreedharan，等人，祝oc/^肌Owi/w"w"193:546-553(1993);Lutz等人，FE^Si^汰，458:197-203(1999);Adamou等人，必/o由w.及dO附附"".，209:385-392(1995))。在US6,242,563和WO2000/05260中公开了一系列PACAP同源物。PACAP具有与所有三种受体可比较的活性，而VIP选择性的激活两种VPAC受体(Tsuts腿i等人，"/"6麵51:1453-1460(2002))。VIP(Eriksson等人，尸印ftVs^，10:481-484(1989))和PACAP(Filipsson等人，/CEAf，82:3093-3098(1997))在静脉给药时，都已表现出不仅刺激人体胰岛素分泌，而且增加胰高血糖素分泌和肝葡萄糖排出。因此，PACAP或VIP刺激一般不会导致糖血的净改善。PACAP或VIP对多种受体的激活作用还对神经、内分泌腺、心血管、生殖、肌肉和免疫系统具有广泛的生理学效应(Gozes等人，C"/r.Af^/.CAe附.，6:1019-1034(1999))。此夕卜，在大鼠中VIP诱导的水样腹泻显示出仅由VPAC受体之一，VPAC1介导(Ito等人，尸印/,Vifey，22:1139-1151(2001);Tsutsumi等人，Diabetes,51:1453-1460(2002))。另外VPAC1和PAC1受体在a-细胞和肝细胞上表达，因此最有可能涉及肝葡萄糖排出。在毒蜥(好e/ocfe/7M"Sws/;"似附)的唾液分泌物中发现了毒蜥外泌肽-4(Eng等人，/.祝0/.0^附.，267(11):7402画7405(1992))。这是39个#^酸的肽，具有葡萄糖依赖性促胰岛素分泌的活性。WO2000/66629中描述了特殊的加入聚乙二醇的毒蜥外泌肽和毒蜥外泌肽激动肽。WO99/43708中描述了具有至少一个与亲脂取代基连结的氩基酸的毒蜥外泌肽衍生物。最新的研究表明选择性作用于VPAC2受体的肽能够刺激胰腺分泌胰岛素，而不产生胃肠副作用也不增加胰高血糖素的释放和肝葡萄糖排出(Tsutsumi等人，D油to，51:1453-1460(2002))。最初通过修饰的VIP和/或PACAP鉴定选择性作用于VPAC2受体的肽。(见例如，Xia等人，/尸to附歸/i^/777^.,281:629-633(1997);Tsuts腿i等人，Z)/"6由，51:1453-1460(2002);WO01/23420;WO2004/06839.)然而，目前报道过的许多VPAC2受体肽激动剂具有不令人满意的效价、选择性和稳定性i普，会阻碍它们的临床可行性。此外，由于多肽在制剂中的稳定性问题，以及这类多肽在体内短暂的半衰期，许多此类肽都不适合作为商业的候选物。另外，已经鉴定了一些VPAC2受体肽激动剂被二肽基肽酶(DPP-IV)灭活。短的血清半衰期可以妨碍这类激动剂作为治疗剂的应用。因此需要新的治疗，其克服与目前NIDDM药物相关的困难。本发明寻求提供改善的化合物，其对VPAC2受体具有选择性，并且只有存在高血糖水平时才诱导胰脏分泌胰岛素。本发明的化合物是相信也改善(5细胞功能的肽。这类肽可在不引起胃肠(GI)副作用或相应的增加肝葡萄糖排出的条件下具有诱导胰岛素分泌的生理效应，而且与已知的VPAC2受体肽激动剂相比，一般具有增强的选择性、效价和/或体内肽稳定性。根据本发明的第一方面，提供了VPAC2受体肽激动剂，其包含下式的序列Xaai-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Thr-Xaa8-Xaa9-Xaaio-Thr-Xaa12-Xaai3-XaawXaai5画Xaai6-Xaan-Xaa]8-Xaai9画Xaa20國Xaa2i-Xaa22陽Xaa23-Xaa24画Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa3(rXaa3i-Xaa32式1(SEQIDNO:1)其中Xaa,是His、dH或不存在；Xaa2是dA、Ser、Val、Gly、Thr、Leu、dS、Pro或Aib;Xaa3是Asp或Glu;Xaa4是Ala、Ile、Tyr、Phe、Val、Thr、Leu、Trp、Gly、dA、Aib或匪eA;Xaas是Val、Leu、Phe、Ile、Thr、Trp、Tyr、dV、Aib或NMeV;Xaa6是Phe、Ile、Leu、Thr、Val、Trp或Tyr;Xaas是Asp、Glu、Ala、Lys、Leu、Arg或Tyr;Xaa9是Asn、Gln、Glu、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa,o是Tyr、Trp或Tyr(OMe);Xaau是Arg、Lys、hR、Orn、Aib、Ala、Leu、Gln、Phe或Cys;Xaau是Leu、Phe、Glu、Ala、Aib、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaaw是Arg、Leu、Lys、Ala、hR、Orn、Phe、Gln、Aib或Cit;Xaa's是Lys、Ala、Arg、Glu、Leu、Orn、Phe、Gln、Aib、K(Ac)、Cys、K(W)或K(CO(CH2)2SH);Xaaw是Gln、Lys、Ala、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa17是Val、Ala、Leu、Ile、Met、Nle、Lys、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaais是Ala、Ser、Cys或Abu;Xaaw是Ala、Leu、Gly、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或Abu;Xaa加是Lys、Gln、hR、Arg、Ser、Orn、Ala、Aib、Trp、Thr、Leu、Ile、Phe、Tyr、Val、K(Ac)、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaau是Lys、Arg、Ala、Phe、Aib、Leu、Gln、Orn、hR、K(Ac)、Ser、Cys、K(W)、K(CO(CH2)2SH^hC;Xaa22是Tyr、Trp、Phe、Thr、Leu、Ile、Val、Tyr(OMe)、Ala、Aib或Ser;Xaa23是Leu、Phe、Ile、AIa、Trp、Thr、Val、Aib或Ser;XaaM是Gln、Asn、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa2s是Ser、Asp、Phe、Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Gln、Asn、Tyr、Aib、Glu、Cys、K(CO(CH2)2SH)或hC;Xaa26是Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Tyr、Phe、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa27是Lys、hR、Arg、Gln、Orn或dK;XaaM是Asn、Gln、Lys、Arg、Aib、Orn、hR、Pro、dK、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa29是Lys、Ser、Arg、Asn、hR、Cys、Orn或不存在；Xaa加是Arg、Lys、Ile、hR或不存在；Xaa^是Tyr、His、Phe、Gln或不存在；以及Xaa32是Cys或不存在；并且满足，如果Xaa^、Xaa3o、Xaa31或Xaa32不存在，那么下游存在的下一个Mi^肽激动剂序列中的下一个氨基酸；以及，所述激动剂包含C-末端延伸，所述延伸包含下述^J^酸序列GGPSSGAPPPK(EC16)(SEQIDNO:8)其中，C-末端氨基酸可以是酰胺化的。优选地，所述VPAC2受体肽激动剂包含下式的序列His-Ser-Xaa3-Ala-Val-Phe-Thr-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Thr-Xaa12-Xaa13-Xaai4-Xaai5-Xaai6-Xaai7-Xaai8-Xaai9-Xaa20-Xaa2i-Xaa22~Xaa23-X3a24-Xaa25-Xaa26-Xaa27画Xaa28-Xaa29画Xaa30-Xa831-X肌32式2(SEQIDNO:2)其中Xaa3是Asp或Glu;Xaas是Asp、Glu、Ala、Lys、Leu、Arg或Tyr;Xaa9是Asn、Gln、Glu、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa,。是Tyr、Trp或Tyr(OMe);Xaa^是Arg、Lys、hR、Orn、Aib、Ala、Leu、Gln、Phe或Cys;Xaau是Leu、Phe、Glu、Ala、Aib、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa，4是Arg、Leu、Lys、Ala、hR、Orn、Phe、Gln、Aib或Cit;Xaa!s是Lys、Ala、Arg、Glu、Leu、Orn、Phe、Gln、Aib、K(Ac)、Cys、K(W)或K(CO(CH2)2SH);Xaaw是Gln、Lys、Ala、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa17是Val、Ala、Leu、Ile、Met、Nle、Lys、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaais是Ala、Ser、Cys或Abu;Xaaw是Ala、Leu、Gly、Ser、Cys、K(CO(CH;j)2SH)或Abu;Xaa加是Lys、Gln、hR、Arg、Ser、Orn、Ala、Aib、Trp、Thr、Leu、Ile、Phe、Tyr、Val、K(Ac)、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa2,是Lys、Arg、Ala、Phe、Aib、Leu、Gln、Orn、hR、K(Ac)、Ser、Cys、K(W)、K(CO(CH2)2SH)ilhC;Xaa22是Tyr、Trp、Phe、Thr、Leu、Ile、Val、Tyr(OMe)、Ala、Aib或Ser;Xaa23是Leu、Phe、Ile、Ala、Trp、Thr、Val、Aib或Ser;XaaM是Gln、Asn、Ser、Cys、K(CO(CH2);jSH)或K(W);Xaa25是Ser、Asp、Phe、Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Gln、Asn、Tyr、Aib、Glu、Cys、K(CO(CH2)2SH4hC;Xaa26是Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Tyr、Phe、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaar是Lys、hR、Arg、Gln、Orn或dK;Xaa28AAsn、Gln、Lys、Arg、Aib、Orn、hR、Pro、dK、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa29是Lys、Ser、Arg、Asn、hR、Cys、Orn或不存在；Xaa邓是Arg、Lys、Ile、hR或不存在；Xaa^是Tyr、His、Phe、Gln或不存在；以及Xaa32是Cys或不存在；并且满足，如果Xaa29、Xaa30、Xaa31或Xaa32不存在，那么下游存在的下一个M酸是肽激动剂序列中的下一个氨基酸；以及，所述激动剂包含C-末端延伸，所述延伸包含下述^J^酸序列GGPSSGAPPPK(EC16)(SEQIDNO:8)其中，C-末端氨基酸可以是酰胺化的。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa3是Asp或Glu,Xaas是Asp或Glu，Xaa9是Asn或Gln，Xaaw是Tyr或Tyr(OMe)，Xaa,2是Arg、hR、Lys或Orn，Xaa!4是Arg、Gln、Aib、hR、Orn、Cit、Lys、Ala或Leu，Xaa15是Lys、Aib、Orn或Arg，Xaa"是Gln或Lys，Xaa"是Val、Leu、Ala、Ile、Lys或Nle,Xaa^是Ala或Abu，Xaa20是Lys、Val、Leu、Aib、Ala、Gln或Arg,Xaa21是Lys、Aib、Orn、Ala、Gln或Arg，Xaa23是Leu或Aib，Xaa25是Ser或Aib，Xaa27是Lys、Orn、hR或Arg，Xaa28是Asn、Gln、Lys、hR、Aib、Orn或Pro和/或Xaa^是Lys、Orn、hR或不存在。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaas是Glu，Xaap是Gin以及Xaa10是Tyr(OMe)。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa,4或Xaa，s是Aib。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa20或Xaa21是Aib。更优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:1)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa^是Aib和/或Xaa加是Aib。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa12、Xaa21、Xaa27和Xaa28都是Orn。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa,9是Abu。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa23是Aib。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa25是Aib。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂包含式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的序列，其中，Xaa3。、Xaa31和Xaa32不存在。甚至更优选地，Xaa29、Xaa30、Xaa31和Xaa32都不存在。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂是加入聚乙二醇的。PEG分子可以与才艮据本发明第一方面的VPAC2受体肽激动剂上的任何位置的任何Lys、Cys、K(W)或K(CO(CH2)2SH)残基共价连接。VPAC2受体肽激动剂中的任何Lys残基可被取代为K(W)或K(CO(CH2)2SH)，其可以是加入聚乙二醇的。此外，所述肽激动剂中的任何Cys残基可被取代为经修饰的半胱氨酸残基，例如hC。经修饰的Cys残基可与PEG分子共价连接。当有超过一个PEG分子时，可以存在Lys、Cys、K(CO(CH2)2SH)和K(W)的加入聚乙二醇的组合。例如，如果有两个PEG分子，那么一个可以与Lys残基连接，一个可以与Cys残基连接。优选地，PEG分子是分支的。或者，PEG分子可以是线性的。优选的，PEG分子的分子量在1000道尔顿和IOO，OOO道尔顿之间。更优选的，PEG分子是选自10,000、20,000、30,000、40，000、50,000和60,000道尔顿。甚至更优选的，是选自20,000、30,000、40,000或60,000道尔顿。当有两个PEG分子共价连接到本发明的肽激动剂时，每个是1，000至40,000道尔顿且优选的，具有分子量为20,000和20,000道尔顿，10,000和30,000道尔顿，30,000和30,000道尔顿，或20,000和40,000道尔顿。优选地，本发明的VPAC2受体肽激动剂是环状的。可通过内酰胺桥来环化VPAC2受体肽激动剂。优选地，通过将Xaa。上的残基的侧链与Xaan+4上的残基的侧链共价结合来形成内酰胺桥，其中，n是l至28。优选地，n是12、20或21。更优选地，n是21。还优选地，通过Lys或Orn残基侧链与Asp或Glu残基侧链的共价结合来形成内酰胺桥。Lys或Orn残基可被Dab残基取代，所述Dab残基侧链可与Asp或Glu残基的侧链共价连接。或者，还可通过二硫键来环化VPAC2受体肽激动剂。优选地，通过将Xaan上的残基的侧链与Xaan+4上的残基的侧链共价连接来形成二硫键，其中，n是l至28。优选地，n是12、20或21。更优选地，n是21。还优选地，通过Cys或hC残基侧链与另一Cys或hC残基侧链之间的共价连接来形成二硫键。或者，可通过将Xaan上的残基的侧链与Xaan+3上的残基的侧链共价连接来形成内酰胺桥或二硫键，其中，n是l至28。还可通过将Xaai上的残基的侧链与Xaaj+7或Xaaj+8上的残基的侧链共价连接来形成内酰胺桥或二硫键，其中i是l至24。VPAC2受体肽激动剂序列还可在Xaa，之前在肽N-末端包含组氨酸残基。优选地，根据本发明第一个方面的VPAC2受体肽激动剂还包含处于肽激动剂N-末端的N-末端修饰，其中，所述N-末端修饰选自(a)添加D-组氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或正亮氨酸；(b)添加肽，其含有序列Ser-Trp-Cys画Glu-Pro-Gly-Trp-Cys-Arg(SEQIDNO:6),其中Arg与肽激动剂的N端相连；(c)添加C广d6烷基，其用一个或多个独立的选自芳基、d-C6烷狄、-NH2、-OH、卣素和-CF3的取代基任选的取代；(d)添加-C(O)R1，其中W是用独立的选自芳基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卣素、-SH和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的d-C16烷基；用独立的选自C广C6烷基、C2-C6烯基、QrC6炔基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卣素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基；用独立的选自C广Q烷基、C2-C6烯基、CVC6炔基、d画Q烷氧基、隱NH"隱OH、卣素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基C广C4烷基；-NR2R3,其中W和R"虫立的是氢、C广C6烷基、芳基或芳基C广Cj烷基；-OR4,其中W是用独立的选自芳基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卤素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的C广C,6烷基，用独立的选自C广C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卤素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基，用独立的选自C,-C6烷基、QrC6烯基、C2-C6炔基、d-C6烷氧基、-NH2、-OH、卤素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基d-C4烷基；或者5-吡咯烷-2-酮；(e)添加-S02R5，其中R5是芳基、芳基C广Ct烷基或C广Cw烷基；(f)形成用d-C6烷基或-SRM壬选的取代的琥珀酰亚胺基团，其中R6是氢或C广C6烷基；(g)添加甲石克氨酸亚砜；(h)添加生物素基-6-氨基己酸(6-氨基己酸(aminocarproicacid));和(i)添加-C(:NH)-NH2。优选的，N末端修饰是添加选自以下的基团乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、甲硫氨酸、甲硫氨酸亚砜、3-苯基丙酰基、苯乙酰基、苯甲酰基、正亮氨酸、D-组氨酸、异亮氨酸、3-巯丙酰基、生物素基-6-氮基己酸和-C(-NH)-NH2。特别优选的N末端修饰是添加乙酰基或己酰基。本领域技术人员应当明白，包含根据本文所述的式1或式2的肽序列与N-末端修饰的多种组合的VPAC2受体肽激动剂可基于上述公开内容来制造。优选地，根据本发明第一个方面的VPAC2受体肽激动剂包含下述氨基酸序列激动剂SEQIDNO序列P6037C6-HSDAVFTEQY(OMe)TOrnLRAibQLAAbuAibOrnYAibQAiblOrnOrnGGPSSGAPPPK(E-C16)-NH2根据本发明的第二个方面，提供了药物组合物，其包含用于本发明的环状VPAC2受体肽激动剂和一种或多种可药用稀释剂、载体和/或赋形剂。根据本发明的第三个方面，提供了用作为药物的本发明的VPAC2受体肽激动剂。根据本发明的第四个方面，提供了用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或用于遏制食物摄取的、本发明的VPAC2受体肽激动剂。根据本发明的第五个方面，提供了本发明的VPAC2受体肽激动剂用于制造下述药物的用途，所述药物用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或用于遏制食物摄取。根据本发明的另一方面，提供了在需要其的患者中治疗非胰岛素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或遏制食物摄取的方法，所述方法包括施用有效量的、本发明的VPAC2受体肽激动剂。根据本发明的还一个方面，提供了含有本发明的VPAC2受体肽激动剂的药物组合物，所述组合物用于治疗非胰島素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或用于遏制食物摄取。本发明的VPAC2受体肽激动剂具有下述优点它们相对于已知的VPAC2受体肽激动剂而言具有增强的选择性、效价和/或稳定性。在体内，C-末端的棕榈酸基团可能与血清清蛋白结合，由此防止肾过滤以及延长VPAC2受体肽激动剂的生物学作用。本发明的VPAC2受体肽激动剂可以是加入聚乙二醇的。一个或多个PEG分子与VPAC2受体肽激动剂的特定残基的共价连接导致产生较之未加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂而言，具有延长的半衰期和降低的清除率的、具有生物学活性的加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂。本发明的VPAC2受体肽激动剂可以是环状的。较之小冲等大小的线性VPAC2肽受体激动剂而言，环状VPAC2受体肽激动剂具有受限的构象迁移(mobility)，因此环状肽较之线性肽而言具有更少量的允许构象。通过环化来限制线性肽的构象灵活性使得较之线性肽而言增强了受体结合亲和性，增加了选择性，并且提高了蛋白水解稳定性和生物利用性。术语"VPAC2"被用于指特定的受体(Lutz等人，丄e汰，458:197-203(1999);Adamou等人，祝oc/^附.i—一.及仏Cb附附肌，209:385-392(1995))，其能被本发明的激动剂活化。该术语还用于指本发明的激动剂。本发明的"选择性VPAC2受体肽激动剂"或"VPAC2受体肽激动剂，，是能选择性活化VPAC2受体以诱导胰岛素分泌的肽。优选地，本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂的序列具有28至32个天然存在的和/或非天然存在的氨基酸，并且额外包含C-末端延伸，其包含下述氨基酸序列GGPSSGAPPPK(EC16)。"选择性加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂，，或"加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂"是与一个或多个聚乙二醇(PEG)分子或其f汴生物共价连接的选择性VPAC2受体肽激动剂，其中，每个PEG与半胱氨酸或赖氨酸氨基酸，或与K(W)或K(CO(CH2)2SH)残基连接。"选择性环状VPAC2受体肽激动剂，，或"环状VPAC2受体肽激动剂，，是通过肽链中两个氨基酸的侧链之间的共价键连接来环化的选择性VPAC2受体肽激动剂。共价键可以例如是内酰胺桥或者二硫键。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂具有C-末端延伸。本发明的C-末端延伸包含序列GGPSSGAPPPK(E-C16)，并且在所述C-末端延伸的N-末端通过肽键与式1(SEQIDNO:l)或式2(SEQIDNO:2)的^k序列C-末端相连。序列GGPSSGAPPPK(E-C16)是毒蜥外泌肽-4的C-末端序列的变体。C-末端赖氨酸残基具有与其侧链连接的谷氨酸残基，所述谷氨酸残基在a-氨基上被棕榈酸酰化。在本文中使用时，在提到术语C-末端延伸时提到的术语"相连"包括向式1或式2的肽序列的C-末端直接添加或连接上氨基酸或化学基团。任选的，选择性VPAC2受体肽激动剂还可以具有N末端修饰。本文使用的术语"N末端修饰，，包括直接在肽的N端添加或连接氨基酸或化学基团，以及形成化学基团，其与肽的N端的氮结合。N末端j务饰可以包括在VPAC2受体肽激动剂肽序列上添加一个或多个天然存在的或非天然存在的氨基酸，优选的是不超过10个氨基酸，其中一个M酸是更优选的。可以添加到N末端的天然存在的氨基酸包括甲硫氨酸和异亮氨酸。添加到N末端的修饰的氨基酸可以是D-组氨酸。或者，下列氨基酸可以添加到N末端SEQIDNO:6Ser-Trp-Cys-Glu-Pro-Gly-Trp-Cys-Arg，其中，Arg与肽激动剂的N端相连。优选的，添加到N端的任何M酸通过肽键与N端相连。本文中使用的关于N末端修饰的术语"相连"，包括直接在VPAC2受体激动剂的N末端添加或连接氨基酸或化学基团。可以在形成肽键的常规偶联条件下实现上述N末端修饰的添加。还可以通过添加烷基基团(R)，优选的C,-d6烷基基团来修饰肽激动剂的N端，形成(R)NH-。可选的，可以通过添加一组式-C(0)W形成式Rt(0)NH-的酰胺来修饰肽激动剂的N端。添加一组式-C(O)R1可以通过与式WCOOH的有机酸反应来实现。现有技术已经表明了用酰化修饰M酸序列的N端(例如，Gozes等人，J.PharmacolExpTher，273:161-167(1995))。添加一组式-C(O)R1可以导致在N端形成尿素基团(见WO01/23240,WO2004/006839)或氨基甲酸基团。此外，通过添加焦谷氨酸，或6-#J^己酸可以修饰N端。肽激动剂的N端可以通过添加一组式-S02RS来修饰，以在N端形成磺胺基团。肽激动剂的N端也可以通过与琥珀酸酐反应来^务饰，以在N端形成琥珀酰亚胺基团。琥珀酰亚胺与肽N端的氮结合。可以通过添加甲硫氨酸亚砜、生物素基-6-氨基己酸或-C(-NH)-NH2可选的修饰N端。添加-C(-NH)-NH2是胍基化(guanidation)修饰，使N端氨基酸的末端NH2变成-NH-C(-NH)-NH2。本发明的大多数序列，包括N末端修饰和C末端延伸，都含有20个天然存在的氨基酸的标准单字母或三字母代码。使用的其他代码定义如下Ac=乙酰基C6=己酰基d=各M酸的(非天然存在的)D-同种型例如，dA-D-丙氨酸，dS-D-丝氨酸，dK-D-赖氨酸hR=高精氨酸—=未被占据的位置Aib=氨基异丁酸CH2=亚甲基OMe=甲氧基Nle=正亮氨酸NMe=与M酸的a氨基连接的N-甲基，例如，NMeA-N-曱基丙氨酸，NMeV-N-甲基缬氨酸Orn=鸟氨酸K(CO(CH2)2SH)二s-(3，-巯丙酰)-赖氨酸K(W)=s-(L-色氨酰)-赖氨酸Abu=a-氨基-n-丁酸(butyricacid)或2-氨基丁酸(aminobutanoicacid)Cit=瓜氨酸Dab=二^^丁酸(diaminobutyricacid)K(Ac)-s-乙酰赖氨酸PEG=聚乙二醇PEG40K=40,000道尔顿的PEG分子PEG30K=30,000道尔顿的PEG分子PEG20K=20,000道尔顿的PEG分子K(E-C16)=(e-(y-L-谷氨酰基(N-a-棕榈酰))-赖氨酸I-1=内酰胺桥或二石充键VIP作为具有28个氨基酸的单条序列天然存在。但是PACAP作为具有酰胺化的羧基的38个氨基酸的肽(PACAP-38)或27个氨基酸的肽(PACAP-27)存在(Miyata等人，5/rc/ie附及esCo附附ww，170:643-648(19卯))。VIP、PACAP-27和PACAP-38的序列如下所示<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>本文中使用的术语"天然存在的氨基酸"意指人类遗传密码子编码的20个氨基酸(即，20个标准氨基酸)。上述20个l^酸是丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、曱硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。"非天然存在的氛基酸"的实例包括合成的氛基酸和由身体修饰的M酸。其包括D-氛基酸，精氨酸样氨基酸(例如，高精氨酸)，及其它在侧链具有额外亚甲基的氨基酸("高，，氨基酸)，以及修饰的氨基酸(如正亮氨酸、赖氨酸(异丙基)-其中赖氨酸的侧链胺被异丙基修饰)。还包括氨基酸如鸟氨酸，氨基异丁酸和氨基丁酸。本文中使用的"选择性，，指与其它已知受体相比，VPAC2受体肽激动剂对VPAC2受体具有增加的选择性。通过VPAC2受体结合亲和力与VPAC1受体结合亲和力的比值，以及通过VPAC2受体结合亲和力与PAC1受体结合亲和力的比值测定选择性的程度。结合亲和力的测定描述在下文的实施例4中。"促胰岛素活性，，指对升高的葡萄糖水平作出反应，刺激胰岛素分泌的能力，从而导致细胞才聂取葡萄糖和降低血浆葡萄糖水平。可以通过本领域已知的方法评价促胰岛素活性，包括用测量VPAC2受体结合活性或受体活化作用(例如，胰岛素瘤细胞系或胰烏分泌胰岛素、静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)、腹膜内葡萄糖耐量试验(IPGTT)和口服葡萄糖耐量试验(OGTT))的实验。人体内促胰岛素活性的常规测量是通过测量胰岛素水平或C肽水平。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂具有促胰岛素活性。本文中使用的"体外效价"是在基于细胞的测定中对肽活化VPAC2受体的能力的测量。体外效价表示为"ECso"，是在单一剂量反应实验中导致活性50%最大增长的化合物有效浓度。出于本发明的目的，用两种不同的测定确定体外效价DiscoveRx和AlphaScreen。上述测定的其它细节参见实施例3和5。同时，上述测定以不同的方式实施，结果证明了两种测定之间的普遍相关性。术语"血浆半衰期，，指之前在血浆中循环的相关分子一半被清除的时间。替代使用的术语是"消除半衰期"。在血浆半衰期或消除半衰期中使用的术语"延长的，，或"更长的"指如在可比较的条件下确定的，与参照分子(例如，未加入聚乙二醇的形式的肽或天然肽)相比，加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂的半衰期有统计学上的显著增加。本文中报道的半衰期是消除半衰期；其对应于消除的终端对数线性率。本领域的技术人员已知半衰期是推导出的参数，作为清除率和分布容积的函数而变化。清除率是对身体排除药物的能力的测量。当清除率由于例如药物修饰作用而降低时，预期半衰期将增长。然而，只有当分布容积没有改变时，该互反关系才是精确的。等式&-0.693(V/C)给出了终端对数线性半衰期(t,/2)、清除率(C)和容积分布(V)之间有效的近似关系。清除率不表示移除了多少药物，而是表示为了实现消除，必须完全脱离药物的生物流体如血液或血浆的体积。清除率表示为每单位时间的体积。本文中使用的"百分比(％)序列同一性，，用于表示当比对时在相似的位置或区域具有相近的(相同的或保守替换的)氨基酸的序列，其中，相同的或保守替换的M酸是不会改变蛋白活性或功能(较之起始蛋白而言)的那些。例如，相互具有至少85%同一性的两个#^酸序列，在相似的位置上具有至少85%相似(相同或保守替换的残基)，其中当比对时最优允许高达3个空位，条件是关于空位，总共不超过15个氛基酸残基被影响。本文中用于计算百分比序列同一性的参照肽是P603C6謂HSDAVFTEQY(OMe)TOrnLRAibQLAAbuAibOrnYAibQAibIOrnOrnGGPSSGAPPPK(E-C16)-NH2百分比序列同一性可以通过以下来计算确定在本发明涵盖的肽和参照肽如P603(SEQIDNO:7)之间不同的残基数目，获得该数目并以其除以参照肽的M酸数目(例如，P603是39个氮基酸)，结果再乘以一百，并从100中减去得数。例如，有39个氨基酸的序列有4个氨基酸与P603不同，其百分比(％)序列同一性为90%(例如，100-((4/39)xl00))。对于超过39个氨基酸的序列，出于上述计算的目的，与P603序列不同的残基数目将包括超过39个的额外的氨基酸。例如，有40个氣基酸的序列，其中有4个M酸与P603序列中的39个氨基酸不同，并且在氛基端有一个P603序列中不存在的额外的氨基酸，它共有5个氨基酸与P603不同。因此，该序列有87%的百分比(％)序列同一性(例如，100-((5/39)xl00))。可以使用本领域普遍已知的方法确定序列同一性的程度(见例如，Wilbur,W.J.和Lipman，D丄/VocTV"rf.爿ow/.fAS<480:726-730(1983)以及MyersE.和MillerW"Co/w/u^4:11-17(1988))。一个可用来确定相似度的程序是MegAlignLipman-Pearson的单对(onepair)方法(使用缺省参数)，其可以从DNAstar公司，1128，SelfparkStreet,Madison,Wisconsin,53715，USA作为Lasergene系统的部分获得。另一个可以寸吏用的程序是ClustalW。这是由Thompson等人(NucleicAcidsResearch,22(22):4673-4680(1994))开发的用于DNA或蛋白质序列的多序列比对软件包。该工具对于实施相关序列的跨物种比较并观察序列保守性是有效的。ClustalW是用于DNA或蛋白质的常规目的多序列比对程序。它产生不同序列的生物学有意义的多序列比对。它计算选定序列的最佳匹配，将其排列从而可以看出同一性、相似性和差别。通过观看Cladograms或Phylograms可以看出进化关系。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂的序列是选择性用于VPAC2受体，并与P603(SEQIDNO:7)优选的具有在60%至70%、60%至65%、65%至70%、70%到80%、70%至75%、75%至80%、80%至卯％、80%至85%、85%至90%、90%至97%、90%至95%或95%至97%范围内的序列同一性。优选的，序列与P603(SEQIDNO:7)有大于82。/。的序列同一性。更优选的，序列与P603(SEQIDNO:7)有大于90%的序列同一性。甚至更优选的，序列与P603(SEQIDNO:7)有大于92%的序列同一性。还更优选的，序列与P603(SEQIDN0:7)有大于95%的序列同一性或97%的序列同一性。本文中使用的术语"d-d6烷基"意指单价饱和直链、支链或环链的烃基，其具有1至16个碳原子，或者当成环状时，具有3至16个碳原子。因此，术语"C广d6烷基"包括，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正庚基、正辛基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基。d-C,6烷基基团可以用一个或多个取代基任选的取代，所述取代基包括例如芳基、d-C6烷f^、-OH、卤素、-CF3和-SH。本文使用的术语"C广C6烷基"意指单价饱和直链、支链或环链的烃基，其具有1至6个碳原子或者当成环状时，具有3至6个碳原子。因此，术语"C广C6烷基，，包括，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基。C广C6烷基基团可以用一个或多个取代基任选的取代。本文使用的术语"QrC6烯基"意指单价直链、支链或环链的烃基，其具有至少一个双键和2至6个碳原子，或者当成环状时，具有3至6个碳原子。因此，术语"CrC6烯基"包括乙烯基、丙-2-烯基、丁-3-烯基、戊-4-烯基和异丙烯基。C2-C6烯基可以用一个或多个取代基任选的取代。本文使用的术语"CVC6炔基"意指单价直链或支链的烃基，其具有至少一个三键和2至6个碳原子。因此，术语"CVC6炔基"包括丙-2-炔基、丁-3-炔基和戊-4-炔基。C2-C6炔基可以用一个或多个取代基任选的取代。本文使用的术语"d-C6烷氧基，，意指单价不取代的饱和直链或支链的烃基,其具有与二价o基的取代点相连的1至6个碳原子。因此，术语"C广C6烷fL^"包括，例如甲氧基、乙M、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。CVC6烷氧基基团可以用一个或多个取代基任选的取代。术语"鹵"或"卣素"意指氟、氯、溴或碘。当单独使用或作为基团的一部分使用时，术语"芳基"是5至10元的芳香基团或芳香杂环基团，其包括苯基、5或6-元的单环芳香杂环基(其中每元都可以被1、2、3、4或5个取代基任选的取代(取决于可用的取代位置数量))、萘基或8-、9-或10-元二环芳香杂环基(其中每元都可以被l、2、3、4、5或6个取代基任选的取代(取决于可用的取代位置数量))。在芳基该定义中，合适的取代基包括C广C6烷基、CrC6烯基、CVC6炔基、11^、羟基、卤素、-SH和CF3。本文使用的术语"芳基C,-C4烷基"意指用芳基取代的C广C4烷基。因此，术语"芳基d-C4烷基，，包括苯甲基、l-苯乙基(a-甲苄基)、2-苯乙基、1-萘曱基或2-萘曱基。术语"萘基"包括1-萘基和2-萘基。1-萘基是优选的。本文使用的术语"苯甲基"意指通过-CHr基与取代点连接的单价未取代的笨基。本文使用的术语"5-或6-元单环芳香杂环基"意指环内共有5或6个原子的单环芳香基，其中1至4个上述原子是各自独立的选自N、O和S。优选的基团在环内有1或2个原子，其各自独立的选自N、O和S。五元单环芳香杂环基团的实例包括吡咯基(又称azolyl)、呋喃基(furanyl)、瘗吩基、吡唑基(也称lH-吡唑基和l,2-diazolyl)、咪唑基、，噪唑基(又称1，3-噁唑基)、异噁唑基(又称1，2-噁唑基)、噻唑基(又称1，3-噻唑基)、异噻唑基(又称1，2-噻唑基)、三唑基、，懲二唑基、瘗二唑基、四哇基、，嗯三唑基和噢三唑基。6元单环芳香杂环基团的实例包括吡咬基、嘧^&、吡漆基、^i漆基和三漆基。本文使用的术语"8-、9-或10-元二环芳香杂环基团，，意指环系统中共有8、9或10个原子的融合二环芳香基，其中1至4个上迷原子各自独立的27选自N、O和S。优选的基团在环系统内有1至3个原子，它们各自独立的选自N、O和S。合适的8-元二环芳香杂环基包括咪唑并[2，l-bl，3塞唑基、噻吩并[3，2-b噻吩基、噻吩并[2，3-d][l，3]噻哇基和噻吩并[2，3-d]咪唑基。合适的9-元二环芳香杂环基包括吲咪基、异吲味基、苯并呋喃基(又称苯并[b呋喃基)、异苯并呋喃基(又称苯并[c]呋喃基)、苯并瘗吩基(又称苯并[bl噻吩基)、异苯并噻吩基(又称苯并[cl噻吩基)、巧l峻基、苯并咪唑基、1，3苯并噁唑基、1，2-苯并异噁唑基、2，1-苯并异喁唑基、1,3苯并噻哇基、1，2-苯并异噻唑基、2，1-苯并异噻唑基、苯并三唑基、1，2，3-苯并喁二唑基、2，1，3-苯并喷、二唑基、1，2，3-苯并噢二喳基、2，1，3-苯并噢二唑基、瘗汾并吡咬基、嘌呤基(purinyl)和咪唑并[l，2-a吡啶。合适的10-元二环芳香杂环基包括会啉基、异会啉基、噌啉、喹唑啉基、喹喔啉基、1，5-萘啶基(naphthyridyl)、1，6-萘!t^、1，7画萘^^&和本文使用的术语"PEG，，意指聚乙二醇分子。PEG典型的形态是具有末端羟基的线性聚合物，并具有式HO-CH2CH2-(CH2CH20)n-CH2CH2-OH，其中n是从约8至约4000。末端的氢可以用保护基团取代例如烷基或链烷醇基。优选的，PEG具有至少一个羟基基团，更优选的，其是末端的羟基基团。正是该羟基基团优选被活化与肽反应。有多种形式的PEG可用于本发明。本领域存在多种PEG衍生物适合用于本发明。(见例如，美国专利号5445090;5900461;5932462;6436386;6448369;6437025;6448369;6495659;6515100和6514491，以及Zalipsky，S.BioconjugateChem.6:150-165,1995)。在本发明中共价连接VPAC2受体肽激动剂的PEG分子并不意图被限定为特定类型。PEG分子的分子量优选的是500-100,000道尔顿。PEG可以是线性或分支的并且加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂可以有一、二或三个PEG分子与肽连接。更优选的是每个加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂有一个或两个PEG分子，但是，当每个肽分子有一个以上的PEG分子时，优选的是不超过3个。进一步考虑PEG分子的两端可以是同-或异-官能化的，用于将两个或多个VPAC2受体肽激动剂交联在一起。当存在两个PEG分子时，PEG分子优选的是每个20,000道尔顿PEG分子或每个30,000道尔顿分子。但是，也可以4吏用具有不同分子量的PEG分子，例如，一个IO，OOO道尔顿PEG分子和1个30,000PEG分子，或一个20,000道尔顿PEG分子和一个40,000道尔顿PEG分子。PEG分子可与Cys或Lys残基共价连接。PEG分子还可与偶联到Lys残基侧链(K(W))上的Trp残基共价连接。或者，K(CO(CH2)2SH)基团可被加入聚乙二醇，形成K(CO(CH2)2S-PEG)。肽激动剂中的任何Lys残基都可被K(W)或K(CO(CH2)2SH)取代，其进而可,M口入聚乙二醇。此外，肽激动剂中的任何Cys残基可被经修饰的半胱氨酸残基，例如hC取代。经修饰的Cys残基可与PEG分子共价连接。本文中使用的术语"加入聚乙二醇"表示上文所述的一个或多个PEG分子与本发明的VPAC2受体肽激动剂共价连接。本文中使用的术语"内酰胺桥"表示将肽激动剂中一个M酸的侧链氨基末端与肽激动剂中另一氨基酸的侧链羧基末端连起来的共价键，特别是酰胺键。优选地，通过将Xaan上的残基的侧链与Xaan+4上的残基的侧链共价连接来形成内酰胺桥，其中，n是1至28。还优选地，通过Lys或Orn残基的侧链氨基末端与Asp或Ghi残基的侧链氯基末端之间的共价连接来形成内酰胺桥。本文中使用的术语"二硫键"表示将肽激动剂中一个氨基酸的侧链末端上的硫原子与肽激动剂中另一氨基酸的侧链末端上的硫原子连起来的共价键。优选地，通过将Xaan上的残基的侧链与Xaan+4上的残基的侧链共价连接来形成二硫键，其中，n是l至28。还优选地，通过Cys或hC残基的侧链与另一Cys或hC残基的侧链之间的共价连接来形成二硫键。才艮据本发明的一种优选实施方式，提供了下述VPAC2受体肽激动剂，其包含式l(SEQIDNO:1)或式2(SEQIDNO:2)的^i^絲列，其中，Xaa3是Asp或Glu，Xaas是Asp或Glu,Xaa9是Asn或Gln,Xaa^是Tyr或Tyr(OMe)，Xaa12;lArg、hR、Lys或Orn，Xaa"是Arg、Gln、Aib、hR、Orn、Cit、Lys、Ala或Leu，Xaa^是Lys、Aib、Orn或Arg,Xaaw是Gln或Lys，Xaan是Val、Leu、Ala、Ile、Lys或Nle,Xaa19AAla或Abu，Xaa2o是Lys、Val、Leu、Aib、Ala、Gln或Arg,Xaa"是Lys、Aib、Orn、Ala、Gln或Arg，Xaa23是Leu或Aib，Xaa25是Ser或Aib，Xaarz是Lys、Orn、hR或Arg，Xaa2s;>l_Asn、Gln、Lys、hR、Aib、Orn或Pro和/或Xaa29是Lys、Orn、hR或不存在，以及包含C-末端延伸，所述C-末端延伸包含序列GGPSSGAPPPK(E-C16)，以及包含N-末端修饰，所述修饰是己酰基或乙酰基的添加。根据本发明的另一种优选实施方式，提供了下述VPAC2受体肽激动剂，其包含式l(SEQIDNO:1)或式2(SEQIDNO:2)的^J^酸序列，其中，Xaas是Glu，Xaa9是Gln，Xaa，。是Tyr(OMe)，Xaa,2是Orn，Xaals^Aib，Xaa19^Abu，Xaa2(p^Aib，Xaa21是Orn，Xaa23是Aib，Xaa25^Aib，Xaa27是Orn和/或Xaa28是Orn，以及包含C-末端延伸，其包含序列GGPSSGAPPPK(E-C16)，以及包含N-末端修饰，所述修饰是己酰基或乙酰基的添加。根据本发明的另一种优选实施方式，提供了下述VPAC2受体肽激动剂，其包含式2(SEQIDNO:2)的M酸序列，包含序列GGPSSGAPPPK(E-C16)的C-末端延伸以及N-末端修饰，所述修饰是己酰基或乙酰基的添加。本发明基于下iiX现向根据式l或式2的肽序列的C-末端添加包含序列GGPSSGAPPPK(E-d6)的C-末端延伸提供了下述特征所述特征可保护肽，以及可增强活性、选择性和/或效价。例如，C-末端延伸可使得肽的螺旋结构稳定，以及使得位于邻近C-末端的、倾向于被齊d切割的位点稳定。此外，本文公开的C-末端延伸的肽可对于VPAC2受体更具选择性，其可比VIP、PACAP和其它已知的VPAC2受体肽激动剂更有效价。蛋白质的加入聚乙二醇作用可以克服使用肽或蛋白质作为治疗剂相关的许多药理学和毒理学/免疫学的问题。但是，对于任何单个的肽都不确定，与肽的未加入聚乙二醇的形式相比，肽的加入聚乙二醇的形式是否会显著的丧失生物活性。加入聚乙二醇的蛋白质的生物活性可以被以下因素影响，例如i)PEG分子的大小；ii)特定的连接位点；iii)修饰的程度；iv)不利的偶联^Hf;v)连接是否使用接头或者是否聚合物直接连接；vi)有害副产物的产生；vii)活化的聚合物造成的破坏；或viii)电荷的滞留。对细胞因子加入聚乙二醇作用实施的工作展现了例如加入聚乙二醇作用具有的效果。才艮据使用的偶联反应，细胞因子的聚合物修饰导致了生物活性的显著下降[Francis，G.E.等人，(1998)PEGylationofcytokinesandothertherapeuticproteinsandpeptides:theimportanceofbiologicaloptimizationofcouplingtechniques,/"汰/好e附.68:1-18]。维持加入聚乙二醇的肽的生物活性甚至比维持蛋白质的更困难。由于肽比蛋白质小，通过加入聚乙二醇作用的修饰对生物活性可能具有更大的影响。本发明的VPAC2受体肽激动剂可以通过共价的连接一个或多个PEG分子来修饰。由于减慢的蛋白水解降解和肾清除率，加入聚乙二醇的肽一般具有改善的药物动力学谱。加入聚乙二醇作用将增加VPAC2受体肽激动剂的表，见尺寸，从而降低肾滤过和改变生物分布。加入聚乙二醇的作用可以保护VPAC2受体肽激动剂的抗原表位，从而降低网状内皮的清除率和被免疫系统识别，还降低蛋白水解酶如DPP-IV的降解。一个或多个PEG分子与小的、生物学活化的VPAC2受体肽激动剂的共价连接造成了负面影响激动剂的风险，例如，通过使内在的二级结构和生物活性构象不稳定并降低生物活性，从而使激动剂不适合作为治疗剂。一个或多个PEG分子与VPAC2受体肽激动剂的特定残基的共价结合，令人惊奇的获得了生物活化的、加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂，其与未加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂相比，具有延长的半衰期和降低的清除率。为了确定VPAC2受体肽激动剂中潜在的加入聚乙二醇作用位点，可以进行丝氨酸扫描。肽中特定位置的Ser残基被取代，检测Ser-修饰的肽的效价和选择性。如果Ser取代对效价只有最低限度的影响，而且Ser-修饰的肽选择用于VPAC2受体，则然后用Ser残基取代Cys或Lys残基，作为直接或间接的加入聚乙二醇作用位点。残基的间接加入聚乙二醇作用是与加入聚乙二醇作用位点的残基结合的化学基团或残基的加入聚乙二醇作用。Lys的间接加入聚乙二醇作用包括K(W)和K(CO(CH2)2SH)的加入聚乙二醇作用。本文描述的本发明提供了下述VPAC2受体肽激动剂，其可与一个或多个PEG或其衍生物共价连接，其中，每个PEG可与肽激动剂中的Cys或Lys氨基酸、与K(W)或K(CO(CH2)2SH)连接。加入聚乙二醇可增强选择性VPAC2受体肽激动剂的半衰期，使得VPAC2受体肽激动剂具有至少1小时的消除半衰期，优选地，至少3、5、7、10、15、20或24小时，并且最优选地，至少48小时。加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂优选具有200ml/h/kg或更少的清除率值，更优选地，180、150、120、100、80、60ml/h/kg或更少，最优选地，少于50、40或20ml/h/kg。野生型VIP在从第8位的天冬氨酸到第26位的异亮氨酸的区域具有a-螺旋结构。增加肽的螺旋含量将增强效价和选择性，并且同时提高对S^降解的保护。使用C-末端延伸可增强肽的螺H。此外，引入将螺旋表面两个氨基酸的侧链连接起来的共价键，例如内酰胺桥也能增强肽的螺M。此外还发现，对VPAC2受体肽激动剂的N-末端的修饰可增强效价和/或提供针对DPP-IV切割的稳定性。VIP和一些已知的VPAC2受体肽激动剂对多种酶的切割易感，因此其具有短的体内半衰期。下面讨论了VPAC2受体肽激动剂中的多个酶促切割位点。切割位点是相对于VIP(SEQIDNO:3)中的M酸位置来讨论的，它们可应用于本文指出的序列。由二肽基肽酶IV(DPP-IV)对肽激动剂的切割作用发生在位置2(VIP中的丝氨酸)和位置3(VIP中的天冬氨酸)之间。通过添加N末端修饰，致使本发明的激动剂对在该区域的DPP-IV切割更稳定。可以改善对抗DPP-IV切割的稳定性的N末端修饰作用的实例包括添加乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、甲硫氨酸、甲硫氨酸亚砜、3-苯基丙酰基、苯乙酰基、苯甲酰基、正亮氨酸、D-组氨酸、异亮氨酸、3-巯丙酰、生物素基-6-氨基己酸和-C(-NH2)-NH2。优选的，N末端修饰是添加乙酰基或己酰基。在野生型的VIP的氨基酸10和11(酪氨酸和苏氨酸)以及22和23(酪氨酸和亮氨酸)之间有胰凝乳蛋白酶切割位点。使在位置10和/或11以及位置22和/或23的取代可以增加肽在这些位点的稳定性。例如，在位置10和/或22用Tyr(OMe)取代酪氨酸可以增加稳定性。内酰胺桥(例如，将第21和25位上的tt酸侧链连接起来)可保护位点22-23抵抗切割。在野生型VIP12和13位的M酸之间有胰蛋白酶切割位点。一些氨基酸使得肽对该位点的切割较不易感，例如，鸟氨酸位于第12位时。在野生型VIP和本领域已知的许多VPAC2受体肽激动剂中，在位置14和15的碱性氨基酸之间与位置20和21的碱性氨基酸之间有切割位点。因为上述位点的取代，本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂具有改善的体内蛋白水解稳定性。上述位点优选的取代是使肽对胰蛋白酶样酶，包括胰蛋白酶的切割较不易感的取代。例如，位于第15位的氨基异丁酸、位于第20位的氨基异丁酸和位于第21位的鸟氨酸都是优选的取代，其可以产生改善的稳定性。在野生型VIP的第25和26位上的氨基酸之间还存在切割位点。该切割位点可通过对第25位上的氨基酸和/或第26位上的氨基酸的取代完全或部分消除。VPAC2受体肽激动剂中包括第27、28和29位上的氨基酸的区域也对酶切割易感。添加C-末端延伸可使得肽激动剂针对神经内肽酶(NEP)更稳定，这还可增加针对VPAC2受体的选择性。该区域还可被胰蛋白酶样酶攻击。如果这发生的话，肽激动剂可能丢失其具有额外的羧肽酶活性的C-末端延伸，从而导致肽的失活形式。可通过用鸟氨酸取代第27、28和/或29上的氮基酸来增加对该区域的切割的抗性。除了对多种肽酶切割具有抗性的选择性VPAC2受体肽激动剂之外，本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂还可包括下述的肽，所述肽较之本领域已知的一些肽而言具有增强的针对VPAC2受体的选择性、增加的效价和/或增加的稳定性。优选地，选择性的未加入聚乙二醇VPAC2受体肽激动剂具有小于2nM的ECso值。更优选地，ECso值小于lnM。进一步更优选地，ECso小于0.5nM。还更优选地，ECso值小于O.lnM。优选地，选择性的加入聚乙二醇的VPAC2受体肽激动剂具有小于200nM的ECs()值。更优选地，ECso值小于50nM。进一步更优选地，ECs。值小于30nM。还更优选地，ECso值小于lOnM。实施例4描述了用于测定选择性的测定，所述选择性作为VPAC2受体结合亲和性与VPAC1受体结合亲和性之比以及作为VPAC2受体结合亲和性与PAC1受体结合亲和性之比来测定。优选的，本发明的激动剂具有选择性比例，其中对VPAC2受体的亲和力比对VPAC1和/或PAC1受体至少大50倍。更优选的，对VPAC2的亲和力比对VPAC1和/或PAC1至少大100倍。甚至更优选的，对VPAC2的亲和力比对VPAC1和/或PAC1至少大200倍。仍然更优选的，对VPAC2的亲和力比对VPAC1和/或PAC1至少大500倍。更优选的，对VPAC2的亲和力比对VPAC1和/或PAC1的比值至少大1000倍。在本文中使用的"选择性VPAC2受体肽激动剂"还包括本文中描述的化合物的可药用盐。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂可以具有足够的酸性、足够的碱性、或双官能基团，相应的与任意数目的无^威，和无机和有机^应，从而形成盐。一般用于形成酸加成盐的酸是无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等等，和有机酸例如对甲苯磺酸、曱磺酸、草酸、对溴苯-磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸、三氟乙酸等等。该类盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-l，4-二酸盐、己炔-l，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、i羟基丁34酸盐、甘醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-l-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐，等等。碱加成盐包括从无M衍生的，例如铵或碱金属或碱土金属氩氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐，等等。可用于制备本发明的盐的这类碱因此包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化胺、碳酸钾，等等。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂优选的按药物组合物配制。可以4吏用的标准药物配制才支术例如描述在Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,Easton，PA中。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂可以配制为通过口腔、局部、口服、经皮、鼻或肺途径施用，或者用于肠胃外施用。肠胃外施用可包括，例如全身施用如通过肌内、静脉内、皮下、真皮内或腹膜内注射。选择性VPAC2受体肽激动剂可以与作为药物组合物的一部分的可接受的药物载体、稀释剂或赋形剂一起联合向受试者施用，用于治疗NIDDM或以下讨论的疾病。药物组合物可以是溶液，或者如果肠胃外施用，是VPAC2受体肽激动剂的悬液或者VPAC2受体肽激动剂与二价金属阳离子例如锌复合的悬液。合适的药物栽体可以包含惰性成分，其不与肽或肽衍生物相互作用。用于肠胃外施用的合适的药物载体包括，例如无菌水、生理盐水、制菌盐水(含有约0.9%mg/ml苯甲醇的盐水)、磷酸緩沖的盐溶液、Hank溶液、Ringer-乳酸盐等等。合适赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇和甘露醇。本发明的VPAC2受体肽激动剂可以配制成使血浆水平在延长的时间段中维持在有效范围内的施用。有效的口服肽药物递送的主要障碍是低下的生物利用率，这是由于酸和酶造成肽的降解、通过上皮膜的低吸收、以及在暴露于消化道内的酸性pH环境后肽转变为不可溶的形式。肽的口服递送系统例如本发明涵盖的的那些是本领域已知的。例如，VPAC2受体肽激动剂可以用孩史球体包入胶嚢然后口服递送。例如，可以将VPAC2受体肽激动剂包入到由商业上可获得的、生物相容的、生物可降解的聚合物组成的孩吏球体中，多聚(交酯-共-乙交酯)-COOH和橄榄油作为填充物(参见Joseph等人，D,'"&tofeg/"43:1319-1328(2000))。其它类型的孩吏球体技术如来自奥克美斯公司(Alkermes)的Medisorb⑧和Prolease⑧生物可降解的聚合物也是可以商业获得的。Medisorb多聚物可以用任意的交酯异构体产生。交酯乙交酯的比例可以在0:100和100:0之间变动，允许产生宽范围的聚合物性质。这可用于设计具有范围在数周至数月的再吸收时间的递送系统和可植入装置。Emisphere也已发表了多篇讨论肽和蛋白质的口服递送技术的文章。例如，参见Leone-bay等人的W095/28838,其公开了由修饰的^J^酸组成的特殊载体，用来促进吸收。本文中描述的选择性VPAC2受体肽激动剂可用于治疗具有多种疾病和病症的受试者。本发明涵盖的激动剂通过作用于受体，指如VPAC2受体，行使其生物学效应。因此可以用本发明的VPAC2激动剂治疗具有疾病和/或病症的受试者，所述受试者对VPAC2受体刺激或VPAC2受体肽激动剂施用具有有利的反应。这类受试者是所谓的"需要用VPAC2激动剂治疗"或"需要VPAC2受体刺激"。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂可用于治疗糖尿病，包括1型和2型糖尿病(非胰島素依赖型糖尿病或NIDDM)。激动剂还可以用于治疗需要用VPAC2受体激动剂预防疗法的受试者，例如有t艮NIDDM的风险的受试者。该治疗还可以延迟糖尿病和糖尿病并发症的发作。其它可以用本发明的激动剂治疗的受试者包括那些患有葡萄糖耐量降低(IGT)(糖尿病分类的专家委员会(ExpertCommitteeonClassificationofDiabetesMellitus)，Z)/a6"^Owe22(增补1):S5，1999)或空腹葡萄糖异常(IFG)(Charles等人，Z),'fl6"^40:796，1991)的受试者，那些体重超过根据受试者身高和体格的正常体重约25%的受试者，有一位或多位亲代患有NIDDM的受试者，已患有d^瞎尿病的受试者，和患有由于例如降低的内源性胰岛素分泌造成的代谢疾病的受试者。选择性VPAC2受体肽激动剂可用于防止具有葡萄糖耐量降低的受试者继续t艮NIDDM，防止胰腺(5-细胞衰退，诱导p-细胞增殖，改善P-细胞功能，活化休眠的P-细胞，使细胞分化成P-细胞，刺激P-细胞复制，以及抑制P-细胞凋亡。在本发明的方法中使用本发明的激动剂可以治疗或预防的其它疾病和病症包括青春晚期糖尿病(MODY)(Herman等人，D/W"es43:40，1994);成人隐性自身免疫糖尿病(LADA)(Zimmet等人，DZfl^fesA/erf.11:299,1994);:fe^糖尿病(Metzger，Z)/"&tes，40:197，1991);代谢综合症X、血脂异常、高血糖症、高胰島素血症、高甘油三酯血症和抗胰岛素性。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂还可用于治疗糖尿病的继发性原因(糖尿病分类专家委员会(ExpertCommitteeonClassificationofDiabetesMellitus)，"/WefesOi"22(增补1):S5，1999)。该继发性原因包括糖皮质激素过多、生长激素过多、嗜铬细胞瘤和药物引起的糖尿病。可以引起糖尿病的药物包括但不限于，吡甲硝苯脲、烟酸、糖皮质激素类、苯妥英、甲状腺素、P-肾上腺素能药、a-干扰素和用于治疗HIV感染的药物。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂在抑制食物摄取和治疗肥胖症中是有效的。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂也可在预防或治疗例如下述疾病中是有效的，所述疾病例如动脉粥样硬化症、高脂血症、高胆固醇血症、低HDL水平、高血压、原发性肺动脉高压、心血管疾病(包括动脉粥样硬化、冠心病和冠状动脉病)、脑血管病和外周血管病；以及用于治疗狼疮、多嚢性卵巢综合征、癌发生(carcinogenesis)，和增生、雄性和雌性生殖问题、性功能障碍、溃疡、睡眠障碍、脂类和碳水化合物代谢障碍、生理节律功能障碍、生长障碍、能量内稳态障碍、免疫病包括自身免疫病(例如，系统性红斑狼療)，以及急性和慢性炎症、类风湿性关节炎和败血症性休克。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂还可以用于治疗与以下相关的生理障碍例如细胞分化产生脂类聚集细胞，调节例如异常胰腺P-细胞功能、胰腺分泌肿瘤和/或自身免疫低血糖症所涉及的胰岛素灵敏度和血糖水平(其中所述低血糖症是由于对胰岛素的自身抗体、对胰岛素受体的自身抗体或对胰腺P-细胞有刺激的自身抗体)，导致形成粥样硬化斑块的巨噬细胞分化、炎症反应、癌发生、增生、脂肪细胞基因表达、脂肪细胞分化、胰腺p-细胞量下降、胰岛素分泌、组织对胰岛素的灵敏度、脂肪肉瘤细胞生长、多嚢性卵巢病、持续无排卵、雄激素增多症、孕酮产生、类固醇生成、细胞内的氧化还原电位和氧化应激、氧化氮合酶(NOS)产生、y-谷氨酰转肽酶增加、过氧化氢酶、血浆三酰甘油、HDL和LDL胆固醇水平，等等。此外，本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂可以用于治疗津喘(Boliii等人，J/o/w(v附"37:57-66(1995);美国专利号5，677，419;显示多肽R3PO在松弛豚鼠气管平滑肌中起作用)；低血压诱导(VIP在哞喘患者中诱导低血压、心动过速和面潮红(Morice等人，i^/7,iVfes7:279-280(1986);Morice等人，丄做c"2:1225-1227(1983)));用于治疗雄性生殖问题(Siow等人，Arch.Androl.43(1):67-71(1999));作为抗凋亡/神经保护剂(Brenneman等人，iV.K5W.865:207-12(1998));在缺血事件中保护心脏(Kalfin等人，/尸Aflr附"co/.E^.7T^r.1268(2):952陽8(1994);Das等人，j朋.尺K爿ow/.865:297-308(1998));用于调控昼夜节律钟及其相关疾病(Hamar等人，C"/109:497-508(2002);Shen等人，7V"汰爿ccu/.97:11575-80,(2000));作为抗溃疡剂(Tuncel等人，TV.K爿ow/.Sc/.865:309-22，(1998));以及作为AIDS的治疗(Branch，等人，Blood，106:摘要1427,(2005))选择性VPAC2受体肽激动剂的"有效量"是向需要VPAC2受体刺激的受试者施用时，不引起不令人接受的副作用而获得需要的治疗和/或预防效果的量。"需要的治疗效应，，包括一个或多个下列l)与疾病或病症相关的症状的改善；2)延迟与疾病或病症相关的症状的发作；3)与没有治疗相比延长的寿命；和4)与没有治疗相比更好的生活质量。例如，用于治疗NIDDM的VPAC2激动剂的"有效量，，是与没有治疗相比，可获得对血糖浓度的更大控制的量，从而获得糖尿病并发症例如视网膜病、神经病或肾病发作的延迟。用于预防NIDDM的选择性PAC2受体肽激动剂的"有效量，，是与没有治疗相比，可以延迟血糖水平升高的发作的量，所述升高的血糖38水平需要用抗低血糖药物如磺酰脲类、噻唑烷二酮类、胰岛素和/或氯苯P瓜艰唤类(bisguanidines)治疗。施用给受试者的选择性VPAC2受体肽激动剂的"有效量，，也取决于疾病的类型和严重程度，以及受试者的特征，例如一般健康、年龄、性别、体重和药物耐受性。有效的使患者血糖正常化的选择性VPAC2肽受体激动剂的剂量取决于多种因素，其中包括但不限于，受试者的性别、重量和年龄，不能调节血糖的严重程度，施用途径和生物利用率，肽的药物动力学语、效价和配方。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂的典型剂量范围从每日约l照至每日约5000ng。优选地，剂量范围从每日约l照至每日约2500照，更优选的从每日约lHg至每日约1000照。甚至更优选的，剂量范围从每日约5照至每日约100ng。其它优选的剂量范围从每日约lOpg至每日约50照。最优选的，剂量是每日约加照。"受试者，，是哺乳动物，优选的人类，但也可以是动物例如陪伴动物(例如，狗、猫，等等)、农场动物(例如，牛、羊、猪、马，等等)和实验室动物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠，等等)。本发明的选择性VPAC2受体肽激动剂可以用固相肽合成技术的标准方法制备。肽合成仪是可以商业获得，例如Rainin-PTISymphony肽合成仪(Tucson,AZ)。固相合成的试剂是可商业获得的，例如从格莱科派普公司(Glycopep)(Chicago，IL)。固相肽合成仪可用于根据生产商说明书阻断干扰性基团，保护待反应的氨基酸、偶联、去偶联和将未反应氨基酸加帽。通常，在树脂上生长的肽链的a-7V-保护氨基酸和7V^端M^A在室温、惰性溶剂中偶联的，所述惰性溶剂例如在二甲基曱酰胺、N-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷，并有偶联剂(例如二环己基碳二亚胺和l-羟基苯并三唑)和碱(如二异丙基乙胺)的存在。a-AM呆护基团是用试剂如三氟醋酸或哌啶从获得的肽树脂去掉的，并重复与下一个待添加到肽链上的需要的7V-保护氨基酸的偶联反应。合适的胺保护基团是本领域普遍已知的，并描述在伊j如Green和Wuts，"ProtectingGroupsinOrganicSynthesis",JohnWiley和Sons,1991中。实例包括叔丁氧羰基(tBoc)和芴曱氧皿(Fmoc)。选择性VPAC2受体肽激动剂还可以使用叔丁氧羰基-或芴甲氧羰基-a-^J^酸，在适当的侧链保护下用标准自动化固相合成规程合成。在完成合成后，可以通过a-tJ^基团与下述反应完成N末端修饰，所述例如(i)活化酯(使用与上述相似的引入a-iV-保护氨基酸的规程)；(ii)醛，在存在还原剂时(还原性M化步骤)；和(iii)胍基化试剂。然后，从固相支持物上切除肽，并同时用标准氟化氢方法或三氟醋酸(TFA)进行侧链去保护。然后，用在VYDACC18柱上，使用0.1%TEA中的乙腈梯度的反相层析进一步纯化粗肽。为了去除乙腈，从含有0.1。/。TEA、乙腈和水的溶液中冻干肽。通过分析反相层析验证纯度。通过质谱验证肽的特性(Identityofpeptides)。肽可以溶于中性pH的含7jC援沖液中。本发明的肽激动剂还可以用本领域已知的重组方法，4吏用真核和原核细胞宿主制备。一旦制备和纯化出了本发明的肽，就可通过将一个或多个PEG分子与肽中的Cys、Lys、K(W)或K(CO(CH2)2SH)残基共价相连来对其进行修饰。本领域已经描迷了多种方法，来生产与PEG共价缀合的肽，用于本发明的特定方法并不意味着限制(关于综述性文献，参见，Roberts,M.等人^vwi"//De//V^viev/eH^,54:459-476，2002)。可使用的PEG分子的实例是甲ft^-PEG2-MAL-40K,分支的PEG马来酰亚胺(奈克趟"^司(Nektar)，Himtsville，Alabama)。其它实例包括但不限于大的mPEG-SBA-20K(奈克塔公司(Nektar)),mPEG2-ALD-40K(奈克^^司(Nektar))和甲氧基-PEG-MAL-30K(陶氏公司(Dow))0用于制备VPAC2受体肽激动剂的一种方法包括用PEG-马来酰亚胺，将PEG与肽的硫羟基团直接连接。可以通过添加或插入Cys或hC残基到肽的上述位置上或其中来实现硫羟官能团的引入。还可以在肽的侧链上引入疏羟官能团(例如，用含有硫羟基的酸如巯基丙酸酰化赖氨酸的￡-#J基团)。本发明的加入聚乙二醇作用过程使用迈克尔加成(Michaeladdition)形成稳定的硫醚接头。反应是高度特异的并且在温和条件下在其它官能团存在时进行。PEG马来酰亚胺作为反应聚合物用于制备定义明确的、生物活性的PEG-蛋白质缀合物。优选的过程使用相对于PEG马来酰亚胺来说摩尔过量(优选1至10摩尔过量)的含有硫羟基的VPAC2受体肽激动剂来驱动反应完成。优选的在pH4.0和9.0之间室温实施反应10分钟至40小时。通过常规分离方法可方便的分离过量的未加入聚乙二醇的含有硫羟基的肽与加入聚乙二醇的产物。优选的用反相HPLC或大小排阻层析分离VPAC2受体肽激动剂。实施例8中提出了VPAC2受体肽激动剂的加入聚乙二醇作用需要的特定条件。可以用PEG马来酰亚胺或分支的PEG马来酰亚胺实施半胱氨酸加入聚乙二醇的作用。用于对VPAC2受体肽激动剂进行加入聚乙二醇的一种备选方法包括使用PEG-琥珀酰亚胺衍生物来对赖氨酸残基加入聚乙二醇。为实现位点特异性加入聚乙二醇，可将不用于加入聚乙二醇的Lys残基取代为Arg残基。进行加入聚乙二醇的另一手段是通过Pictet-Spengler反应。需要具有其游离胺的Trp残基，以将PEG分子掺入到VPAC2受体选择性肽上。实现此的一种手段是在固相合成其间，通过酰胺键，以位点特异性方式，将Trp残基引入到Lys侧链的胺上(见实施例10)。对VPAC2受体肽激动剂的环化可在溶液或固相支持体上进行。在固相支持体上的环化可在对肽进行固相合成后立即进行。这包括对将在环化中共价连接的氨基酸进行选择性或正交(orthogonal)保护。下面将参考下述非限制性实施例来描述本发明的多种优选特征和实施方式。实施例1-通过固相t-Boc化学过程制备选择性VPAC2受体肽激动剂将约0,5-0.6克(0.38-0.45毫摩尔)BocSer(Bzl)-PAM树脂置于标准60mL反应容器中。在美国应用生物系统7〉司(AppliedBiosystems)ABI430A肽合成仪上运行双偶联。从米德维斯特生物技术公司(MidwestBiotech)(Fishers，IN)获得下列的侧链保护氨基酸(2毫摩尔柱体(cartridge)的Boc氨基酸)并用于合成Arg-甲苯磺酰基(Tos)、Asp-环己基酯(OcHx)、Asp-9-荷甲基(Fm)、Cys-p-甲基苯曱基(p-MeBzl)、Glu-环己基酯(OcHx)、His-节氧基甲基(Bom)、Lys-2-氯苄氧基羰基(2C1-Z)、Lys-9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、Orn-2-氯千氧基羰基(2C1-Z)、Ser-O-二千醚(OBzI)、Thr-O-二千醚(OBzl)、Trp-甲酰基(CHO)、Tyr-2-溴节氧基羰基(2Br画Z)、Boc-Ser(OBzl)PAM树脂和MBHA树脂。三氟乙酸(TFA)、二异丙基乙胺(DIEA)、处于NMP中的1.0M羟基苯并三唑(HOBt)和处于NMP中的1.0M二环己基碳二亚胺(DCC)购自PE应用生物系统公司(PE画AppliedBiosystems(FosterCity,CA))。二甲基甲酰胺(DMF-Burdkk和Jackson)和二氯曱烷(DCM画Mallinkrodt)购自梅斯化学公司(MaysChemicalCo.(Indianapolis,IN))。苯并三唑-l-基國氧-tris-(二甲基氨基)-锛六氟磷酸盐(BOP)从诺瓦生物化学公司(NovaBiochem(SanDiego，CA))获得。使用都是用DCC形成的对称肝或HOBt酯实施标准双偶联。在合成完成时，去掉N端Boc基团，如果序列中存在Trp,用DMF中的20。/。哌咬处理肽基树脂从而对Trp侧链脱甲酰化。为了酰化N端，在肽树脂上加入4倍过量的相应酸的对称酐。用在DCM中二异丙基碳二亚胺(DIC)活化制备对称酐。将反应进行4小时并通过茚三酮检测监控。用DCM洗涤后，将树脂转移到TEFLON反应容器并在真空中干燥。通过反应容器与HF(氢氟酸)装置(潘尼苏拉实验室(PenninsulaLaboratories))的接触进行切割。加入lmL间甲酚每克/树脂，并在预冷的容器中浓缩入lOmLHF(购自AGA公司，Indianapolis,IN)。当存在甲硫氨酸时，则加入lmLDMS每克树脂。反应在冰浴中搅拌l小时。真空去掉HF。残渣悬浮在乙醚中。过滤固体并用乙醚洗涤。将每种肽抽提到含水乙酸中，并且冰冻干燥或者直接上样到反相柱上。在2.2x25cmVYDACC18柱上和緩冲液A(水中含0.1。/。TFA)中进行纯化。在HPLC(沃特氏公司(Waters))上以10mL/分钟运行20%至90%B(乙腈中的0.1%TFA)的梯度120分钟以上，同时在280nm(4.0A)监控UV并且收集一分钟级分。合并适当的级分，冷冻并冻干。用HPLC(0.46x15cmMETASILAQC18)和MALDI质镨分析干燥产物。通过分别用Fmoc和Fm选择性保护赖氨酸残基和天冬氨酸残基的侧VPAC2受体肽激动剂。合成中使用的所有其它M酸都是标准的、苯甲基侧链保护的Boc-氨基酸。在对肽进行固相合成之后，可以立即再在固相支持体上进行环化。Fmoc和Fm保护基团被选择性除去，通过在存在DIEA时用BOP活化天冬氨酸的氛基来进行环化。令反应进行24小时，通过茚三酮检测来监控。实施例2-通过固相Fmoc化学过程制备选择性VPAC2受体肽激动剂在每个反应容器中加入约114mg(50毫摩尔)FMOCSer(tBu)WANG树脂(购自格莱科派普公司(Glycopep)，Chicago,IL)。在RaininSymphony肽合成仪上进行合成。用75mg(S0微摩尔)RinkAmideAM树脂(来普普利莫公司(RappPolymere.)Tuebingen,德国)制备具有C末端酰胺的类似物。下述Fmoc氨基酸购自自格莱科派普公司(Glycopep)(Chicago,IL)和诺华生物化学公司(NovaBiochem)(LaJolla，CA)::Arg-2，2，4，6，7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)、Asn-三苯甲基(Trt)、Asp-(3-叔丁基酯(tBu)、Asp-(3-烯丙基酯(Allyl)、Glu-S-叔丁基酯(tBu)、Glu-S-烯丙基酯(Allyl)、Gln-三苯甲基(Trt)、His-三苯甲基(Trt)、Lys-叔丁氧羰基(Boc)、Lys-烯丙氧基羰基(Aloc)、Orn-烯丙氧基羰基(Aloc)、Ser-叔丁基醚(OtBu)、Thr-叔丁基醚(OtBu)、Trp-叔丁氧基羰基(Boc)、Tyr-叔丁基醚(OtBu)。溶剂二甲基甲酰胺(DMF-Burdick和Jackson)、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷(DCM隱Mallinkrodt)购自梅斯化学公司(MaysChemicalCo.)(Indianapolis,IN)。羟基苯并三唑(HOBt)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、二异丙基乙胺(DIEA)和哌咬(Pip)购自阿尔德里克化学公司(AldrichChemicalCo)(Milwaukee,WI)。苯并三唑-l-基-氧-tris-(二甲基氨基)-锈六氟磷酸盐(BOP)从诺瓦生物化学公司(NovaBiochem(SanDiego,CA))获得。所有的^J^酸都以0.3M溶解在DMF中。用20。/。旅咬/DMF去保护20分钟后，进行三个小时DIC/HOBt活化偶联。在去保护和偶联后用DMF洗涤每个树脂。在最后的偶联和去保护后，用DCM洗涤肽基树脂并在真空的反应容器中干燥。为了N末端酰化作用，向肽树脂上加入4倍过量的相应酸的对称酐。通过在DCM中DIC活化制备对称酐。将反应进行4小时并用茚三酮检测监控。然后用DCM洗涤肽树脂并在真空中干燥。切割反应与切割混合物混合2小时，所述切割混合物由每10mLTFA的0.2mL^f充基甲烷、0.2mL曱醇和0.4mL三异丙基眭烷組成，以上均购自阿尔德里克化学公司(AldrichChemicalCo"Milwaukee,WI)。如果序列中存在Cys,则加入2%乙二>^醇。向TFA滤出物加入糾mL乙醚。沉淀剂在2000rpm离心2分钟。倾去上清。将沉淀重悬在40mL乙醚中，再离心，再倾出，在氮气中干燥，然后真空干燥。0.3-0.6mg的每种产物溶解在lml0.1%TFA/乙腈(ACN)中，其中取20jiL用HPLC分析[0.46xl5cmMETASILAQC18，lmL/分钟，45°C，214nM(0.2A)，A=0.1%TFA，B=0.1%TFA/50%ACN。梯度=50%B至卯％B30分钟以上。在2.2x25cmVYDACC18柱上和緩沖液A(水中的0.1%TFA)中进行纯化。在HPLC(沃特氏公司(Waters))上以10mL/分钟运行20%至90%B(乙腈中的0.1。/oTFA)的梯度120分钟以上，同时在280nm(4.0A)监控UV，并且收集一分钟级分。合并适当的级分，冷冻并冻千。用HPLC(0.46x15cmMETASILAQC18)和MALDI质傳分析干燥产品。通过分别用Aloc和Allyl选择性保护赖氨酸残基和天冬氨酸残基的侧44链，来制备具有将赖氨酸残基和天冬氨酸残基连接起来的内酰胺桥的环状VPAC2受体肽激动剂。合成中使用的所有其它氨基酸都是标准的、叔丁基侧链保护的Fmoc-氨基酸。在对肽进行固相合成之后，可以立即再在固相支持体上进行环化。Aloc和Allyl保护基团被选择性除去，通过在存在DIEA时用BOP活化天冬氨酸的氣基来进行环化。通过固相Fmoc化学过程来制备P603将大约"mg(50微摩尔)聚苯乙烯RinkAmideAM树脂(来普普利莫公司(RappPolymereGmbH,Tubingen,德国))放置于反应容器中。使用RaininSymphony肽合成仪，在自动合成的第一轮合成循环中使用Fmoc-Lys-烯丙氧基羰基(Aloc)。按照上文实施例2所述，进行对肽树脂的延伸。完成对肽树脂的自动延伸(包括C6-N-末端酰化)后，使用处于DCM-乙酸-哌啶(92:5:3，v/v/v)(AldrichChemicalCo"Milwaukee,WI)中的Tetrakis(三苯膦)钯(O)[100微摩尔来人工除去Aloc保护基团，这在25。C进行20分钟。该步骤重复两次。然后用处于DCM中的5%DIEA和处于DMF中的0.03M三水合二乙基二硫代氨基曱酸钠(sodiumdiethyldithiocarbamatetrihydrate)(阿尔德里克化学公司(AldrichChemicalCo.,Milwaukee,WI))来洗aloc去保护的树脂。使用处于DMF中的DIC(500微摩尔)和HOBt(500微摩尔)，人工掺入Fmoc-Glu-a-OtBu酯(500孩傳尔；购自诺瓦生物化学公司(NovaBiochem,LaJolla，CA))，这在25。C进行2小时。随后除去Fmoc之后，使用与针对Fmoc-Glu-a-OtBu酯所用的同样的方法，掺入棕榈酸(500微摩尔；购自阿尔德里克化学公司(AldrichChemicalCo"Milwaukee,WI))。按照实施例2所述来进行从树脂上切割肽以及纯化。实施例3-在人VPAC2受体上的体外效价a篩选在培养瓶中用PBS洗一次细胞(稳定表达人VPAC2受体的CHO-S细胞)。然后用无酶的解离緩冲液漂洗细胞。移除解离的细胞。然后将细胞离心下来，并在刺激緩沖液中洗涤。对每一个数据点，使用50,000个悬浮在刺激緩冲液中的细胞。对于该緩沖液，加入a筛选受体樣沐连同刺激物。孵育该混合物60分钟。加入裂解緩沖液和a筛选供体^K，并将其孵育60至120分钟。在合适的仪器(例如，皮尔金艾尔莫公司(Perkin-Elmer)的AlphaQuest)上读取a筛选信号(指示胞内cAMP水平)。包括a篩选供体和受体微珠的步骤在弱光下实施。从原始信号或基于绝对cAMP水平计算cAMP生成的EC5o，所述绝对cAMP水平用在每块平板上实施的标准曲线确定。每种激动剂的结果都至少来自单次运行中进行的两次分析。对于一些激动剂，结果是一次以上运行的平均值。检测的肽浓度是:10000、1000、100、10、3、1、0丄0.01、0.003、0.001、0.0001和O.OOOOlnM。D,'savd:在测定的前一天，将稳定表i^AVPAC2受体的CHO-S细胞系按50,000细胞/孔接种在96孔微量滴定板上。允许细胞在200jiL培养基中贴壁24小时。在实验当天，去掉培养基。并且洗涤细胞两次。细胞在测定緩沖液加IBMX中室温孵育15分钟。然后，加入刺激物并溶解在测定緩冲液中。刺激物存在30分钟。然后，温和的去掉测定緩冲液。加入DiscoveRxcAMP试剂盒的细胞裂解试剂。然后，使用生产商描述的用于显现cAMP信号的标准规程(迪斯卡Rx有限公司(DiscoveRxInc,)，美国)。从原始信号或基于绝对cAMP水平计算cAMP生成的ECso值，所述绝对cAMP水平用在每块平板上实施的标准曲线确定。肽的一般检测浓度是1000、300、100、10、1、0.3、0.1、0.01、0.001、0.0001和0nM。表1报道了不同测定模式的人VPAC2受体的活性(ECso(nM))。表1.在人VPAC2受体上的肽效价46<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>实施例4-选择性结合测定使用从稳定的VPAC2细胞系(见实施例3)或从经人VPAC1或PAC1瞬时转染的细胞制备的膜。用125I-标记的PACAP-27作为VPAC1和VPAC2，以及PAC1的示踪物，实施滤膜结合测定。用于该测定的溶液和仪器包括预浸液蒸馏水中的0.5。/。聚乙烯胺用于冲洗滤板的緩冲液25mMHEPESpH7,4封闭緩冲液25mMHEPESpH7.4;0.2%无蛋白酶BSA测定緩冲液25mMHEPESpH7.4;0.5。/。无蛋白酶BSA稀释和测定平板PS-Microplate，U型滤板MultiscreenFBOpaque板；1.0pMB型Glasfiber滤膜为了制备滤板，用真空过滤吸去预浸液。平板用200nL沖洗緩冲液沖洗两次。加入200iiL封闭緩冲液到滤板上。然后将滤板与200nL预浸液在室温孵育1小时。在测定平板中^25nL测定緩冲液，25jiL(2.5照)悬浮在测定緩沖液中的膜，25nL在测定緩冲液中的化合物(激动剂)，和"pL在测定緩沖液中的示踪物(约40000cpm)。装好的平板振荡孵育1小时。进行从测定平板到滤板的转移。真空过滤吸去封闭緩冲液，并用冲洗緩冲液洗涤两次。从测定平板转移90nL到滤板。吸去从测定平板转移的90jiL，并用200nL冲洗緩冲液洗涤三次。去掉塑料支持物。在60。C干燥1小时。力口入30jiLMicroscint。计数。实施例5-大鼠VPAC1和VPAC2受体的体外效价Z)/scwd:CHO-PO细胞用可商业获得的转染试剂(英杰生命技术公司(Invitrogen)的Lipofectamine)瞬时转染大鼠VPAC1或VPAC2受体DNA。细胞按10，000/孔的密度接种在96孔平板中，并允许其在200mL培养基中生长3天。在第3天，实施检测。在实验当天，去掉培养基。并且洗涤细胞两次。细胞在测定緩沖、^U口IBMX中室温孵育15分钟。然后，加入刺激物并将其溶解在测定緩沖液中。刺激物存在30分钟。然后，温和的去掉测定緩冲液。加入DiscoveRxcAMP试剂盒的细胞裂解试剂。然后，使用生产商描述的用于显现cAMP信号的标准规程(迪斯卡Rx公司(DiscoveRxInc.)，美国)。从原始信号或基于绝对cAMP水平计算eAMP生成的ECs。值，所述绝对cAMP水平用在每块平板上实施的标准曲线确定。肽的一般检测浓度是1000、300、100、10、1、0.3、0.1、0.01、0.001、0.0001和0nM。实施例6-体内测定静脉葡萄潜耐量试验(7F(7T入普通大鼠禁食过夜，并在实验前麻醉。将血液取样导管插入大鼠。一般在葡萄糖负荷前24h皮下给予激动剂。从颈动脉中取血样。在给予激动剂和葡萄糖注射之前立即取血样。在初始血样后，静脉内(i.v.)注射混合的葡萄糖。给予0.5g/kg体重的葡萄糖负荷，每kg体重注射总量1.5mL有葡萄糖和激动剂的载体。变动肽浓度按叫/kg产生需要的剂量。在给予葡萄糖后的2、4、6和10分钟取血样。动物对照组接受只有葡萄糖但没有加入激动剂的相同载体。在一些实例中，取20和30分钟的葡萄糖后血样。在血样中加入抑酶肽(250-500kIU/ml血)。然后用标准方法分析血浆的葡萄糖和胰岛素。使用储存在PBS中的配制和校准的肽。一般，该储液是预稀释的100nM储液。但是，使用的是具有每mL约lmg激动剂的更浓缩的储液。特定浓度一般是已知的。最大反应中的变异性最主要是由于栽体剂量的变异性。^^呈细节如下物种/品系/体重大鼠/WistarUnilever/约275-300g治疗时程单剂量给药体积/途径1.5mL/kg/静脉内(iv)载体水中的8。/。PEG300、0.1%BSA食物/水方案大鼠在手术前禁食过夜。生活状态参数在测试结束时处死动物。IVGTT:在每组大鼠上实施(具有两根导管，颈静脉和颈动乐l9，戊巴比妥麻醉。葡萄糖静脉内推注在时间=0时作为10%溶液(5mL/kg)的500mg/kg。化合物静脉内(iv):在葡萄糖血液取样前0-240分钟(从颈动脉取300jiL;EDTA作为抗凝剂；抑酶肽和PMSF作为抗蛋白水解物；置于》K上)0、2、4、6和10、20和30分钟。确定的参数胰岛素+葡萄糖毒物动力学在胰岛素测量后剩余的血浆样品保存在-20。C并确定化合物水平。实施例7-大鼠血清的稳定性研究为了确定VPAC2受体肽激动剂在大鼠血清中的稳定性，获得了CHO-VPAC2细胞克隆#6(96孔平^L/50，000细胞/孔，培养1天)、PBSlx(Gibco)、在100nM储液中的用于分析的肽，处死的普通Wistar大鼠的大鼠血清、抑酶肽和DiscoveRx测定试剂盒。在4吏用前将大鼠血清储存在4°C并在两周内4吏用。在第0天，制备两份100nL等分试样的大鼠血清中的10nM肽，通过对于每个等分试样在90nL大鼠血清中加入10fiL肽储液。在这些等分试样之一中加入250klU抑酶肽/mL。有抑酶肽时等分试样储存在4°C。没有抑肽酶时等分试样储存在37°C。将等分试样孵育24小时。第1天，在第0天制备的等分试样孵育24小时之后，制备孵育緩冲液，其中含有PBS+l,3mMCaCl2、1.2mMMgCl2、2mM葡萄糖和0.5mMIBMX。针对研究的每种肽，制备具有血清中经11个连续3x稀释的肽的平板(对于4。C和37。C等分试样)。使用的最大浓度为4000nM。在醉育緩沖液中对含细胞的板洗两次，以每孔50jtL孵育培养基将细胞赙育15分钟。从平板向细胞转移每孔50nL溶液，使用初步筛选提示的最大浓度，一式两份，所述平板是制备的，其对每种所研究肽的4°C和37°C等分试样，具有11个连续3x稀释的肽。该步骤以2为因子稀释了肽浓度。细胞在室温孵育30分钟。去掉上清。加入40pL/孔的DiscoveRx抗体/抽提緩冲液。细胞在振荡器(300rpm)上孵育1小时。然后进行DiscoveRx试剂盒的普通程序。在柱12中包括cAMP标准物。从cAMP测定数据确定EC50值。通过公式ECso,4。c/ECso，37。c估计每种条件的活性肽的剩余量。表537°C在大鼠血清中24小时后的预计狀稳定性<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>1值>100%可代表完整的肽从PEG缀合物释放实施例8-使用基于硫羟基的化学过程的选择性VPAC2受体肽激动剂的加入聚乙二醇作用一般在允许硫醚键形成的条件下进行加入聚乙二醇的反应。特别的，溶液的pH范围在约4至9之间，含有硫羟基的肽的浓度范围在PEG马来酰亚胺浓度的0.7至10摩尔过量之间。一般在室温下进行加入聚乙二醇的反应。然后用反相HPLC或大小排阻层析(SEC)分离VPAC2受体肽激动剂。用分析RP-HPLC、HPLC-SEC、SDS-PAGE和/或MALDI质镨描述加入聚乙二醇的肽类似物的特征。一般通过在一端或两端添加半胱氨酸或高半胱氨酸或含有硫羟基的部分，或者通过在序列中插入半胱氨酸或高半胱氨酸或含有>5克羟基的部分来将硫羟基官能团引入到选择性VPAC2受体肽激动剂中或其上。含有硫羟基的VPAC2受体肽激动剂与40kDa、30kDa或20kDa的PEG马来酰亚胺反应生产与PEG通过硫醚键共价连接的衍生物。实施例9-通过酰化赖氨酸側链的加入聚乙二醇作用为了实现选择性VPAC2受体肽激动剂的位点特异性加入聚乙二醇作用，将除了计划加入聚乙二醇的Lys残基以外的所有Lys残基都转变成Arg残基。可使用的PEG分子为mPEG-SBA-20K(奈克^^>司(Nektar)，批号PT-04E-11)。优选的在室温下进行加入聚乙二醇反应2-3小时。用制备HPLC纯化肽。实施例10-通过Pictet-Spengler反应的加入聚乙二醇作用为了进行通过Pictet-Spengler反应的加入聚乙二醇作用，需要具有其游离胺的Trp残基将PEG分子掺入到选择性VPAC2受体肽激动剂上。实现这的一种方法是将Trp残基偶联到Lys的侧链上。深入的SAR表示该修饰没有改变亲本肽在其体外效价和选择性上的性质。反应使用具有功能性醛的PEG,例如mPEG2-BUTYRALD-40K(奈克备公司(Nektar)，USA)。位点特异性的加入聚乙二醇的作用涉及在PEG和肽之间形成四咔啉环。加入聚乙二醇的作用在冰醋酸中室温进行l至48小时。反应使用1至10摩尔过量的PEG醛。在去掉醋酸后，通过制备RP-HPLC分离VPAC2受体肽激动剂。本发明的其它改变对于本领域技术人员来说是明显的，并不偏离本发明的范围。权利要求1.VPAC2受体肽激动剂，其包含下式的序列Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Thr-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Thr-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Xaa32式1(SEQIDNO1)其中Xaa1是His、dH或不存在；Xaa2是dA、Ser、Val、Gly、Thr、Leu、dS、Pro或Aib；Xaa3是Asp或Glu；Xaa4是Ala、Ile、Tyr、Phe、Val、Thr、Leu、Trp、Gly、dA、Aib或NMeA；Xaa5是Val、Leu、Phe、Ile、Thr、Trp、Tyr、dV、Aib或NMeV；Xaa6是Phe、Ile、Leu、Thr、Va1、Trp或Tyr；Xaa8是Asp、Glu、Ala、Lys、Leu、Arg或Tyr；Xaa9是Asn、Gln、Glu、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH)；Xaa10是Tyr、Trp或Tyr(OMe)；Xaa12是Arg、Lys、hR、Orn、Aib、Ala、Leu、Gln、Phe或Cys；Xaa13是Leu、Phe、Glu、Ala、Aib、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH)；Xaa14是Arg、Leu、Lys、Ala、hR、Orn、Phe、Gln、Aib或Cit；Xaa15是Lys、Ala、Arg、Glu、Leu、Orn、Phe、Gln、Aib、K(Ac)、Cys、K(W)或K(CO(CH2)2SH)；Xaa16是Gln、Lys、Ala、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH)；Xaa17是Val、Ala、Leu、Ile、Met、Nle、Lys、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W)；Xaa18是Ala、Ser、Cys或Abu；Xaa19是Ala、Leu、Gly、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或Abu；Xaa20是Lys、Gln、hR、Arg、Ser、Orn、Ala、Aib、Trp、Thr、Leu、Ile、Phe、Tyr、Val、K(Ac)、Cys或K(CO(CH2)2SH)；Xaa21是Lys、Arg、Ala、Phe、Aib、Leu、Gln、Orn、hR、K(Ac)、Ser、Cys、K(W)、K(CO(CH2)2SH)或hC；Xaa22是Tyr、Trp、Phe、Thr、Leu、Ile、Val、Tyr(OMe)、Ala、Aib或Ser；Xaa23是Leu、Phe、Ile、Ala、Trp、Thr、Val、Aib或Ser；Xaa24是Gln、Asn、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W)；Xaa25是Ser、Asp、Phe、Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Gln、Asn、Tyr、Aib、Glu、Cys、K(CO(CH2)2SH)或hC；Xaa26是Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Tyr、Phe、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W)；Xaa27是Lys、hR、Arg、Gln、Orn或dK；Xaa28是Asn、Gln、Lys、Arg、Aib、Orn、hR、Pro、dK、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W)；Xaa29是Lys、Ser、Arg、Asn、hR、Cys、Orn或不存在；Xaa30是Arg、Lys、Ile、hR或不存在；Xaa31是Tyr、His、Phe、Gln或不存在；以及Xaa32是Cys或不存在；并且满足，如果Xaa29、Xaa30、Xaa31或Xaa32不存在，那么下游存在的下一个氨基酸是肽激动剂序列中的下一个氨基酸；以及，所述激动剂包含C-末端延伸，所述延伸包含下述氨基酸序列GGPSSGAPPPK(E-C16)其中，所述C-末端氨基酸可以是酰胺化的。2.根据权利要求1的VPAC2受体肽激动剂，其包含下式的序列His-Ser-Xaa3-Ala-Val曙Phe画Thr隱Xaa8-Xaa9-XaanrThr-Xaa『Xaa『Xaa14-Xaa15誦Xaai6-Xaan-Xaai8-X3a19-Xaa20-Xaji21一Xaa22誦Xaa23-Xaa24-Xaa25誦Xaa26-Xaa27誦Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xa831-Xaa32式2(SEQIDNO:2)其中Xaa3是Asp或Glu;Xaas是Asp、Glu、Ala、Lys、Leu、Arg或Tyr;Xaa9是Asn、Gln、Glu、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa1()是Tyr、Trp或Tyr(OMe);Xaau是Arg、Lys、hR、Orn、Aib、Ala、Leu、Gln、Phe或Cys;Xaa!3是Leu、Phe、Glu、Ala、Aib、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa,4是Arg、Leu、Lys、Ala、hR、Orn、Phe、Gln、Aib或Cit;Xaa!5是Lys、Ala、Arg、Glu、Leu、Orn、Phe、Gln、Aib、K(Ac)、Cys、K(W)或K(CO(CH2)2SH);Xaaw是Gln、Lys、Ala、Ser、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa"是Val、Ala、Leu、Ile、Met、Nle、Lys、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa!8是Ala、Ser、Cys或Abu;Xaaw是Ala、Leu、Gly、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或Abu;Xaa加是Lys、Gln、hR、Arg、Ser、Orn、Ala、Aib、Trp、Thr、Leu、Ile、Phe、Tyr、Val、K(Ac)、Cys或K(CO(CH2)2SH);Xaa;n是Lys、Arg、Ala、Phe、Aib、Leu、Gln、Orn、hR、K(Ac)、Ser、Cys、K(W)、K(CO(CH2)2SH)或hC;Xaan是Tyr、Trp、Phe、Thr、Leu、Ile、Val、Tyr(OMe)、Ala、Aib或Ser;Xaa23是Leu、Phe、Ile、Ala、Trp、Thr、Val、Aib或Ser;Xaa24是Gln、Asn、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa25是Ser、Asp、Phe、Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Gln、Asn、Tyr、Aib、Glu、Cys、K(CO(CH2)2SH)或hC;Xaa26是Ile、Leu、Thr、Val、Trp、Tyr、Phe、Aib、Ser、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa27是Lys、hR、Arg、Gln、Orn或dK;Xaa28是Asn、Gln、Lys、Arg、Aib、Orn、hR、Pro、dK、Cys、K(CO(CH2)2SH)或K(W);Xaa29是Lys、Ser、Arg、Asn、hR、Cys、Orn或不存在；Xaa3o是Arg、Lys、Ile、hR或不存在；Xaaa是Tyr、His、Phe、Gln或不存在；以及Xaa32是Cys或不存在；并且满足，如果Xaa29、Xaa3G、Xaa3,或Xaa32不存在，那么下游存在的下一个M酸是肽激动剂序列中的下一个氮基酸；以及，所述激动剂包含C-末端延伸，所述延伸包含下述M^列GGPSSGAPPPK(E-C16)其中，C-末端氨基酸可以是酰胺化的。3.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa8是Glu，Xaa9是Gln，并且Xaa,o是Tyr(OMe)。4.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa15是Aib。5.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa20是Aib。6.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa12、Xaa2i、Xaa27和Xaa28都是Orn。7.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa19是Abu。8.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa23是Aib.。9.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa25是Aib。10.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，Xaa29、Xaa3o、Xaa31和Xaa32都不存在。11.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，所述激动剂是加入聚乙二醇的。12.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其中，所述激动剂是环状的。13.根据前述任意一项权利要求的VPAC2受体肽激动剂，其还包含处于肽激动剂N-末端的N-末端修饰，其中，所述N-末端修饰选自(a)添加D-组氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或正亮氨酸；(b)添加肽，其含有序列Ser國Trp-Cys-Glu-Pro陽Gly画Trp-Cys-Arg(SEQIDNO:6)，其中Arg与肽激动剂的N端相连；(c)添加C广d6烷基，其用一个或多个独立的选自芳基、d-C6烷氧基、-NH2、-OH、卤素和-CF3的取代基任选的取代；(d)添加-C(O)R1，其中W是用独立的选自芳基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卣素、-SH和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的d-C,6烷基；用独立的选自C广C6烷基、C2-C6烯基、CVC6炔基、C广C6烷氧基、-NH2、誦OH、卤素和陽CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基；用独立的选自C,-C6烷基、CVC6烯基、QrC6炔基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卣素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基d-C4烷基；-NR2R3，其中112和113独立的是氢、C广C6烷基、芳基或芳基d-C4烷基；-OR4,其中R"是用独立的选自芳基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卤素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的d-d6烷基，用独立的选自d-C6烷基、C2誦C6烯基、CVC6炔基、C广C6烷氧基、-NH2、-OH、卣素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基，用独立的选自C广C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、CrC6烷氧基、-NH2、-OH、卤素和-CF3的一个或多个取代基任选的取代的芳基C广C4烷基；或者5-吡咯烷-2-酮；(e)添加-s02r5，其中r5是芳基、芳基d-C4烷基或C广d6烷基；(f)形成用C广C6烷基或-SI^任选的取代的琥珀酰亚胺基团，其中议6是氢或d-C6烷基；(g)添加甲硫氨酸亚砜；(h)添加生物素基-6-氨基己酸(6-氨基己酸(aminocarproicacid));和(i)添加-<:(=冊)-冊2。14.根据权利要求13的VPAC2受体肽激动剂，其中，所述N-末端修饰是添加选自以下的基团乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、甲硫氨酸、甲硫氨酸亚砜、3-苯基丙酰基、苯乙酰基、苯曱酰基、正亮氨酸、D-组氨酸、异亮氨酸、3-巯丙酰基、生物素基-6-氨基己酸(6画aminocaproicacid)和-C(-NH)-NH2。15.才艮据权利要求14的VPAC2受体肽激动剂，其中，所述N-末端修^饰是添加乙酰基或己酰基。16.根据权利要求1的VPAC2受体肽激动剂，其包含下述氨基酸序列<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>17.药物组合物，其包含根据权利要求1至16中任意一项的VPAC2受体肽激动剂以及一种或多种可药用稀释剂、栽体和赋形剂。18.根据权利要求1至16中任意一项的VPAC2受体肽激动剂，其用作为药物。19.根据权利要求1至16中任意一项的VPAC2受体肽激动剂，其用取。，、，'、'$20.根据权利要求1至16中任意一项的VPAC2受体肽激动剂用于制备下述药物的用途，所述药物用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或用于遏制食物摄取。21.在需要其的患者中治疗非胰岛素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或遏制食物摄取的方法，所述方法包括施用有效量的、根据权利要求1至16中任意一项的VPAC2受体肽激动剂。22.药物組合物，其含有根据权利要求1至16中任意一项的VPAC2受体肽激动剂，所述药物组合物用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病或用于遏制食物摄取。23.基本上如前文参考实施例所述的VPAC2受体肽激动剂。全文摘要本发明涵盖了选择性激活VPAC2受体并用于糖尿病治疗的肽。文档编号A61K38/22GK101437848SQ200780006909公开日2009年5月20日申请日期2007年2月20日优先权日2006年2月28日发明者J·阿尔西纳-费尔南德斯,张连山申请人:伊莱利利公司