专利名称：：四氢姜黄素用于制备抗抑郁药的用途及其固体分散体的制备方法
技术领域：
：本发明涉及四氢姜黄素用于制备抗抑郁药的用途及一种四氢姜黄素固体分散体的制备方法。
背景技术：
：四氢姜黄素(Tetrahydrocurcumin，THC，如下图所示)是姜黄素的主要代谢产物之一，水溶性，稳定性均比姜黄素好。目前主要用于化妆品增白剂、抗衰老保健品和减肥药中的添加剂。H(y^v、0H国外文献报道，四氢姜黄素和姜黄素都具有抗氧化活性，但二者的药理作用有所不同。Sandur等研究发现，四氢姜黄素对TNF诱导的NF-kappaB活化没有抑制作用，抗炎作用弱于姜黄素，抑制细胞生长的作用也比姜黄素弱得多。Pari等的研究显示，四氢姜黄素治疗的糖尿病大鼠，血浆糖化蛋白的水平降低，血浆胰岛素和组织中唾液酸的水平升高，而组织中己糖、己糖胺和岩藻糖维持正常。四氢姜黄素的这一作用强于姜黄素。Murugan等报道，口服四氢姜黄素80mg/kg15天可以显著降低脂质过氧化作用，增强细胞抗氧化保护作用，对依托红霉素诱导的大鼠肝损害有保护作用。Pari等研究发现，四氢姜黄素还可以显著降低血浆尿素和肌酐的水平，使肌3酐清除率恢复正常，减轻氯喹引起的大鼠实验性肾损伤。近年来，还有些文献报道姜黄素具有抗抑郁作用。徐英，库宝善等研究发现5mg/kg和10mg/kg姜黄素可以逆转利血平诱导的小鼠体温下降，结果与对照组差异明显(p<0.05,0.01);5mg/kg和10mg/kg姜黄素能显著增加5-羟色胺酸(5-HTP)诱导的小鼠的甩头次数(p<0.05,0.01);5mg/kg和10mg/kg姜黄素还可以明显拮抗高剂量阿扑吗啡引起的小鼠体温下降，与对照组差异明显(p<0.05,0.01);姜黄素在2.5，5和10mg/kg剂量可以显著增加小鼠脑内5-羟色胺(5-HT)的含量，在10mg/kg剂量可以显著增加小鼠脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的含量，与对照组差异明显(p<0.05)。这些实验结果表明姜黄素具有抗抑郁作用，其作用发挥可能与单胺神经系统有关。(详见《中国临床康复》，2005,9(44):162-164)。此外，王任烨，库宝善等报道姜黄素及原花青素在小鼠行为绝望模型中显示出明显的抗抑郁活性，其作用可能与中枢单胺递质系统有关。姜黄素在慢性应激大鼠模型中亦显示出抗抑郁活性，且其分子机制可能与增强AC-cAMP-CREB信号转导通路的功能有关。(详见《中国药理通讯》，2006，23(4):51-52)。2004年库宝善等对姜黄素的抗抑郁作用这一发明申请了专利。然而四氢姜黄素是否有抗抑郁作用国内外尚未见文献报道。
发明内容本发明的目的之一是提供四氢姜黄素及其固体分散体用于制备抗抑郁药的应用。本发明的另一个目的是提供上述四氢姜黄素固体分散体的制备方法。本发明的另一个目的是提供四氢姜黄素及其固体分散体用于制备抗抑郁的保健品、食品或食品添加剂的应用。四氢姜黄素固体分散体是以四氢姜黄素与表面活性剂两者按一定比例制备成固体分散体。表面活性剂选自下列之一或它们的组合泊洛沙姆188、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯20、聚山梨酯80、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠。表面活性剂优选为泊洛沙姆188。四氢姜黄素固体分散体的制备方法将质量比为1:31:30的四氢姜黄素和表面活性剂加热至完全熔融后，置于0"C-2(TC低温环境中冷冻,然后取出烘干，粉碎，得到四氢姜黄素固体分散体。本发明人通过多种动物实验，包括小鼠强迫游泳实验、小鼠悬尾实验、5-羟色胺酸(5-HTP)诱导的小鼠甩头实验及测定悬尾实验后的小鼠脑组织(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)等神经递质的含量，探讨四氢姜黄素的抗抑郁作用及其机制。动物实验结果显示，在一定剂量范围内，四氢姜黄素的作用强度具有剂量依赖性，其中四氢姜黄素2.5mg/kg和5mg/kg单次给药和连续给药14天均可显著縮短小鼠强迫游泳实验和小鼠悬尾实验的不动时间。这一结果说明，四氢姜黄素可以抵抗行为绝望动物模型小鼠的绝望行为，具有抗抑郁活性，且四氢姜黄素在5mg/kg剂量下的抗抑郁作用与阳性对照药氟西汀80mg/kg相似。四氢姜黄素5mg/kg连续给药14天后，能显著增强5-HTP诱导的小鼠甩头行为，说明四氢姜黄素具有抗抑郁活性且其作用发挥可能与增强5-HT能和/或NE能神经系统功能有关。悬尾实验后小鼠中枢神经递质的测定结果显示，连续给药14天后，四氢姜黄素在产生抗抑郁作用的同时可提高小鼠全脑NE、DA、5-HT的含量，其中5mg/kg和10mg/kg组可以显著增加悬尾实验后小鼠脑组织NE的含量；5mg/kg组可以显著增加小鼠脑组织DA的含量；5mg/kg和10mg/kg组，可以显著增加悬尾实验后小鼠脑组织5-HT的含量。实验结果提示四氢姜黄素的抗抑郁作用可能是通过增加NE、DA、5-HT三种神经递质在全脑神经突触间的含量来实现的。综上，四氢姜黄素具有抗抑郁作用，其作用发挥可能与单胺神经递质系统有关，与氟西汀比较，四氢姜黄素具有毒性低、疗效好的优点。具体实施例方式例1小鼠强迫游泳实验选体重1822g的雄性昆明鼠，在给药后lh放入水深10cm的水缸(25cm高，18cm直径)，水温25'C。观察6min，比较对照组和给药组在后4min内不动时间的差异。在实验前23天，小鼠给予双蒸水并以前述同样的条件先进行初筛，选取后4min内不动时间在70160S的小鼠进行正式实验。将筛选出的60只合格小鼠随机分成6组，每组10只。实验前lh，对照组给予等体积同浓度的赋型剂对照，氟西汀阳性对照组给予氟西汀80.00mg/kg，四氢姜黄素不同剂量组分别给予0.5mg/kg、lmg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg的四氢姜黄素灌胃。另将筛选出的60只合格小鼠随机分成6组，每组10只，观察连续给药的抗抑郁作用。实验前13天每天8:309:OO给药。对照组和氟西汀阳性对照组每天灌胃给予等体积同浓度的赋型剂对照，四氢姜黄素不同剂量组分别给予0.5mg/kg、lmg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg的四氢姜黄素灌胃。第14天，实验前lh，除氟西汀阳性对照组灌胃给予盐酸氟西汀80mg/kg外，其余各组仍按上述方法给药。上述各组给药体积均为0.2ml/10g。实验结果见表l、表2。表1四氢姜黄素单次给药对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响组别齐懂(mg/kg)动物(只)4min不动时间(s)对照组10130.60±28.90氟西汀组80.001089.50±39.60*四氢姜黄素组0.5010119.30±32.201.0010107.50±34.602.501092.90±44.70*5.0010卯.20士25.40**与对照组比较，*:P<0.05，**:P<0.01，下同。四氢姜黄素连续给药14天对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响组别剂量(mg/kg)动物数4min不动时间(s)对照组10143.60±38.87氟西汀组80.001082.50±32.87**四氢姜黄素组0.5010128.20±36.081.0010123.00士40.562.5010107.70±31.88*5.001098.80±26.59**表1、表2显示，在一定剂量范围内，四氢姜黄素作用强度具有剂量依赖性，其中四氢姜黄素2.5mg/kg和5mg/kg单次给药和连续给药14天均可显著縮短小鼠强迫游泳实验的不动时间，提示四氢姜黄素具有抗抑郁活性。例2小鼠悬尾实验选体重1822g的雄性昆明鼠，在给药后lh，将其尾端2cm的部位贴在一水平玻璃棒上，使小鼠成倒挂状态，其头部离台面约5cm，悬挂两侧用板隔开小鼠视7线。观察6min，比较给药组和对照组在后5min内的不动时间。在实验前23天，小鼠给予双蒸水并以前述同样的条件先进行初筛，选取后5min内不动时间在70160S的小鼠进行正式实验。本实验分组和给药同小鼠强迫游泳实验。实验结果见表3、表4。表3四氢姜黄素单次给药对小鼠悬尾实验不动时间的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>四氢姜黄素连续给药14天对小鼠悬尾实验不动时间的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3、表4显示，在一定剂量范围内，四氢姜黄素作用强度具有剂量依赖性,其中四氢姜黄素2.5mg/kg和5mg/kg单次给药和连续给药14天均可显著縮短小鼠悬尾实验的不动时间，提示四氢姜黄素具有抗抑郁活性。例35-HTP诱导的小鼠甩头实验体重1822g的雄性昆明鼠60只，随机分成6组，每组10只。实验给药同连续给药14天的小鼠强迫游泳实验。小鼠末次灌胃给药lh后，腹腔注射5-HTP70mg/kg，10min后开始观察，记录6min内小鼠甩头次数，比较给药组和对照组小鼠甩头次数的差异。实验结果见表5。表5四氢姜黄素对5-HTP诱导的小鼠甩头实验的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表5显示，在一定剂量范围内，四氢姜黄素作用强度具有剂量依赖性，四氢姜黄素5mg/kg连续给药14天后，能显著增强5-HTP诱导的小鼠甩头行为，提示四氢姜黄素具有抗抑郁活性且其作用发挥可能与增强5-HT能和/或NE能神经系统功能有关。例4悬尾实验后小鼠中枢神经递质的测定4.l小鼠悬尾实验用与前述相同的初筛方法筛选出适合做小鼠悬尾实验的小鼠66只并将其随机分成6组，每组11只。实验前13天每天8:309力0给药，对照组每天灌胃给予等体积同浓度的赋型剂对照，氟西汀阳性对照组每天灌胃给予氟西汀4.5mg/kg，四氢姜黄素不同剂量组分别给予lmg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg的四氢姜黄素灌胃。第14天给药后lh，按前述小鼠悬尾实验方法进行实验。上述各组给药体积均为0.2ml/10g小鼠体重。实验结果见表6。表6四氢姜黄素连续给药14天对小鼠悬尾实验不动时间的影响组别剂量(mg/kg)动物数5min不动时间(s)对照组140.27±38.22氟西汀组4.501176.09±33.43**四氢姜黄素组1.0011130.73±31.852.5011117.73±43.685.001198.64±43.16*10.001193.55±35.13**表6显示，在一定剂量范围内，四氢姜黄素作用强度具有剂量依赖性，与对照组比较，四氢姜黄素5mg/kg和10mg/kg连续给药14天均能显著縮短小鼠悬尾实验的不动时间(P<0.05，P<0.01)。4.2悬尾实验后小鼠脑组织NE、DA、5-HT等神经递质含量的测定4.2.1样品处理方法小鼠悬尾试验后24h，将小鼠断头，迅速取出全脑组织，在冰生理盐水中洗去血迹，用滤纸拭干，称重，一7(TC冰箱保存待测。测定前将其从冰箱取出，在室温中解冻，倒入玻璃匀浆器中，加入少量冰冷的0.4mol/lHCL04溶液，在冰浴中上下转动数10次，充分研磨使组织匀浆化(每个脑组织约需68min)，将匀浆液转入Ependet管中，加冰冷的0.4mol/lHCL04溶液适量，涡流2min，置高速冷冻离心机(4°C)内以12000r/min，离心20min，将离心后的上清液转入Ependet管中，再以12000r/min，二次离心15min，取上清液用0.4mol/lHCL04溶液定容至lml，涡流混匀，得样品溶液。4.2.2色谱条件色谱柱<:18色谱柱(ZorbaxeclipseXDBC18，5um，150mmX4.6■i.d)，流动相为0.1mo1/1NaAc(内含0.01mmol/lEDTA-2Na)，用HAc调pH值至5.1,取此缓冲液与甲醇按93:7混合，用0.45um的微孔滤膜过滤，超声脱气，流速为lml/min，进样量10ul/次，发射波长330nm，激发波长290nm。柱温30°C。测定结果见表7、表8、表9。表7四氢姜黄素对悬尾实验后小鼠脑组织NE的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表7显示与对照组比较，四氢姜黄素5mg/kg和10mg/kg连续给药14天可以显著增加悬尾实验后小鼠脑组织NE的含量。表8四氢姜黄素对悬尾实验后小鼠脑组织DA的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表8显示与对照组比较，四氢姜黄素5mg/kg连续给药14天可以显著增加悬尾实验后小鼠脑组织DA的含量。表9四氢姜黄素对悬尾实验后小鼠脑组织5-HT的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表9显示与对照组比较，四氢姜黄素5mg/kg和10mg/kg连续给药14天可以显著增加悬尾实验后小鼠脑组织5-HT的含量。例5四氢姜黄素用于制备抗抑郁药的不同可用剂型的制备5.1片剂四氢姜黄素加适量淀粉，压成片剂，基片重0.5g。5.2胶囊四氢姜黄素与辅料混合后直接填充入胶囊，每粒胶囊相当于0.5g四氢姜黄素。5.3含片四氢姜黄素加入适量山梨醇和水溶性淀粉，压制成舌下含片。5.4固体分散体四氢姜黄素作为原料药，表面活性剂为药物载体，两者按一定比例制备成固体分散体。例6四氢姜黄素用于抗抑郁的保健品、食品或食品添加剂的制备6.1抗抑郁功能的果汁饮料在10公斤纯净水中加入lg的四氢姜黄素及适量芒果、菠萝或橙汁、西番莲和添加剂，做成抗抑郁功能的果汁饮料。6.2抗抑郁症功能的蛋糕在10公斤面粉中加入lg的四氢姜黄素及1公斤鸡蛋和添加剂，做成具有抗抑郁症功能的蛋糕。6.3抗抑郁症功能的饼干或馒头在10公斤面粉中加入lg的四氢姜黄素和添加剂，做成具有抗抑郁症功能的饼干或馒头。权利要求1、四氢姜黄素用于制备抗抑郁药的应用。2、四氢姜黄素固体分散体，其特征在于该固体分散体以四氢姜黄素与表面活性剂按一定比例制备而成。3、根据权利要求2所述的四氢姜黄素固体分散体，其特征在于表面活性剂选自下列之一或它们的组合泊洛沙姆188、聚乙烯吡咯垸酮、聚山梨酯20、聚山梨酯80、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠。4、根据权利要求3所述的四氢姜黄素固体分散体，其特征在于表面活性剂为泊洛沙姆188。5、权利要求2或3或4的四氢姜黄素固体分散体用于制备抗抑郁药的应用。6、权利要求2或3的四氢姜黄素固体分散体的制备方法，其特征在于将质量比为1:31:30的四氢姜黄素和表面活性剂加热至完全熔融后，置于0"C-2(TC低温环境中冷冻，然后取出烘干,粉碎，得到四氢姜黄素固体分散体。7、四氢姜黄素及其固体分散体用于制备抗抑郁保健品、食品或食品添加剂的应用。全文摘要本发明涉及四氢姜黄素用于制备抗抑郁药的用途及一种四氢姜黄素固体分散体的制备方法。本发明的目的在于提供四氢姜黄素用于制备抗抑郁药的应用。四氢姜黄素固体分散体，以四氢姜黄素与表面活性剂两者按一定比例制备成固体分散体。其制备方法为将质量比为1∶3～1∶30的四氢姜黄素和表面活性剂加热至完全熔融后，置于低温环境中冷冻，然后取出烘干，粉碎，得到四氢姜黄素固体分散体。四氢姜黄素及其固体分散体用于制备抗抑郁的药品、保健品、食品或食品添加剂的应用。四氢姜黄素具有抗抑郁作用，其作用发挥可能与影响单胺神经递质系统有关，另外，与氟西汀比较，四氢姜黄素具有毒性低、疗效好的优点。文档编号A61K31/12GK101543486SQ20081007080公开日2009年9月30日申请日期2008年3月25日优先权日2008年3月25日发明者温彩霞,许建华,魏小娟,黄秀旺申请人:福建医科大学