一种海星甾醇固体分散体及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种海星甾醇固体分散体，所述海星甾醇固体分散体由如下制备方法制备得到：S1.将海星粉粹后，加入溶剂浸泡10~20h，加热回流10~15h；S2.将S1中所得加热回流液皂化，萃取，洗涤干燥后即得所述海星甾醇提取物；S3.将S2中所得海星甾醇提取物加入聚乙烯吡咯烷酮，喷雾干燥后即得所述海星甾醇固体分散体。本发明提供的海星甾醇固体分散体具有治疗良性前列腺增生、少精症、高血脂症及高胆固醇症、脱发疾病的疗效，可达到显著的治疗效果，同时具有毒性低的优点。因此，可用于制备治疗前列腺增生、少精症、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病的药物、保健食品、食品添加剂及外用制剂。
【专利说明】
一种海星甾醇固体分散体及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及中药材海星，更具体地，涉及海星留醇固体分散体及其在制备用于治 疗或预防良性前列腺增生、少精症、阳痿、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病药物、保健食品、 食品添加剂以及外用制剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 良性前列腺增生症(Benign Prostatic Hyperplasia,BPH)是前列腺尿道周围细 胞增生，腺体进行性肿大，使前列腺尿道狭窄，引起膀胱尿液流出梗塞。临床表现为尿频、排 尿困难、尿潴留等下尿路症状(LUTS)症状。这是一种常见的男性老年性疾病。50岁以上的男 性大约30 %~50 %的人会出现不同程度的良性前列腺增生，且发病率随着年龄增大而增 加。据报道，70岁~79岁的男性发病率为70%，80岁以上的男性则高达90 %。现有治疗该疾 病的药物以非那留胺(Finasteride，商品名：保列治、保发治）为代表，作用机理是抑制5α-还原酶的活性，抑制前列腺增生以及治疗脱发，存在着造成患者阳痿、少精等副作用。高血 脂症及高胆固醇症与良性前列腺增生常常伴随发生，许多研究表明高血脂症及高胆固醇症 加速良性前列腺增生的发展，同时伴随有少精症出现，有年轻化趋势。因此，研究开发一种 治疗良性前列腺增生、少精症、阳痿、高血脂症及高胆固醇症、脱发疾病药物，而且效果好、 毒副作用小，这对保证老年人健康将具有十分重要的意义。
[0003] 海星是我国海洋中药材，民间有服用海星的习惯，用于药料炖汤用，有"平肝镇惊， 制酸和胃"功效。有专利公开一种从海星中提取海星留体皂甙的方法，使用溶有表面活性剂 的多元醇/水混和溶液作为助溶剂采用超临界C〇2萃取海星皂甙(200410052085.4);有专利 报道从海星萃取多糖、神经酰胺、胺基酸，能确实达到保湿、美白、抗老化等效果 (201410647646.9)，该专利提及的海星物质与本专利申请的物质属于不同类别。还有专利 公开海龙为原料制备固体分散体治疗良性前列腺增生的方法(200710027064.0 )，本专利申 请使用的海星为原料提取的留醇类物质，与海龙使用的物质上是不同。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于根据现有技术中的不足，提供一种海星留醇固体分散体。
[0005] 本发明的另一目的在于提供上述海星留醇固体分散体在制备用于治疗或预防良 性前列腺增生、少精症、阳痿、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病药物、保健食品、食品添加剂 以及外用制剂中的应用。
[0006] 本发明通过如下技术方案实现上述技术目的：
[0007] 本发明提供了一种海星留醇固体分散体，所述海星留醇固体分散体由如下制备方 法制备得到：
[0008] SI.将海星粉粹后，加入溶剂浸泡10~20h，加热回流10~15h;
[0009] S2.将SI中所得加热回流液皂化，萃取，洗涤干燥后即得所述海星留醇提取物；
[0010] S3.将S2中所得海星留醇提取物加入聚乙烯吡咯烷酮，喷雾干燥后即得所述海星 甾醇固体分散体。
[0011] Sl中，溶剂作为一般性溶解试剂使用，海星在上述溶剂中具有一定的溶解度即可。
[0012] 优选地，S3中，所述海星甾醇提取物和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:1~1:40。
[0013] 更优选地，S3中，所述海星留醇提取物和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为（1:4)~（1: 15)。优选地，S1中，溶剂为正己烷，所述海星按0.1~0.5g/ml的比例加入到正己烷中；S2中， 皂化为加入含10 %氢氧化钾的甲醇溶液进行皂化，皂化温度为50~70°C，皂化时间为5~ 6h〇
[0014] 本发明通过对所得海星留醇提取物进行成分检测，其中含有以下结构式的组分：
[0015]
[0016] 本发明另外提供一种甾醇类组合物，包括如下组分：豆甾-5,22-二烯-3β_醇、胆 甾-5，24-二烯-3β-醇、胆甾-7-烯-3β-醇、胆甾-5-烯-3α-醇、胆甾烷-3β-醇、胆甾-5，7-二 烯-3β_醇、麦角留_5，7，22-三烯-3β-醇、麦角留-7，22-二烯-3β-醇、麦角留-7，9，22-三烯-3 醇、?留 _7，22-二稀_3β_醇、麦角留_7_稀_3β_醇、?留_7_稀_3β_醇。
[0017] 优选地，按重量份计，包括如下组分:豆甾-5，22-二烯-3β-醇为1~15份;胆甾-5， 24-二烯-3β-醇为2~15份;胆甾-5-烯-3β-醇为4~20份、胆甾-5-烯-3β-醇为1~10份、胆 甾-7-烯-3β-醇为1~15份;胆甾烷-3β-醇为2~20份;胆甾-5，7_二烯-3β-醇为5~90份;麦 角甾-5，7，22-三烯-3β-醇为5~25份;麦角甾-7，22-二烯-3β-醇为5~25份;麦角甾-7，9， 22-三烯-3β-醇为8~70份;豆留-7，22-二烯-3β-醇为5~25份;麦角留-7-烯-3β-醇为5~25 份;豆留-7-烯-3β-醇为5~25份。
[0018] 优选地，所述留醇类组合物的组分还包括药学上可接受的盐、酯或苷。
[0019] 本发明经实验证明，海星留醇固体分散体对良性前列腺增生、少精症、阳痿、高血 脂症、高胆固醇症疾病、脱发具有良好的疗效，具有毒性低的优点。因此，可用于制备治疗良 性前列腺增生、少精症、阳痿、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病的药物、保健食品、食品添加 剂以及外用制剂的应用中。
[0020]所述的海星用于制备治疗良性如列腺增生、少精症、阳瘦、尚血脂症、尚胆固醇症、 脱发疾病的药物、保健食品、营养补充剂以及外用制剂的应用，是将海星先经粉碎、皂化处 理，有机溶剂萃取提取海星留醇，加入药用辅料聚乙烯吡咯烷酮(PVP Κ30)制备固体分散体 用于制备药物及保健食品。所用海星提取、皂化处理产物加入药用辅料制备固体分散体，加 入常用药剂根据需要制成适当的剂型，片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂或栓剂等，也可 制备口服液、保健酒(药酒），通常以口服方式使用，当然也可以采用其它给药方式;其每天 使用海星留醇剂量一般为约1~50000毫克，成年人常用量为每天10~10000毫克，最常用剂 量为30~3000毫克;每天一次或分数次使用，海星留醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:1~ 1:40,一般为(1:2)~（1:25)，常用比例为(1:3)~（1:15)，最常用剂量为(1:4)~（1:15)。
[0021] 与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
[0022] 本发明提供的海星留醇固体分散体具有对治疗良性前列腺增生、少精症、高血脂 症及高胆固醇症、脱发疾病的疗效，可达到显著的治疗效果，同时具有毒性低的优点，可用 于制备治疗或预防良性前列腺增生、少精症、阳痿、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病药物、 保健食品、食品添加剂以及外用制剂。
【附图说明】
[0023]图1实施例1中得到的海龙甾醇提取物的GC-MS图谱。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1海星固体分散体制备及急性毒性实验
[0025] 一、材料
[0026]实验样品：海星干品（中华五角海星、多棘海盘车、罗氏海盘车，重量各占33.3% )， 由中山大学生命科学学院提供。
[0027]实验动物:NIH系小鼠，由广东省医学实验中心提供。
[0028] 二、方法与结果
[0029] 海星留醇固体分散体制备:海星干品（中华五角海星、多棘海盘车、罗氏海盘车，重 量各1公斤）超微粉碎，正己烷1000 Oml装在烧瓶中冷浸过夜，72°C加热回流12小时，回收溶 剂并转移到圆底烧瓶中，减压干燥后加入1500ml含10%Κ0Η甲醇溶液，摇匀，于60°C水浴充 分皂化，每隔15min摇匀一次，持续反应5-6小时后蒸干甲醇加 400ml蒸馏水稀释，转移到分 液漏斗中摇匀，用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液用饱和NaCl溶液洗涤，加过量无水Na2SO 4干 燥3小时，过滤回收熔剂，蒸干乙醚熔剂即可得到海星留醇提取物89克，经过3次重结晶获得 海星留醇提取物60克，总留醇纯度为85%。取60克海星留醇溶于无水乙醇1000 ml，加入聚乙 烯吡咯烷酮300克，加热溶解，使用小型喷雾干燥机120°C喷雾干燥得到海星留醇固体分散 体346克，海星留醇制得固体分散体后在水溶液中的溶解性比海星留醇提高20倍以上，提示 海星留醇固体分散体比海星留醇具有更好的吸收以及药理功效。
[0030] 海星甾醇提取物的检测：
[0031] 检测条件为:色谱条件
[0032] DSQ II单四极杆气相色谱-质谱联用仪(美国ThermoFisher公司）；
[0033] TG-5SILMS 毛细管柱，30m X 0 · 25mm X 0 · 25μπι;
[0034] 载气:氦气，流量20ml/min;
[0035] 进样器温度280°C，程序升温：80°C进样，保留3min，10min/°C升温至100°C，5°C/ min升至 180°C，2°C/min升温至280°C。
[0036]质谱条件
[0037] 电离方式EI，电子能量70eV，离子源温度250°C，扫描速度3.5842s/sec。
[0038]利用GC-MS对海龙甾醇提取物的成分进行了分析，根据GC-MS图谱(如图1所示)和 甾体裂解规律，再结合文献资料，上述海龙留醇提取物中含有以下成分，见表1所示：
[0039]表 1
[0042]急性毒性实验:选择健康NIH系小鼠，体重20±2g，20只，雌雄各半，将海星留醇固 体分散体配成150mg/ml受试液，对小鼠一次灌胃受试物受试液0.8ml/20g体重，连续观察七 天，小鼠活动敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或异常反应，限于受试物浓度和体积不能再增大， 不能测出其LD 5Q，故进行最大耐受量试验。选择健康小鼠20只，雌雄各半，于24小时内分10次 灌服海星留醇固体分散体受试液（150mg/ml)，每次0.5ml/20g体重，观察7天，此期间让小鼠 自由进食和饮水，小鼠活动敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或异常反应。
[0043] 三、结论
[0044] 小鼠每天灌胃给予海星甾醇固体分散体最大耐受量应不小于0.5X10X0.15X 50 = 37.5g/kg，即海星留醇提取物最大耐受量应不小于6.25g/kg，海星留醇提取物属于实际 无毒级物质。
[0045] 实施例2海星留醇固体分散体治疗良性前列腺增生的作用
[0046] 一 ·材料
[0047] 1.1实验动物:健康昆明小鼠，4周龄，雄性，60只，体重约20克；10天龄胎鼠，20只， 均由广东省医学实验动物中心提供。生理多用仪，上海益联医学仪器发展有限公司提供。
[0048] 1.2实验药品及试剂：阳性对照药:保列治，默沙东（英国）公司，美国默克公司分 部，分装厂家，杭州默沙东制药有限公司;海星甾醇固体分散体(制备方法如实验例1)，由中 山大学生命科学学院提供;酸性磷酸酶(ACP)测试盒，由南京建成生物工程研究所提供;血 清锌测定试剂盒，由温州市东欧生物工程有限公司提供。
[0049] 二.方法与结果
[0050]选取60只健康雄性昆明小鼠饲养一周后，腹腔注射水合氯醛麻醉后，无菌操作剖 开腹部，仔细分离前列腺腹叶，在手术显微镜下用显微镊子向两个前列腺腹叶内各植入1个 16天龄胎鼠的尿生殖窦组织，逐层缝合腹壁。假手术对照组仅用镊子尖端刺入前列腺组织。 分为六个组，分别为假手术对照组、模型组、海星留醇固体分散体低、中、高剂量组、阳性药 物组，每组10只。同时开始给予受试物，每天通过灌胃方式给药，假手术对照组、模型组大鼠 灌胃给予PVP 240mg/Kg体重，海星留醇固体分散体低、中、高剂量小鼠灌胃剂量分别为60、 120、240mg/Kg体重，阳性药物组给予保列治lmg/Kg体重，持续灌胃40天。
[0051] 连续给药40天，第41天称量体重，摘眼取血，离心分离血清，称取前列腺腹叶、背 叶，计算前列腺脏器指数（内脏重量/体重），测定ACP活性、血清锌浓度。T检验统计分析，结 果如表1所示。
[0052] 表1海星留醇固体分散体对尿生殖窦诱导小鼠良性前列腺增生模型的影响（x± S.D.，n = 10)
[0054] 注:与模型对照组比较广P<0 · 01，***P<0 · 001。
[0055] 由实验结果可知，尿生殖窦诱导小鼠良性前列腺增生模型中，模型对照组的前列 腺腹叶及腹叶指数均比正常对照组有明显增加(p〈0.001)，提示良性前列腺增生模型制备 成功。海星留醇固体分散体低、中、高剂量分别对前列腺腹叶及腹叶指数均有明显的降低作 用，呈剂量依赖关系(p〈0.001)，说明海星留醇固体分散体具有治疗良性前列腺增生的药理 作用。
[0056] 实施例3海星留醇固体分散体治疗少精症的作用
[0057] 一 ·材料
[0058]注射用环磷酰胺，广东博宏药业有限公司生产，SCI型计算机辅助精子质量分析， Microptic 公司；
[0059]实验动物:健康昆明小鼠，4周龄，雄性，50只，体重约20克；由广东省医学实验动物 中心提供。
[0060] 二.方法与结果
[0061] 选取50只健康雄性昆明小鼠饲养一周后，随机分为5组，分别为正常组、模型组、海 星甾醇低、中、高剂量组，每组10只。除正常对照组外，各组小鼠每周腹腔注射环磷酰胺 100mg/kg-次，持续五周，正常对照组小鼠每天腹腔注射等剂量的生理盐水。同时开始给予 受试物，每天通过灌胃方式给药，海星留醇固体分散体低、中、高剂量小鼠灌胃剂量分别为 90、180、360mg/Kg体重，每天以灌胃方式进行给药，持续五周。5周后使用精子质量分析仪精 子活力、活率和密度。
[0062]表2海星留醇固体分散体对小鼠少精症模型精子活力、活率和密度的影响（ x*S.D.;n = 10)
[0064] 与模型组比较广*Ρ<0·001。
[0065] 与正常组相比，模型组精子活力、活率和密度显著降低(Ρ〈0.001)，提示环磷酰胺 诱导小鼠少精症模型复制成功。与模型组相比，海星留醇固体分散体低、中、高剂量能够显 著提高精子活力、活率和密度(P〈〇. 001 )，海星留醇固体分散体具有治疗少精症的作用。
[0066] 实施例4海星留醇固体分散体治疗阳痿、高血脂症、高胆固醇症的作用
[0067] 一 ·材料
[0068] 高脂高胆固醇饲料，由中山大学生命科学学院提供;总胆固醇(TC)测定试剂盒，甘 油三酯（TG)测定试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒，低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)测定试剂盒，由中生北控生物科技股份有限公司提供;阳性对照药:保列治，默沙东 (英国）公司，美国默克公司分部，分装厂家，杭州默沙东制药有限公司。
[0069]实验动物:健康SD大鼠，60只，体重约200克；由广东省医学实验动物中心提供。 [0070] 二、方法与结果
[0071] 60只雄性SD大鼠，经10%水合氯醛生理盐水溶液腹腔注射麻醉后在无菌条件下进 行睾丸切除手术。其中10只雄性大鼠，切开阴囊皮肤，分离但不切除睾丸，再缝合，作为假手 术组;所有大鼠每天肌肉注射青霉素7.14万单位/kg体重，治疗4天，恢复一周。分为六个组， 分别为假手术对照组、模型组、海星留醇固体分散体低、中、高剂量组、阳性药物组，每组10 只。除假手术对照组大鼠喂养普通饲料，其余动物喂养高脂高胆固醇饲料，同时开始给予受 试物，每天通过灌胃方式给药，假手术对照组、模型组大鼠灌胃给予PVP 200mg/Kg，海星甾 醇固体分散体低、中、高剂量小鼠灌胃剂量分别为50、100、200mg/Kg体重，阳性药物组给予 保列治lmg/Kg体重，连续灌胃60天。
[0072] 第61天进行大鼠阴茎电刺激实验，调整生理多用仪参数：电压50V，频率30Hz，波宽 0.2ms，幅度1，将生理多用仪的电极至于大鼠阴茎部位，给予局部电刺激，测量从电刺激开 始到阴茎勃起的间隔时间，即为勃起潜伏期。取血分离血清，测定TC、TG、HDL-C和LDL-C含 量。
[0073]表3海星留醇固体分散体对良性前列腺增生、阳痿、高血脂症、高胆固醇症模型的 作用（^S.D., n = 10)
[0075] 与模型组比较广Ρ<〇 · 05广Ρ<0 · 01
广，<0 · 001。
[0076]与假手术组相比，模型组大鼠前列腺背叶均显著增加 (ρ〈0.001)，模型组大鼠阴茎 勃起潜伏期显著增加 (Ρ〈〇. 001)，模型组大鼠血清TC、TG、和LDL-C含量显著增加 (ρ〈0.001)， HDL-C含量显著减少(p〈0.001 )，提示良性前列腺增生、阳痿、高血脂高胆固醇症模型建立成 功，海星甾醇低、中、高剂量组能够显著降低前列腺背叶指数(Ρ〈〇.001)，降低大鼠血清TC、 TG、和LDL-C含量（ρ〈0.001)，海星甾醇中、高剂量能够显著升高HDL-C含量（ρ〈0.05, ρ〈 0.01)，提示海星留醇对前列腺增生、阳痿、高血脂、高胆固醇症具有治疗作用。
[0077] 实施例5海星留醇固体分散体治疗脱发的作用
[0078] 一 ·材料
[0079] 1.1海星甾醇固体分散体(海星甾醇:PVP比例为1: 10)，由中山大学生命科学学院 提供;使用时用无水乙醇配成含有海星留醇5mg/50ml浓度，每次喷涂脱发处均湿润为适量， 每天早午晚各喷涂1次。
[0080] 二·方法与结果
[0081 ]选取全头性圆形脱发患者60例，其中男性38例，女性22例，年龄40岁至60岁，试用 90天，生发出硬发者42例，生发出硬发浓密者38例，试用180天，生发生出硬发者57例，生发 出硬发浓密者48例，总有效率95%，显效率80%，无效率5%，提示海星留醇固体分散体具有 治疗脱发的作用。
【主权项】
1. 一种海星留醇固体分散体，其特征在于，所述海星留醇固体分散体由如下制备方法 制备得到：51. 将海星粉粹后，加入溶剂浸泡10~20h，加热回流10~15h;52. 将S1中所得加热回流液皂化，萃取，浓缩、洗涤干燥后即得所述海星留醇提取物；53. 将S2中所得海星留醇提取物加入聚乙烯吡咯烷酮，喷雾干燥后即得所述海星甾醇 固体分散体。2. 根据权利要求1所述的海星留醇固体分散体，其特征在于，S3中，所述海星留醇提取 物和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:1~1:40。3. 根据权利要求1所述的海星留醇固体分散体，其特征在于，S3中，所述海星留醇提取 物和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为（1:4M 1:15)。4. 根据权利要求1所述的海星留醇固体分散体，其特征在于，S1中，溶剂为正己烷，所述 海星按0.05~0.3g/ml的比例加入到正己烧中；S2中，皂化为加入含10%氢氧化钾的甲醇溶液 进行皂化，皂化温度为50~70°C，皂化时间为5~6h。5. 权利要求1至4任一所述海星留醇固体分散体在制备用于治疗或预防良性前列腺增 生、少精症、阳痿、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病药物、保健食品、食品添加剂及外用制剂 中的应用。6. -种甾醇类组合物，其特征在于，包括如下组分：豆甾-5, 22-二烯-3β-醇、胆甾-5， 24-二烯-3β-醇、胆留-7-烯-3β-醇、胆留-5-烯-3α-醇、胆留烷-3β-醇、胆留-5，7-二烯-3β-醇、麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇、麦角甾-7，9，22-三烯-3β-醇、?留，22-二稀_3β_醇、麦角留_7_稀_3β_醇、?留_7_稀_3β_醇。7. 根据权利要求6所述的留醇类组合物，其特征在于，按重量份计，包括如下组分:包括 如下组分:豆留-5, 22-二烯-3β-醇为1~15份;胆留-5, 24-二烯-3β-醇为2~15份;胆甾-5-烯-3β_醇为4~20份、胆留-5-烯-3β-醇为1~10份、胆留-7-烯-3β-醇为1~15份;胆留烷-3β-醇 为2~20份;胆留-5，7-二烯-3β-醇为5~90份；麦角留_5,7，22-三烯-3β-醇为5~25份；麦 角甾-7, 22-二烯-3β-醇为5~25份；麦角甾-7, 9, 22-三烯-3β-醇为8~70份;豆甾-7，22-二烯-3β-醇为5~25份;麦角留-7-烯-3β-醇为5~25份;豆留-7-烯-3β-醇为5~25份。8. 权利要求6或7所述的留醇类组合物在制备用于治疗或预防良性前列腺增生、少精 症、阳痿、高血脂症、高胆固醇症、脱发疾病药物、保健食品、食品添加剂以及外用制剂中的 应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述留醇类组合物的组分还包括药学上可 接受的盐、酯或苷。
【文档编号】A23L33/10GK105963324SQ201610304291
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】许东晖, 梅雪婷
【申请人】中山大学