专利名称：聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种聚合物，尤其是涉及一种双嵌段聚合物聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸 钠)作为杀微生物剂用于抑制艾滋病病毒(HIV-1)在生殖系统的感染，或作为外用避孕药。
背景技术：
艾滋病传染性强，危害大。经性接触感染是HIV-1传播的主要方式，占全球HIV感染总 数的80% 90%。杀微生物剂是性生活前应用于阴道或直肠内，能够直接杀灭或中和HIV-1 等病原体的、人工合成的或天然的物质。已有预防HIV-1传播的杀微生物剂上市，更多的进 入临床i式验(1 、 Klasse, P. J.; Shattock, R.; Moore, J. P., Antiretroviral drug-based microbicides to prevent HIV陽l sexual transmission.」""w及ev Met/ 2008， 59， 455-471 )。 艾滋病患者的精子与 HIV病毒是结合在一起的，而且精子可以促进HIV-l病毒的感染(2、 Scofield, V. L.; Clisham, P. R.; Raghupathy, R. R., Sperm as activating cofactors in HIV sexual transmission. Ac/^/DS 1991， 5 (1 2)， 11-20)。由于性传染艾滋病和人的精子受孕都是在生殖系统内进行(3、 Doncel， G. F., Exploiting common targets in human fertilization and HIV infection: development of novel contraceptive microbicides. //ww i e/ TOif L^d加e 2006， 12 (2)， 103-117)，因此兼有杀精子作用的 新型高效杀微生物剂是具有潜在的应用前景和广泛市场。我们发现聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-
马来酸钠)纳米颗粒抑制HIV-1对T细胞的感染；与精子有很强的结合力，可以抑制精子参与
受孕。
发明内容
本发明的目的在于提供一种聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途。
所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为抗艾滋病病毒(HIV-l)感染的杀微生物 剂。所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为外用避孕药，抑制精子参与受孕。
所述聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒的起始原料为聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)或聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)，聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)或聚(苯乙 烯-交替-马来酸酐)通过水解可得到聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒。
聚苯乙烯嵌段以及聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)嵌段可以有不同的聚合度。
阳离子为钠离子，也可以为其它阳离子，如钾，四季胺盐等。
可以在聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒内部包含一些药品，用于进一步增 强它们作为抗HIV-1感染的杀微生物剂或外用避孕药的效果。
本发明所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒对HIV-1的感染有很强抑制 效果，达到半抑制率的剂量为0.5 lpg/mL。由于对细胞的毒性很低，聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒可以作为有效的杀微生物剂，置于阴道或直肠内预防HIV-1的性传 播。
本发明所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒与精子有较强的结合力，可 以置于阴道内，用于阻断精子与卵子的结合而达到避孕的效果。
具体实施例方式
(1) 将聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)通过化学反应和超声波处理得到表面含有高 密度碳酸根负离子的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒。
(2) 表达HIV-1病毒受体CD4、 CCR5、 CXCR4的T细胞(TZM-B1细胞株)很容易 被外源HIV-1病毒感染。TZM-B1细胞株含有单拷贝报告基因pgal。 TZM-B1细胞被HIV-1 感染后，报告基因Pgal被激活导致p-半乳糖水解酶的表达。加入P-半乳糖水解酶的底物X-gal 后，被HIV-1感染TZM-B1细胞内的P-半乳糖水解酶催化水解底物X-gal后，产生蓝色颜料 沉积在细胞内，细胞显蓝色。HIV-1病毒对T细胞的感染被聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸 钠)纳米颗粒抑制后，由于没有P-半乳糖水解酶的表达，TZM-B1与X-gal混合后，细胞不变 色。因此通过计量显色细胞的比例可以得到聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒队 HIV-1感染的抑制效果。
(3) 将聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)与疏水的荧光探针罗丹明6G溶解在有机溶 剂里，然后向溶液中滴加水后，通过超声波处理而得到在内部包含荧光探针罗丹明6G的聚 苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)颗粒。包含荧光分子的纳米颗粒与精子孵育后，在荧光共 聚焦显微镜下检测细胞表面。
本发明所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的医疗应用的具体实施步骤为
1. 将聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)溶解在二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中，加入 NaOH水溶液(1M)搅拌3h后向反应体系中加入水，然后在超声波下超声30min后被转移 到透析袋中透析除去体系中的NaOH水溶液得到聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗 粒。
2. 表达HIV-1受体CD4、 CCR5、与CXCR4的TZM-B1细胞，HIV-1病毒，与不同含 量的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒加入到DMEM中，于37。C在C02培养箱
培养48h。通过检测报告基因X-gal的表达量来测量纳米颗粒对HIV-1病毒感染的抑制作用。 聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒的半抑制率(IC5o)为0.5pg/mL。
3. 细胞毒性实验MT4细胞与不同剂量的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒 在C02培养箱37X:培养。每隔24h，用台盼蓝染色测量细胞的数量，以及死亡率。在剂量高 达2pg/mL时，6天以后细胞生长速度降低20%，但是细胞无明显死亡。在低剂量时，细胞生 长速度没有明显变化。
4. 聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒(10mg)与荧光分子罗丹明(Rhodamine 6G) (lmg)溶解在DMF (0.3mL)中。向反应体系中加入水(2.7mL)后在超声波下超声30min, 得到包含有罗丹明6G的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒。精子细胞与包含有罗 丹明的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒在37'C孵育。2h后，离心分离细胞，除 去没有与细胞结合的纳米颗粒。在荧光共聚焦显微镜下观察，精子细胞表面含有高强度的荧 光，说明连聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒吸附在精子细胞表面。
所述聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒的起始原料为聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)或聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)，聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)或聚(苯乙 烯-交替-马来酸酐)通过水解可得到聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒。
聚苯乙烯嵌段以及聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)嵌段可以有不同的聚合度。
阳离子为钠离子，也可以为其它阳离子，如钾，四季胺盐等。
可以在聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒内部包含一些药品，用于进一步增 强它们作为抗HIV-1感染的杀微生物剂或外用避孕药的效果。
权利要求
1.聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途，其特征在于所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为抗艾滋病病毒感染的杀微生物剂。
2. 聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途，其特征在于所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为外用避孕药，抑制精子参与受孕。
3. 如权利要求l或2所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途，其特征在于所 述聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒的起始原料为聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马 来酸酐)或聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)，聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)或聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)通过水解可得到聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒。
4. 如权利要求l或2所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途，其特征在于所 述聚苯乙烯嵌段以及聚(苯乙烯-交替-马来酸酐)嵌段有不同的聚合度。
5. 如权利要求l或2所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途，其特征在于在 聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒内部包含药品，用于进一步增强聚苯乙烯-聚 (苯乙烯-交替-马来酸钠)纳米颗粒作为抗HIV-1感染的杀微生物剂或外用避孕药的效果。
全文摘要
聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途，涉及一种聚合物，尤其是涉及一种双嵌段聚合物聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为杀微生物剂用于抑制艾滋病病毒(HIV-1)在生殖系统的感染，或作为外用避孕药。提供一种聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)的用途。所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为抗艾滋病病毒(HIV-1)感染的杀微生物剂。所述的聚苯乙烯-聚(苯乙烯-交替-马来酸钠)作为外用避孕药，抑制精子参与受孕。
文档编号A61K31/765GK101361752SQ20081007186
公开日2009年2月11日 申请日期2008年9月26日 优先权日2008年9月26日
发明者夏宁邵, 磊 李, 苏荣敏, 陈小平, 韩守法, 韩家淮 申请人:厦门大学