专利名称：：枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及枳模子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是我国位居第二的癌症"杀手"，常见于中年男性。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，但一旦出现症状就诊，就已经属于中晚期。故肝癌的治疗难度大，一般患者发病后生存时间仅为6个月，人称"癌中之王"。根据调查结果表明，目前男性前三位的新发癌症分别是肺癌、结肠癌和鼻咽癌，女性则是乳癌、结肠癌及肺癌，充分说明了肺癌和结肠癌在新发癌症群中的危害性。从植物中寻找高效低毒的抗癌药物，成为国内外抗癌药物研究的重点。有效的抗癌化合物和中草药有效部位的抗癌复方制剂都具有重要的临床价值。枳模子为鼠李科拐枣属植物枳模(H(weniaduleisThunb.)的干燥成熟带肉质花序轴的种子。《中国药物植物志》中又称为北枳模，又称为鸡爪梨、拐枣、甜半夜。产于河北、山东、山西、河南、陕西、甘肃、四川北部、湖北西部、安徽、江苏、江西(庐山)。生于海拔200-1400米的次生林中或庭园栽培。中医认为枳模子有清热利尿，解酒毒之功效，主治酒病、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症等。
发明内容本发明的目的是提供枳模子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供的制备枳模子提取物方法，是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从枳模子中提取得到的。其中，所用有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一种或其任意比例的混合物，优选体积百分含量为95%的乙醇水溶液。各种常用的提取方法均适用于该方法，优选回流提取；提取的温度为60-10(TC;提取次数至少为l次，优选2-3次，每次提取时间为l-4小时。利用上述方法得到的枳模子提取物，以该枳模子提取物为活性成分的抗肿瘤药物，及该提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，也属于本发明的保护范围。本发明提供的枳模子提取物对肝癌、结肠癌或肺癌，尤其是肝癌，均具有较强的抑制作用。以该提取物为活性成分的抗肿瘤药物，可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法，导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。需要的时候，在上述药物中还可加入一种或多种药学上可接受的载体；载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂等。上述预防和/或治疗抗肿瘤的药物可制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。其制备方法均可按照药学领域的常规方法制备。上述预防和/或治疗抗肿瘤药物的用量一般为200-800mg枳模子提取物/kg体重/天，疗程为10至15天。本发明提供的制备枳模子提取物的方法简单、成本低廉。实验证明，本发明提供的枳模子提取物能够有效抑制人肿瘤细胞的生长，如人肝癌、结肠癌细胞。因此本发明所提供的枳模子提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、结肠癌药物，具有重要的意义。具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、制备枳模子提取物取枳模子(宁波德康生物制品有限公司)200g,将其以1:3(枳棋子95%乙醇)的重量份数比与95%乙醇(乙醇水=95:5，体积比)混合，在6(TC条件下回流提取3h,抽滤，收集第一次回流提取液1和滤渣1;将得到的所有滤渣1与95%乙醇混合，95%乙醇的量与第一次相同，在60"C条件下提取3h，收集第二次回流提取液2和滤渣2，并将提取液2与提取液1合并；将得到的所有滤渣2与95%乙醇混合，95%乙醇的量与第一次相同，6(TC回流提取3h，抽滤，收集第三次回流提取液3;将提取液l、提取液2和提取液3合并，将所得的提取液进行真空减压浓縮、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重，得到2.54g枳模子提取物。实施例2、枳模子提取物在抑制肿瘤细胞生长中的应用将对数生长的肿瘤细胞(人肝癌细胞BEL-7402、人结肠癌细胞HCT-8、人肺癌细胞A-549)用0.25%的胰蛋白酶消化，然后用含10%(体积百分含量)胎牛血清的DMEM完全培养基悬浮细胞，制成细胞悬液，并分别将各肿瘤细胞稀释至1.0xl()S个/mL，再将其接种至96孔培养板中，每孔200uL，各肿瘤细胞分别接种3个孔，于37'C，5y。C02的培养箱内培养24h;然后倾去各孔培养液。将实施例1制得的枳模子提取物溶解于DMSO中，然后用DMEM完全培养基进行稀释，得到枳模子提取物溶液，使枳模子提取物的终浓度为50ug/mL，使DMSO的浓度为10%(体积百分含量)。同时设实验组、对照组进行实验实验组将枳模子提取物溶液依次分别加入上述肿瘤细胞BEL-7402、HCT-8、A-549的培养孔内，各自接种3个孔，每孔加入200ul;对照组向上述各肿瘤细胞的培养孔内加入含10%(体积百分含量)DMSO的DMEM完全培养基，各自接种3个孔，每孔加入200ul;将以上各组的培养板同时置于37"C、5%(302的培养箱内培养2天。2天后向每孔加入20ul新鲜配制的5mg/ml四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液，并在37t:、5。/。C02的条件下继续培养4h;小心弃上清，每孔加入200uLDMSO，室温放置15-20min，每5min振荡一次；在酶标仪上测定各孔在波长490nm处的光密度值(OD值)，按公式计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率(％)=1-(OD实验)/(OD对照)x綱％。实验设三次重复，结果取平均数。枳模子提取物对人不同肿瘤细胞BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的结果如表l所示。表1枳模子提取物对人不同肿瘤细胞的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>枳模子提取物的对多种肿瘤细胞的抑制作用实验结果表明，枳模子提取物在浓度为50ug/mL时对人肝癌细胞BEL-7402、结肠癌细胞HCT-8和肺癌细胞A-549均有一定程度的抑制作用，对肺癌细胞的抑制作用相对较小，对肝癌、结肠癌抑制作用较强，均达到50%以上。文献中报道的提取物在浓度为25mg/mL时对人肝癌细胞BEL-7402的抑制率为56%，本发明在浓度仅为其1/500的条件下，对同样的人肝癌细胞BEL-7402的抑制率达到52.56%，起到了近似同样的效果，充分说明了本发明提供的提取物比文献中提供的提取物的高效性。因此，枳模子提取物可以用于制备抗肝癌、结肠癌的药物。权利要求1、一种枳椇子提取物，是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从枳椇子中提取得到的。2、根据权利要求1所述的提取物，其特征在于所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一种或其任意比例的混合物。3、根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取剂为体积百分含量为95%的乙醇水溶液。4、根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取为回流提取。5、根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取温度为60-100。c。6、根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取次数至少为1次，优选2-3次；每次提取时间为l-4小时。7、一种制备权利要求1-6任一所述的枳模子提取物的方法，是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从枳模子中提取得到的。8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一种或其任意比例的混合物。9、根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于所述提取剂为体积百分含量为95%的乙醇水溶液。10、根据权利要求7或8所述的提取物，其特征在于所述提取为回流提取。11、根据权利要求7或8所述的提取物，其特征在于所述提取温度为60-100.C。12、根据权利要求7或8所述的提取物，其特征在于所述提取次数至少为l次，所述每次提取的时间为l-4小时。13、以权利要求l-6任一所述的枳模子提取物为活性成分的抗肿瘤药物。14、根据权利要求13所述的抗肿瘤药物，其特征在于所述肿瘤为肝癌、结肠癌或肺癌，优选肝癌。15、权利要求l-6任一所述的枳模子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。16、根据权利要求15所述的应用，其特征在于所述肿瘤为肝癌、结肠癌或肺癌，优选肝癌。全文摘要本发明公开了一种枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用。该方法是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从枳椇子中提取得到。所用有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。回流提取时的温度为60-100℃；提取次数至少为1次，每次提取时间为1-4小时。该方法工艺简单、成本低廉，所得提取物可有效抑制人肿瘤细胞的生长，如人肝癌、结肠癌或肺癌细胞。本发明提供的枳椇子提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、结肠癌药物具有重要的意义。文档编号A61P35/00GK101390979SQ20081022606公开日2009年3月25日申请日期2008年11月5日优先权日2008年11月5日发明者岩刘,唐亚林,玮戴,莉谭申请人:中国科学院化学研究所