专利名称：一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种组合物，特别涉及一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物及其制 备方法。
背景技术：
辛伐他汀为一种高效调脂药，能使血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯 下降、高密度脂蛋白胆固醇升高。能显著减缓动脉粥样硬化进程，有出色的耐受性、高度的 安全性。用于高脂血症、家族性高胆固醇血症。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种辛伐他汀组合物；本发明的另一个目的在于公开 一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物的制备方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明辛伐他汀组合物由如下固体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制 得Ph 6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下 灭菌，灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20°C-4(TC条件下培养3-7天，作为斜面 菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1 0.5-2的比例混和，混勻后在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基体积的5-10%，在20-40°C，培养1-5天，在培养好的麸皮中加入0. 01-0. 5M ph7 pbs缓冲 液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅 拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液； 底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 03-0. 2重量份， 经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 1.5-8混 合，在转化温度为20-40°C，转化反应时间为12-48小时，即得组合物。本发明辛伐他汀的组合物固体发酵方法优选为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷 却，制得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在110°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却， 接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加 入0.3M ph7 pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中 加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心 取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐 他汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比 为1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。
本发明辛伐他汀组合物还可以由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制 得Ph是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件 下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌种； 液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6-8的培养基，使 得每体积份培养基含葡萄糖0. 01-0. 1重量份，牛肉膏0. 01-0. 1重量份，蛋白胨0. 01-0. 06 重量份，硝酸铵0. 01-0. 05重量份，硫酸镁0. 01-0. 08重量份；20-100体积份的培养基，在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基的5-10%，在20-40°C，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1_5天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 03-0. 2 重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物 添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00003-0. 0001重量份，在转 化温度为20-40°C，转化时间为5-48小时，即得组合物。本发明辛伐他汀组合物液体发酵方法优选为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后 冷却，制得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉 膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖 0. 05重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 03重量份，硫酸镁0. 04重 量份；50体积份的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得 斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液 体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1 重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物 添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度 为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。上述重量份与体积份的关系为克与毫升的关系，即g/ml。利用曲霉CICC 2368产酶水解辛伐他汀，其中部分辛伐他汀的结构发生了改变， 即辛伐他汀的结构类似物。原辛伐他汀在酶的作用下形成含辛伐他汀和辛伐他汀结构类似 物的组合物，该组合物降血脂水平优于同浓度辛伐他汀。
图1固体发酵对照品一图2固体发酵对照品二图 3 曲霉 CICC 2368图4固体发酵无新生物产生图5液体发酵对照品一图6液体发酵对照品二图7液体发酵曲霉CICC 2368图8液体发酵无新生物产生
下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1菌种筛选(固体发酵)本发明的关键在于筛选到对辛伐他汀有转化作用的菌种，筛选实验的过程为筛 选菌种为 CICC 3093，CICC 2203，CICC3005, CICC 2368供试品制备将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养 基含琼脂0.05g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在30°C条件下培养5 天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1 1的比例混和， 混勻后在iio°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培 养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得 固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全 溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备 用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底 物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时 间为24小时，即得组合物。对照品一制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. Ig,经微 孔滤膜无菌过滤后，取滤液0. 5ml，加0. 25ml水，20_40°C反应24h，即得作为对照品一。对照 品二制备用4个筛选菌种分别按照供试品制备中的方法制备粗酶液，每种粗酶液0. 25ml 加 0. 5ml 水，20-40°C 反应 24h。色谱柱C0SM0SIL 0DS-C18 (250X4. 6mm)；检测器UVU =238nm)流动相A为含0. OlM醋酸胺的水溶液，流动相B为甲醇。试验结果可知，图一显 示辛伐他汀标品；图二显示4个菌分别制备的酶液对照品二，液相图谱表明，4个菌分别制 备的酶液液相图大体相同；图三显示CICC 2368与辛伐他汀的酶解反应组合物即本发明组 合物的液相图大体相同，均有新生成物出现(箭头处)，其它菌种与辛伐他汀酶转化反应后 无新物质出现。实验例2菌种筛选(液体发酵)本发明的关键在于筛选到对辛伐他汀有转化作用的菌种，筛选实验的过程为筛 选菌种为 CICC 3093，CICC 2203，CICC3005,，CICC 2368供试品制备斜面菌种培养将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基， 使得每体积份培养基含琼脂ο. 05g ；在iio°c条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在 30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁 加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05g，牛肉膏0. 05g，蛋白 胨0. 04g，硝酸铵0. 03g，硫酸镁0. 04g ；在250ml的三脚瓶中装入50ml的培养基，在110°C 条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在 30°C，摇瓶转速150r/min条件下进行摇瓶发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制 备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作 为底物；酶反应液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵 培养液中含底物0. 00008g，在转化温度为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。对照品一制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. Ig, 经微孔滤膜无菌过滤后，取滤液0. 5ml，加0. 25ml水，20-40 °C反应24h，即得作为对照 品一。对照品二制备用4个筛选菌种分别按照供试品制备中的方法制备液体发酵培养液，每种液体发酵培养液0. 25ml加0. 5ml水，20-40°C反应24h。色谱柱C0SM0SIL 0DS-C18(250X4. 6mm)；检测器υν(λ = 238nm)流动相A为含0. OlM醋酸胺的水溶液，流动 相B为甲醇。试验结果可知，图四显示辛伐他汀标品；图6液体发酵显示4个菌分别制备的 酶液对照品二，液相图谱表明，4个菌分别制备的酶液液相图大体相同；图7液体发酵显示 CICC2368与辛伐他汀的酶解反应组合物即本发明组合物的液相图大体相同，均有新生成物 出现(箭头处)，其它菌种与辛伐他汀酶转化反应后无新物质出现。实验例3药效学实验比较同一浓度辛伐他汀和本发明辛伐他汀组合物对大鼠降脂能力的对比实验，实 验方案如下1、试验动物雄性SD大鼠，体重180 220g。试验动物由北京维通利华实验动物 技术有限公司提供。2、试验药物A、辛伐他汀底物加酶液培养12_48h后的混合物(实施例1组合物)B、与A同浓度辛伐他汀底物加与酶液体积相同的水培养12_48h的混合物)3、血脂测定用OLYMPUS AU1000自动生化仪对血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)分别以胆固醇氧化酶法、甘油 磷酸氧化酶法、酶法及选择遮蔽酶法测定。4、健康成年雄性SD大鼠70只，观察10天后在乙醚麻醉下眼球后静脉丛采血测 定血脂基础水平，然后分组，每组10只，开始喂高脂饲料(胆固醇1%，猪油5%，基础饲粒 94% )并同时给予下列药物每日2次灌胃A组和B组给药量均为167ug/kg/次；给药后 第14天乙醚麻醉下眼球后静脉丛采血复查血脂。试验前各组大鼠血脂无显著差异，见表1。 高脂饮食同时给药结果表明A组和B组灌胃2周都可以显著降低大鼠血清总胆固醇水平及 甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，并能提高高密度脂蛋白胆固醇的水平；以下实验数 据还表明A组的降总胆固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的能力要高于B组，这表明A 组中酶转化辛伐他汀后得到的辛伐他汀的结构类似物体内降总胆固醇，甘油三酯和低密度 脂蛋白胆固醇的能力要优于辛伐他汀。表IA和B降血脂水平比较试验(χ士 s，η = 10)
总胆闽醇1Γ汕三酯低密度脂蛋白胆固醇高密度脂蛋白胆固醇正常组1. 68±0. 06〇.88 ±0. 060. 67 ± . 040. 79 ±0. 04A1. 15±0. 040. 38 ±0. 080. 23 ±0. 051. 12 ± 0. 06B1. 36±0. 050. 52±0· 070. 36 ±0. 040. 88 士 0. 05注上述各指标单位均为mmol/L应用微生物酶或微生物细胞进行的合成技术被称为微生物转化，它们在迅猛发展 的化合物的合成和转化方面扮演着越来越重要的角色，而且微生物酶转化技术普遍具有环 境友好，作用条件温和等优势；此外，生物催化剂具有高度的选择性，包括化学选择性，区域 选择性，对映体选择性和非对映体选择性；微生物转化较化学手段转化有以下优点条件 温和，设备简单，公害少，反应速率较快，比较环保。
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实验例4药效学实验同实验例3的实验方法，试验药物A为辛伐他汀底物加酶液培养12_48h后的混合 物(实施例6组合物)，实验数据表明A组的降总胆固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇 的能力要高于B组，这表明A组中酶转化辛伐他汀后得到的辛伐他汀的结构类似物体内降 总胆固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的能力要优于辛伐他汀。表2A和B降血脂水平比较试验(χ士 s，η = 10) 注上述各指标单位均为mmol/L下述实施例均能实现本发明所述实验例的效果。
具体实施例方式实施例1 辛伐他汀的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 05g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得 斜面并接种，在30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照 重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在110°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入 斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加入 0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入 硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上 清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. Ig, 经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 4混合，在 转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。实施例2 辛伐他汀的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 6的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 03g ；在105°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方 法制得斜面并接种，在35°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 1.5的比例混和，混勻后在105°C条件下，灭菌35分钟，灭菌后冷 却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在35°C，培养2天，在培养好的 麸皮中加入0. 5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵 培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透 析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛 伐他汀0. 04g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为 1 7混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为40小时，即得组合物。实施例3 辛伐他汀的组合物固体发酵
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斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 08g ；在115°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方 法制得斜面并接种，在25°C条件下培养6天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 1. 8的比例混和，混勻后在120°C条件下，灭菌25分钟，灭菌后冷 却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的9%，在25°C，培养2天，在培养好的 麸皮中加入0. 4M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵 培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透 析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛 伐他汀0. 09g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为 1 3混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为18小时，即得组合物。实施例4 辛伐他汀的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 8的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. Ig ；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方 法制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后冷 却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好的 麸皮中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵 培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透 析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛 伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为 1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合物。实施例5 辛伐他汀的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 8的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. Ig ；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方 法制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后冷 却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好的 麸皮中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵 培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透 析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每ml含辛 伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为 1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合物。实施例6 辛伐他汀的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制 得Ph是7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 05g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 05g，牛肉 膏0. 05g，蛋白胨0. 04g，硝酸铵0. 03g，硫酸镁0. 04g ；50ml的培养基，在110°C条件下，灭 菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8 %，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛 伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用 液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底物 0. 00008g，在转化温度为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。实施例7 辛伐他汀的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是6. 5的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 09g;在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得pH为6. 5的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 02g，牛 肉膏0. 9g，蛋白胨0. 04g，硝酸铵0. 02g，硫酸镁0. 07g ；60ml的培养基，在102°C条件下，灭 菌38分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7 %，在24°C，转速 220r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛 伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. 05g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利 用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底 物0. 00008g，在转化温度为29°C，转化时间为9小时，即得组合物。实施例8 辛伐他汀的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是6. 5的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 09g;在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得pH为6. 5的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 02g，牛 肉膏0. 9g，蛋白胨0. 04g，硝酸铵0. 02g，硫酸镁0. 07g ；60ml的培养基，在102°C条件下，灭 菌38分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7%，在24°C，转速 220r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛 伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. 05g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利 用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底 物0. 00008g，在转化温度为29°C，转化时间为9小时，即得组合物。实施例9 辛伐他汀的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7. 5的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 04g ；在108°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在37°C条件下培养4天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得pH为7. 5的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 08g，牛 肉膏0. 05g，蛋白胨0. 03g，硝酸铵0. 04g，硫酸镁0. 02g ；70ml的培养基，在117°C条件下， 灭菌24分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7 %，在36°C，转速 105r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛 伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用 液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底物 0. 00004g，在转化温度为34°C，转化时间为43小时，即得组合物。实施例10 辛伐他汀的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 04g ；在116°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在34°C条件下培养3天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为8的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 05g，牛肉 膏0. Olg，蛋白胨0. 06g，硝酸铵0. 04g，硫酸镁0. 02g ；IOOml的培养基，在108°C条件下，灭 菌21分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的10 %，在30°C，转速 105r/min条件下进行发酵，培养5天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛 伐他汀，制成的溶液每ml含辛伐他汀0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用 液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底物 0. 00004g，在转化温度为40°C，转化时间为25小时，即得组合物。
权利要求
一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6 8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0.02 0.1重量份；在100 120℃条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20℃ 40℃条件下培养3 7天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1∶0.5 2的比例混和，混匀后在100 120℃条件下，灭菌20 40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的5 10％，在20 40℃，培养1 5天，在培养好的麸皮中加入0.01 0.5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均匀至完全溶解，在4℃条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0.03 0.2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1∶1.5 8混合，在转化温度为20 40℃，转化反应时间为12 48小时，即得组合物。
2.如权利要求1所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁 按照重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在iio°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却， 接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加 入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加 入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取 上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他 汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为 1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。
3.如权利要求1所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 03重量份；在105°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在35°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.5的比例混和，混勻后在105°C条件下，灭菌35分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在35°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积 份含辛伐他汀0. 04重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底 物以体积比为1 7混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为40小时，即得组合物。
4.如权利要求1所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 08重量份；在115°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在25°C条件下培养6天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1. 8的比例混和，混勻后在120°C条件下，灭菌25分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的9%，在25°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 4M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积 份含辛伐他汀0. 09重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底 物以体积比为1 3混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为18小时，即得组合物。
5.如权利要求1所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 1重量份；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规 方法制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦 芽汁按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后 冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好 的麸皮中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积 份含辛伐他汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物 以体积比为1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合物。
6.一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下灭菌， 灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌 种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1 0.5-2的比例混和，混勻后在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基体积的5-10%，在20-40°C，培养1-5天，在培养好的麸皮中加入0. 01-0. 5M ph7pbs缓冲 液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅 拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液； 底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 03-0. 2重量份， 经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 1.5-8混 合，在转化温度为20-40°C，转化反应时间为12-48小时，即得组合物。
7.如权利要求6所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是 7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁 按照重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在iio°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却， 接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加 入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加 入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取 上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他 汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。
8.如权利要求6所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6 的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 03重量份；在105°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在35°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.5的比例混和，混勻后在105°C条件下，灭菌35分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在35°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积 份含辛伐他汀0. 04重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底 物以体积比为1 混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为40小时，即得组合物。
9.如权利要求6所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 7 的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 08重量份；在115°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在25°C条件下培养6天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.8的比例混和，混勻后在120°C条件下，灭菌25分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的9%，在25°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 4M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积 份含辛伐他汀0. 09重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底 物以体积比为1 3混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为18小时，即得组合物。
10.如权利要求6所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 1重量份；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规 方法制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦 芽汁按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后 冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好 的麸皮中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积 份含辛伐他汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物 以体积比为1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合物。
11.一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下灭 菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌种；液体 发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6-8的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0.01-0. 1重量份，牛肉膏0. 01-0. 1重量份，蛋白胨0. 01-0. 06 重量份，硝酸铵0. 01-0. 05重量份，硫酸镁0. 01-0. 08重量份；20-100体积份的培养基，在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基的5-10 %，在20-40°C，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1_5天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 03-0. 2 重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物 添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00003-0. 0001重量份，在转 化温度为20-40°C，转化时间为5-48小时，即得组合物。
12.如权利要求11所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 03重量份，硫酸镁0. 04重量份；50 体积份的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种 体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培 养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1重量份， 经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到 液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度为30°C， 转化时间为28小时，即得组合物。
13.如权利要求11所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6.5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 09重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋 白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 02 重量份，牛肉膏0. 9重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 02重量份，硫酸镁0. 07重量份； 60体积份的培养基，在102°C条件下，灭菌38分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面 菌种体积占培养基的7%，在24°C，转速220r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发 酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 05重 量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添 加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度为 29 °C，转化时间为9小时，S卩得组合物。
14.如权利要求11所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7.5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在108°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在37°C条件下培养4天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋 白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 08 重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 03重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重量 份；70体积份的培养基，在117°C条件下，灭菌24分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7%，在36°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体 发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1重 量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添 加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在转化温度为 34 °C，转化时间为43小时，即得组合物。
15.如权利要求11所述的辛伐他汀组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在116°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在34°C条件下培养3天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为8的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 01重量份，蛋白胨0. 06重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重量份； 100体积份的培养基，在108°C条件下，灭菌21分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面 菌种体积占培养基的10%，在30°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养5天，作为液体 发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1重 量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添 加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在转化温度为 40°C，转化时间为25小时，即得组合物。
16.一种具有降血脂作用的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下灭 菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌种；液体 发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6-8的培养基，使得 每体积份培养基含葡萄糖0. 01-0. 1重量份，牛肉膏0. 01-0. 1重量份，蛋白胨0. 01-0. 06 重量份，硝酸铵0. 01-0. 05重量份，硫酸镁0. 01-0. 08重量份；20-100体积份的培养基，在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基的5-10 %，在20-40°C，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1_5天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 03-0. 2 重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物 添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00003-0. 0001重量份，在转 化温度为20-40°C，转化时间为5-48小时，即得组合物。
17.如权利要求16所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 03重量份，硫酸镁0. 04重量份；50 体积份的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种 体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培 养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到 液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度为30°C， 转化时间为28小时，即得组合物。
18.如权利要求16所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6.5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 09重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋 白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 02 重量份，牛肉膏0. 9重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 02重量份，硫酸镁0. 07重量份； 60体积份的培养基，在102°C条件下，灭菌38分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面 菌种体积占培养基的7%，在24°C，转速220r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发 酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 05重 量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添 加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度为 29 °C，转化时间为9小时，S卩得组合物。
19.如权利要求16所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是 )7.5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在108°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在37°C条件下培养4天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋 白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 08 重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 03重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重量 份；70体积份的培养基，在117°C条件下，灭菌24分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜 面菌种体积占培养基的7%，在36°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体 发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1重 量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添 加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在转化温度为 34 °C，转化时间为43小时，S卩得组合物。
20.如权利要求16所述的辛伐他汀组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2368进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在116°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜 面并接种，在34°C条件下培养3天，作为斜面菌种；液体发酵:将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸 铵，硫酸镁加入水中制得PH为8的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重量份，牛肉膏 0. 01重量份，蛋白胨0. 06重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重量份；100体积份的培养 基，在108°C条件下，灭菌21分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的 10%，在30°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养5天，作为液体发酵培养液；底物的制备用 水溶液溶解辛伐他汀，制成的溶液每体积份含辛伐他汀0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作 为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份 发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在转化温度为40°C，转化时间为25小时，即得组合物。
21.如权利要求1-5、11-15任一所述的辛伐他汀组合物在制备降血脂药物中的应用。
全文摘要
利用曲霉CICC 2368产酶水解辛伐他汀，其中部分辛伐他汀的结构发生了改变，即辛伐他汀的结构类似物，原辛伐他汀在酶的作用下形成含辛伐他汀和辛伐他汀结构类似物的组合物，该组合物降血脂水平优于同浓度辛伐他汀。
文档编号A61K31/366GK101897694SQ200910085110
公开日2010年12月1日 申请日期2009年5月31日 优先权日2009年5月31日
发明者刘春丽, 巩金妹, 段震文, 薛岚, 郭树仁, 魏艳丽 申请人:北京北大维信生物科技有限公司