专利名称：一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂及其制备方法。
背景技术：
临床使用的抗肿瘤化学药物包括细胞毒性药物和分子靶向药物两大类。细胞毒性 抗肿瘤药物(如顺钼等)都是非特异性的，它们在抑制和杀伤异常增殖的肿瘤细胞的同时， 对其它增殖较快的正常细胞也同样产生抑制和杀伤作用，由此产生的毒副作用以及肿瘤细 胞对药物先天或获得性的抗药性等问题一直是制约细胞毒性化疗药物临床应用的瓶颈。近十年来，针对肿瘤细胞特异的增殖、分化和凋亡机制，设计和合成高选择性的 分子靶向治疗药物得到迅速发展。酪氨酸蛋白激酶抑制剂(TKI) imatiniMGleevec )、 gefitinib(Iressa )和erlotinib等分子靶向药物相继进入临床使用，使蛋白激酶成为 后基因时代最重要的药物作用靶点之一。但是，许多对肿瘤细胞异常高表达的蛋白激酶有 很好抑制活性的小分子化合物，由于水溶性差或毒副作用大而不能在临床被应用。另一方 面，尽管第一代TKI抗肿瘤治疗药物取得了极大的成功，但在临床应用中，绝大部分对第一 代TKI药物敏感的癌症病人会由于编码靶酶的基因突变而产生抗药性。因而，能克服第一 代TKI治疗药物获得性抗药性的新一代TKI抗肿瘤药物，如Dasatinib和Sutent等相继 问世。Sutent是一种多靶点的酪氨酸激酶抑制剂，能有效抑制血管内皮细胞生长因子受体 (VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)和KIT的活化，对由于基因突变导致Imitinib 抗药性的胃肠基质肿瘤(GIST)有很好的活性。另外，一系列被称为Combi-molecule (组合 分子)的喹唑啉衍生物也得到药物化学家们的关注。喹唑啉衍生物含有丙烯酰或三氮烯 类取代基，能与位于表皮生长因子受体(EGFR)ATP结合域内的半胱氨酸残基发生烷基化反 应，不可逆地抑制EGFR的自磷酸化。与此同时，细胞内水解产生的三氮烯组分还能与DNA 反应，烷基化DNA，进一步加强TKI抗肿瘤药物的活性，对高表达EGFR的NIH3T3HER14细胞 的增殖产生显著抑制作用。但是，这一类组合分子化合物中细胞毒性(烷基化)单元的毒 副作用使它们的研究仍然停留在实验室研究阶段。
发明内容
本发明的目的是克服现有的酪氨酸蛋白激酶抑制剂体系不含有能与细胞毒性有 机金属类配合物配位的系列，且细胞毒性药物毒副作用较大、水溶性较差的缺陷而提供一 种能与细胞毒性有机金属钌配合物配位、细胞毒性药物毒副作用小、水溶性好的酪氨酸蛋 白激酶抑制剂。本发明提供了一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其中，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由 通式⑴表示的化合物 其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、 稠杂环氨基中的一种或几种。本发明还提供了上述酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法，其中，该方法包括将第 一反应物与第二反应物在有机溶剂中接触，所述第一反应物为4-卤-6，7-二甲氧基喹唑 啉，所述第二反应物为由具有配位功能的基团取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻 唑和氨基稠杂环化合物中的一种或几种，接触反应的条件使得第一反应物中4位的卤素与 第二反应物中的氨基发生缩合反应。本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂具有较高的选择性、较低的毒副作用和较强 的水溶性，此外，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂还能够用于取代细胞毒性有机金属钌配合物中 的一个或多个配体，所制得的配合物既能作用于蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)和也能作用于 DNA的多靶点组合分子抗肿瘤化合物。本发明提供的蛋白激酶抑制剂还有助于降低肿瘤细 胞对药物产生抗药性的可能性。本发明提供的蛋白激酶抑制剂由于含有潜在金属配位位点，因此能够用于合成含 金属配位中心的组合分子抗肿瘤化合物。与此同时，酶联免疫吸附分析(ELISA)测定结果 表明，所合成的化合物对酪氨酸蛋白激酶EGFR有很好的抑制活性。
图1-5为本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的X射线衍射晶体结构图。
具体实施例方式根据本发明提供的酪氨蛋白酸激酶抑制剂，其中，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由 通式⑴表示的化合物 其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、 稠杂环氨基中的一种或几种。按照本发明，所述具有配位功能的基团可以是各种能与金属特别是钌形成配位体 的基团。所述具有配位功能的基团取代的芳氨基可以为下述通式(2)所示 其中，在通式(2)中，Rl、R2、R3、R4和R5各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、 氨基、苯基、氨苯基、苯氨基、-SCH3> -SH、-C00H、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R1-R5 中至少有一个基团选自-SCH3、-SH、-COOH、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一种；优选情况 下，所述具有配位功能的基团取代的芳氨基可以为由如下通式(14)_(17)所示基团中的一 种 其中，在通式(14)中，R15和R16可以各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、氨 基、苯基、氨苯基、苯氨基、-SCH3> -SH、-C00H、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R15和 R16中至少有一个基团选自_SCH3、-SH、-C00H、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一种；更优 选情况下，R15为F、H、-NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子数为1-3的烷基中的一种，R16为Cl、 H、-SCH3> -SH 和-COOH 中的一种。按照本发明，所述具有配位功能的基团取代的芳氨基还可以为由结构式(13)所
示的结构 按照本发明，所述六元芳杂环氨基可以为如下通式(3)所示
其中，在通式⑶中，R6、R7各自独立地为碳原子或氮原子，且&和1 7中的至少-为氮原子；R8、R9和Rltl各自独立地为氢原子、氨基、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R8、 Ri^PRltl中的至少一个基团为氨基；优选情况下，所述六元芳杂环氨基可以由下述通式(18) 所示 其中，氨基的位置可以位于吡啶氮的对位、间位或邻位，如下述结构式所示
按照本发明，所述五元杂环氨基可以为如下通式(4)所示
其中，通式(8)-(9)中的R14可以为碳原子数为1-3的烷基、2-吡啶基或亚甲 基-2-吡啶基。根据本发明，所述酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法包括将第一反应物与第二反 应物在有机溶剂中接触，所述第一反应物为4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物 为由具有配位功能的基团取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻唑和氨基稠杂环化合其中，在通式(4)中，Rll、R12和R13各自独立地选自氢原子、碳原子数为1_3的 烧基、氨基中的一种，且R11、R12和R13中的至少一个基团为氨基；优选情况下，所述五元杂 环氨基可以为由下述结构式所示的五元杂环氨基 按照本发明，所述稠杂环氨基可以由下述通式(5)_(12)所示物中的一种或几种，接触反应的条件使得第一反应物中4位的卤素与第二反应物中的氨基 发生缩合反应。其中，所述4-卤-6，7- 二甲氧基喹唑啉优选为4-氯-6，7- 二甲氧基喹唑 啉和/或4-溴-6，7- 二甲氧基喹唑啉。所述第一反应物与第二反应物的摩尔比可以为1 (1-3)，优选为1 (1-1.5); 所述有机溶剂可以选自异丙醇、乙醇和甲苯中的一种或几种，以第一反应物与第二反应物 的总量为100毫克为基准，所述有机溶剂的用量可以为20-50毫升，优选为20-40毫升。按照本发明提供的方法，其中，所述由具有配位功能的基团取代的芳香胺为通式 (19)所示或者为由结构式(31)所示，所述氨基吡啶为通式(20)所示，所述氨基嘧啶为通 式(21)所示，所述氨基噻唑为通式(22)所示，所述氨基稠杂环化合物为通式(23)-(30)所
示 其中，在通式(19)中，R17、R18、R19、R2(1和R21各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、 氨基、苯基、氨基苯、苯氨基、-SCH3、-SH、-C00H和碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R17-R21 中至少有一个基团选自_SCH3、-SH、-C00H、苯基、氨基、氨基苯和苯氨基中的一种；在通式 (20)中，R22、R23、R24、R25和R26各自独立地为氢原子、氨基、碳原子数为1-3的烷基中的一种， 且R22, R23> R24、R25和R26中的至少一个基团为氨基；在通式(21)中，R27, R28, R29和R30各自 独立地选自氢原子、碳原子数为1-3的烷基、氨基中的一种，且R27、R28、R29和R30中的至 少一个基团为氨基；在通式(22)中，R31、R32和R33各自独立地选自氢原子、碳原子数为1-3 的烷基、氨基中的一种，且R31、R32和R33中的至少一个基团为氨基；在通式(26)-(27)中，R36 为碳原子数为1-3的烷基、2-吡啶基或亚甲基-2-吡啶基。优选情况下，所述第二反应物中通式(19)所述的化合物优选为如通式(32)至 (35)所示化合物中的一种或几种；所述第二反应物中通式(20)所述的化合物优选为如通 式(36)所示化合物 其中，通式(32)中的R34为F、H、NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子数为1_3的烷基 中的一种，R35为Cl、H、-SCH3> -SH和-COOH中的一种；且R34和R35中至少有一个基团选自_SCH3、-SH、-C00H、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一种。按照本发明，所述第一反应物和第二反应物均可以商购得到，也可以按照本各种 常规的制备方法制备得到。按照本发明，当所述第二反应物为由通式(23)_(25)所述的稠杂环化合物时，所 述反应还优选在催化剂的存在下进行，所述催化剂可以选自Pd2 (dba) 3 (三(二亚苄基丙酮) 二钯(0))、三叔丁基磷((t-Bu)3P)和叔丁醇钠(t-BuONa)中的一种或几种；当以所述稠杂 环胺的摩尔数为1时，所述催化剂的用量可以为(0.01-0.015) (0. 05-0. 1) (2-4) 0例如，由通式(26)-(27)表示的化合物的制备方法可以包括(1)将硝基取代的1，2-二氨基苯与碳原子数为1-3的饱和脂肪酸、2-吡啶基甲酸 和2-吡啶基乙酸中的一种在盐酸水溶液、磷酸和多聚磷酸中的一种或几种溶液中，在回流 条件下，回流3-5小时，冷却，并调节反应得到的混合物的pH值为9-10，过滤，洗涤后重结 晶得到硝基取代的苯并咪唑；所述硝基取代的1，2_二氨基苯与碳原子数为1-3的饱和脂肪 酸、2-吡啶基甲酸和2吡啶基乙酸中的一种的摩尔比可以为1 1-1 3，以1克硝基取代 1,2- 二氨基苯的量为基准，所述酸或酸的水溶液的体积为8-20毫升，盐酸水溶液的浓度一 般为5摩尔/升的盐酸水溶液。(2)在贵金属催化剂的存在下，将步骤⑴得到的硝基取代的苯并咪唑与水合胼 在有机溶剂中接触，然后冷却，除去溶剂，过滤，洗涤，得到氨基取代的苯并咪唑；所述接触 的条件包括，接触的时间为1-5小时，接触的温度为60-80°C，以0. 1克所述硝基取代的苯并 咪唑的量计，水合胼的用量为0. 3-0. 5毫升，催化剂的用量为0. 1-0. 5克，所述有机溶剂可 以为乙醇，有机溶剂的用量为5-15毫升，所述贵金属催化剂通常为钯/碳催化剂。在步骤(1)中，所述调节反应得到的混合物的pH值的方法可以为各种常规的方 法，例如，采用各种碱性溶液调节PH值，如氢氧化钠或氢氧化钾溶液等；所述洗涤的方法可 以采用常规的水洗的方法，洗涤的次数使无氢氧根离子被检出即可；所述重结晶的方法可 以为各种常规的方法，例如，将反应产物溶于水和乙醇的混合溶液中，蒸发，析出，而进行重 结晶。在步骤(2)中，所述除去溶剂的方法可以采用常规的方法，例如蒸发的方法；所述 洗涤的方法可以采用反应用溶剂进行洗涤，以除去未反应的原料，例如，乙醇和/或乙醚。具体而言，如果反应产物为由通式(26)所述的化合物，则反应原料为3-硝基-1， 2-二氨基苯；如果反应产物为由通式(27)所述的化合物，则反应原料为4-硝基-1，2-二
氨基苯。例如，由通式(28)_(30)所示的化合物的制备方法可以包括在贵金属催化剂 的存在下，将硝基取代的-8-羟基喹啉与水合胼在有机溶剂中接触，过滤，除去溶剂，洗涤 并干燥；所述接触的条件包括接触的温度为80-85°C，接触的时间为2-5小时；以每克硝 基取代的-8-羟基喹啉的重量计，水合胼的用量可以为0. 5-1毫升，催化剂的用量可以为 0. 1-0. 3克，溶剂的用量可以为30-50毫升。所述有机溶剂可以选自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种。所述催化剂可以为各种贵金属催化剂，例如，钯/碳催化剂。所述除去溶剂的方法可以采用各种方法，例如减压蒸馏的方法。所述洗涤的方法可以采用各种常规的方法，例如用异丙醇和/或乙醚洗涤，以除去部分未反应的原料。所述干燥的方法和条件为本领域技术人员所公知，例如，所述干燥的温度可以为 40-80°C，优选为60-70°C ；干燥的时间可以为2_12小时，优选为5_8小时。具体而言，如果反应产物为由通式(28)所述的化合物，则反应原料为5-硝 基-8-羟基喹啉；如果反应产物为由通式(29)所述的化合物，则反应原料为6-硝基-8-羟 基喹啉；反应产物为由通式(30)所述的化合物，则反应原料为7-硝基-8-羟基喹啉。按照本发明，所述R为通式(13)所述基团的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法优 选为包括下述步骤的方法(1)将4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4-苯二胺在第一有机溶剂中接触，过滤， 得到第一反应物；接触的条件包括接触的温度为70-90°C，接触的时间为2-5小时；所述 4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4_苯二胺的摩尔比为1 1-1. 2;所述第一有机溶剂选自 异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，以100毫克所述反应物的总重量为基准，所述溶剂的 用量为20-50毫升；(2)将中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐在第二有机溶剂中接触，分离，得到第 二反应物；所述接触的条件包括接触的温度为0-5°C，接触的时间为1-5小时；所述中性红 与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐的摩尔比为2 (2.5-3) (3-3. 5)；所述第二有机溶剂选 自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，以中性红和三聚氰氯的总量为100毫克为基准，所 述溶剂的用量可以为20-50毫升；所述分离得到第二反应物的方法可以采用常规的方法， 例如将该反应混合物与冰水或冰块混合，将反应物析出，冰水或冰块的用量只要使反应物 能够析出即可；(3)将步骤(1)得到的第一反应物与步骤(2)得到的第二反应物在第三有机溶剂 中接触，接触的条件包括接触的温度为10-25°C，接触的时间为1-5小时；所述第一反应物 与第二反应物的摩尔比为1 (1-2)，所述第三有机溶剂选自四氢呋喃和/或丙酮；以所述 第一反应物和第二反应物的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量可以为20-50毫升， 将得到的产物分离纯化的方法可以采用常规的方法，例如将该反应混合物与冰水或冰块混 合，将反应物析出，冰水或冰块的用量只要使反应物能够析出即可。实施例1本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。
R17
(1) (2)
将由上述反应式中的第一反应物(1)(购自上海氟德化工有限公司)与第二反应 物(2)(购自Sigma公司)在异丁醇中加热回流，所述第一反应物为4-氯-6，7-二甲氧基
Ν Z-^Nn所述第一反应物与第
二反应物的摩尔比均为1 1，以第一反应物和第二反应物的总量为100毫克为基准，异丁 醇的用量为15毫升；所述加热回流的条件包括回流的温度为80°c，回流的时间为4小时， 分别得到化合物 LQ1001、LQ1002、LQ1003、LQ1004、LQ1005、LQ1006、LQ1007、LQ1008、LQ1009、 LQ10010。分别通过核磁共振和质谱对上述制得的化合物进行表征LQ1001 =C16H13N3O2 FCl，calc. MW = 333. 5，ESI-MS (m/z) [M+H]+334. 21H NMR:(氖代 DMS0) δ (ppm) 11. 502 (s，1H，2-H)，8. 874 (s，1H，8-H)，8. 348 (s， 1H，5-H) ,8. 026 (dd, 1H，5，-H) , 7. 737 (m，1Η，2，-H) 7. 531 (t，1Η，6，-H) 7. 347 (s，1Η, Ν-Η)4· 002(s，6H，-CH3)；LQ1002 C16H15N3O2, cal. MW = 281. 1，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+ :282· 2. 21H NMR:(氘代 DMS0) δ (ppm) :11. 370 (s，1H，2_H)，8. 812 (s，1H，8_H)，8. 313 (s，1H， 5-H), 7. 677(m，2H，3，-H)，7. 476(m，2H，4，-H, N-H) 7. 312(m，2H，2，-H) 4. 000(d，6H，-CH3)LQ1003 C22H20N4O2, cal. MW = 372. 1，ESI-MS (m/z) [M+H]+ :373. 31H NMR:(氘代 DMSO) δ (ppm) :11. 107 (s，1H，2_H)，8. 774 (s，1H，8_H)，8. 364 (s，1H， N-H)，8. 182 (s，1H，5-H)7. 491 (dd，2H，3”-H)，7. 250 (m，3H，2”-H，N-H) 7. 110(m，4H，2，-H, 3，-H), 6. 847 (t，1H，4”-H)，3. 996(d，6H，-CH3)LQ1004 C22H20N4O2, cal. MW = 372. 1，ESI-MS (m/z) [M+H]+ :373. 31H NMR:(氘代 DMSO) δ (ppm) :9. 459 (s，1H，2_H)，8. 446 (s，1H，8_H)，7. 854 (s， 1H，5-H)，7. 786(d，2H，2”-H)，7. 565(d，2H，3，-H) 7. 372(d，2H，2，-H)，7. 176 (s，1H, N-H)，
6.645(d，2H，3”-H)，5· 166(s，2H，-NH2)，3. 926(d，6H，-CH3)LQ1005 C16H16N4O2, cal. MW = 296. 3， ESI-MS (m/z) [M+H]+ -.297. 01H NMR (氘代 DMSO) δ (ppm) 10. 852 (s, 1H, )，8. 690 (s, 1H, )，8. 106 (s, 1H,)，
7.320 (d, 2H)，7. 253 (s, 1H, ) 6. 723 (d, 2H)，3. 979 (d, 6H)，1. 236 (s, 2H)LQ1006 =C17H17N3O2S, cal. MW = 327. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 328. 0
18
1H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 11. 223 (s，1H, )，8· 843 (s，1H, )，8· 243 (s，1Η,)， 7. 615 (s 1H)，7. 497 (m, 2H, ) 7. 320 (s, 1H)，7. 223 (d, 1H) ,4. 018 (d, 6H)，2. 520 (s, 3H)LQ1007 C22H19N3O2, cal. MW = 357. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 358. 01H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 9. 269 (s, 1H, )，8. 197 (s, 1H, )，7. 598 (s, 1H,)， 7. 473 (m, 6H)，7. 250 (d, 3H, ) 7. 086 (s, 1H)，，4. 003 (d, 6H)LQ1008 C22H19N3O2, cal. MW = 357. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 358. 01H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 11. 269 (s，1H, )，8· 828 (s，1H, )，8· 243 (s，1Η,)， 7. 991 (s，1H)，7· 696(s，3H，) 7. 610(m，2H)，7· 494(m，2H) 7. 406(s, 1H)，7. 298(s, 1H)， 4. 012(d，6H)LQ1009 C22H19N3O2, cal. MW = 357. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ :358. 01H NMR (氘代 DMSO) δ (ppm) :11· 234 (s，1H, )，8· 836 (s，1H, )，8· 246 (s，1H,)， 7. 798 (s，4H)，7. 722 (d, 2H, ) 7. 488 (s, 2H)，7. 382 (s, 1H) ,7. 310 (d, 1H) ,4. 021 (d, 6H)LQ1010 C15H14N4O2, calc. MW = 282. 2，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+283· 11H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 9. 160 (s, 1H, 2-H)，9. 006 (s, 1H, N-H)，8. 634 (d, 2H, 3，-H)，7. 604 (s，1H, 8—H)，7. 151 (s，1H，5—H)，4. 058 (s, 3H, -CH3)，3. 938 (s,3H, -CH3)LQ1007、LQ1008和LQ1009的X射线衍射晶体结构分别如图1_3所示。实施例2本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。 将摩尔比为1 1的上述反应式中的第一反应物(1)4-氯-6，7_ 二甲氧基喹唑 啉与第二反应物⑶5-氨基菲洛林(由Sigma公司购得)，在催化剂Pd2 (dba) 3、t (Bu) 3P和 t-BuONa的存在下(所述催化剂Pd2 (dba) 3、t (Bu) 3P和t_BuONa与第一反应物(1)的摩尔比 为0.0125 0.075 3 1)，在甲苯中加热回流28小时后冷却至室温，过滤，用甲苯和乙 醚洗涤至将未反应的原料除去，在乙醇中重结晶，得淡黄色固体。通过核磁共振和质谱表征 为目标产物LS1001。LS1001 C22H17N5O2 Calc. MW = 383. 3，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+384· 1。1H NMR:(氘代 DMS0) δ (ppm) :10· 1197 (s，1H)，9. 1047 (d，1H)，9. 0564 (s，1H)， 8. 4577(m，2H)，8· 1917 (s，1Η)，8· 0957 (s，1Η)，8· 0312 (s，1H)，7· 7149 (m，2H)，7· 1858 (s， 1Η), 3. 9501 (d,6H)LSlOOl的X射线衍射晶体结构如图4所示。实施例3
本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备 (4)(5)将由上述反应式中的第一反应物(4)与第二反应物(5)在四氢呋喃溶剂中，在室 温(20°C)下搅拌反应约3小时，将反应液倒入冰块中，搅拌至冰块融化，析出红色产物，用 甲醇重结晶纯化产物，得到化合物LQ1011，以第一反应物(4)与第二反应物(5)的总量为 100毫克为基准，所述溶剂的用量为20毫升。分别通过核磁共振和质谱对上述制得的化合物进行表征LQlOll =C34H30ClN11O2 Calc. MW = 660. 127，ESI-MS(m/z) 661. 5。1H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 10. 333 (s，1H)，10. 018 (s，1H)，9. 405 (m，1H)， 8. 267 (m, 1H)，7. 968 (d, 2H)，7. 744 (m, 4H)，7. 505 (m, 2H)，7. 160 (s,2H)，6. 832 (s, 1H)， 3. 934 (d, 6H)，3. 934 (d, 6H)，2. 956 (s,6H)，2. 535 (s, 3H,)。其中所述第一反应物(4)和第二反应物(5)分别通过下面两个反应自合成得到 所述第一反应物(4)的制备方法包括将摩尔比为1 1的4-氯-6，7_ 二甲氧基 喹唑啉与1，4-苯二胺在80°C下，在异丙醇中搅拌反应约4小时，过滤，分别用乙醇和乙醚洗 涤将未反应的原料除去，将滤饼粗产品在DMF中进行重结晶，得橙红色纯品。经核磁及质谱检测为目标产物。LQ1005=C16H16N4O2, cal. MW = 296. 3，ESI-MS (m/ z) :[M+H]+ 297. O0 1H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 10. 852 (s，1H，)，8. 690 (s，1H，)，8. 106 (s, 1H, )，7. 320 (d, 2H)，7. 253 (s, 1H, ) 6. 723 (d, 2H)，3. 979 (d, 6H)，1. 236 (s, 2H) 第二反应物(5)的制备方法包括将分散于丙酮中的中性红(由国药集团化学试 剂有限公司购得)(中性红与丙酮的用量比例150mg 30ml)，滴加到溶于丙酮的三聚氰氯 (三聚氰氯与丙酮的用量比例IlOmg 7ml)中，中性红与三聚氰氯的摩尔比为2 3，在冰浴(0-50C )下，搅拌反应30分钟后，滴加入Na2CO3 (Na2CO3与中性红的摩尔比为1 1. 25， 10分钟滴完后，继续反应约2小时，将反应液倒入冰块中，搅拌至冰融化，过滤，干燥滤饼得 粗品，柱层析分离，淋洗液为石油醚乙酸乙酯=2 1(体积比)，得纯品，经质谱检测为目 标产物。C18H15Cl2N7，cal. MW = 400. 26，ESI-MS(m/z) [M+H]+ 401. 36.实施例4本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。
将由上述反应式中的第一反应物⑴与第二反应物(6)在异丙醇中加 热回流，所述第一反应物为4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物分别为
所述第一反应物与第二反应物的摩尔
比分别为1 1、1 1，以第一反应物与第二反应的总量为100毫克为基准，溶剂的用量为 20毫升；所述加热回流的条件包括回流的温度为80°C，回流的时间为4小时，过滤，分别用 乙醇和乙醚洗涤将未反应的原料除去，将滤饼粗产品在DMF中进行重结晶，分别得到化合 物 LS1002、LS1003。LS1002 =C17H15N5O2 Calc. MW = 321. 3，ESI-MS (m/z) :322. 11H NMR (氘 it DMS0) δ (ppm) 11. 63 (s, 1H), 9. 38 (s, 1H), 8. 83 (s, 1H), 8. 42 (s, 1Η)，8. 24 (s，1Η)，7. 92-7. 84 (m, 2Η)，7. 37 (s, 1H)，4. 04 (s, 3H) ,4. 01(s,3H).LS1003 =C18H17N5O2 Calc. MW = 335. 4，ESI-MS (m/z) :336. 11H NMR:(氘代 DMSO) δ (ppm) 9. 87 (s，1Η)，8. 48 (s，1Η)，8. 04 (s，1Η)，7. 96 (s，1Η)， 7. 55 (s，2H)，7. 2 (s，1H)，3. 98 (s, 3H)，3. 94 (s, 3H)，2. 58 (s, 3H).其中，所述第二反应物(6)的制备方法为将摩尔比为1 3的4-硝基-1，2-二氨 基苯与甲酸或乙酸，在浓度为5摩尔/升盐酸溶液中回流4小时，放置冷却后，用浓度为10 重量％ NaOH溶液将pH值调至10，析出大量固体。过滤，用水洗涤，在水中进行重结晶，得到 5-硝基苯并咪唑或2-甲基-5-硝基苯并咪唑；将0. 4克钯炭催化剂分散在12毫升乙醇溶剂中，加入2. 4毫升水合胼，加热至回 流，加入0. 8克5-硝基苯并咪唑的乙醇溶液30ml，反应3小时后，静止冷却，旋蒸除去大部 分溶剂，静置后，有固体析出，用乙醇、乙醚洗涤，得5-氨基苯并咪唑。 自制得的第二反应物如5-硝基苯并咪唑、5-氨基苯并咪唑分别通过质谱和核磁 共振表征5-硝基苯并咪唑C7H5N3O2 cal. MW = 163. 1，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 164. 3 ；HNMR (氘代 DMS0) 13. 088 (s，1H)，8· 544(s，2H)，8· 128 (d，1Η)，7· 764 (s，1H)5-氨基苯并咪唑C7H7N3 cal. MW = 133. 1，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+ :134· 3实施例5本实施例用于说明本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备。 将由上述反应式中的第一反应物(1)与第二反应物(7)在乙醇溶剂中加热回流， 所述第一反应物为4-氯-6，7- 二甲氧基喹唑啉，所述第二反应物为5-氨基-8-羟基喹啉， 所述第一反应物与第二反应物的摩尔比为1 1，以第一反应物(1)与第二反应物(7)的总 量为100毫克为基准，溶剂的用量为20毫升；回流的时间为3小时，过滤析出物，用热乙醇 洗涤3次，再用乙醚洗涤，干燥即可得到纯化合物JLY1001。其中，第二反应物(7) 5-氨基-8-羟基喹啉的制备方法包括将100毫升异丙醇和 2克5-硝基-8-羟基喹啉加入到250毫升三口瓶中，搅拌下加热，升至指定温度80°C，加入 0. 25克Pd/C催化剂和1. 5毫升水合胼并控温80-85°C反应4小时后，趁热过滤，滤液经减 压蒸去异丙醇，冷却后所得固体用异丙醇和乙醚洗涤后，将产物在室温下真空干燥5小时。 通过质谱方法证明所得化合物为上述第二反应物5-氨基-8-羟基喹啉。分别通过核磁共振和质谱对上述制得的化合物进行表征JLY1001 C19H16N4O3 Calc. MW = 348. 36，ESI-MS (m/z) :[M+H]+ 349. 1。1HWR(DMSo-CI6) δ (ppm) :11· 36 (s，1H)，10. 23 (s，1H)，8· 93 (s，1H)，8· 61 (s，1H)， 8. 24(m，2H)，7. 57 (m，2H)，7. 30 (s, 1H)，7. 20 (d, J = 4. OHz, 1H)，4. 0 (s，6H).JLY1001的X射线衍射晶体结构如图5所示。实施例6-10该实施例用于说明体外激酶抑制的活性测定应用酶联免疫吸附分析(Enzyme Immunosorbent Assay, ELISA)分别测定由实施 例1-5合成的化合物的激酶抑制活性(实施例1-5合成的化合物的浓度分别为40 μ M(微摩 尔 / 升)、4 μ Μ、400ηΜ (纳摩尔 / 升)、40ηΜ、4ηΜ、400ρΜ (皮摩尔 / 升)、40ρΜ、4ρΜ)。使用 CST 公 司的蛋白激酶检测试剂盒PTPlB(Tyr66)Biotinylated P印tide作为激酶EGFR(EpidermalGrowth Factor Receptor)的底物。分别加入由实施例1_5合成的化合物的激酶抑制剂， 使用Spectramax M5 (USA, Molecular Devices)型酶标仪，采用分光光度法，测定特定波长 450nm处的光吸收OD值，根据下式计算化合物对细胞的抑制生长率，通过OriginPro 7. O数 据处理软件由上述抑制生长率的数值得到δ曲线，考察本发明实施例1-5合成的化合物的 激酶抑制剂对激酶底物的磷酸化反应的抑制程度，从而得到IC50值(即对激酶底物的磷酸 化抑制程度达到50%时的激酶抑制剂的浓度值)。实验结果是两次独立的平行实验的平均 值，变动一般为士 15%。15种EGFR抑制剂IC50的测定结果如下表1所示。 表1 上表中，易溶DMSO是指在常温常压下，在DMSO中的溶解度不低于1.0克，微溶于 水是指在常温常压下，在水中的溶解度为0. 09-0. 10克，溶于甲醇乙醇是指在常温常压下， 在甲醇中的溶解度为1. 0-9. 9克，在乙醇中的溶解度为1. 0-9. 9克。从上表1中的结果可以看出，本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂，即Iressa类 有机小分子对EGFR蛋白激酶均表现出良好的抑制活性，此外，本发明提供的蛋白激酶抑制 剂能够用于取代细胞毒性有机金属钌配合物中的一个或多个配体，所制得的配合物既能作 用于蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)也能作用于DNA的多靶点组合分子抗肿瘤化合物。本发明提供的蛋白激酶抑制剂还有助于降低肿瘤细胞对药物产生抗药性的可能性为能够与毒性。
权利要求
一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其特征在于，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由通式(1)表示的化合物其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、稠杂环氨基中的一种或几种。F2009100846156C0000011.tif
2.根据权利要求1所述的酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其中，所述由具有配位功能的基团 取代的芳氨基具有通式(2)所示的结构或者具有结构式(13)所示的结构，所述六元芳杂环 氨基具有通式(3)所示的结构，所述五元杂环氨基具有通式(4)所示的结构，所述稠杂环氨 基具有式(5)-(12)所示的结构 其中，在通式(2)中，Rl、R2、R3、R4和R5各自独立地为氢原子、氟原子、氯原子、氨基、苯基、氨苯基、苯氨基、一SC几、一SH、一C。。H、碳原子数为卜3的烷基中的一种，且R卜R5中至少有一个基团选自一SCH，、一SH、一C。。H、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一种；在通式(3)中，凡、R，各自独立地为碳原子或氮原子，且凡或R，中的至少一个为氮原子；L、R。和R，。各自独立地为氢原子、氨基、碳原子数为卜3的烷基中的一种，且L、L和R、。中的至少一个基团为氨基；在通式(4)中，R11、R12和R13各自独立地选自氢原子、碳原子数为卜3的烷基、氨基中的一种，且R11、R12和R13中的至少一个基团为氨基；在通式(8)一(9)中，R14为碳原子数为卜3的烷基、2一吡啶基或亚甲基一2一吡啶基。
3.根据权利要求2所述的酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其中，所述R为如通式(14)一(18)表示的基团中的任意一种；(17) (18)其中，通式(14)中的R15为F、H、-NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子数为1-3的烷基中 的一种，R16为Cl、H、-SCH3、-SH和-COOH中的一种，且R15和R16中至少有一个基团选 自-SCH3、-SH、-C00H、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一种。
4.权利要求1所述酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括将第 一反应物与第二反应物在有机溶剂中接触，所述第一反应物为4-卤-6，7-二甲氧基喹唑 啉，所述第二反应物为由具有配位功能的基团取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻 唑和氨基稠杂环化合物中的一种或几种，接触反应的条件使得第一反应物中4位的卤素与 第二反应物中的氨基发生缩合反应。
5.根据权利要求4所示的制备方法，其中，所述由具有配位功能的基团取代的芳香 胺为通式(19)所示或者为由结构式(31)所示，所述氨基吡啶为通式(20)所示，所述氨 基嘧啶为通式(21)所示，所述氨基噻唑为通式(22)所示，所述氨基稠杂环化合物为通式 (23)-(30) 其中，在通式(19)中，R17、R18、R19、R2(1和R21各自独II地为氢原子、氟原子、氯原子、氨 基、苯基、氨基苯、苯氨基、-SCH3、-SH、-C00H和碳原子数为1-3的烷基中的一种，且R17_R21中 至少有一个基团选自-SCH3、-SH、-C00H、苯基、氨基、氨基苯和苯氨基中的一种；在通式(20) 中，R22、R23、R24、R25和R26各自独立地为氢原子、氨基、碳原子数为1-3的烷基中的一种，且 R22、R23、R24、R25和R26中的至少一个基团为氨基；在通式(21)中，R27、R28、R29和R3Q各自独立 地选自氢原子、碳原子数为1-3的烷基、氨基中的一种，且R27、R28、R29和R3(1中的至少一个基 团为氨基；在通式(22)中，R31、R32和R33各自独立地选自氢原子、碳原子数为1-3的烷基、 氨基中的一种，且R31、R32和R33中的至少一个基团为氨基；在通式(26)-(27)中，R36为碳原 子数为1-3的烷基、2-吡啶基或亚甲基-2-吡啶基。
6.根据权利要求5所示的制备方法，其中，所述第二反应物为如通式(32)至(36)所示 化合物中的一种或几种 其中，通式(32)中的R34为F、H、_NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子数为1-3的烷基中 的一种，R35为CI、H、-SCH3、-SH和-C00H中的一种，且R34和R35中至少有一个基团选 自-SCH3、-SH、-COOH、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一种。
7.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第一反应物与第二反应物的摩尔比为 1 (1-3)，所述有机溶剂选自异丙醇、乙醇和甲苯中的一种或几种，以第一反应物与第二 反应物的总量为100毫克为基准，所述有机溶剂的用量为20-50毫升。
8.权利要求1中R为通式(13)所示基团的酪氨酸蛋白激酶抑制剂的制备方法，其特征 在于，该方法包括(1)将4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4_苯二胺在第一有机溶剂中接触，过滤， 得到第一反应物；接触的条件包括接触的温度为70-90°C，接触的时间为2-5小时；所述 4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉与1，4_苯二胺的摩尔比为1 (1-1.2)；所述第一有机溶剂选 自异丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，有机溶剂的用量以4-卤-6，7-二甲氧基喹唑啉和 1,4-苯二胺的总量为100毫克为基准，所述溶剂的用量为20-50毫升；(2)将中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐在第二有机溶剂中接触，分离，得到第二反 应物；所述接触的条件包括接触的温度为0-5°C，接触的时间为1-5小时；所述中性红与三聚氰氯和碱金属的碳酸盐的摩尔比为2 (2.5-3) (3-3.5)；所述第二有机溶剂选自异 丙醇、丙酮和乙醇中的一种或几种，以中性红和三聚氰氯的总量为100毫克为基准，所述溶 剂的用量为20-50毫升；(3)将步骤(1)得到的第一反应物与步骤(2)得到的第二反应物在第三有机溶剂中接 触，接触的条件包括接触的温度为10-25°C，接触的时间为1-5小时；所述步骤⑴得到的 第一反应物与步骤(2)得到的第二反应物的摩尔比为1 (1-2)，所述第三有机溶剂选自四 氢呋喃和/或丙酮；以所述第一反应物和第二反应物的总量为100毫克为基准，所述溶剂的 用量为20-50毫升。
全文摘要
一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其中，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂为由通式(1)表示的化合物，其中，R为由具有配位功能的基团取代的芳氨基、六元芳杂环氨基、五元杂环氨基、稠杂环氨基中的一种或几种。本发明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制剂具有较高的选择性、较低的毒副作用和较强的水溶性，此外，该酪氨酸蛋白激酶抑制剂还能够用于取代细胞毒性有机金属钌配合物中的一个或多个配体，所制得的配合物既能作用于蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)和也能作用于DNA的多靶点组合分子抗肿瘤化合物。本发明提供的蛋白激酶抑制剂还有助于降低肿瘤细胞对药物产生抗药性的可能性。
文档编号A61P35/00GK101890018SQ20091008461
公开日2010年11月24日 申请日期2009年5月22日 优先权日2009年5月22日
发明者吕爽, 吴魁, 汪福意, 纪丽云, 罗群, 胡文兵, 韩玉苗 申请人:中国科学院化学研究所