专利名称：一种吡喃并环己酮衍生物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从中国南海柳珊瑚Dichotella gemmacea内生真菌 Aspergillussp.的培养液中提取分离的azaphilone衍生物及其制备方法和作为抗肿瘤药 物的应用。
背景技术：
自从1929年从陆地微生物中制备出青霉素以来，微生物次级代谢产物已成为药 物的丰富来源，绝大多数临床应用的抗生素都来源于真菌和细菌。微生物中的活性次级代 谢产物还有其他的药用价值，如抗肿瘤，治疗心脑血管疾病，酶抑制剂等。海洋微生物的生 活环境与陆生微生物相比迥然不同，特别是高压、高盐度、贫营养、低温、低光照、缺氧等特 殊环境因素决定了海洋微生物发展出独特的代谢方式，也提供了陆生微生物无法提供的活 性次级代谢产物，海洋微生物被认为是高新颖性化学结构和药物先导化合物重要的潜在资 源，人们对从海洋微生物中寻找新的特效药物寄予极大希望。
发明内容
本发明的目的在于提供一种来源于中国南海柳珊瑚D. gemmacea内生真菌 Aspergillus sp.的培养液中提取分离的azaphilone衍生物及其制备方法和作为抗肿瘤 药物的应用，它能满足现有技术的上述需求。一种azaphilone衍生物，其特征在于分子式为C26H26O3,结构式为 上述azaphilone衍生物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对中国南海 柳珊瑚D. gemmacea内生真菌AspergiIlus sp.进行菌种培养，再在发酵培养基中进行发酵 培养，将得到的液体过滤，除掉菌体，所得发酵液用有机溶剂萃取；萃取液浓缩后进行柱层 析或薄层层析色谱分离，将所得洗脱液浓缩，得无色晶体，即为azaphilone衍生物。上述的azaphilone衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明制备的azaphilone衍生物对人肺癌A-549和人乳腺癌MCF-7细胞具有明 显的抑制活性，可用作抗肿瘤药物，并且原料可以进行大规模生产，应用前景广阔。
具体实施例方式制备本发明的化合物时，采取下述各步骤(1)先在菌种培养基中对中国南海柳珊瑚D. gemmacea内生真菌AspergillusSP.进行菌种培养，所用的培养基含有葡萄糖1.0% (重量百分数，下同)、酵母膏0.1%、蛋 白胨0. 2 %、琼脂1. 0 %、氯化钠0. 3 %，其余为水。使用时将其制成试管斜面，上述真菌菌株 在30°C下培养5天。所述的菌种培养基含有葡萄糖0. -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨
0.01%_1%、琼脂0. -3.0%、氯化钠0.05% -5%，其余为水。培养温度为15_35°C，培 养时间为3-10天。(2)上述培养所得的真菌菌种进行发酵培养，所用的发酵培养基含有葡萄糖
1.0%、酵母膏0. 1%、蛋白胨0. 2%、氯化钠0. 3%，其余为水。真菌菌株于28°C培养30天。所述的发酵培养基含有葡萄糖0. -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨 0.01% -1%、氯化钠0.05% -5%，其余为水。培养温度为15-35°c，培养时间为7_40天。(3)化合物aspergilone A的提取分离将前一步得到的发酵液体过滤，除去菌体；所得发酵液用有机溶剂乙酸乙酯萃取 5次，将所得萃取液合并浓缩后，进行柱层析或薄层色谱分离，将洗脱液浓缩得无色晶体，即 为 aspergilone A0所述的有机溶剂乙酸乙酯可改用正丁醇或氯仿或二氯甲烷。化合物aspergilone A的核磁数据 化合物aspergilone A的质谱数据EIMS (正离子)m/z 386 [M]+, 295, 91 ；HRESIMS m/z[M+H]+ 387. 1974 (C26H26O3,理论 值 387. 1960).化合物aspergilone A的晶体数据晶体为orthorhombic 晶系，空间群为 P2 (1) 2 (1) 2 (1)，a = 10.3292(11) A, b = 13.7223(14) A,c 二 15.3534(16) Α, α = β = y = 90. 00°，C26H26O3,Mr = 386. 47，
F= 2176.2(4) A35Z = 4, Oc = 1. 180g/cm3, F(OOO) = 824，μ = 0. 076mm_1, the finalR =0.0437 and wR = 0. 1159 for 16280 observed reflections (I > 2 σ (I)).
7.48
8) 8)
32, dq (6.6, 0
2.58，dq (7.0, 0
0.71, d (6.6)
0.55， d (7.0)
\)<I7 66
2.2. 11
/l>i\
dlo r.c-c
\1<-/
力.O 2.2. 11 /Viv
59
84 21
62 32
m m m
89-6.87
06
11
33 33
7.06
7
m m m
6.82
8
7.11-7.06
06
11
5
本实施例制得的aspergilone A的结构式为 本发明的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用本发明的化合物的抗肿瘤活性试验将对数增长期的人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐药株KBV200肿瘤细胞分别制备成靶 细胞悬液。取96孔培养板，每孔加入190 μ L、含有3. OX IO3个上述靶细胞的悬液，恒温培 养24h后，加入IOyL含不同浓度测试样品的培养基，对照组加等体积的含10%胎牛血清 (FBS)的RPMI-1640培养液。置37°C、5% CO2条件下培养68h，弃上清液，直接于光学显微 镜下观察细胞形态。然后按10 μ L/孔加入3- (4，5- 二甲基-2-噻唑)-2，5- 二苯基溴化四 唑(MTT)液，继续培养4h，弃去上清液。加入二甲基亚砜(DMSO) 100 μ L/孔，吹打，使样品充 分溶解，用酶标仪以试验波长为570nm、参比波长为450nm测定光密度OD值。再按杀伤率=(对照孔OD值-药物孔OD值)/对照孔OD值计算杀伤率，绘制剂量反应回归曲线，计算半数杀伤浓度IC5(I。实验表明，本发明的aspergilone A对人肺癌A-549和人乳腺癌MCF-7细胞具有 明显的抑制活性，其IC5tl值分别为37. 0 μ g/mL和25. 0 μ g/mL,可用作抗肿瘤药物，并且原 料可以进行大规模生产，应用前景广阔。
权利要求
一种azaphilone衍生物，其特征在于分子式为C26H2603，结构式为F2009102565566C00011.tif
2.权利要求1所述的azaphilone衍生物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中 对中国南海柳珊瑚Dichotella gemmacea内生真菌Aspergillus sp.进行菌种培养，再 在发酵培养基中进行发酵培养，将得到的液体过滤，除掉菌体，所得发酵液用有机溶剂萃 取；萃取液浓缩后进行柱层析或薄层层析色谱分离，将所得洗脱液浓缩，得无色晶体，即为 azaphilone
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的菌种培养基含有葡萄糖 0. 1 % -5.0%、酵母膏 0.01 % -1 %、蛋白胨 0.01 % -1 %、琼脂 0. 1 % -3.0%、氯化钠 0. 05% -5%，其余为水。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的发酵培养基含有葡萄糖 0. 1% -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨0.01% -1%、氯化钠0. 05% _5%，其余为水。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、氯 仿或二氯甲烷。
6.权利要求1所述的azaphilone衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种azaphilone衍生物及其制备方法和作为抗肿瘤药物的应用。制备时先在菌种培养基中对中国南海柳珊瑚Dichotella gemmacea内生真菌Aspergillussp.进行菌种培养，再在发酵培养基中进行发酵培养，将得到的液体过滤，除掉菌体，所得发酵液用有机溶剂萃取；萃取液浓缩后进行柱层析或薄层层析色谱分离，将所得洗脱液浓缩，得无色晶体，即为azaphilone衍生物。本发明制备的azaphilone衍生物对人肺癌A-549和人乳腺癌MCF-7细胞具有明显的抑制活性，可用作抗肿瘤药物，并且原料可以进行大规模生产，应用前景广阔。
文档编号A61K31/352GK101921255SQ20091025655
公开日2010年12月22日 申请日期2009年12月24日 优先权日2009年12月24日
发明者佘志刚, 林永成, 王长云, 邵长伦, 魏美燕 申请人:中国海洋大学