专利名称：：一种倍半萜化合物的制备方法与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种倍半萜化合物的制备方法与应用。
背景技术：
：瘤状软骨凹丁页藻[Chondrophycuspapillous(C.Agardh)GarbaryetHarper]属于红藻门(Rhodophyta)，红藻纲(Rhodophyceae)，仙菜目(Ceramiales)，松节藻科(Rhodomelaceae)，凹顶藻属(Laurencia)的亚属。近年来的化学和药理研究表明，凹顶藻中含有丰富的结构新颖的化合物，这些化合物许多具有独特的生物活性，如抗肿瘤，抗病毒，抗炎及抗真菌等。对凹顶藻属海藻化学成分的研究将会在医药及相关领域起到重大作用。
发明内容本发明的目的在于提供一种倍半萜化合物的制备方法与应用，它能弥补现有技术的上述需求。—种倍半萜化合物的制备方法，其特征在于将瘤状软骨凹顶藻用水清洗，粉碎，用乙醇水溶液浸提，再用氯仿与甲醇的混合液浸提，将所得的两种浸提液混合，减压浓縮，得到粗浸膏；将该粗浸膏用水稀释，再用乙酸乙酯萃取，将所得萃取液减压浓縮后，得乙酸乙酯相浸膏，进行硅胶柱减压层析，经反复硅胶柱常压层析、高效液相色谱分离得到倍半萜化合物。上述倍半萜化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明制备的倍半萜化合物对慢性髓原白血病细胞K562、人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞SMMC-7721具有较强的抑制活性，可用作抗肿瘤药物。原料易得，应用前景广阔。具体实施例方式制备本发明的化合物时，(1)将采自海南三亚梅山海域的瘤状软骨凹顶藻[Chondrophycusp即illous(C.Agardh)]用自来水清洗，除去泥沙，将该瘤状软骨凹顶藻样品粉碎后，用95%(体积百分数)的乙醇水溶液浸提3次，然后再用氯仿与甲醇的混合液浸提3次。合并两种浸提液，减压浓縮得粗浸膏。将该粗浸膏用500mL水稀释后，再用等体积的乙酸乙酯萃取6次，将所得萃取液减压浓縮得到乙酸乙酯相浸膏，所述的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的体积比为i:l-2，本实施例为i:i。密封保存于4t:冰箱中备用。(2)上述乙酸乙酯相浸膏(50.5g)经过硅胶柱减压层析(VLC)，石油醚-乙酸乙酯梯度(ioo:o，90:io，so:20，60:40，50:50，30:70，o:ioo)洗脱，将其按照极性大小分成7个组分(Fr.1Fr.7)。Fr.3(1.7g，石油醚-乙酸乙酯80:20)洗脱组分经硅胶柱层析，用石油醚_乙酸乙酯梯度洗脱，得到4个组分(Fr.3-1Fr.3_4)，Fr.3_3经3反复硅胶柱层析和高效液相色谱分离，最终得到倍半萜化合物12.0mg，其结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本发明制备的化合物的体外抗肿瘤活性筛选试验及其结果(1)抗肿瘤活性测试采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法，对慢性髓原白血病细胞K562、人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞SMMC-7721细胞株的体外抗肿瘤活性进行测试。(2)活性测试方法实验设阴性对照组(水)、匿SO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个不同浓度(0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4，12.8，25.6)的待测样品组，每个浓度设3个平行。选取对数生长期细胞，用RPMI1640完全培养基制成单细胞悬浮液，用血球计数板计数，按50000个/mL接种90iiL于96孔平底细胞培养板，置于体积分数为5%0)2、湿度90%以上、37"温箱中培养。24h后取出，加入lmg待测样品，继续培养72h后取出，置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况。然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液50yL，37。C反应4h后，吸弃上清液，再向各孔加入100LDMS0，充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测量各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>根据样品浓度与抑制率的关系，求出抑制率为50%时样品的半数抑制浓度(ICJ，样品活性结果即以IC5。表示。(3)活性测试结果试验结果显示，本发明制备的含溴吲哚生物碱能有效的抑制慢性髓原白血病细胞K562、人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞SMMC-7721的生长。含溴喷哚生物碱对抑制肿瘤细胞株的IC5。值g/mL)见表1。表1本发明制备的两种化合物的体外抗肿瘤活性(IC5。，yg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>注MitomycinC，为阳性对照药。权利要求一种倍半萜化合物的制备方法，其特征在于将瘤状软骨凹顶藻用水清洗，粉碎，用乙醇水溶液浸提，再用氯仿与甲醇的混合液浸提，将所得的两种浸提液混合，减压浓缩，得到粗浸膏；将该粗浸膏用水稀释，再用乙酸乙酯萃取，将所得萃取液减压浓缩后，得乙酸乙酯相浸膏，进行硅胶柱减压层析，经反复硅胶柱常压层析、高效液相色谱分离得到倍半萜化合物。2.权利要求1所述的倍半萜化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。全文摘要本发明涉及一种倍半萜化合物的制备方法与应用，制备时，将瘤状软骨凹顶藻用水清洗，粉碎，用乙醇水溶液浸提，再用氯仿与甲醇的混合液浸提，将所得的两种浸提液混合，减压浓缩，得到粗浸膏；将该粗浸膏用水稀释，再用乙酸乙酯萃取，将所得萃取液减压浓缩后，得乙酸乙酯相浸膏，进行硅胶柱减压层析，经反复硅胶柱常压层析、高效液相色谱分离得到倍半萜化合物。本发明制备的倍半萜化合物对慢性髓原白血病细胞K562、人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞SMMC-7721具有较强的抑制活性，可用作抗肿瘤药物。原料易得，应用前景广阔。文档编号A61P35/00GK101774891SQ20091025655公开日2010年7月14日申请日期2009年12月24日优先权日2009年12月24日发明者孙玲玲,王长云,邵长伦申请人:中国海洋大学