缓释给药系统的制作方法

专利名称：缓释给药系统的制作方法
技术领域：
本发明描述了可提高药物生物利用度的延迟/可控给药系统，用黏膜黏附剂、膨胀聚合物和它们的衍生物作为载体以实现延迟/可控给药，特别适合于阿昔洛韦和黏膜黏附膨胀聚合物，象卡波姆、ΡΕ0、海藻酸钠、羟丙甲纤维素(hypromellose)、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、丙烯酸树脂(Eudragits)、壳聚糖及其衍生物的给药。
背景技术：
一些药物和大分子很难穿过黏膜被吸收，或那些微溶/缓慢溶解的物质造成的事实是，在有限的时间内，它们仍然存在于胃肠道中，大部分没有释放或吸收，大部分未经吸收便排泄出去。科学家们最大的挑战之一是这类生物利用度差的分子的给药，在特定的时期内仅有有限的剂量到达血浆。生物利用度低导致病人对药物吸收存在差异，使施以有效剂量变得非常困难。因此，增加这类口服药物的生物利用度一直是研究给药的科学家们期待已久的需求。人们认为，能够将药物以完整形式递送至靶点，停留在靶点更长时间并增加黏膜通透性，以实现药物不受阻碍的和更好的吸收的载体，应作为一种对策，只要载体是安全的，不影响粘膜上皮细胞的性质。阿昔洛韦，本发明的主要主题之一，是一类水溶性差，口服生物利用度差且可变的(10-20%)药物，阿昔洛韦的消除半衰期大约是3小时，经肾排出体外，部分由肾小球滤过和部分由肾小管分泌。本发明涉及的载体，包括但不限于聚合物，如壳聚糖(及其衍生物，不限于巯基化壳聚糖、三甲基壳聚糖)、羟丙甲纤维素、聚环氧乙烷、卡波姆、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、 黄原胶和类似的产品，这些聚合物的衍生物，它们的不同组合等，它们是黏膜黏附的、可膨胀的，且能够延长G. I.保留时间，提高给药过程中药物的生物利用度。
现有技术Genta等1 (1997)描述了使用聚乳酸/聚乳酸乙交酯共聚物微粒以实现阿昔洛韦的延迟给药。Thanau等2(2001)集中综述了使用壳聚糖和三甲基壳聚糖作为亲水性大分子药物包括肽类药物吸收促进剂的方法。在猪和大鼠中进行的实验显示出增加的肽类药物的生物利用度。一些实例使用巯基化壳聚糖和TMC作为大分子聚合物药物的给药载体，如以胰岛
素、层粘连蛋白肽、异硫氰酸荧光素葡聚糖4000(FITC-deXtran 4000)作为亲脂性药物模
型 3-5。接枝壳聚糖已被用来作为给药系统中的吸收促进剂。Rokhade等6(2007)描述了丙烯酰胺接枝葡聚糖和壳聚糖微球的半互穿聚合物网络(IPN)，其是通过乳化交联方法，用戊二醛作为交联剂，将阿昔洛韦包裹于微球中制备，发现药物释放延长高达12小时。然而，它们使用了茶碱，其理化性质与阿昔洛韦完全不同，其生物利用度是100%。
Hu等7(2009)使用其中掺入了药物的接枝壳聚糖寡糖形成的胶团，以增强阿霉素的吸收。US 6 3 4 0 4 7 58公开了一种用于释放药物的控释口服药物剂型，该药物在水中的溶解度比该药物与水重量份为1 10的药物的溶解度高，所述剂型包括其中分散有该药物的固体聚合物基质，药物与聚合物的重量比为约15 85 约80 20，所述聚合物基质吸水时膨胀，由此形成足够大的尺寸以延长给药模式过程中胃内潴留的时间，通过溶出释放药物至胃液中，药物从基质中扩散至胃液中，浸入后1小时胃液中含有约40%的该药物，浸入后约8小时内，基本释放全部药物，直至药物全部释放完，其基本保持完好。在其它涉及几组药物的实例的权利要求中，所述权利要求将完全释放药物所需的时间限定在10小时内。 在本发明中，设计用于治疗胃局部疾病如溃疡，而并非全身吸收。US 20 0 40 1 85 1 059公开了一种含有聚合物基质的控释剂型，药用活性剂分散于含有生物相容的、亲水性聚合物的所述聚合物基质中，该剂型吸水后向各个方向过度膨胀至一定的尺寸，以促进胃内潴留，并在其因腐蚀(erosion)减少前保持该尺寸以延长存在的时间。US 200701606781°公开了不溶于GIT液的聚合物的微胶囊。还描述了阿昔洛韦的体内释放模式。该发明表明80%阿昔洛韦在最初的!Bhrs内释放。没有关于生物利用度及给药频率降低的信息。上述引用的参考文献所描述的体内研究中，没有确切地说明所述药物在体内环境中是如何工作的。本发明公开了新的改良的方法，使用不同的黏膜黏附载体来递送具有低生物利用度的药物，描述了对控释组合物进行的体外和体内研究，特别例举了对包埋于壳聚糖、巯基化壳聚糖和三甲基壳聚糖中的阿昔洛韦的研究，或阿昔洛韦与其它聚合物联合以实现改善药物释放均勻度的目标，并延长药物从剂型中释放的时间。本发明例举的用于阿昔洛韦的方法和组合物，对于任何其它具有相同或近似性质的以及在给药、给药效率和治疗中存在问题的药物是适用的。发明概述本发明公开了一种含有治疗有效量的药用活性剂的控释剂型，在不含有增溶剂或膨胀促进剂(swelling enhancer)或均不含有二者的1型美国药典(USP)溶出试验中，其在模拟的胃液中以一级释放率，在约12小时内释放彡约90%的所述活性剂，包括(a)由至少两种生物相容聚合物的聚合物基质，其中至少一种聚合物为黏膜黏附的，所述药用活性剂和药用辅料制成的片剂；该片剂能够在所述模拟胃液中迅速膨胀至一定的大小而不崩解， 导致其在胃内潴留，在与胃液接触后立即通过可控的腐蚀开始控释所述活性剂，(b)掺入所述活性剂的未接枝壳聚糖或壳聚糖衍生物或卡波姆的微球，其中所述药用活性剂不是聚合物分子，在胃内给药后，所述微球黏附于胃黏膜上，以可控的方式长时间释放所述活性剂。本发明片剂中例举的两种聚合物是卡波姆974P和聚环氧乙烷；然而，可使用任何其它聚合物对，以适当的比例形成上述药物释放特性。本发明的药用辅料包括粘合剂、稀释剂、 PH调节剂、助流剂、润滑剂、成膜剂、抗粘剂、涂层剂、着色剂。在本发明的一个具体实例中，所述片剂包括阿昔洛韦、卡波姆974P、聚环氧乙烷、 微晶纤维素(Avicel PH) 101、聚维酮K30、硬脂酸镁和胶态氧化硅。尤其是，所述片剂含有下述成分，每IOOOmg剂型阿昔洛韦763. 37mg、卡波姆974P 75mg、聚环氧乙烷25mg、AvicelPH 101 93. 83mg、聚维酮K30 30mg、硬脂酸镁7. 5mg、胶态氧化硅5. Omgo用于制备微球的壳聚糖衍生物包括三甲基壳聚糖或巯基化壳聚糖。只要便于达到理想的药物释放效果，还可以使用它们的混合物。本发明的微球可装于小袋中，或任意添加药用成分和辅料作为制备固体单位剂型包括片剂或/和胶囊的原料。本发明还公开了一种向病人口服施予来自控释剂型的治疗有效量的药用活性剂的方法，所述剂型在不含增溶剂或膨胀促进剂或二者均不含的美国药典(USP)I型溶出试验中，其在模拟的胃液中以一级释放率，在约12小时内释放 <约90%的所述活性剂，包括 (a)由至少两种生物相容聚合物的聚合物基质、所述药用活性剂和药用辅料制成的片剂； 该片剂能够在所述模拟胃液中迅速膨胀至一定的大小而不崩解，导致其在胃内潴留，在与胃液接触后立即通过可控的腐蚀开始控释所述活性剂，或(b)掺入所述活性剂的未接枝壳聚糖或壳聚糖衍生物的微球，其中所述药用活性剂不是聚合物分子，在胃内给药后，所述微球黏附于胃黏膜上，以可控的方式长时间释放所述活性剂。本发明方法中例举使用的聚合物包括卡波姆974P和聚环氧乙烷。然而，可以使用任何其它的具有上述药物释放性质的聚合物对。本发明方法中例举的药用活性剂是阿昔洛韦。然而，可以使用任何其它的具有与阿昔洛韦相同性质的以及与阿昔洛韦存在相同的药物释放问题的药用活性剂。本发明方法中使用的药用辅料包括粘合剂、稀释剂、pH调节剂、助流剂、润滑剂、成膜剂、抗粘剂、涂层剂、着色剂。本发明方法中的控释剂型包括阿昔洛韦、卡波姆974P、聚环氧乙烷、Avicel PH 101、聚维酮K30、硬脂酸镁、胶态氧化硅、乙醇。在本发明的一个具体实施方案中，每IOOOmg所述控释剂型包括阿昔洛韦 763. 37mg、卡波姆 974P 75mg、聚环氧乙烧 25mg、Avicel PH 101 93. 83mg、聚维酮 K30 30mg、硬脂酸镁7. 5mg、胶态氧化硅5. Omgo本发明还包括一种方法，其中所述微球装于小袋中，或任意添加其它的药用成分和辅料作为制备固体单位剂型包括片剂和胶囊的成分。制备本发明口服剂型的方法，对于片剂，制备步骤包括将含有所述药用活性成分、 聚合物和辅料的混合物制成湿粒，添加助流剂并压片。制备本发明微球的方法，包括在乙酸中制备壳聚糖或壳聚糖衍生物的溶液，添加药用活性剂的水溶液，在连续搅拌下将该混合物加入含有表面活性剂的由轻液体石蜡和重液体石蜡(1 1)组成的连续相中，形成油包水乳化剂，在一段时间内滴加戊二醛，持续搅拌一段时间，离心分离形成的微球，用石油醚洗涤，除去液体石蜡，悬浮于亚硫酸氢钠溶液中，并搅拌一段时间，去除残余的戊二醛，最后用蒸馏水洗涤，干燥微球。


图1壳聚糖(A)，N-TMC(B)，羟基壳聚糖(C)，卡波姆⑶和羟丙基甲基纤维素 (Methocel) K15M (E)微球的 SEM 显微照片(X 10，000)。比例尺=50 μ m图2微球制剂的膨胀测量，％。数据显示为平均值士SD (η = 3)图3来自微球制剂的阿昔洛韦的体外释放，％。数据显示为平均值士SD(η = 3)
图4给药后!3hr，作为溶液(A)的荧光探针6_CF(0. 3% w/v, lml)在肠粘膜的十二指肠区段的渗透，巯基化壳聚糖(B)，TMC (C)，壳聚糖(D)，卡波姆(E)和Methocel K15M(F) 微球制剂(X 450)。比例尺=250 μ m ；MU =黏膜表面；VI =绒毛。图5作为药物溶液和微球制剂给药后，阿昔洛韦的血浆浓度。数据显示为平均值 ±SD (n = 3)图6为该模拟实验的血浆浓度-时间曲线。图7为阿昔洛韦顶200mg&400mg的模拟血浆浓度-时间曲线的比较。图8为阿昔洛韦顶200mg多剂量给药的血浆水平。图9为在第1天和第5天给药时，阿昔洛韦IR 200mg的血浆浓度的比较。图10为阿昔洛韦速释和阿昔洛韦控释片剂的血浆浓度曲线的比较。图11为预测的阿昔洛韦CR制剂的体外药物释放曲线。图12为使用卡波姆974P作为聚合物(批号Acy-ER-IA & Acy-ER-IB)制备的胃滞留片的药物体外释放曲线。图13为使用聚环氧乙烷(批号Acy-ER_2A & 2B)制备的胃滞留片的药物体外释放曲线。图14为使用卡波姆974P和聚环氧乙烷的组合(批号3A，3B & 3C)制备的胃滞留片的药物体外释放曲线。图15为不同批号的胃滞留片的体外药物释放曲线的比较，以及通过计算机模拟研究生成的阿昔洛韦缓释制剂的靶点释放曲线。图16为不同批号的胃滞留片的膨胀曲线，％。图17为测定的不同批号的胃滞留片的黏膜黏附强度。发明详述本发明的聚合物包括水溶性的或水不溶性的，进一步包括壳聚糖和壳聚糖衍生物，典型的如巯基化壳聚糖和三甲基壳聚糖、卡波姆、HPMC、海藻酸盐、胶质、丙烯酸树脂、羟丙甲纤维素(Hypromellose)、聚环氧乙烷以及它们的组合等。本发明的药用辅料可选自下列组粘合剂、稀释剂、PH调节剂、助流剂、润滑剂、成膜剂、抗粘剂、涂层剂、着色剂等。所述缓释给药系统可以是一个单位或多个单位的形式。它可以是片剂、胶囊、微球、丸剂、颗粒剂等。它可以装于泡罩(blister)、瓶和袋等中。可采用制剂领域熟知的方法制备给药系统，如湿法制粒、干法制粒、直接压缩、混合、挤压&滚圆、包被等。本发明的缓释给药系统可根据病人所需的剂量给药。本发明还涉及药物，尤其是阿昔洛韦控释(CR)的模拟药代动力学 测定阿昔洛韦CR所需的剂量和吸收率，得到与速释(IR)可比的Cmax和Cmin。 预测阿昔洛韦CR的血液水平并与顶比较。 根据吸收率常数绘制体外溶出曲线。用于缓释的聚合物之一是壳聚糖，其是含有氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖的共聚物的多糖。它是生物可降解的、生物相容的、黏膜黏附的聚合物，已用于颗粒剂给药系统的配制。壳聚糖以浓度和PH依赖的方式打开上皮细胞的紧密连接。在酸性pH下，壳聚糖能有效提高特定药物的渗透，但随着pH增加，效率下降。11
因此，为了克服壳聚糖在高pH值下溶解度的限制，合成N-三甲基季铵化壳聚糖 (N-Trimethyl quartenized chitosan) (N-TMC)用于比较研究。N-TMC 能够在即使中性环境下，显示出作为吸收促进剂穿过肠上皮细胞的能力。2N-TMC增强药物吸收的机制与壳聚糖相同。12它通过聚合物分子的正电荷和上皮细胞表面的阴离子组分之间的相互作用，打开相邻的上皮细胞之间的紧密连接。本发明研究中选用的另一种聚合物是巯基化壳聚糖。巯基化壳聚糖是黏膜黏附的聚合物领域中的新希望。据报道，巯基化物的高黏膜黏附性质加强了与胃黏膜的接触，用于增强许多药物的上皮细胞渗透性。13_15此外，据报道，这些增强药物肠渗透的聚合物，有助于增强阿昔洛韦和黏膜黏附剂的肠渗透性。在本发明的一个实施方案中，用于治疗单纯疱疹病毒感染的阿昔洛韦，广泛用于治疗感染如皮肤疱疹、生殖器疱疹、水痘、水痘带状疱疹感染和疱疹性角膜炎。“5目前市售的阿昔洛韦为口服的胶囊、片剂和悬浮剂，静脉注射剂和软膏。多数情况下，口服阿昔洛韦使用的剂量强度为200mg片剂，每天5次。此外，对于产生免疫活性的单纯疱疹病毒感染复发的病人，需长期(6个月或更久)施用阿昔洛韦。17现有的常规治疗具有下列不足，如高可变的吸收和低的生物利用度(10-20%)，且需要频繁给药(每天5次)导致病人顺应性差。 另外，随着剂量的增加，生物利用度是下降的。而且，药物的平均血浆半衰期是2. 5hrs,需要反复施以高剂量的药物OOOmg每次，每天5次)。结果是，大部分药物未被吸收(50-60 % )， 随粪便排出。18阿昔洛韦在酸性PH下可溶，主要在胃肠道的上部被吸收(GIT)。19本发明的一个实施方案公开了用于药物胃滞留给药的黏膜黏附的微球。使用多糖壳聚糖、巯基化壳聚糖、三甲基壳聚糖、卡波姆71G和甲基纤维素K15M以及它们的不同组合物作为黏膜黏附的聚合物。用乳化化学交联技术制备微球制剂，进行试管内(in vitro)、体外(ex-vivo)和体内评价。这些微球可制成下列剂型，包括袋(sachet)、片剂、胶囊等。在另一个实施方案中，公开了由一种或多种聚合物和辅料制备的用于缓释给药的阿昔洛韦胃滞留片剂。在本发明进一步的实施方案中，进行了阿昔洛韦CR的药代动力学模拟实验 测定阿昔洛韦CR所需的剂量和吸收率，得到与顶相比可比的Cmax和Cmin。 预测阿昔洛韦CR的血液水平并与顶比较。 根据吸收率常数，绘制体外溶出曲线。以下实验用于描述本发明，而不是对本发明的限制。任何参数的改进或变化，所述常数包括但不限于，使用的聚合物，它们的组合，使用的药物，使用的化学物质和它们的浓度，测定药物含量的不同步骤，模拟的药物仅为例举，任何相当的药物对本领域技术人员而言是显而易见的，且能够达到相同的目的，应包含于本发明的范围内。材料和方法材料壳聚糖(脱乙酰度82%，分子量650，000)由中央渔业研究所，科钦(Central Fisheries Research Institute, Cochin)惠赠。Methocel K 15M 和卡波姆 71G 分别由卡乐康公司，孟买(Colorcon Ltd. Mumbai)和德固赛公司，孟买(Degussa Ltd.，Mumbai)惠赠。2-亚氨基硫烷盐酸(2-Lninothiolane-HCl)、6-羧基荧光素(6-CF)和Traut，s试剂购自Sigma-Aldrich公司，美国。乙醇、乙腈、甲醇和二甲苯购自E. Merck公司，孟买，印度。
8巯基化壳聚糖和N-三甲基壳聚糖(N-TMC)是按照彻！！^叩-^^皿代！！等^报道的方法在实验室中制备的。微球制剂的制备采用乳化交联法(Wang等2°)，用壳聚糖、N-TMC和巯基化壳聚糖作为聚合物制备微球制剂。优化乳化交联法用于不同的步骤和制剂种类。在乙酸ν/ν)中制备壳聚糖溶液(1.0-2.0% w/v)，向它们各自的溶液中加入药物的水溶液(0. 1-0. 5% w/w)。进一步将其加入连续相(由含有Span80(0. 5% w/v) 作为表面活性剂的轻液体石蜡和重液体石蜡(1 1)组成)中，采用三叶片搅拌器在持续搅拌下(1200-2000rpm)形成油包水乳状液。随后分别在15、30、45和60min滴加戊二醛 (0. 25-1. Oml, 25% ν/ν)。搅拌持续3. 5小时。离心分离获得微球，用石油醚洗涤，除去液体石蜡。将微球悬浮于5% w/v的亚硫酸氢钠溶液中，搅拌15分钟，去除残余的戊二醛，最后用蒸馏水洗涤，干燥微球。贮存于真空干燥器中。采用相同的方法，用优化的步骤和制剂种类制备巯基化壳聚糖和N-三甲基壳聚糖微球。采用Harikarnpakdee21等报道的喷雾干燥技术制备卡波姆71G和Methocel K15M 的微球。Methocel K15M或卡波姆71G溶于去离子水中。阿昔洛韦单独溶于蒸馏水中。然后将胶态氧化硅(Aerosil)、糊精和丙二醇与聚合物溶液混合。喷雾干燥各组溶液，卡波姆 71G所采用的进口温度为120°C，Methocel K15M为130°C，泵设置为5ml/min ；喷流量400
纳升/分钟。以同样的方式制备荧光微球。为此，将药物溶液替换为0. 3% w/v的6-CF溶液，采用上述步骤制备微球。微球的特性形态学检测通过扫描电镜测定微球的形态(SEM，JSM-5310LV扫描电镜，东京，日本)。用双面胶带将微球安装于金属短管上，在真空条件下镀金，镀金层为150° A。在扫描电镜下观察短管。颗粒大小的测定用微米级标尺测量颗粒的大小。将干燥的微球(5mg)悬浮于蒸馏水中，超声5秒。 将一滴悬浮液置于洁净的载玻片上，在微米级目镜下计数微球。每组最少计数200个微球。膨胀的测定在pH6. 8的磷酸盐缓冲液中膨胀微球。用显微镜测量干燥微球的大小，以及在磷酸盐缓冲液(PH6. 8)中孵育0. 3,1. 0,3. 0和5. Ohr后微球的大小。用时间t的微球直径 (Dt)和起始时间的微球直径(t = 0[D0])的差，测定在不同时间间隔的膨胀百分数，根据以下方程式计算
膨胀％ =D' ~D° 人 *100 (1)产量产量的计算是根据得到的三组中各组干燥微球的平均重量(Wl)与起始原料的起始干重(W2)的比值。(Entrapment efficiency)在HCI(O.OIM)中消化载有阿昔洛韦的壳聚糖、N-TMC或巯基化壳聚糖微球。卡波姆71G和Methocel K15M微球分别分散于0. IMNaOH和0. 05M磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中，间歇摇动，过夜孵育。过滤该混合物，根据Darwish等22报道的方法，采用荧光分光光度法在激发波长256nm和发射波长374nm下，检测滤液(Elico荧光分光光度计，SL-174，新德里， 印度)。包封率的计算是根据制剂中存在的药物的实际量与起始加入药物的量的比值。黏膜黏附测定的研究根据Vyas等恐描述的方法，测定微球制剂的黏膜黏附特性。宰杀动物Ihr内，从当地屠宰场获得新鲜的猪肠5cm，进一步用等渗盐溶液洗净。将精确称重的微球置于附着在聚乙烯平皿上的黏膜表面，该平皿与水平面呈40°角固定。将预热至37士 1°C的磷酸盐缓冲液(PH6.8)以5ml/min的速度流过该组织。通过目视观察，记录从猪肠的黏膜表面去除所有的微球所需的时间。21药物体外释放研究采用美国药典(USP)桨法(paddle method)溶出试验，在37士0. 5 °C下，以 50士5rpm的搅拌速度测定来自微球的阿昔洛韦的体外释放。在最初的lhr，用HCl缓冲液 900ml (pHl. 2)作为溶出介质，在随后的llhrs，用磷酸盐缓冲液(PBS，pH6. 8)作为溶出介质。将干的微球装于硬胶囊中并置于溶出仪中。在不同的时间间隔取出5ml样品，用等量的溶出介质补充介质的体积。然后用荧光分光光度法分析样品。G. I. T 分布大鼠(品种为Sprague dawley)，6_8月龄，体重200_220g在实验开始前禁食 16-20hr。水随意提供。这些研究的协议是经过动物伦理委员会(Institutional Animal ethics committee)的批准，遵照纪律原则和CPCSEA的方针。在该研究中，分为6组，每组含15只大鼠。第1组口服给药6-CF的水溶液(0. 3% w/v, lml)。第2、3、4、5和6组分别施以由壳聚糖(M-CH)、巯基化壳聚糖(M-TCH)、N-三甲基壳聚糖(N-TMC)、卡波姆71G或 Methocel K15M制得的6-CF微球。微球口服是通过在1. Oml生理盐水中悬浮20mg微球样品，相当于3. Omg 6-CF，在非麻醉状态下通过橡胶管强制饲喂。给药2、4、6、8或IOhr后处死大鼠，立即分离，胃(第1部分)沿小肠全长，其进一步细分成6个部分(第2-7部分，每部分长度为14cm)。胃和小肠部分被切开，露出内粘膜表面。用药匙刮黏膜，收集位于各部分的全部微球。在壳聚糖、巯基化壳聚糖和N-TMC的情况下，向收集的样品中加入0. IN HCl IOml0在卡波姆71G和Methocel K15M微球的情况下，分别加入0. IN NaOH和磷酸盐缓冲液(0. 05M)。将混合物用勻浆器捣碎，提取6-CF，保持Mhr。在3000rpm离心20分钟后，荧光测定分析在λ激发489nm和λ发射515nm下上清液中的6-羧基荧光素。使用该方法，6-CF 的提取率约为95%。此外，取下第2、3和4部分2cm大小组织，进一步处理，用于荧光显微观察。荧光显微观察进行荧光显微观察以确定分布的程度和微球制剂渗透的程度。切下的GIT组织用棉纸吸干。将擦拭的组织固定于固定液(3 1无水乙醇氯仿)中!3hr。首先将组织块转移至无水乙醇中OAhr，然后在无水乙醇和二甲苯中lhr。向该溶液中加入刮蜡(Wax scrapings)直至饱和，并保持24hr。将组织包埋于固体石蜡中，制备石蜡封片，在 62士 1.0°C下成熟。用切片机(Erma optical works,日本)切组织(5^111厚)，在荧光显微镜下(Leica，DMRBE，本斯海姆，德国)检测。溶血毒性检测本发明进一步了溶血毒性研究。19采集健康供者血样，并用3%柠檬酸钠抗凝。通过离心(3000Xg，5min)从血浆中分离红细胞，并悬浮于pH 7. 4的磷酸盐缓冲液(PBS)中。 红细胞(RBC)悬液(1% )与蒸馏水混合，作为100%溶血，生理盐水不产生溶血因此作为空白。将0.5ml 2% w/v微球制剂的PBS(pH 7.4)分散液加入4. 5ml生理盐水中，并与Iml红细胞悬液相互作用。同样，将0. 5ml 0. 3% w/v阿昔洛韦的PBS溶液与4. 5ml的生理盐水混合，并与红细胞悬液相互作用，在37士 1. 0°C的孵育器中保持Ihr。Ihr后，离心混合物，取上清用等量的生理盐水稀释，测定在540nm的吸光值，以同样稀释的生理盐水上清作为空白对照。因此测定每个样品的溶血百分比，以吸水作为100%溶血样品。药代动力学研究大鼠(Sprague dawley)，6-8月龄，体重200_220g，分为6组，每组5只动物。大鼠在给药前12小时直至给药后M小时禁食。研究过程中随意给水。阿昔洛韦的剂量为5mg/ kg。24第1组口服0. 3% w/v药物的PBS溶液(ρΗ7· 4)。第2、3、4、5和6组分别口服壳聚糖、巯基化壳聚糖、三甲基壳聚糖、卡波姆或Methocel微球。20mg微球样品，相当于3. Omg 阿昔洛韦悬浮于1.0ml盐溶液中，在非麻醉状态下用橡胶管口服给药。在2.5、5、10、15和 Mhrs，从颈静脉采集血样置于印endorff管中，2000rpm离心IOmin (REMI仪器；孟买，印度)。收集上清并加入乙腈沉淀蛋白。2000rpm离心15min收集沉淀的蛋白。收集上清，用 0. 45 μ m滤膜过滤，滤液置于容量瓶中，通过荧光分光光度法进行测定。阿昔洛韦控释的药代动力学模拟实验模拟实验研究的假设如下1.产品将用于生殖器疱疹的起始和间歇性治疗。这些疾病所需的剂量为每4小时 200mg,每天5次，连续10天。2.产品应为生物粘着剂型，应被设计成能够在GIT的上部潴留时间较长。3.每天给药2次CR制剂。4.由于在GIT的吸收区潴留延长，CR制剂的生物利用度比顶制剂高25%。5.吸收过程由进行的释放控制。药物的内在吸收速率常数(intrinsic absorption rate constant)比剂型释放的药物高(Ka >>>>>>>药物释放速率)，因此，剂型释放的任意量的药物是即时的。模拟实验模拟方法包括以下步骤。1.第1步，根据文献16]8报道的药代动力学参数，绘制阿昔洛韦/阿昔洛韦顶片剂的血浆浓度曲线。2.然后用这些参数预测CR剂型所需的特性。3.然后用步骤2中获得的参数进行CR进行模拟实验。方法和结果列于表6-9和图6-11。所用的平台(PlatformUsed)
PIV计算机(1.7双核处理器)，IGB内存，200GB硬盘，微软Microsoft Excel 2003。胃滞留阿昔洛韦片剂的加工利用湿法制粒，制备基质片剂。称重阿昔洛韦、聚合物和微晶粉末纤维素，一起过 #40ASTM筛，并在塑料袋中混合5min。用PVP-K30的乙醇溶液制粒(制粒的步骤/方法是什么？)所述混合原料。在40°C的烘干机中干燥所述湿的原料(mass)，并将干燥的原料过#20ASTM筛。将颗粒与硬脂酸镁混合，用19mmX9mm压缩，做成胶囊形，凹冲(concave punch)。各批次的配方成分列于表9中。药片的硬度保持在约19. 6-22. 6kp，厚度为5. 94 禾口 6.03mm。片剂的性质采用报道的方法测定压缩的阿昔洛韦胃滞留片剂的特性，如硬度、脆碎度、厚度、 重量差异和成分均勻度。简言之，用Monsanto硬度计测定硬度。用罗氏(Roche)脆性检测仪测定脆碎度。根据IP程序测定重量差异和药物成分的均勻度。阿昔洛韦胃滞留片剂的体外药物释放研究用美国药典-2型溶出装置，在37°C 士0.5°C下50rpm进行体外溶出研究。释放检测是在900ml不同的溶出介质中进行的模拟胃液(pH 1. 2)和磷酸盐缓冲液(pH6. 8)。在特定的时间间隔取出部分溶液(IOml)，用紫外可见分光光度计在255nm测定药物含量。需明确的是，片剂中使用的成分均不干扰该检测。水吸收动力学用平衡重量增加法(equilibrium weight gain method)，采用美国药典I型溶出检测装置，进行水吸收研究。精确称重片剂，置于溶出篮(dissolution basket.)中。将篮子浸入含有900ml 0. IN HCl (pHl. 2)的溶出容器中，保持37士0. 5°C ；转速为50rpm。每隔一定时间，从溶出容器中移出篮子-基质系统，用纸巾印干，除去多余的水分，再称重。用下列公式计算水吸收的百分比(即，由于吸收介质的膨胀程度)。% 水吸收=Wt/W。X 100(2)其中，Wtl和Wt分别为在时间t的干片剂和膨胀片剂的重量。基质腐蚀研究根据mxibe等25报道的方法进行基质腐蚀研究。采用美国药典I型溶出检测装置进行测定。称重干片剂，在37士0.5°C下，置于含有900ml 0. IN HCl (pHl. 2)的溶出篮中。 将篮子浸入溶出容器中，保持；以50rpm转动篮子。每隔一定时间，从溶出容器中移出整个篮子-基质组合，在50°C的热风烘箱中干燥至恒重。时间t的基质腐蚀(E)，由方程式3
计算得到。
权利要求
1.一种含有治疗有效量的药用活性剂的控释剂型，在不含增溶剂或膨胀促进剂或二者均不含的情况下，在美国药典(USP)I型溶出试验中，其在模拟的胃液中以一级释放率在约 12小时内释放<约90%的所述活性剂，包括a.由至少两种生物相容聚合物的聚合物基质、所述药用活性剂和药用辅料制成的片剂，其中至少一种所述的聚合物为黏膜黏附的；该片剂能够在所述模拟胃液中迅速膨胀至一定的大小而不崩解，导致其在胃内潴留，在与胃液接触后立即通过可控的腐蚀和扩散开始控释所述活性剂，或b.掺入所述活性剂的未接枝壳聚糖或壳聚糖衍生物的微球，其中所述药用活性剂不是聚合物分子，在胃内给药后，所述微球黏附于胃黏膜上，以可控的方式长时间释放所述活性剂。
2.根据权利要求1(a)所述的控释剂型，其中所述聚合物为黏膜黏附的、可膨胀的聚合物，包括卡波姆71G和聚环氧乙烷、羟丙甲纤维素(hypermellose)、聚环氧乙烷、卡波姆、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、丙烯酸树脂(Eudragits)、黄原胶。
3.根据权利要求1(a)所述的控释剂型，其中所述活性剂为阿昔洛韦或阿昔洛韦衍生物。
4.根据权利要求1所述的控释剂型，其中所述可用的药用辅料包括粘合剂、稀释剂、PH 调节剂、助流剂、润滑剂、成膜剂、抗粘剂、涂层剂、着色剂。
5.一种控释剂型，含有阿昔洛韦、卡波姆974P、聚环氧乙烷、Avicel PH 101、聚维酮 K30、硬脂酸镁和胶态氧化硅。
6.一种控释剂型，每IOOOmg剂型含有阿昔洛韦763. 37mg、卡波姆974P 75mg、聚环氧乙烷 25mg、Avicel PH 101 93. 8;3mg、聚维酮 K30 30mg、硬脂酸镁 7. 5mg、胶态氧化硅 5. Omg。
7.根据权利要求1(b)所述的控释剂型，其中所述壳聚糖衍生物是三甲基壳聚糖或巯基化壳聚糖。
8.根据权利要求1(b)所述的控释剂型，其中所述微球装于小袋中，或用作制备固体单位剂型包括片剂和胶囊的成分。
9.对患者口服施予来自控释剂型的治疗有效量的药用活性剂的方法，所述剂型在不含增溶剂或膨胀促进剂或二者均不含的情况下，在美国药典(USP)I型溶出试验中，其在模拟的胃液中以一级释放率在约12小时内释放<约90%的所述活性剂，包括i.由至少两种生物相容聚合物的聚合物基质、所述药用活性剂和药用辅料制成的片剂；该片剂能够在所述模拟胃液中迅速膨胀至一定的大小而不崩解，导致其在胃内潴留，在与胃液接触后立即通过可控的腐蚀(erosion)和扩散开始控释所述活性剂，或 .掺入所述活性剂的未接枝壳聚糖或壳聚糖衍生物的微球，其中所述药用活性剂不是聚合物分子，在胃内给药后，所述微球黏附于胃黏膜上，以可控的方式长时间释放所述活性剂。
10.根据权利要求9(a)所述的方法，其中所述聚合物包括卡波姆71G和聚环氧乙烷、 Avicel PH 101、聚维酮K30、硬脂酸镁和胶态氧化硅。
11.根据权利要求9(a)所述的方法，其中所述活性剂为阿昔洛韦。
12.根据权利要求9所述的方法，其中所述药用辅料包括粘合剂、稀释剂、pH调节剂、助流剂、润滑剂、成膜剂、抗粘剂、涂层剂、着色剂。
13.根据权利要求9所述的方法，其中所述控释剂型包括阿昔洛韦、卡波姆974P、聚环氧乙烷、Avicel PH101、聚维酮K30、硬脂酸镁、胶态氧化硅。
14.根据权利要求9所述的方法，其中每IOOOmg所述控释剂型包括阿昔洛韦 763. 37mg、卡波姆 974P 75mg、聚环氧乙烧 25mg、Avicel PH 101 93. 83mg、聚维酮 K30 30mg、硬脂酸镁7. 5mg、胶态氧化硅5. Omgo
15.根据权利要求9(b)所述的方法，其中所述壳聚糖衍生物是三甲基壳聚糖或巯基化壳聚糖。
16.根据权利要求9所述的方法，其中所述微球装于小袋中，或用作与任选添加其它的药用成分和辅料制备固体单位剂型包括片剂和胶囊的成分。
17.制备权利要求1所述口服剂型的方法，包括下述步骤i.将含有所述药用活性剂、聚合物和辅料的混合物制成湿粒，添加助流剂并压片，或 .将壳聚糖或壳聚糖衍生物在乙酸中制备成溶液，添加药用活性剂的水溶液，在连续搅拌下将该混合物加入含有表面活性剂的由轻液体石蜡和重液体石蜡(1 1)组成的连续相中，形成油包水乳化剂，在一段时间内滴加戊二醛，持续搅拌一段时间，离心分离形成的微球，用石油醚洗涤，除去液体石蜡，悬浮于亚硫酸氢钠溶液中，并搅拌一段时间，去除残余的戊二醛，最后用蒸馏水洗涤，干燥微球。
全文摘要
本发明公开了一种含有治疗有效量药用活性剂如阿昔洛韦的控释剂型，在不含增溶剂或膨胀促进剂或二者均不含有的情况下，在美国药典(USP)1型溶出试验中，其在模拟的胃液中以一级释放率，约12小时内释放≤约90％的所述活性剂，该控释剂型包括(a)由至少两种生物相容的聚合物，如卡波姆974P和聚环氧乙烷的聚合物基质、所述药用活性剂和药用辅料制成的片剂；该片剂能够在所述模拟胃液中迅速膨胀至一定的大小而不崩解，导致其在胃内潴留，在与胃液接触后立即通过可控的腐蚀和扩散开始控释所述活性剂，或(b)未接枝壳聚糖或壳聚糖衍生物，如巯基化壳聚糖和三甲基壳聚糖，或掺入所述活性剂的卡波姆的微球，其中所述药用活性剂不是聚合物分子，在胃内给药后，所述微球粘附于胃黏膜上，以可控的方式长时间释放所述活性剂。
文档编号A61K31/522GK102307574SQ200980140227
公开日2012年1月4日 申请日期2009年10月8日 优先权日2008年10月8日
发明者A·K·蒂瓦里, 匏·辛格·哈德温德, 苏密特·戴利沃, 苏贝亨特·杰恩, 马杜·拉娜 申请人:鲍斯生命科学Pvt有限公司