专利名称：：异黄酮类化合物在制备抗肿瘤的药物或食品中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，是射干Belamcandachinensis(L.)DC.中异黄酮类化合物鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷在制备抗肿瘤药物或食品中的应用。射干是鸢尾科射干属植物射干Belamcandachinensis(L.)DC.的干燥根茎。已报道的射干含有的主要成分有野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、鸢尾黄酮新苷元A、白射干素、野鸢尾苷和鸢尾苷等19个异黄酮类化合物[JinLi(金丽)，ChenHai-Sheng(陈海生)etal.NewflavoneandisoflavoneglycosidefromBelamcandachinensis,ChineseChemicalLetters2007，18:158-160JinLi(金丽)，ChenHai-sheng(陈海生)，etal.ChemicalconstituentsfromBelamcandachinensisJournalofAsianNaturalProductsResearch2008，10(1):89_91；胡小兰，等。射干中化学成分的分离与鉴定，中药通报，1982，7(1):2930；吉文亮，秦民坚，王峥涛射干的化学成分研究(I)，中国药科大学学报，2001，32(3):197199；余亚纲，等。B.Chinensis根茎中亲脂性组分的研究，药学学报，1983，18(12)969972；YamakiM,etal.，PlantaMed.，1990，56(3)335；HydeyukiIto,SatomiOnoue,etal.，IsoflavonoidsfromBelamcandachinensis,Chem.Pharm.Bull,2001,49(9):12291231；周立新，林茂，赫兰峰，射干的化学成分研究(I)，中草药，1996，27(1):810；秦民坚，吉文亮，王峥涛，射干的化学成分研究(II)，中草药，2004，35(5):487489]。异黄酮类化合物野鸢尾苷元(irigenin)、鸢尾黄素(tectorigenin),次野鸢尾黄素(irisflorentin)、野鸢尾苷(iridin)和鸢尾苷(tectoridin)的化学结构通其中，队为0H或0CH3；R2为0CH3、0H或H；R3为0H或Oglu；R4为0CH3、0H或H；R5为0CH3、OH、H或Oglu(glu为葡萄糖基)；R6为0CH3、0H或H。上述各化合物的基团搭配分别见表1。表1五种异黄酮的化学结构和名称
背景技术：
：式为<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>但至今未见野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷具有抗肿瘤作用方面的报道。
发明内容本发明的目的是为异黄酮类化合物野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷提供一种制备抗肿瘤药物或食品的用途。本发明选用的细胞株为A549(人肺癌细胞)、L0V0(人肠癌细胞)、6T_CEM(人T细胞白血病细胞)、HL-60(人白血病细胞)；采用的实验方法为常规的MTT法。化合物野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷、鸢尾苷自制，制备方法详见JinLi(金丽)，ChenHai_sheng(陈海生)，etal.ChemicalconstituentsfromBelamcandachinensisJournalofAsianNaturalProductsResearch2008，10(1):89_91。经体外抗肿瘤活性试验，野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷对上述细胞株均具有细胞毒活性，特别是鸢尾黄素具有显著抑制MDA-MB-435(人乳腺癌细胞)细胞生长作用，因此可用于制备抗肿瘤药物或食品。本发明为制备抗肿瘤的药物或食品提供了一种新的来源。具体实施例方式现结合实施例，对本发明作详细描述。实施例1.制备野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷、鸢尾苷(详见JinLi(金HI3)，ChenHai_sheng(陈海生)，etal.ChemicalconstituentsfromBelamcandachinensisJournalofAsianNaturalProductsResearch2008，10(1):89_91)中药射干干燥根茎4Kg，粉碎后用80%乙醇加热回流提取3次，减压回收溶剂，得流浸膏约200g，将其分散于蒸馏水800ml中，依次用石油醚、氯仿和乙酸乙酯分别萃取3次(每次500ml)，分别回收溶剂后，得到石油醚萃取物22g，氯仿萃取物65g，乙酸乙酯萃取物28g。取氯仿萃取物65g进行硅胶柱层析，用梯度溶剂系统CHC13—CHC13/CH3OHH20(201)洗脱，分别得到流份C1、C2和C3。将C1再进行S印hadexLH20柱层析，用CHC13/CH30H(11)洗脱，收集相应洗脱液，分别得到化合物BC-3，BC-1和BC-2。取乙酸乙酯萃取物28g，经硅胶柱层析，用梯度溶剂系统CHC13/CH30H(201—11)洗脱，得到流份E1、E2和E3。将E3再进行S印hadexLH20柱层析，用CHC13/CH30H(11)洗脱，收集相应洗脱液，得到化合物BC-4和BC-5。实施例2野鸢尾苷元、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷、鸢尾苷体外抗肿瘤活性实验1、试验药物野鸢尾苷元(BC-1)、鸢尾黄素(BC-2)、次野鸢尾黄素(BC_3)、野鸢尾苷(BC_4)、鸢尾苷(BC-5)，由实施例1制备；阳性对照药强力霉素(D0X)，常州制药厂；2、细胞株由上海医药工业研究院药理研究室提供①AM9(人肺癌细胞)②L0V0(人肠癌细胞)③6T-CEM(人T细胞白血病细胞)④MDA-MB-435(人乳腺癌细胞)3、培养液RPMI1640+15%NBS+双抗(10000U/mL青霉素+10000U/mL链霉素)4、其他材料全自动酶标仪型号(WellscanMK-2)生产厂商芬兰Labsystems公司96孔细胞培养板(美国Nime公司)5、实验方法1)配制细胞悬液按常规将上述各细胞株用RPMI1640+15%NBS+双抗配制成浓度为4_5X104个/ml的细胞悬液。2)配制药物溶液将野鸢尾苷元(BC-1)、鸢尾黄素(BC-2)、次野鸢尾黄素(BC_3)、野鸢尾苷(BC_4)、鸢尾苷(BC-5)和强力霉素(D0X)精密称重，分别用适量DMS0溶解，临用时以含DMEM的PBS(-)稀释至所需浓度，DMS0终浓度低于0.1%(V/V)。药物溶液浓度为lmg/ml。3)抗肿瘤活性实验采用MTT法，在96孔板上，分别加入细胞悬液lOOiU/孔，置5%0)2培养箱内37°C培养；培养至24h，分别加入药物溶液10yl/孔，设双复孔，继续置5%C02培养箱内37°C培养；培养至72h，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20u1，继续培养4h，终止培养，lOOOrpm离心5min，然后弃去培养板孔内的培养液，每孔加入150iilDMS0，震荡lOmin，充分溶解后，用MK-2全自动酶标仪测570nm0D值。6、实验结果通过MTT法测定异黄酮类化合物鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷、鸢尾苷体外细胞毒活性，各化合物的IC50和肿瘤细胞抑制率如表2所示。表2五个异黄酮化合物对人体肿瘤细胞的体外增殖抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表2可见，5种异黄酮类化合物(BC-1-BC-5)对所选肿瘤细胞都有抑制作用，尤其是对人肠癌细胞(L0V0)的抑制率都比较明显，鸢尾黄素(BC-2)和次野鸢尾黄素(BC-3)对人乳腺癌细(MDA-MB-435)的抑制作用非常明显。上述实验结果表明，异黄酮类化合物鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷均具有较显著的抗肿瘤作用，因此可用于制备抗肿瘤的药物或食品。权利要求异黄酮类化合物鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷在制备抗肿瘤的药物或食品中的应用，它们的化学结构通式如下其中R1为OH或OCH3；R2为OCH3、OH或H；R3为OH或Oglu；R4为OCH3、OH或H；R5为OCH3、OH、H或Oglu；R6为OCH3、OH或H；各化合物的基团搭配分别为FSA00000081695800011.tif全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，是射干Belamcandachinensis(L.)DC.中异黄酮类化合物鸢尾黄素、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素、野鸢尾苷或鸢尾苷用于制备抗肿瘤的药物或食品的用途。经体外实验，它们对细胞株A549(人肺癌细胞)、LOVO(人肠癌细胞)、6T-CEM(人T细胞白血病细胞)、HL-60(人白血病细胞)具有显著抑制细胞生长作用，因此，可用于制备抗肿瘤的药物或食品。本发明为制备抗肿瘤的药物或食品提供了新的来源。文档编号A61K31/352GK101797247SQ20101014491公开日2010年8月11日申请日期2010年4月9日优先权日2010年4月9日发明者刘建国,赵卫权,金丽,金永生,陈海生申请人:中国人民解放军第二军医大学