抗FcRH5抗体和免疫偶联物及使用方法

专利名称：抗FcRH5抗体和免疫偶联物及使用方法
技术领域：
本发明致力于对于哺乳动物中造血肿瘤(hematopoietic tumor)治疗有用的组合物和使用那些组合物治疗哺乳动物中造血肿瘤的方法。
背景技术：
恶性肿瘤(癌症)是美国第二位死因，排在心脏病之后(Boring等，CACancel J. Clin. 43 7 (1993))。癌症的特征在于衍生自正常组织的赘生性细胞或异常细胞的数目增力口，所述细胞增殖而形成肿瘤块，这些赘生性肿瘤细胞侵入邻近组织，和产生经称作转移的过程最终经血液或淋巴系统扩散至局部淋巴结和远端部位。在癌性状态中，细胞在正常细胞不会生长的条件下增殖。癌症自身表现为极其多种形式，特征在于不同程度的侵入性和攻击性。涉及造血(生成血液的细胞要素(诸如淋巴细胞、白细胞、血小板、红细胞和天然杀伤细胞)的过程)期间生成的细胞的癌症称作造血癌症。能在血液和淋巴组织中找到且对免疫应答至关重要的淋巴细胞分成两大类淋巴细胞B淋巴细胞(B细胞)和T淋巴细胞 (T细胞)，它们分别介导体液和细胞介导的免疫。B细胞在骨髓内成熟，然后离开骨髓并在其细胞表面上表达抗原结合抗体。当幼稚B细胞初次遭遇其膜结合抗体对之特异性的抗原时，该细胞开始快速分裂且其后代分化成记忆B细胞和称作“浆细胞”的效应细胞。记忆B细胞具有较长的寿命并继续表达与最初的亲本细胞具有相同特异性的膜结合抗体。浆细胞不生成膜结合抗体，但改为生成可分泌形式的抗体。分泌型抗体是体液免疫的主要效应分子。T细胞在胸腺内成熟，胸腺为未成熟T细胞的增殖和分化提供环境。在T细胞成熟期间，T细胞经历基因重排(这生成T细胞受体)及正和负选择(这有助于决定成熟T细胞的细胞表面表型)。成熟τ细胞的特征性细胞表面标志物是CD3: T细胞受体复合物和共同受体⑶4或⑶8之一。在试图发现癌症疗法的有效细胞靶物的尝试中，研究人员试图鉴定与一种或多种正常的非癌性细胞相比在一种或多种特定类型的癌细胞的表面上特异性表达的跨膜的或以其它方式与膜结合的多肽。通常，此类膜结合多肽在癌细胞表面上表达的丰度要高于非癌性细胞表面上的。此类膜结合细胞表面抗原多肽的鉴定产生了特异性靶向癌细胞的能力，供经基于抗体的疗法进行的破坏用。在这点上，注意到基于抗体的疗法在某些癌症的治疗中证明是非常有效的。例如，HERCEPTIN 和RITUXAN (二者都来自Genentech 公司(South San Francisco，California))是分别已经成功用于治疗乳腺癌和非何杰金氏淋巴瘤的抗体。更具体的说，HERCEPTIN 是重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，其选择性结合人表皮生长因子受体2 (HER2)原癌基因的胞外结构域。在25-30%的原发性乳腺癌中观察到HER2蛋白过表达。RITUXAN 是遗传工程嵌合鼠/人单克隆抗体，其针对在正常和恶性B淋巴细胞的表面上找到的⑶20抗原。这两种抗体都是在CHO细胞中重组生产的。在试图发现癌症疗法的有效细胞靶物的其它尝试中，研究人员试图鉴定(1)与一种或多种特定类型的非癌性正常细胞相比由一种或多种特定类型的癌细胞特异性生成的非膜结合的多肽，(2)由癌细胞以显著高于一种或多种非癌性细胞的表达水平生成的多肽， 或C3)其表达特异性局限于只有一种(或非常有限数目的不同)组织类型的多肽，所述组织处于癌性和非癌性两种状态(例如正常前列腺和前列腺肿瘤组织)。此类多肽可以保持胞内定位，或者可以由癌细胞分泌。此外，此类多肽可以是不是由癌细胞自身表达的，而是由生成和/或分泌对癌细胞具有强化或生长增强效果的多肽的细胞表达的。此类分泌多肽常常是给癌细胞提供胜过正常细胞的生长优势的蛋白质，而且包括诸如例如血管发生因子、细胞粘附因子、生长因子等等的物质。此类非膜结合多肽的拮抗剂的鉴定预期会充当此类癌症治疗的有效治疗剂。而且，此类多肽的表达样式的鉴定对于哺乳动物中特定癌症的诊断会是有用的。尽管在哺乳动物癌症疗法中有了上述进展，对于能够分别检测哺乳动物中肿瘤的存在和有效抑制肿瘤性细胞生长的别的治疗剂仍然存在很大的需要。因此，本发明的一个目标是鉴定其表达特异性地局限于处于癌性和非癌性状态的单一(或非常有限数目的不同)组织类型即造血组织的，细胞膜结合的、分泌的或胞内的多肽，及使用那些多肽及其编码核酸来生成在哺乳动物中造血癌症的治疗性处理和/或检测中有用的组合物。染色体lq21的异常在B细胞恶性(包括B细胞淋巴瘤和骨髓瘤)中是常见的， 但是这些畸变靶向的基因大多不知道。涉及带Iq21_q23的染色体异常是B细胞非何杰金氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤二者中最频繁的遗传损害之一。在非何杰金氏淋巴瘤亚型中， Iq21_q23处的易位断裂点(包括易位和重复)已有报告，常常作为伯基特淋巴瘤中和边缘区B细胞淋巴瘤中的滤泡和弥漫大B细胞淋巴瘤(DLCL)中的单一染色体异常。通过克隆骨髓瘤细胞系中的t (1:14) (q21:q32)染色体易位的断裂点，鉴定出两种基因，称作免疫球蛋白超家族受体易位有关(IRTA) 1和IRTA2。IRTA2与鉴定为BXMASl (Nakayama etal.， Biochm. Biophys. Res. Commun. 285 :830_7，2001)禾口FcRH5 (Davis et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98 :9772-7,2001)的序列相同。IRTAl和IRTA2都是相关基因家族IRTA的成员。FcRH5(或IRTA2)是一种与Fc受体家族具有同源性的细胞表面受体。它在正常情况中在成熟B细胞中表达，而且在外周淋巴样器官中具有与FcRH4(IRTAl)不同的分布。 IRTAl在边缘区B细胞中表达，而IRTA2还在生发中心中央细胞中和在免疫母细胞中表达。 IRTA2表达在具有lq21异常的多发性骨髓瘤和伯基特淋巴瘤细胞系中失调(参见Miller et al.，Blood99 3662-2669，2002)。B细胞恶性中高频率涉及lq21结构重排提示IRTAl和 IRTA2对于这些疾病的发病机理是至关重要的(参见已公布的PCT申请No. WO 01/38490 ； 已公布的美国专利申请No. 20080292632,通过述及将其完整内容收入本文)(还可参见 Poison, et al. Int Immunol. 2006 S印；18 (9) :1363-73)。鉴于FcRH5的表达，生成针对FcRH5抗原的治疗性抗体是有益的，其在施用给患者时(尤其是用于长期治疗)产生最低限度的抗原性或不产生抗原性。本发明满足了这种需要和其它需要。本发明提供了抗FcRH5抗体，其克服了当前治疗性组合物的限制且提供别的优点，这根据下文详述是显而易见的。抗体-药物偶联物(ADC)，即免疫偶联物在局部递送细胞毒性剂或细胞生长抑制剂，即在治疗癌症中杀伤或抑制肿瘤细胞的药物中的应用(Lambert，J. (2005)Curr. Opinion in Pharmacology 5 :543-549 ；Wu 等(2005)NatureBiotechnology 23(9) 1137-1146 ；Payne, G. (2003)Cancer Cell 3 :207-212 ；Syrigos 禾口 Epenetos (1999) Anticancer Research 19 :605-614 ;Niculescu_Duvaz 禾口 Springer(1997)Adv. Drug Del. Rev. 26 :151-172 ；US 4975278)能够将药物模块靶向递送至肿瘤并且在其中发生胞内蓄积，其中全身给予这些未偶联的药物活性剂在对肿瘤细胞消除的同时也对正常细胞产生了不可接受水平的毒性(Baldwin 等(1986) Lancet pp. (Mar. 15，1986) :603-05 ； Thorpe, (1985) “ AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy A Review, " -MonoclonalAntibody ' 84 :Biological and Clinical Applications, A. Pinchera等(ed. s), pp. 475-506)。提高ADC的治疗指数(即最高的功效与最低的毒性)的努力已经集中到多克隆抗体(Rowland et al (1986)Cancer Immunol. Immunother., 21 :183-87)和单克隆抗体(mAbs)的特异性以及药物-连接和药物-释放特性上 (Lambert, J. (2005)Curr. Opinion in Pharmacology 5 :543_549) 。
物的药物模块包括细菌蛋白质毒素，诸如白喉毒素，植物蛋白质毒素，诸如蓖麻毒素；小分子，诸如 auristatin、格尔德霉素(geldanamycin) (Mandler 等(2000) J. of the Nat. Cancer Inst. 92(19) :1573-1581；Mandler 等(2000)Bioorganic & Med.Chem. Letters 10 :1025-1028 ；Mandler 等 Q002)BioconjugateChem. 13 :786-791)；美登木素生物碱 (maytansinoids) (EP 1391213 ;Liu 等(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623)； 加利车霉素(calicheamicin) (Lode 等(1998)Cancer Res. 58 :2928 ；Hinman 等(1993) Cancer Res. 53 :3336-3342)；柔红霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、甲氨蝶呤 (methotrexate)和长春地辛(vindesine) (Rowland等(1986)，见上文)。药物模块可以影响细胞毒性和细胞抑制性机制，包括微管蛋白结合、DNA结合或拓扑异构酶抑制。某些细胞毒性药物在与大的抗体或蛋白质受体配体偶联时趋向于失活或活性降低。Auristatin 月太类，auristatin E(AE)JPmonomethyl auristatin (MMAE),多拉司他汀(dolastatin)的合成类似物(W0 02/088172)作为药物模块与下列各项偶联 (i)嵌合单克隆抗体cBR96(对癌上的Lewis Y具有特异性)；(ii)对血液恶性肿瘤上的 CD30 具有特异性的 cAC10(Klussman,等(2004)，BioconjugateChemistry 15(4) 765-773 ；Doronina 等(2003)Nature Biotechnology21 (7) :778-784 ；Francisco 等 (2003)Blood 102(4) :1458-1465 ；US 2004/0018194 ； (iii)用于治疗表达 CD20 的癌症和免疫病变的抗-CD20抗体，诸如B细胞单克隆抗体(rituxan) (W0 04/032828) ； (iv) 用于治疗结肠直肠癌的抗_EphB2R抗体2H9(Mao等(2004)Cancer Research 64(3) 781-788) ； (v)E-选择蛋白抗体(Bhaskar 等(2003)Cancer Res. 63 :6387-6394) ； (vi)曲妥单抗(trastuzumab，HERCEPTIN ,US 2005/0238649)；和(vi)其它抗-CD30 抗体 (W003/043583)。auristatin E 的变体披露在 US 5767237 和 US 6124431 中。与单克隆抗体 禹联白勺 Monoemethyl auristatin E 披露在 Senter 等白勺 Proceedings of theAmerican Association for Cancer Research, Volume 45,Abstract Number 623 中，2004 年 3 月 28 日提交。Auristatin类似物MMAE和MMAF与各种抗体偶联(US2005/0238649)。
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常规附着方式，即通过共价键连接，药物模块与抗体一般产生不均一的 (heterogeneous)分子混合物，其中药物模块结合在抗体上的许多位点上。例如，细胞毒性药物一般与抗体通过抗体的通常大量的赖氨酸残基偶联，从而产生不均一的抗体-药物偶联物混合物。根据反应条件的不同，所述的不均一混合物一般含有抗体0-约8个或8个以上附着的药物模块的分布。此外，在具有特定整数比的药物模块与抗体的偶联物各亚组内可能是不均一的混合物，其中药物模块结合在抗体上的不同位点上。分析和制备方法可能不足以分离和表征由偶联反应产生的不均一混合物中的抗体-药物偶联物类分子。抗体为较大的复杂的并且结构多样的生物分子，通常带有许多反应性官能基。其与接头试剂和药物-接头中间体的反应性取决于如下因素诸如PH、浓度、盐浓度和共溶剂。此外，多步骤偶联过程因控制反应条件和表征反应剂和中间体方面的困难而可能不可再现。半胱氨酸硫醇在中性pH具有反应性，这与在接近pH 7时质子化和亲核性降低的大部分胺类不同。由于游离硫醇(RSH，硫氢基)具有相对的反应性，所以带有半胱氨酸残基的蛋白质通常以其作为二硫化物-连接的寡聚体的氧化形式存在或具有内部桥连的二硫化物基团。胞外蛋白一般不带有游离硫醇(Garman，1997，Non-Radioactive Labelling A Practical Approach, AcademicPress, London, 55 页上)。抗体半胱氨酸硫醇一般对亲电子偶联反应剂比对抗体胺或羟基更具反应性，即更具亲核性。已经通过遗传改造将半胱氨酸残基引入了蛋白质以便形成与配体的共价结合物或形成新的分子内二硫键(Better等 (1994)J.Biol. Chem. 13 :9644-9650 ；Bernhard 等(1994)Bioconjugate Chem. 5 :126-132 ； Greenwood φ (1994)Therapeutic Immunology 1:247-255 ；Tu φ (1999)Proc. Natl. Acad. Sci USA 96 :4862-4867 ；Kanno 等(2000) J. of Biotechnology, 76 :207-214 ；Chmura 等 (2001)Proc. Nat. Acad. Sci. USA 98(15) :8480-8484 ;US6248564)。然而，通过使蛋白质的不同氨基酸残基突变成半胱氨酸氨基酸来改造半胱氨酸硫醇可能存在问题，特别是就未配对的(游离Cys)残基或那些相对易于进行反应或氧化的残基而言。在蛋白质的浓溶液中， 无论是在大肠杆菌(E.coli)的周质中，还是在培养物上清液或部分或完全纯化的蛋白质中，蛋白质表面上的未配对的Cys残基可以配对并且氧化成分子内二硫化物和由此的蛋白质二聚体或多聚体。二硫化物二聚体的形成使得新的Cys无法与药物、配体或其它标记发生偶联反应。此外，如果蛋白质以氧化方式在新改造的Cys和已存在的Cys残基之间形成分子内二硫键，那么两种Cys硫醇基团对活性位点的参与和相互作用而言均无法利用。此夕卜，可以通过错误折叠或丧失三级结构使蛋白质失活或赋予其非特异性(aiang等O002) Anal. Biochem. 311 :1_9)。半胱氨酸改造抗体已经设计成Fab抗体片段(thioFab)和表达成全长IgG单克隆(thioMab)抗体(Junutula，J. R. et al. (2008) J Immunol Methods 332 :41-52 ；US 2007/0092940，通过述及收录其内容)。ThioFab和ThioMab抗体经新引入的半胱氨酸硫醇处的接头与硫醇反应性接头试剂和药物-接头试剂偶联以制备抗体药物偶联物(Thio ADC)。通过述及完整收录本文中引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)。发明概述本发明提供了抗FcRH5抗体或其功能性片段，及其在造血肿瘤治疗中的使用方法。
一方面，本发明提供了一种与任何上文或下文所述多肽结合(优选特异性结合) 的抗体。任选的是，所述抗体是单克隆抗体、抗体片段(包括Fab、Fab'、F(ab'片段)、双抗体、单域抗体、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗FcRH5多肽抗体结合其相应抗原性表位的抗体。本发明的抗体可任选偶联至生长抑制剂或细胞毒剂，诸如毒素，包括例如auristatin、美登木素生物碱、多拉司他汀衍生物或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶、诸如此类。本发明的抗体可任选在CHO细胞或细菌细胞中生成，且优选诱导它们所结合的细胞死亡。出于检测目的，本发明的抗体可以是可检测标记的，附着至固体支持物的，诸如此类。一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对FcRH5的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对FcRH5的亲和力)或二价形式的该抗体对FcRH5的亲和力 (例如IgG片段形式的抗体对FcRH5的亲和力)分别与鼠抗体(例如Fab片段形式或IgG 片段形式的鼠抗体对FcRH5的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的嵌合抗体对FcRH5的亲和力)的单价亲和力或其二价形式的亲和力基本上相同，分别低于鼠抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的鼠抗体对FcRH5的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的嵌合抗体对FcRH5的亲和力)的单价亲和力或其二价形式的亲和力，或分别高于鼠抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的鼠抗体对FcRH5的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的嵌合抗体对FcRH5的亲和力) 的单价亲和力或其二价形式的亲和力，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图9(SEQ ID NO 19)和

图10 (SEQ ID NO 21)所示轻链和重链可变域序列，由图9 (SEQ ID NO 19)和图10 (SEQ ID N0:21)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图9 (SEQ ID NO 19)和图10(SEQID NO 21)所示轻链和重链可变域序列组成。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对 FcRH5的亲和力(例如IgG形式的该抗体对FcRH5的亲和力)是0. 4ηΜ、0· 2ηΜ或0. 5ηΜ。一方面，提供了一种与FcRH5结合的抗体，其中该抗体包含至少一种、两种、三种、 四种、五种或六种选自下组的HVR (i) HVR-Ll，其包含序列 KASQDVSTAVA (SEQ ID NO 26)(ii)HVR-L2，其包含序列 SASYRYT (SEQ ID NO 27)(iii)HVR-L3，其包含序列 QQHFSSPRT(SEQ ID NO :28)(iv) HVR-Hl，其包含序列 GFTFSSYAVS (SEQ ID NO :35)(v)HVR-H2，其包含序列 ATISSGGSLTFYLDSVR(SEQ ID NO :36)禾口(vi)HVR-H3，其包含序列 PIPDYYALDY(SEQ ID NO :37)。在另一个实施方案中，所述HVR-H2具有序列SEQ ID NO :36。在另一个实施方案中，所述抗体包含人κ亚组1共有框架序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含重链人亚组III共有框架序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含与选自SEQ ID N0:19的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的轻链可变域。在一个实施方案中，所述抗体包含与选自SEQ ID N0:21的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的重链可变域。在另一个实施方案中，所述抗体包含与选自SEQ ID NO :19的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的轻链可变域。在另一个实施方案中，所述抗体包含与选自SEQ ID NO :21的氨基酸序列具有至
20少90%氨基酸序列同一性的重链可变域。在一个实施方案中，所述抗体包含重链可变域， 该重链可变域包含一种、两种、三种或四种选自SEQID NO :31、32、33和34的框架氨基酸序列。在其它实施方案中，所述抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含一种、两种、三种或四种选自SEQ ID而22、23、对和25的框架氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含重链可变域包含一种、两种、三种或四种与选自SEQ ID NO :31、32、33和34的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的框架氨基酸序列。在其它实施方案中，所述抗体包含轻链可变域包含一种、两种、三种或四种与选自SEQID NO =22,23,24和25的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的框架氨基酸序列。一方面，提供了结合FcRH5的抗体，其中所述抗体包含至少一种变异HVR，其中所述变异HVR序列包含SEQ ID NO :26、27、28、35、36或37所示序列中的至少一个残基的修饰。在另一个实施方案中，所述修饰是替代、插入或删除。在另一个实施方案中，框架序列的至少一部分是人共有框架序列。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对人FcRH5的单价亲和力与包含图9 (SEQ ID NO 19)和图10 (SEQ ID NO 21)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的单价亲和力基本上相同。一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对人FcRH5的单价亲和力比包含图9 (SEQ ID NO 19)和图10 (SEQ ID NO 21)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的单价亲和力高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对人FcRH5的单价亲和力比包含图9(SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的单价亲和力低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、25、30、35、40、45、50、55 或 60 倍。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人 FcRH5的亲和力与二价形式的且包含图9 (SEQ ID NO :18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的亲和力基本上相同。一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人 FcRH5的亲和力比二价形式的且包含图9 (SEQ ID NO :18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的亲和力高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人 FcRH5的亲和力比二价形式的且包含图9 (SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO :20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的亲和力低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55 或60 倍。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人 FcRH5的亲和力是0.4nM。在一个实施方案中，二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是 0. 4nM+/-. 04。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人 FcRH5的亲和力是0. 2nM。在一个实施方案中，二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是 0. 2nM+/-. 02。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是0. 5nM。在一个实施方案中，二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是 0. 5nM+/-0. 1。在所有方面，所述结合亲和力表述成Kd值。另一方面，所述结合亲和力是通过 Biacore或放射免疫测定法测量的。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中该人源化抗体在偶联至细胞毒剂时抑制肿瘤细胞生长。另一方面，本发明提供了一种人源化抗FcRH5抗体，其中该人源化抗体在偶联至细胞毒剂时抑制肿瘤细胞生长。在一个实施方案中，所述人源化抗体和嵌合抗体均是单价的或二价的。在另一个实施方案中，所述人源化抗体和嵌合抗体均包含连接至Fc区的单一 Fab区另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图 11 (SEQ ID NO :35-37)所示 HVR1-HC、HVR2-HC 和 / 或 HVR3-HC 序列。在一个实施方案中， 所述可变域包含图 11 (SEQ ID NO 31-34)所示 FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC 和 / 或 FR4-HC 序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含图11 (SEQ ID NO 38和/或39)所示CHl和/或 Fc序列。另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图 11 (SEQ ID NO :26-28)所示 HVR1-LC、HVR2-LC 和 / 或 HVR3-LC 序列。在一个实施方案中， 所述可变域包含图 11 (SEQ ID NO 22-25)所示 FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC 和 / 或 FR4-LC 序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含图11(SEQ ID NO 29)所示CLl序列。一方面，本发明提供了一种多肽，其包含图10(SEQ ID NO :21)所示序列。另一方面，本发明提供了一种多肽，其包含图9(SEQ ID NO 19)所示序列。另一方面，本发明提供了通过如下工艺制备的抗体，所述工艺包括(a)培养表达包含本文所述重链可变域和本文所述轻链可变域的抗体的细胞；并(b)分离自所述培养的细胞分离所述抗体。另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含本文所述重链可变域和本文所述轻链可变域。在一个实施方案中，所述抗体是单价的且包含Fc区。一方面，本发明提供了一种多核苷酸，其编码本文所述抗体。在一个实施方案中， 本发明提供了一种载体，其包含所述多核苷酸。在另一个实施方案中，本发明提供了一种宿主细胞，其包含所述载体。一方面，本发明包括一种半胱氨酸改造抗FcRH5抗体，其包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸和选自SEQ ID NO :41-44的序列。所述半胱氨酸改造抗FcRH5抗体可以与 FcRH5多肽结合。所述半胱氨酸改造抗FcRH5抗体可以通过包括用半胱氨酸替换亲本抗 FcRH5抗体的一个或多个氨基酸残基的方法来制备。一方面，本发明包括一种半胱氨酸改造抗FcRH5抗体，其包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，其中所述半胱氨酸改造抗FcRH5抗体与FcRH5多肽结合且是通过包括用半胱氨酸替换亲本抗FcRH5抗体的一个或多个氨基酸残基的方法制备的，其中所述亲本抗体包含至少一种选自下组的HVR序列(i) HVR-Ll，其包含序列 KASQDVSTAVA (SEQ ID NO 26)(ii)HVR-L2，其包含序列 SASYRYT (SEQ ID NO 27)
(iii)HVR-L3，其包含序列 QQHFSSPRT(SEQ ID NO :28)(iv) HVR-Hl，其包含序列 GFTFSSYAVS(SEQ ID NO :35)(v)HVR-H2，其包含序列 ATISSGGSLTFYLDSVR(SEQ ID NO :36)禾口(vi)HVR-H3，其包含序列 PIPDYYALDY(SEQ ID NO :37)。所述半胱氨酸改造抗FcRH5抗体可以是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗FcRH5多肽抗体结合其相应抗原性表位的抗体。本发明的抗体可任选偶联至生长抑制剂或细胞毒剂，诸如毒素，包括例如auristatin或美登木素生物碱。本发明的抗体可任选在CHO细胞或细菌细胞中生成，且优选抑制它们所结合的细胞生长或增殖或诱导它们所结合的细胞死亡。出于诊断目的，本发明的抗体可以是可检测标记的，附着至固体支持物的，诸如此类。一方面，本发明提供了制备本发明抗体的方法。例如，本发明提供了一种制备 FcRH5抗体(如本文中所定义的，其包括全长抗体及其片段)的方法，所述方法包括在合适的宿主细胞中表达编码所述抗体(或其片段)的本发明重组载体，并回收所述抗体。另一方面，本发明提供了能够结合表达FcRH5的第一细胞和表达细胞表面靶抗原的第二细胞的双特异性抗体。在一个实施方案中，所述第二细胞是T细胞。在一个实施方案中，所述细胞表面靶抗原是CD3。在某些实施方案中，所述双特异性抗体是隆起入空腔抗体(protruberance-into-cavity antibody)。在一个实施方案中，所述双特异性抗体是无糖基化的。在一个实施方案中，所述双特异性抗体是在大肠杆菌宿主细胞中生成的。在一个实施方案中，所述双特异性抗体缺少一种或多种Fc效应器功能。在一个实施方案中，所述双特异性抗体缺少ADCC活性。一方面，本发明是一种药物配制剂，其包含本发明的抗体或本发明的抗体-药物偶联物，及药学可接受稀释剂、载体或赋形剂。一方面，本发明提供了一种制品，其包含容器；和装在该容器内的组合物，其中所述组合物包含一种或多种本发明的FcRH5抗体。一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含第一容器，其中装有包含一种或多种本发明FcRH5抗体的组合物；及第二容器，其中装有缓冲液。一方面，本发明提供了本发明的FcRH5抗体在制备用于治疗性和/或预防性处理疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)的药物中的用途。一方面，本发明提供了本发明的制品在制备用于治疗性和/或预防性处理疾病 (诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)的药物中的用途。—方面，本发明提供了本发明的试剂盒在制备用于治疗性和/或预防性处理疾病 (诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)的药物中的用途。—方面，本发明提供了一种抑制表达FcRH5的细胞生长的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明的抗体，由此引起对所述细胞生长的抑制。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。一方面，本发明提供了一种治疗性处理患有癌性肿瘤(所述癌性肿瘤包含表达 FcRH5的细胞)的哺乳动物的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗性有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述哺乳动物。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
—方面，本发明提供了一种用于治疗或预防与FcRH5表达升高有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括给需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明抗体，由此有效治疗或预防所述细胞增殖性病症。在一个实施方案中，所述增殖性病症是癌症。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。一方面，本发明提供了一种用于抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分依赖于FcRH5的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体， 由此抑制所述细胞的生长。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。一方面，本发明提供了一种治疗性处理哺乳动物中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖于FcRH5的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述肿瘤。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。—方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，包括给患者施用药物配制剂，该药物配制剂包含本文所述免疫偶联物、可接受的稀释剂、载体或赋形剂。—方面，本发明提供了一种抑制B细胞增殖的方法，包括在允许下述免疫偶联物结合至FcRH5的条件下使细胞暴露于包含本发明抗体的免疫偶联物。本发明的方法可进一步包括别的治疗步骤。例如在一个实施方案中，方法进一步包括其中使所靶向的细胞和/或组织(例如癌细胞)暴露于放射治疗或化疗剂的步骤。一方面，本发明提供了如下的方法，其包括与有效量的另一治疗剂(诸如抗血管发生剂、另一抗体、化疗剂、细胞毒剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂)组合地施用有效量的抗FcRH5抗体。例如， 与抗癌剂或抗血管发生剂组合地使用抗FcRH5抗体以治疗各种赘生性或非赘生性疾患。在具体的例子中，与Velcade (bortezomib)、Revlimid (Ienalidomide)、他莫昔芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、贝伐单抗、长春新碱、 顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、长春碱、卡钼、帕利他赛、多西他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、地塞米松、美法仑、泼尼松、长春新碱、沙利度胺组合地使用抗FcRH5抗体。根据要治疗的具体癌症适应证，本发明的组合疗法可以与别的治疗剂诸如化疗剂或者别的疗法诸如放疗或手术组合。许多已知的化疗剂可以在本发明的组合疗法中使用。 优选地，会使用作为具体适应证标准治疗的那些化疗剂。组合中要使用的每种治疗剂的剂量或频率优选与相应药剂在没有其它药剂的情况中使用时的剂量或频率相同，或更少。另一方面，本发明提供了本文所述任何抗FcRH5抗体，其中所述抗FcRH5抗体包含可检测标记物。一方面，本发明提供了一种测定怀疑含有FcRH5的样品中FcRH5的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于本发明的抗体，并测定所述抗体对所述样品中FcRH5 的结合，其中所述抗体结合所述样品中的FcRH5指示所述样品中存在所述蛋白质。一方面，本发明提供了一种诊断与表达FcRH5的细胞(诸如B细胞)增多有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括使生物学样品中的测试细胞接触任何上述抗体；通
24过检测所述抗体对FcRH5的结合来测定结合至所述样品中测试细胞的抗体的水平；并比较结合至对照样品中细胞的抗体的水平，其中将所结合的抗体的水平相对于测试和对照样品中表达FcRH5的细胞的数目标准化，且其中测试样品中所结合的抗体的水平高于对照样品指明存在与表达FcRH5的细胞有关的细胞增殖性病症。一方面，本发明提供了一种检测血液或血清中可溶性FcRH5的方法，所述方法包括使来自怀疑经历B细胞增殖性病症的哺乳动物的血液或血清测试样品接触本发明的抗 FcRH5抗体，并检测测试样品中可溶性FcRH5相对于来自正常哺乳动物的血液或血清对照样品的升高。一方面，本发明提供了一种使本发明的抗体结合至表达FcRH5的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明的抗体。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。附图简述图1描绘嵌合抗人FcRH5 7D11轻链(DNA)。图2描绘嵌合抗人FcRH5 7D11轻链(氨基酸)。图3描绘嵌合抗人FcRH5 7D11重链(DNA)。图4描绘嵌合抗人FcRH5 7D11重链(氨基酸)。图5描绘嵌合抗人FcRH5 (mAblOA8)轻链(DNA)。图6描绘嵌合抗人FcRH5 (mAblOA8)轻链(氨基酸)。图7描绘嵌合抗人FcRH5 (mAblOA8)重链(DNA)。图8描绘嵌合抗人FcRH5 (mAblOA8)重链(氨基酸)。图9显示鼠10A8和人源化10A8vl的可变轻链与人共有VL κ 1 (huKI)域(SEQ ID NO:64)的比对。图10显示鼠10A8和人源化10A8vl的可变重链与人亚组共有VH(hullI)域(SEQ ID NO 65)的比对。图11显示本发明抗体(HulOA8vl)的氨基酸序列。图12显示本发明thio-Mab半胱氨酸改造多肽链的氨基酸序列。图13显示的本发明thio-Mab半胱氨酸改造多肽链的氨基酸序列。图14显示FcRH5抗体的交叉反应性。图15显示FcRH5抗体的交叉反应性。图16显示FcRH5抗体的交叉反应性。图17显示FcRH5抗体的FACS分析。图18显示FcRH5抗体滴定。图19显示FcRH5抗体滴定。图20显示本发明thio-Mab的FACS分析图21显示本发明thio-Mab的FACS分析图22显示本发明thio-Mab的FACS分析图23显示本发明thio-Mab的FACS分析图M显示本发明偶联抗体的FACS分析。图25显示本发明偶联抗体的FACS分析。
图沈显示本发明抗体对肿瘤体积均值的影响。图27显示本发明抗体对体重均值的影响。图观显示本发明抗体对肿瘤体积均值的影响。图四显示本发明抗体对体重均值的影响。图30a显示本发明抗体偶联物对肿瘤体积均值的影响。图30b显示本发明抗体偶联物对体重均值的影响。图31显示单一化合物剂量响应分析。图32显示单一化合物剂量响应分析。图33显示PR0820 cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO :58)，其中SEQ ID NO :58是在本文中称作“DNA56041-1416”的克隆(在本文中也称作“FcRH5”)。该核苷酸序列编码FcRH5， 起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线(参见Goddard等人美国专利No. 7491529)。图34显示自图33所示SEQ ID NO 59的编码序列推导的氨基酸序列(SEQID NO 59)(参见Goddard等人美国专利No. 7491529)。图!35A-B 显示 PR052387 cDNA 的核苷酸序列(SEQ ID NO :602)，其中 SEQID NO: 60是在本文中称作“DNA257845”的克隆(在本文中也称作“FcRH5”)。该核苷酸序列编码 FcRH5，起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线(参见Chang等人已公布的美国专利申 it No. 20060251662).图36显示自图36A-B所示SEQ ID NO 61的编码序列推导的氨基酸序列(SEQ ID NO 61)(参见Chang等人已公布的美国专利申请No. 20060251662)。图 37 显示 PR0314992 cDNA 的核苷酸序列(SEQ ID NO :62)，其中 SEQ IDNO 62 是来自猕猴，在本文中称作“DNA676969”的克隆(在本文中也称作“cyno FcRH5”)。图38显示自图37所示SEQ ID NO 63的编码序列推导的氨基酸序列(SEQID NO 63)。图39显示小鼠中抗体免疫偶联物和至少一种化疗剂的组合施用对肿瘤体积均值的影响。图40显示每个剂量组中动物的百分比体重变化。图41显示小鼠中抗体免疫偶联物和至少一种化疗剂的组合施用对肿瘤体积均值的影响。图42显示每个剂量组中动物的百分比体重变化。图43显示小鼠中抗体免疫偶联物和至少一种化疗剂的组合施用对肿瘤体积均值的影响。图44显示每个剂量组中动物的百分比体重变化。图45显示本发明抗体偶联物对肿瘤体积均值的影响。图46显示本发明抗体偶联物对体重均值的影响。图47显示本发明抗体偶联物对肿瘤体积均值的影响。图48显示本发明抗体偶联物对体重均值的影响。发明详述本发明提供了用于鉴定对于哺乳动物中造血肿瘤治疗有用的组合物的方法、组合物、试剂盒和制品及使用那些组合物治疗哺乳动物中造血肿瘤的方法。
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本文中提供了这些方法、组合物、试剂盒和制品的详情。I.通用技术除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。文献中充分阐述了此类技术，诸如"Molecular Cloning ALaboratory Manual，，，second edition (Sambrook et al. , 1989) ；"OligonucleotideSynthesis" (Μ. J. Gait, ed. , 1984) ；"Animal Cell Culture" (R. I.Freshney, ed. , 1987) ；“Methods in Enzymology" (Academic Press, Inc. ) ；"Current Protocols inMolecular Biology" (F. M. Ausubel et al. , eds. , 1987, and periodic updates) ；“PCR :The Polymerase Chain Reaction，，，(Mullis et al. , ed., 1994) ；"A PracticalGuide to Molecular Cloning” (Perbal Bernard V. ，1988) ；"Phage Display ALaboratory Manual" (Barbas et al.，2001)。II.定义为了解释本说明书的目的，应用以下定义，而且在任何适宜的时候，以单数使用的术语也会包括复数，反之亦然。在所列任何定义与通过述及收入本文的任何文件抵触的情况中，应当以下文所列定义为准。“B细胞表面标志物”或“B细胞表面抗原”在本文中指在B细胞表面上表达的抗原，可以用能结合它的拮抗剂来靶向它，包括但不限于B细胞表面抗原的抗体或能够拮抗配体对天然存在B细胞抗原的结合的可溶形式B细胞表面抗原的抗体。例示性的B细胞表面标志物包括 CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、 CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85 和 CD86 白细胞表面标志物(有关说明参见《The LeukocyteAntigen Facts Book》，第2版，1997， Barclay 等编,Academic Press,HarcourtBrace & Co. ,New York)。其它 B 细胞表面标志物包括 RP105、FcRH2、B-ce 11CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、BAFF、BLys、Btig、 NAG14、SLGC16270、FcRHU IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA 和 239287。特别感兴趣的B细胞表面标志物是在B细胞上较之哺乳动物的其它非B细胞组织优先表达的，而且可以是在前体B细胞和成熟B细胞二者上都表达的。如本文中所使用的，术语“FcRH5”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人、猕猴(cyno))和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然FcRH5，除非另有说明。人FcRH5在本文中还称作“TAH018”或“PR085143”(SEQ ID NO :2)且由在本文中还称作“DNA340394”的核苷酸序列(SEQ ID NO :1)编码。猕猴FcRH5在本文中还称作“cyno FcRH5”。术语“FcRH5”涵盖“全长”、未加工的FcRH5以及自细胞中加工得到的任何形式的FcRH5。该术语还涵盖天然存在的FcRH5变体，例如剪接变体、等位变体和同等型 (isoform)。本文所述FcRH5多肽可以从多种来源分离，诸如人组织类型或其它来源，或者通过重组或合成方法制备。“天然序列FcRH5多肽”包括与自自然界衍生的相应FcRH5多肽具有相同氨基酸序列的多肽。此类天然序列FcRH5多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组或合成方法制备。术语“天然序列FcRH5多肽”明确涵盖天然存在的截短或分泌形式的特定FcRH5多肽(例如胞外结构域序列)、该多肽的天然存在变异形式(例如可变剪接形式)和天然存在等位变体。在本发明的某些实施方案中，本文中所公开的天然序列FcRH5多肽是包含附图中所示全长氨基酸序列的成熟或全长天然序列多肽。起始和终止密码子(如果指明的话)在附图中以粗体显示且划有下划线。图中以“N”表示的核酸残基指任何核酸残基。然而，虽然图中所公开的FcRH5多肽显示出以本文中在图中标示为第1位氨基酸的甲硫氨酸残基开始，但是想得到且和有可能的是，可以采用位于图中第1位氨基酸上游或下游的其它甲硫氨酸残基作为FcRH5多肽的起始氨基酸残基。“mulOA8” 或 “MA10A8” 或“鼠 FcRH5 (10A8)抗体”或“鼠抗 FcRH5 (10A8)抗体”在本文中用于具体指鼠抗FcRH5单克隆抗体，其中所述鼠抗FcRH5单克隆抗体包含轻链可变域SEQ ID NO :18 (图9)和重链可变域SEQ ID NO 20 (图10)。鼠抗FcRH5单克隆抗体可以自商业来源购买。“chlOA8” 或 “chMAFcRH5 (10A8) ” 或 “chFcRH5 (10A8) ” 或“嵌合 MAFcRH5 (10A8)抗体”在本文中用于具体指嵌合抗人FcRH5抗体，其中所述嵌合抗FcRH5抗体包含轻链SEQ ID NO :15(图6)。所述轻链SEQ ID NO 15进一步包含图9所示可变域和人IgGl轻链恒定域。 所述嵌合抗FcRH5抗体进一步包含重链SEQ ID NO 17 (图幻。所述重链SEQ ID NO 17进一步包含图10所示可变域和人IgGl重链恒定域。“吐7011，，或“(^獻卩^^5(7011) ”或"chFcRH5 (7D11) ”或“嵌合 MAFcRH5 (7D11)抗体”在本文中用于具体指嵌合抗人FcRH5抗体，其中所述嵌合抗FcRH5抗体包含轻链SEQ ID NO :11(图幻，其包含人IgGl轻链恒定域。所述嵌合抗FcRH5(7Dll)抗体进一步包含重链 SEQ ID NO :13(图4)，其包含人IgGl的重链恒定域。“抗cynoFcRH5”或“抗cyno FcRH5”在本文中用于指与cyno FcRH5结合的抗体。“10A8-嫁接物”或“10A8-嫁接的‘人源化，抗体”或“hulOAS嫁接物”在本文中用于具体指通过将来自鼠抗FcRH5抗体(mulOAS)的高变区嫁接入受体人共有VL κ I (huKI) 和人亚组 III 共有 VH(huIII)生成的嫁接物(Carter et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89 :似85(1992))(见实施例 1 和图 9(SEQ ID NO :19)和图 10(SEQ ID NO :21))。“hulOA8，， 或“hulOASvl”在本文中用于具体指人源化10A8抗体。氨基酸残基/位点的“修饰”在用于本文时指一级氨基酸序列与起始氨基酸序列相比的变化，其中所述改变源自涉及所述氨基酸残基/位点的序列改变。例如，典型的修饰包括用另一种氨基酸替代所述残基(或者在所述位置)(例如保守或非保守替代)、在所述残基/位置插入一个或多个(通常少于5个或3个)氨基酸、及删除所述残基/位置。“氨基酸替代”或其变体指用不同氨基酸残基置换预定的(起初的)氨基酸序列中现有的氨基酸残基。通常且优选的是，修饰导致与包含起始(或“野生型”)氨基酸序列的多肽相比，变体多肽的至少一种物理生化活性发生改变。例如，在抗体的情况中，发生改变的物理生化活性可以是对靶分子的结合亲和力、结合能力和/或结合效应。术语“抗体”以最广义使用，明确覆盖例如单一抗FcRH5单克隆抗体(包括激动性抗体、拮抗性抗体、中和性抗体、全长或完整单克隆抗体)、具有多表位特异性的抗FcRH5抗体组合物、多克隆抗体、多价抗体、自至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们展现出期望的生物学活性)、单链抗FcRH5抗体和抗FcRH5抗体片段(见下文)(包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段)、双抗体、单域抗体(sdAb)，只要它们展现出期望的生物学或免疫学活性。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。抗体可以是人的、人源化的和/或亲和力成熟的。术语“抗FcRH5抗体”或“与FcRH5结合的抗体”指能够以足够亲和力结合FcRH5的抗体，使得该抗体作为靶向FcRH5中的诊断剂和/或治疗剂是有用的。优选的是，抗 FcRH5抗体结合无关的非FcRH5蛋白质的程度小于该抗体对FcRH5的结合的约10%，根据例如放射免疫测定法(RIA)的测量。在某些实施方案中，与FcRH5结合的抗体具有< ΙμΜ、 彡ΙΟΟηΜ、彡ΙΟηΜ、彡InM或彡0. InM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗FcRH5抗体结合在来自不同物种的FcRH5间保守的FcRH5表位。“分离的”抗体指已经鉴定且自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的治疗用途的物质，可包括酶、激素和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(1)根据Lowry法的测定，抗体重量超过95%，最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或C3)根据还原性或非还原性条件下的 SDS-PAGE及使用考马斯蓝或优选的银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白(IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，因此包含10 个抗原结合位点；而分泌型IgA抗体可聚合而形成包含2-5个基本的4链单元及J链的多价装配物)。在IgG的情况中，4链单元通常是约150，000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在N-末端具有一个可变区(VH)，接着是三个(对于α和Y链)或四个(对于μ和ε同种型)恒定区(CH)。 每条轻链在N-末端具有一个可变区(VL)，接着是其另一端的一个恒定区(CL)。VL与VH排列在一起，而CL与重链第一恒定区(CHl)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变区之间形成界面。一个VH和一个VL —起配对而形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如 Basic and Clinical Immunology,8th edition,Daniel P. Stites, Abba I. Terrand Tristram G. Parslow(eds. ),Appleton & Lange, Norwalk,CT, 1994, page 7land Chapter 6。根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的L链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。根据其重链恒定域(Ch)氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有称作α、δ、ε、Υ和μ的重链。根据CH序列和功能的较小差异，、和α类可进一步分为亚类，例如人类表达下列亚类IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变域可以称为“VH”。轻链的可变域可以称为“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分且包含抗原结合位点。术语“可变的”指可变域中的某些区段在抗体间序列差异广泛的实情。V结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均勻分布于可变域跨越的Iio个氨基酸。事实上，V区由15-30个氨基酸，称作框架区(FR)的相对不变异的区段及将框架区分开的每个长度为9-12个氨基酸，称作“高变区”的极度变异的较短区域组成。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成折叠片结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区通过FR非常接近地保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见 Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991))。 ’g 定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)中抗体的参与。“完整抗体”指包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定域CJ、CH2*Ch3的抗体。恒定域可以是天然序列恒定区(例如人天然序列恒定区)或其氨基酸序列变体。优选的是，完整抗体具有一项或多项效应器功能。“裸抗体(裸露的抗体)”为本发明目的指未偶联细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab' )2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利 5，641，870，实施例2;2&口&1& et al. ,Protein Eng. 8(10) :1057-1062(1995))；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。在一个实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，如此保留结合抗原的能力。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，和残余 “Fe”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由完整轻链及重链的可变区(Vh)和第一恒定区(ChI)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个抗原结合位点。 胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab' )2片段，它粗略相当于两个通过二硫键相连的Fab 片段，具有二价抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab’片段因在(^1结构域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH 是本文中对其中恒定区半胱氨酸残基携带一个游离硫醇基的Fab’的称谓。F(ab' )2抗体片段最初是作为成对Fab’片段生成的，在Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联。Fc片段包含通过二硫键保持在一起的所有两条重链的羧基末端部分。抗体的效应器功能是由Fc区中的序列决定的，该区还是受到在某些类型的细胞上找到的Fc受体(FcR) 所识别的部分。“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链Fv种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连，使得轻链和重链在与双链Fv种类类似的“二聚体”结构中相结合。从这两个结构域的折叠结构中散发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，其贡献出供结合抗原的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或是只包含对抗原特异性的三个CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。“单链Fv”，也可缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接成一条多肽链的抗体Vh和八结构域的抗体片段。优选的是，sFv多肽在Vh和八结构域之间还包含多肽接头，使得 sFv形成抗原结合期望的结构。关于sFv的综述参见PlUckthun，《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，vol. 113, Rosenburg 禾口 Moore 编，Springer-Verlag, New York,
30pp. 269-315，1994 ；Borrebaeck 1995，见下文。术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的抗体片段，该片段在同一条多肽链 (Vh-Vl)中包含相连的重链可变域(Vh)和轻链可变域(VJ。通过在V1^nt结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(见上一段)来制备小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非链内配对，导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双抗体可以是二价的或双特异性的。双特异性双抗体是两个“交叉” sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的Vh和\结构域存在于不同多肽链上。双抗体更完整的描述于例如EP404，097 ；WO 93/11161 ；Hudson et al.，Nat. Med. 9 :129-134(2003)；及 Hollingeret al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 :6444-6448(1993)。三抗体(Triabody)和四抗体(tetrabody)也记载于 Hudson et al.，Nat. Med. 9 :129-134 (2003)。术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各抗体个体是相同的，除了可以以极小量存在的可能的天然存在突变形式外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性之外，单克隆抗体的优势在于它们可以在未受到其它抗体污染的情况中合成。修饰语“单克隆”不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可用于本发明的单克隆抗体可通过最初由Kohler等(197 Nature 256 :495记载的杂交瘤方法来制备，或者可通过重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(参见例如美国专利No. 4，816，567)。 “单克隆抗体”还可使用例如 Clackson 等(1991)Nature 352 :624-628 ；和 Marks 等(1991) J. Mol. Biol. 222 :581-597中记载的技术从噬菌体抗体库分离。单克隆抗体在本文中包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(参见美国专利No. 4，816，567 ；Morrison et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA81 :6851-6855 (1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括包含衍生自非人灵长类动物(例如旧大陆猴类(Old World Monkey)、猿等)的可变域抗原结合序列和人恒定区序列的“灵长类化”抗体。非人(例如啮齿类)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人抗体的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望抗体特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR) 残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jones et al.，Nature 321 :522-525(1986) ；Riechmann et al.，Nature 332 :323-329(1988)； 和Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593-596 (1992)。还可参见以下综述及其引用的参考文献Vaswani andHamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol. ,1 :105-115(1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23 :1035-1038(1995) ；Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech.，5 :428-433(1994)。“thio”在本文中用于指抗体时指半胱氨酸改造抗体，而“hu”在本文中用于指抗体时指人源化抗体。“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227 :381 (1991) ；Marks et al.，J. Mol. Biol. 222 :581 (1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法Cole et al. , Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy,Alan R. Liss,p. 77 (1985) ；Boerner et al. , J. Immunol. 147(1) :86_95 (1991) 。van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol.，5 :368-74 (2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因组已经失能的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如6，075，181和6，150，584，关于XEN0M0USE 技术)。还可参见例如Li et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103 :3557-3562 (2006)，关于经人 B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个高变区三个在VH中(H1、H2、 H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。本文中使用且涵盖许多高变区的叙述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的且是最常用的(Kabat et al. ,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。Chothia 指结构环的位置(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196 :901-917(1987))。Chothia CDR-Hl环的末端在使用Kabat编号规则编号时在 H32与H34之间变化，取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入；如果35A和35B都不存在，那么该环在32处结束；如果只有35A存在，那么该环在33 处结束；如果35A和35B都存在，那么该环在34处结束)。AbM高变区代表Kabat⑶R与 Chothia结构环之间的折衷，而且用于Oxford Molecular的AbM抗体建模软件。“接触”高变区是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些高变区中每一个的残基。
权利要求
1.一种抗FcRH5抗体，其包含(a)至少一种选自下组的HVR序列(i)HVR-Ll，其包含序列 KASQDVSTAVA (SEQ ID NO 26)(ii)HVR-L2，其包含序列SASYRYT (SEQ ID NO 27)(iii)HVR-L3，其包含序列QQHFSSPRT(SEQ ID NO :28)(iv)HVR-Hl，其包含序列 GFTFSSYAVS (SEQ ID NO :35)(v)HVR-H2，其包含序列ATISSGGSLTFYLDSVR(SEQ ID NO :36)(vi)HVR-H3，其包含序列PIPDYYALDY(SEQ ID NO :37)；禾口(b)至少一种变异HVR，其中所述变异HVR包含SEQID NO :26、27、28、35、36或37所示序列中的至少一个残基的修饰。
2.权利要求1的抗体，其中框架序列的至少一部分是人共有框架序列。
3.权利要求1的抗体，其中所述修饰是替代、插入或删除。
4.权利要求1的抗体，其包含具有序列SEQID NO 36的HVR-H2。
5.一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对人FcRH5的单价亲和力与包含图9 (SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的单价亲和力基本上相同。
6.一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对人FcRH5的单价亲和力比包含图9 (SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的单价亲和力高至少 1、2、3、4、5、6、7、8、9 或 10 倍。
7 一种人源化抗FcRH5抗体，其中该抗体对人FcRH5的单价亲和力比包含图9 (SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的单价亲和力低至少 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、 55或60倍。
8.一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力与二价形式的且包含图9 (SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的亲和力基本上相同。
9.一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力比二价形式的且包含图9 (SEQ ID NO 18)和图10 (SEQ ID NO 20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的亲和力高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。
10.一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力比二价形式的且包含图9(SEQ ID NO 18)和图10(SEQ ID NO :20)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的亲和力低至少 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、 25、30、35、40、45、50、55 或 60 倍。
11.一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是0. 4nM。
12.权利要求11的人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是 0. 4nM+/-. 04。
13.一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是0. 2nM。
14.权利要求13的人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是 0. 2nM+/-. 02。
15.一种人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是0. 5nM。
16.权利要求15的人源化抗FcRH5抗体，其中二价形式的该抗体对人FcRH5的亲和力是 0. 5nM+/-0. 1。
17.权利要求5-16任一项的抗体，其中所述结合亲和力表述成Kd值。
18.权利要求5-16任一项的抗体，其中所述结合亲和力是通过Biacore或放射免疫测定法测量的。
19.权利要求1的抗体，其包含人κ亚组1共有框架序列。
20.权利要求1的抗体，其包含重链人亚组III共有框架序列。
21.一种人源化抗FcRH5抗体，其中该人源化抗体在偶联至细胞毒剂时抑制肿瘤细胞生长。
22.前述权利要求任一项的抗体，其中所述人源化抗体和嵌合抗体均是单价的或二价的。
23.前述权利要求任一项的抗体，其中所述人源化抗体和嵌合抗体均包含连接至Fc区的单一 Fab区。
24.—种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图11 (SEQ ID NO :35-37)所示 HVR1-HC、HVR2-HC 和 / 或 HVR3-HC 序列。
25.权利要求M的抗体，其中所述可变域包含图11(SEQ ID NO 31-34)所示FR1-HC、 FR2-HC、FR3-HC 和 / 或 FR4-HC 序列。
26.权利要求M或25的抗体，其中所述抗体包含图11(SEQ ID NO 38和/或39)所示CHl和/或Fc序列。
27.一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图11 (SEQ ID NO J6-28)所示 HVR1-LC、HVR2-LC 和 / 或 HVR3-LC 序列。
28.权利要求27的抗体，其中所述可变域包含图11(SEQ ID NO :22-25)所示FR1-LC、 FR2-LC、FR3-LC 和 / 或 FR4-LC 序列。
29.权利要求27或观的抗体，其中所述抗体包含图11(SEQ ID NO :29)所示CLl序列。
30.包含图10(SEQ ID NO 21)所示序列的多肽。
31.包含图9(SEQID NO :19)所示序列的多肽。
32.通过如下方法生成的抗体(a)培养表达包含权利要求M46任一项的重链可变域和权利要求27- 任一项的轻链可变域的抗体的细胞；并(b)自所述培养细胞分离所述抗体。
33.一种抗体，其包含权利要求M-26任一项的重链可变域和权利要求27-29任一项的轻链可变域。
34.权利要求33的抗体，其中所述抗体是单价的且包含Fc区。
35.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQID NO 19的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的轻链可变域。
36.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQID NO 21的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的重链可变域。
37.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重链可变域，该重链可变域包含一种、两种、三种或四种选自SEQ ID NO :31、32、33和34的框架氨基酸序列。
38.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含一种、两种、 三种或四种选自SEQ ID NO :22,23,24 ^P 25的框架氨基酸序列。
39.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重链可变域，该重链可变域包含一种、两种、 三种或四种与选自SEQ ID NO :31、32、33和34的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的框架氨基酸序列。
40.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含一种、两种、 三种或四种与选自SEQ ID NO :22、23、对和25的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的框架氨基酸序列。
41.权利要求的抗体35，其中所述抗体包含与选自SEQID NO :21的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的重链可变域。
42.权利要求的抗体36，其中所述抗体包含与选自SEQID NO 19的氨基酸序列具有至少90%氨基酸序列同一性的轻链可变域。
43.一种与FcRH5结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO 21具有至少90%序列同一性的重链可变域。
44.一种与FcRH5结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID N0:19具有至少90%序列同一性的轻链可变域。
45.一种与FcRH5结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO 21具有至少90%序列同一性的重链可变域和与氨基酸序列SEQ ID NO 19具有至少90%序列同一性的轻链可变域。
46.一种多核苷酸，其编码权利要求1、33、41、164或165的抗体。
47.一种载体，其包含权利要求46的多核苷酸。
48.一种宿主细胞，其包含权利要求47的载体。
49.一种制备抗FcRH5抗体的方法，其中该方法包括(a)在适合于编码所述抗体的多核苷酸表达的条件下培养选自下组的宿主细胞真核细胞和CHO细胞，并(b)分离所述抗体。
50.一种抗体，其结合与包含如下重链多肽的抗体的表位基本上相同的表位，所述重链多肽包含SEQ ID NO :21所示氨基酸序列；或基于所述氨基酸序列的共有或变异序列。
51.权利要求50的抗体，其结合与包含如下轻链多肽的抗体的表位基本上相同的表位，所述轻链多肽包含SEQ ID NO :19所示氨基酸序列；或基于所述氨基酸序列的共有或变异序列。
52.权利要求1、33、41、164或165的抗体，其中所述FcRH5是在细胞表面上表达的。
53.权利要求52的抗体，其中所述细胞是B细胞。
54.权利要求53的抗体，其中所述B细胞是与B细胞增殖性病症有关的。
55.权利要求M的抗体，其中所述B细胞增殖性病症是癌症。
56.权利要求55的抗体，其中所述B细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤 (NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
57.权利要求1、33、41、164或165的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
58.权利要求57的抗体，其中所述抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab，-SH、Fv、SCFv或 (Fab，)2 片段。
59.权利要求57的抗体，其中所述抗体是人源化的。
60.权利要求1、33、41、164或165的抗体，其中所述抗体与包含重链可变域SEQID NO: 21和轻链可变域SEQ ID NO 19的抗体结合相同表位。
61.一种免疫偶联物，其包含共价附着至细胞毒剂的权利要求1、33、41、164或165的抗体。
62.权利要求61的免疫偶联物，其中所述细胞毒剂选自毒素、化疗剂、药物模块、抗生素、放射性同位素和溶核酶。
63.权利要求62的免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有式Ab-(L-D)p，其中(a)Ab是权利要求1、33、41、164或165的抗体；(b)L是接头；(c)D是药物模块。
64.权利要求63的免疫偶联物，其中L选自6-马来酰亚氨基己酰基(MC)、马来酰亚氨基丙酰基(MP)、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对氨基苄氧羰基 (PAB)、N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯(SPP)、N_琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)、4_(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDB)和N-琥珀酰亚氨基碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)。
65.权利要求63的免疫偶联物，其中D选自下组美登木素生物碱，auristatin和多拉司他汀。
66.一种药物组合物，其包含权利要求63的免疫偶联物和药学可接受载体。
67.一种抑制表达FcRH5的细胞生长的方法，所述方法包括使所述细胞接触权利要求 1、33、41、164或165任一项的抗体，由此引起对所述细胞生长的抑制。
68.权利要求67的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
69.权利要求67的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
70.一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体。
71.权利要求70的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性 NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病 (ALL)和套细胞淋巴瘤。
72.权利要求70的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
73.权利要求70的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
74.一种治疗受试者中增殖性病症的方法，所述方法包括给实施受试者施用有效量的权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体。
75.权利要求74的方法，其中所述增殖性病症是癌症。
76.权利要求75的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性 NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病 (ALL)和套细胞淋巴瘤。
77.权利要求74的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
78.权利要求74的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
79.—种抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分依赖于FcRH5的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体，由此抑制所述细胞的生长。
80.权利要求79的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
81.权利要求79的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
82.—种治疗性处理哺乳动物中肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖于 FcRH5的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1、33、41、164或 165任一项的抗体。
83.权利要求82的方法，其中所述肿瘤是与淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性 NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病 (ALL)和套细胞淋巴瘤有关的。
84.权利要求82的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
85.权利要求82的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
86.一种抑制B细胞增殖的方法，包括在允许下述免疫偶联物结合至FcRH5的条件下使细胞暴露于权利要求64的免疫偶联物。
87.权利要求86的方法，其中所述B细胞增殖选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、 攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
88.权利要求86的方法，其中所述B细胞是异种移植物。
89.权利要求86的方法，其中所述暴露发生于体外。
90.权利要求86的方法，其中所述暴露发生于体内。
91.一种测定怀疑含有FcRH5的生物学样品中FcRH5的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体，并测定所述抗体对所述样品中FcRH5的结合，其中所述抗体结合至所述样品中的FcRH5指示所述样品中存在所述蛋白质。
92.权利要求91的方法，其中所述生物学样品来自怀疑患有B细胞增殖性病症的患者。
93.权利要求92的方法，其中所述B细胞增殖性病症是选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤 (NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
94.一种使权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体结合至表达FcRH5的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体。
95.权利要求94的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
96.权利要求94的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
97.一种半胱氨酸改造抗体，其包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，其中所述半胱氨酸改造抗体是通过包括用游离半胱氨酸氨基酸替换亲本抗体的一个或多个氨基酸残基的方法制备的，其中所述亲本抗体是权利要求1、33、41、164或165的抗体。
98.权利要求97的半胱氨酸改造抗体，其中所述一个或多个游离半胱氨酸氨基酸具有 0. 6-1. 0范围中的硫醇反应性值。
99.权利要求97的半胱氨酸改造抗体，其中所述半胱氨酸改造抗体比亲本抗体与硫醇反应性试剂的反应性更强。
100.权利要求97的半胱氨酸改造抗体，其中所述方法进一步包括通过使半胱氨酸改造抗体与硫醇反应性试剂起反应来测定所述半胱氨酸改造抗体的硫醇反应性；其中所述半胱氨酸改造抗体比亲本抗体与硫醇反应性试剂的反应性更强。
101.权利要求97的半胱氨酸改造抗体，其中所述一个或多个游离半胱氨酸氨基酸残基位于轻链中。
102.权利要求97的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是包含共价附着至细胞毒剂的半胱氨酸改造抗体的免疫偶联物。
103.权利要求102的半胱氨酸改造抗体，其中所述细胞毒剂选自毒素、化疗剂、药物模块、抗生素、放射性同位素和溶核酶。
104.权利要求97的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至捕捉标记物、检测标记物或固体支持物的。
105.权利要求104的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至生物素捕捉标记物的。
106.权利要求104的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至荧光染料检测标记物的。
107.权利要求106的半胱氨酸改造抗体，其中所述荧光染料选自荧光素型、罗丹明型、 丹酰、丽丝胺、花青、藻红蛋白、德州红、及其类似物。
108.权利要求104的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至放射性核素检测标记物的，该放射性核素选自 ^!、"(^(、^、32 、3、、64^!、68^!、8’、99!^、111^!、123〗、124〗、125!、 1311,133Xe,177Lu^211At 和 213Bi0
109.权利要求104的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是通过螯合配体共价附着至检测标记物的。
110.权利要求109的半胱氨酸改造抗体，其中所述螯合配体是选自D0TA、D0TP、D0TMA、 DTPA 禾口 TETA。
111.权利要求1、33、41、164或165的抗体，其包含清蛋白结合肽。
112.权利要求111的抗体，其中所述清蛋白结合肽选自SEQID NO :246-250。
113.—种半胱氨酸改造抗体，其在亲本抗体中在依照Kabat编号规则的轻链的一个或多个位置处及在依照Kabat编号规则的重链的一个或多个位置处和在依照EU编号规则的重链的一个或多个位置处包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，其中所述亲本抗体是权利要求1、33、41、164或165的抗体。
114.权利要求113的抗体，其中所述抗体选自单克隆抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人抗体和人源化抗体。
115.权利要求113的抗体，其是抗体片段。
116.权利要求115的抗体，其中所述抗体片段是Fab片段。
117.权利要求113的抗体，其选自嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。
118.权利要求113的抗体，其是在细菌中生成的。
119.权利要求113的抗体，其是在CHO细胞中生成的。
120.一种测定怀疑含有下述蛋白质的样品中FcRH5蛋白质的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于权利要求109的抗体，并测定所述抗体对所述样品中所述FcRH5 蛋白质的结合，其中所述抗体结合至所述蛋白质指示所述样品中存在所述蛋白质。
121.权利要求120的方法，其中所述样品包含怀疑表达所述FcRH5蛋白质的细胞。
122.权利要求120的方法，其中所述细胞是B细胞。
123.权利要求120的方法，其中所述抗体是共价附着至标记物的，该标记物选自荧光染料、放射性同位素、生物素或金属络合配体。
124.—种药物配制剂，其包含权利要求113的抗FcRH5抗体和药学可接受稀释剂、载体或赋形剂。
125.权利要求113的抗体，其中所述抗体是共价附着至auristatin或美登木素生物碱药物模块的，由此抗体药物偶联物形成。
126.权利要求125的抗体-药物偶联物，其包含抗体(Ab)和auristatin或美登木素生物碱药物模块(D)，其中所述半胱氨酸改造抗体是通过接头模块(L)经一个或多个游离半胱氨酸氨基酸附着至D的；该化合物具有式I Ab-(L-D)p I 其中ρ是1、2、3或4。
127.权利要求126的抗体-药物偶联物化合物，其中ρ是2。
128.权利要求126的抗体-药物偶联物化合物，其中L具有式 -Aa-Ww-Yy-其中A是延伸物单元，其共价附着至半胱氨酸改造抗体(Ab)的半胱氨酸硫醇； a是 或1 ；各个W独立地是氨基酸单元； w是范围为0至12的整数； Y是间隔物单元，其共价附着至药物模块；且 y是0、1或2。
129.权利要求128的抗体-药物偶联物化合物，其具有式
130.权利要求128的抗体-药物偶联物化合物，其中Ww是缬氨酸-瓜氨酸。
131.权利要求1 的抗体-药物偶联物化合物，其中R17是(CH2)5或(CH2)2。
132.权利要求128的抗体-药物偶联物化合物，其具有式
133.权利要求132的抗体-药物偶联物化合物，其中R17是(CH2)5或(CH2)2。
134.权利要求128的抗体-药物偶联物化合物，其具有式
135.权利要求126的抗体-药物偶联物化合物，其中L是SMCC、SPP、SPDB或ΒΜΡΕ0。
136.权利要求126的抗体-药物偶联物化合物，其中D是MMAE，其具有结构
137.权利要求126的抗体-药物偶联物化合物，其中D是MMAF，其具有结构
138.权利要求126的抗体-药物偶联物化合物，其中D是DMl或DM4，其具有结构
139.权利要求125的抗体-药物偶联物化合物，其中所述抗体选自单克隆抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体和抗体片段。
140.权利要求125的抗体-药物偶联物化合物，其中所述抗体片段是Fab片段。
141.一种抗体-药物偶联物化合物，其选自结构
142.权利要求125的抗体药物偶联物，其中所述auristatin是MMAE或MMAF。
143.权利要求126的抗体药物偶联物，其中L是MC-val-cit-PAB或MC。
144.一种用于检测B细胞的测定法，包括(a)使细胞暴露于权利要求125的抗体-药物偶联物化合物；并(b)测定所述抗体-药物偶联物化合物对所述细胞的结合程度。
145.一种抑制细胞增殖的方法，包括用权利要求125的抗体-药物偶联物化合物处理细胞培养基中的哺乳动物癌性B细胞，由此所述癌性B细胞的增殖得到抑制。
146.一种药物配制剂，其包含权利要求125的抗体-药物偶联物和药学可接受稀释剂、 载体或赋形剂。
147.一种治疗癌症的方法，包括给患者施用权利要求146的药物配制剂。
148.权利要求147的方法，其中所述癌症选自下组淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、 攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
149.权利要求147的方法，其中给所述患者施用与所述抗体-药物偶联物化合物组合的细胞毒剂。
150.一种制品，其包含权利要求146的药物配制剂； 容器；和包装插页或标签，其指明该化合物可用于治疗以FcRH5多肽过表达为特征的癌症。
151.权利要求150的制品，其中所述癌症选自下组淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、 攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
152.一种用于制备抗体-药物偶联物化合物的方法，该抗体-药物偶联物化合物包含权利要求113的抗FcRH5抗体(Ab)，和auristatin或美登木素生物碱药物模块(D)，其中该抗体是通过接头模块(L)经一个或多个改造的半胱氨酸氨基酸附着至D的；该化合物具有式I Ab- (L-D)p I其中ρ是1、2、3或4 ；该方法包括下列步骤(a)使该抗体的改造的半胱氨酸基团与接头试剂起反应以形成抗体-接头中间体 Ab-L ；并(b)使Ab-L与活化的药物模块D起反应；由此抗体-药物偶联物形成； 或包括下列步骤(c)使药物模块的亲核基团与接头试剂起反应以形成药物-接头中间体D-L;并(d)使D-L与该抗体的改造的半胱氨酸基团起反应；由此抗体-药物偶联物形成。
153.权利要求152的方法，进一步包括在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达所述抗体的步骤。
154.权利要求152的方法，进一步包括用还原剂处理所表达的抗体的步骤。
155.权利要求154的方法，其中所述还原剂选自TCEP和DTT。
156.权利要求154的方法，进一步包括在用还原剂处理后用氧化剂处理所表达的抗体的步骤。
157.权利要求156的方法，其中所述氧化剂选自硫酸铜、脱氢抗坏血酸和空气。
158.权利要求113的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQID NO :42任一项的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链序列。
159.权利要求113的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQID NO :41具有至少 90%序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO 42具有至少90%序列同一性的重链序列。
160.权利要求113的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQID NO :44任一项的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链序列。
161.权利要求113的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQID NO 43具有至少90%序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO :44具有至少90%序列同一性的重链序列。
162.一种组合物，其包含权利要求1、33、41、164或165任一项的抗体。
163.权利要求162的组合物，其中所述组合物包含载体。
164.一种与FcRH5结合的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO 20的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链可变域和与选自SEQ ID NO: 18的氨基酸序列具有至少 90 %序列同一性的轻链可变域。
165.—种与FcRH5结合的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID N0:13的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的重链可变域和与选自SEQ ID NO 11的氨基酸序列具有至少 90 %序列同一性的轻链可变域。
166.权利要求113的抗体，其中半胱氨酸位于轻链第205位。
167.权利要求113的抗体，其中半胱氨酸位于重链第114位。
168.权利要求113的抗体，其中半胱氨酸位于重链第400位。
169.权利要求53的抗体，其中所述B细胞与浆细胞病症有关。
170.权利要求169的抗体，其中所述浆细胞病症是癌症。
171.权利要求170的抗体，其中所述浆细胞病症选自性质未确定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤(MM)、巨球蛋白血症、重链病、系统性轻链淀粉样变(AL)、孤立性浆细胞瘤、髓外浆细胞瘤、多发性孤立性浆细胞瘤、浆细胞白血病、B细胞非何杰金淋巴瘤、B 细胞慢性淋巴细胞性白血病。
172.权利要求67的方法，进一步包括使所述细胞与有效量的另一治疗剂接触。
173.权利要求70的方法，进一步包括对所述受试者施用有效量的另一治疗剂。
174.权利要求74的方法，进一步包括对所述受试者施用有效量的另一治疗剂。
175.权利要求79的方法，进一步包括使所述细胞与有效量的另一治疗剂接触。
176.权利要求82的方法，进一步包括使所述细胞与有效量的另一治疗剂接触。
177.权利要求86的方法，进一步包括使所述细胞暴露于有效量的另一治疗剂。
178.权利要求147的方法，进一步包括对所述患者施用有效量的另一治疗剂。
179.权利要求172的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
180.权利要求179的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、 来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
181.权利要求173的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
182.权利要求181的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、 来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
183.权利要求174的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
184.权利要求183的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、 来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
185.权利要求175的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
186.权利要求185的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、 来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
187.权利要求176的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
188.权利要求187的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、 来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
189.权利要求177的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
190.权利要求189的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、 来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
191.权利要求178的方法，其中所述治疗剂选自下组抗体、化疗剂、细胞毒剂、抗血管发生剂、免疫抑制剂、前体药物、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、类固醇、止吐药、癌症疫苗、镇痛药、或生长抑制剂。
192.权利要求191的方法，其中所述治疗剂选自下组welcade、revlimid、他莫昔芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、erlotinib、贝伐单抗、长春新碱、imatinib、sorafenib、lapatinib、或曲妥单抗、顺钼、吉西他滨、甲氨蝶呤、 长春碱、卡钼、帕利他赛、培美曲塞、5-氟尿嘧啶、多柔比星、bortezomib、lenalidomide、美法仑、泼尼松、地塞米松、或多西他赛。
193.权利要求33的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
194.权利要求193的抗体，其特异性结合⑶3。
195.权利要求194的抗体，其是隆起入空腔抗体。
196.权利要求195的抗体，其是无糖基化的。
197.权利要求196的抗体，其是在大肠杆菌宿主细胞中生成的。
198.权利要求196的抗体，其缺少一种或多种Fc效应器功能。
199.权利要求198的抗体，其缺少ADCC活性。
全文摘要
本发明致力于对于哺乳动物中造血肿瘤治疗有用的人源化的、偶联的抗FcRH5抗体和使用该抗体治疗哺乳动物中造血肿瘤的方法。
文档编号A61K39/395GK102471380SQ201080024087
公开日2012年5月23日 申请日期2010年3月31日 优先权日2009年4月1日
发明者A.埃本斯, A.波尔森, C.亚当斯, J.R.朱纳塔拉, J-a.杭戈, K.埃尔金斯, 吴雁, 郑冰 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司