专利名称：一种程序性释放多种药物的纳米粒脂质体及其制备与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种纳米粒脂质体及其制备与应用，特别涉及一种程序性释放多种药物的纳米粒脂质体及其制备与应用。
背景技术：
肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance, MDR)是指一种药物对肿瘤的长时间作用产生的耐药性，并会由此引起对其他抗肿瘤药物的交叉耐药性，这种肿瘤细胞产生的多药耐药性，涉及临床常用的多用抗肿瘤药物，是肿瘤治疗能否成功的关键，所以一直以来都是肿瘤治疗研究的热点，但目前还没有行之有效的解决方法。青蒿素是我国药学工作者1971年从菊科植物黄花蒿叶中提取分离到的一种过氧桥的倍半萜内酯类化合物，双氢青蒿素(Dihydroartemisinin，DHA)是青蒿素类药物在体内的最终活性代谢产物，并一直以来作为抗疟药使用；随着技术进步以及临床的需要，青蒿素以及其衍生物的其他药理活性得到了广泛的关注。尤其是青蒿素及其衍生物的抗肿瘤作用方面，各国药物学家进行了广泛的研究，其抗肿瘤作用的机理可以分成三个作用包括协同、增效作用，逆转肿瘤的多药耐药性，以及抑制肿瘤血管生长和转移的作用，双氢青蒿素磷脂复合物为已申请专利“ 一种双氢青蒿素磷脂复合物脂质体制剂及其应用”中所制备的磷脂复合物制剂，其与阿霉素联用可有效的增加阿霉素的细胞毒性，并逆转阿霉素的多药耐药性达33倍，本发明中，拟以双氢青蒿素磷脂复合物与阿霉素联用，制备具有逆转阿霉素多药耐药性的制剂。聚乳酸羟基乙酸共聚物(poly(D，L-lactide-co-gly-colide)，PLGA)又名聚乙丙交酯，丙交酯乙交酯共聚物，是近些年来常采用的控释给药系统的载体材料之一如用于骨科固定和组织修复材料，手术缝合线等等，并已获得美国FDA认可，其具有易于合成，生物可降解、降解速度可调节性和良好的可塑性等特点，因此本发明中通过调节PLGA中丙交酯乙交酯的比例和分子量控制其降解速度，从而控制阿霉素的释放速度。纳米粒脂质体(lipoparticle)是一类将纳米粒子与脂质体通过范德华力、亲疏水性、电荷的相互作用等作用力，将纳米粒子与脂质体自组装形成的一类复合体系，其可将多种药物通过不同的装载方法包载于同一个纳米粒的复方纳米粒。中国专利“纳米细胞传递系统”(专利号200580013065. 9)涉及了以脂质囊泡包裹PLGA纳米粒的形式，并对其两种制剂的先后起作用进行了权利保护，但其实施例只涉及到血管抑制剂卡布他汀与化疗药物的协同治疗作用，其并未涉及逆转肿瘤多药耐药性的应用，此外本发明中以双十二烷基二甲基溴铵(DMAB)为黏合剂进行纳米粒脂质体的自组装制剂的制备，这种制备方式可以解决阳离子纳米粒的注射毒性问题，具有较好的应用前景，目前尚未见报道，另外也未发现将双氢青蒿素磷脂复合物与阿霉素共同包载制备纳米粒脂质体，用于抗耐药抗肿瘤作用的研究。
发明内容
本发明目的是提供ー种程序性释放多种药物的纳米粒脂质体及其制备与应用，以 双氧青蒿素磷脂复合物与阿霉素联用，以双十ニ烧基ニ甲基溴铵(DMB)为黏合剂制备具 有逆转阿霉素多药耐药性的制剂，可有效的增加阿霉素的细胞毒性，并提高逆转阿霉素的 多药耐药性，具有较好的应用前景。为实现本发明目的，本发明采用的技术方案是ー种程序性释放药物的纳米粒脂质体，所述的纳米粒脂质体主要由以下质量配比 的组分制成
聚孔酸轻基乙酸共聚物19.34~50.79份
双氢青蒿素碟脂复合物5.78~25.73份
_脂0.01~25.27 份
双十ニ坑基ニ曱基溴铵0.01~15.38份
胆固醇0.01~20.0份
阿霉素0.01~10.16份所述的聚乳酸轻基乙酸共聚物分子量为0. 5 30万，所述双氧青蒿素磷脂复合物 为双氧青蒿素与磷脂以质量比1 : 0. 1 10的复合物；所述磷脂为天然磷脂或合成磷脂。本发明所述的聚乳酸轻基乙酸共聚物为丙交酯与乙交酯质量比1 : 0. 1 5的共 聚物。本发明所述的纳米粒脂质体主要由以上质量配比的组分制成，“主要”的含义是本 发明不排除制剂时再添加ー些药用辅料，少量合理药用辅料的添加不会影响本发明的技术效量。进ー步，本发明所述的纳米粒脂质体优选由以下质量配比的组分制成
聚孔酸轻基乙酸共聚物30~50份
双氢青蒿素碟脂复合物10~20份
石粦脂0.01~10份
双十ニ坑基ニ曱基溴铵0.01~0.5份
胆固醇0.01~10份
阿霉素5~10份所述的聚乳酸轻基乙酸共聚物分子量为0. 8 6万。本发明的纳米粒脂质体中，双氧青蒿素磷脂复合物中的磷脂及纳米粒脂质体中的 磷脂，可以相同或不同，所述的磷脂各自独立为下列之ー大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、ニ肉豆 蔻酰磷脂酰甘油、ニ硬脂酰磷脂酰胆碱、ニ硬脂酰磷脂酰甘油、ニ棕榈酰磷脂酰胆碱、ニ油 酰磷脂酰胆碱或ニ棕榈酰磷脂酰乙醇胺。
本发明所述的程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备方法按照以下步骤进行(1)阿霉素纳米粒的制备取组方量双十二烷基二甲基溴铵配制质量浓度 0. 01 % 5%的双十二烷基二甲基溴铵水溶液，加入组方量的聚乳酸羟基乙酸共聚物及组方量的阿霉素溶于有机溶剂A中，7000 ^OOOr/min乳化均质15 30分钟，加水将乳化体系分散，分散后旋转蒸发除去有机溶剂，然后30000 lOOOOOr/min离心20 60min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒； 所述的有机溶剂A为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮；所述的有机溶剂A与双十二烷基二甲基溴铵水溶液体积之比为0. 2 1 1 ；(2)程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备取组方量的双氢青蒿素磷脂复合物与组方量的磷脂及组方量的胆固醇共混，加入有机溶剂B至混合液澄清，旋转蒸发成膜，再与步骤(1)制得的阿霉素纳米粒共混，以缓冲溶液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，制得纳米粒脂质体溶液，然后以lOOOOr/min离心10 30分钟，离心除去未融合的脂质体纳米粒， 冷冻干燥，即得程序性释放药物的纳米粒脂质体，所述的有机溶剂B为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮。本发明方法中所述的缓冲溶液为药典中允许的药用缓冲液，通常可用磷酸盐缓冲溶液、蒸馏水、硼酸缓冲溶液、生理盐水或5%葡萄糖注射液。本发明推荐pH值为5. O 7. 4磷酸盐缓冲溶液。本发明提供另一种制备所述的程序性释放药物的纳米粒脂质体的方法，所述的方法按照以下步骤进行a)阿霉素纳米粒的制备取组方量双十二烷基二甲基溴铵配制质量浓度 0. 01 % 5 %的双十二烷基二甲基溴铵水溶液，取组方量的聚乳酸羟基乙酸共聚物及组方量的阿霉素溶于有机溶剂C中，7000 ^OOOr/min乳化均质15 30分钟，加水将乳化体系分散，分散后旋转蒸发除去有机溶剂，然后30000 lOOOOOr/min离心20 60min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒； 所述的有机溶剂C为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮，所述的有机溶剂C与双十二烷基二甲基溴铵水溶液体积之比为0. 2 1 1 ；b)程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备取组方量的双氢青蒿素磷脂复合物与组方量的磷脂及组方量的胆固醇共混，加入有机溶剂D至混合液澄清，旋转蒸发成膜，缓冲液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径为50 300nm，制得双氢青蒿素磷脂复合物脂质体溶液，然后将双氢青蒿素磷脂复合物脂质体溶液与步骤a)制得的阿霉素纳米粒共混，加热至30 70°C，孵育30 90分钟，以10000转离心10 30分钟，离心除去未融合的纳米粒脂质体，冷冻干燥，即得程序性释放药物的纳米粒脂质体，所述的有机溶剂D为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮。同第一种制备方法相同，该方法优选的缓冲溶液为pH5. 0 7. 4磷酸盐缓冲溶液。本发明还提供程序性释放药物的纳米粒脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用，所述应用为纳米粒脂质体对人乳腺癌MCF-7细胞阿霉素敏感株、耐药株的敏感性及耐药性、纳米粒脂质体释药行为及对荷S180肉瘤小鼠的治疗，详见本发明实施例。本发明所述的一种程序性释放药物的纳米粒脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用， 所述的纳米粒脂质体的用量以纳米粒脂质体中阿霉素的含量计为10.01 10. 16mg/mg阿霉素，阿霉素用量为2 10mg/kg体重。所述的双氢青蒿素磷脂复合物的制备方法为所述双氢青蒿素磷脂复合物为双氢青蒿素与磷脂以摩尔比1 0.1 10的复合物；所述磷脂为天然磷脂或合成磷脂，按照配比量，将双氢青蒿素与磷脂加入有机溶剂中，30 60°C反应0. 5 4h至反应液澄清，将反应液30 60°C减压旋蒸，除去有机溶剂，干燥，即得双氢青蒿素磷脂复合物；所述的有机溶剂为下列之一氯仿、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、环己烷、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮，所述有机溶剂的用量通常以能够溶解双氢青蒿素及磷脂并澄清为准。本发明所述的程序性释放多种药物的纳米粒脂质体优选负载双氢青蒿素及阿霉素的纳米粒脂质体。与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在(1)本发明所述负载不同性质药物的纳米粒脂质体可用于静脉注射，皮下注射等， 如可用于对阿霉素耐药的乳腺癌，白血病的治疗，逆转肿瘤的耐药性；(2)本发明纳米粒脂质体可以同时负载两种以上的药物，并程序性释放药物；C3)本发明程序性释放多种药物的纳米粒脂质体可以改变阳离子纳米粒的表面形状，降低阳离子纳米粒的细胞毒性，是用于制备注射制剂的有效方法；(4)本发明纳米粒脂质体可提高药物的利用率，减少病人痛苦和医疗成本。
图1为实施例7所制备的纳米粒脂质体的透射电镜图；图2为实施例7所制备的纳米粒脂质体的扫描电镜图；图3为空白纳米粒，空白的脂质体和空白纳米粒脂质体的zeta电位图，图3-1为实施例5方法制备的空白纳米粒的zeta电位图、图3-2为实施例15方法制备的空白脂质体zeta电位图，图3-3为实施例16方法制备的空白纳米粒脂质体zeta电位图；图4为实施例10方法所制备的双氢青蒿素磷脂复合物/阿霉素纳米粒脂质体中药物释放图；图5为实施例20纳米粒脂质体的对荷S180肉瘤小鼠的肿瘤抑制率=Blank为空白纳米粒脂质体组，DHA-P为双氢青蒿素磷脂复合物组，DOX为阿霉素组，DOX-N为阿霉素纳米粒组，D0X-N+DHA-P为双氢青蒿素磷脂复合物/阿霉素纳米粒组，LNP为双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体组。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此本发明所述的碳酸聚酯膜为粒径200nm，连续过膜均化10 20次进行均质化处理。实施例1 :DMAB修饰阿霉素纳米粒的制备取IOOmg双十二烷基二甲基溴铵配制质量浓度为0. 5%的双十二烷基二甲基溴铵水溶液20mL，将聚乳酸羟基乙酸共聚物中丙交酯和乙交酯的质量比50 50，分子量为8000的聚乳酸羟基乙酸共聚物200mg，IOmg阿霉素溶解于IOmL乙酸乙酯中，7000r/min乳化均质15分钟，加入蒸馏水定容至IOOmL,将乳化体系分散，分散后旋转蒸发，除去有机溶剂， 30000r/min离心30min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，蒸馏水洗涤三遍后，冷冻干燥，即得负载阿霉素纳米粒120mg。
实施例2 =DMAB修饰阿霉素纳米粒的制备取200mg双十二烷基二甲基溴铵配制浓度为1 %的双十二烷基二甲基溴铵水溶液 20mL，将聚乳酸羟基乙酸共聚物中丙交酯和乙交酯的质量比75 25，分子量为60000聚乳酸羟基乙酸共聚物300mg，IOmg阿霉素溶解于IOmL丙酮中，lOOOOr/min乳化均质15分钟， 加入蒸馏水定容至IOOmL,将乳化体系分散，分散后旋转蒸发，除去有机溶剂，30000r/min 离心45min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，蒸馏水洗涤三遍后，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒210mg。实施例3 =DMAB修饰阿霉素纳米粒的制备取SOOmg双十二烷基二甲基溴铵配制浓度为2%的双十二烷基二甲基溴铵水溶液 40mL，将聚乳酸羟基乙酸共聚物中丙交酯和乙交酯的质量比25 75，分子量为100000聚乳酸羟基乙酸共聚物2300mg，IOmg阿霉素溶解于20mL丙酮中，15000r/min乳化均质15分钟， 加入蒸馏水定容至250mL，将乳化体系分散，分散后旋转蒸发，除去有机溶剂，eOOOOr/min 离心，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，蒸馏水洗涤三遍后，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒1. 5g。实施例4 =DMAB修饰阿霉素纳米粒的制备取IOOOmg双十二烷基二甲基溴铵配制浓度为5 %的双十二烷基二甲基溴铵水溶液20mL，将聚乳酸羟基乙酸共聚物中丙交酯和乙交酯的质量比50 50，分子量为20000 聚乳酸羟基乙酸共聚物2000mg，IOmg阿霉素溶解于IOmL乙酸乙酯中，29000r/min乳化均质15分钟，加入蒸馏水定容至IOOmL,将乳化体系分散，分散后旋转蒸发，除去有机溶剂， lOOOOOr/min离心，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，蒸馏水洗涤三遍后，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒90mg。实施例5 空白纳米粒的制备取200mg双十二烷基二甲基溴铵(DMAB)配制浓度为1 %的双十二烷基二甲基溴铵水溶液20mL，将聚乳酸羟基乙酸共聚物中丙交酯和乙交酯的质量比75 25，分子量为 10000聚乳酸羟基乙酸共聚物300mg溶解于IOmL丙酮中，lOOOOr/min乳化均质15分钟，加入蒸馏水定容至IOOmL,将乳化体系分散，分散后旋转蒸发，除去有机溶剂，30000r/min离心45min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，蒸馏水洗涤三遍后，冷冻干燥， 即DMAB修饰的空白纳米粒200mg。实施例6双氢青蒿素磷脂复合物的制备称取双氢青蒿素0. 50g，大豆磷脂2. 56g，加入乙酸乙酯40mL，40°C反应Ih至反应液澄清，30°C减压旋转蒸发去除溶剂，20°C真空干燥12小时，即得粉末状双氢青蒿素磷脂复合物3. 06g，密封包装，放入4°C冰箱保存。实施例7 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法制备的双氢青蒿素磷脂复合物200mg，与200mg大豆卵磷脂，IOOmg 胆固醇共混，溶于氯仿中至反应液澄清，旋转蒸发成膜，与200mg实施例4方法所制备的阿
8霉素纳米粒共混，以PH7. 4的PBS缓冲溶液分水化，过碳酸酯膜，均一粒径，制得纳米粒脂质体溶液，然后以lOOOOr/min离心lOmin，除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂300mg，其透射电镜图如图1所示，扫描电镜图见图2。实施例8 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法制备的双氢青蒿素磷脂复合物400mg，与200mg蛋黄卵磷脂，200mg 胆固醇共混，溶于氯仿中至反应液澄清，旋转蒸发成膜，与300mg实施例3方法所制备的阿霉素纳米粒共混，以PH7. 4的PBS缓冲液充分水化，过碳酸酯膜，均一粒径，制得纳米粒脂质体的溶液，然后以lOOOOr/min离心10分钟，除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂500mg。实施例9 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法制备的双氢青蒿素磷脂复合物200mg，与200mg 二肉豆蔻酰磷脂酰甘油，IOOmg胆固醇共混，溶于丙酮中至反应液澄清，旋转蒸发成膜，与200mg实施例4所制备的阿霉素纳米粒共混，以PH7. 4的PBS缓冲溶液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径，制得纳米粒脂质体的溶液，然后以lOOOOr/min离心10分钟，除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂350mg。实施例10 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法所制备的双氢青蒿素磷脂复合物200mg，与200mg 二棕榈酰磷脂酰胆碱，IOOmg胆固醇共混，溶于乙酸乙酯中至反应液澄清，旋转蒸发成膜，与200mg实施例 1方法所制备的纳米粒共混，以PH7. 4的PBS缓冲溶液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径，制得纳米粒脂质体的溶液，然后以lOOOOr/min离心10分钟，除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂300mg。实施例11 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法制备的双氢青蒿素磷脂复合物200mg，与200mg大豆卵磷脂，IOOmg 胆固醇共混，溶于二氯甲烷中至反应液澄清，旋转蒸发成膜，以PH7. 4的PBS缓冲溶液充分水化，过碳酸酯膜，均一粒径，制得双氢青蒿素脂质体的溶液，然后加入实施例4方法制备的阿霉素纳米粒IOOmg与上述双氢青蒿素脂质体溶液共混加热至40°C，孵育30分钟，然后以lOOOOr/min离心10分钟，离心除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂150mg。实施例12 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法所制备的双氢青蒿素磷脂复合物400mg，与200mg蛋黄卵磷脂， 200mg胆固醇共混，溶于丙酮中至反应液澄清，旋转蒸发成膜，以pH7. 4的PBS缓冲溶液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径，制得双氢青蒿素脂质体的溶液，然后加入实施例4方法制备的阿霉素纳米粒200mg与上述双氢青蒿素脂质体溶液共混，加热至40°C，孵育30分钟，然后以lOOOOr/min离心10分钟，离心除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂300mg。实施例13 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法制备的双氢青蒿素磷脂复合物200mg，与200mg二肉豆蔻酰磷脂酰甘油，IOOmg胆固醇共混，溶于丙酮中至混合液澄清，旋转蒸发成膜，以5%葡萄糖溶液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径，制得双氢青蒿素脂质体的溶液，然后加入实施例4方法制备的阿霉素纳米粒IOOmg与上述双氢青蒿素脂质体溶液加热至45°C，孵育30分钟，然后以lOOOOr/min离心10分钟，离心除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂200mg。实施例14 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体的制备取实施例6方法制备的双氢青蒿素磷脂复合物200mg，与200mg 二棕榈酰磷脂酰胆碱，IOOmg胆固醇共混，溶于乙酸乙酯中至混合液澄清，旋转蒸发成膜，以生理盐水充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径，制得双氢青蒿素脂质体的溶液，然后加入实施例4制备的阿霉素纳米粒300mg与上述双氢青蒿素脂质体溶液加热至50°C，孵育30分钟，然后以 10000r/min离心10分钟，除去未融合的脂质体，即得程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂450mg。实施例15 空白脂质体的制备取200mg蛋黄卵磷脂，200mg胆固醇共混，溶于丙酮中至混合液澄清，旋转蒸发成膜，以PH7. 4的PBS缓冲溶液充分水化，过碳酸酯膜，均一粒径，制得空白脂质体的溶液。实施例16 空白纳米粒脂质体的制备取实施例5制备的空白纳米粒与实施例15制备的空白脂质体共混，40°C孵育 30min, 10000r/min离心除去未融合的脂质体，即得空白的纳米粒脂质体。实施例17 双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体对人乳腺癌MCF-7细胞耐药株和敏感株的作用(1)药液的配制1)双氢青蒿素阿霉素纳米粒脂质体药液的配制取实施例11所制备的程序性释放多种药物的纳米粒脂质体制剂，其中双氢青蒿素与阿霉素的质量百分比为5 2，用1640 培养液(杭州吉诺生物有限公司)，配制成负载有双氢青蒿素和阿霉素纳米粒脂质体样品液。5mg/mLMTT液的配制上海生物工程技术服务有限公司(2)取对数生长期的MCF-7细胞，用含10%胎牛血清的1640培养液制成一定浓度的细胞悬液，加入96孔培养板中，每孔细胞数为0. 5X 104，在细胞培养箱中37°C培养Mh， 细胞贴壁后，除去培养液，加入IOOuL于不同的组中，设置培养液空白组，不加药细胞空白组，每组设六个平行孔，置于37°C恒温培养箱中，培养M小时，每孔加入5mg/mLMTT液20uL 继续培养4小时，去上清后，每孔加入二甲基亚砜(DMSO) 200uL,于上述恒温培养箱放置10 分钟，酶标仪检测570nm下光密度值(0D值)，实验重复4次。测试内容包括测定阿霉素浓度为0. 05、0.5、1、4和8ug/mL的双氢青蒿素阿霉素纳米粒脂质体(其中双氢青蒿素阿霉素重量比恒定为5 2)对MCF-7细胞(中科院上海细胞所)的抑制率，并依据抑制率(IR) 计算IC50(即细胞生长抑制率为50%时的药物浓度)。
细胞生长抑制率 IR(%) = 1 —■.各组数值均以i ± SD图示。P < 0. 05为差异有统计学意义。P < 0. 01为差异有
显著统计学意义。对比双氢青蒿素/阿霉素纳米粒脂质体对MCF-7细胞敏感株与耐药株的抑制率， 试验结果见表1。
表1纳米粒脂质体对MCF-7敏感株与耐药株的生长抑制率( ± SD )
权利要求
1. 一种程序性释放多种药物的纳米粒脂质体，其特征在于所述的纳米粒脂质体主要由如下质量配比的组方制成19.34-50.79 份聚乳酸羟基乙酸共聚物双氢青蒿素磷脂复合物磷脂双十二坑基二曱基溴铵胆固醇5.78-25.73 份 0.01-25.27 份 0.01-15.38 # 0.01-20.0 份阿霉素0.01~10.16份所述的聚乳酸羟基乙酸共聚物分子量为0. 5 30万，所述双氢青蒿素磷脂复合物为双氢青蒿素与磷脂以质量比1 0. 1 10的复合物；所述磷脂为天然磷脂或合成磷脂。
2.如权利要求1所述的纳米粒脂质体，其特征在于所述的纳米粒脂质体由以下质量配比的组方制成聚乳酸羟基乙酸共聚物双氢青蒿素磷脂复合物磷脂双十二坑基二曱基溴铵胆固醇30-50 份 10-20 份 0.01-10 # 0.01-0.5 份 0.01-10 # 5-10 份阿霉素所述的聚乳酸羟基乙酸共聚物分子量为0. 8 6万。
3.如权利要求1或2所述的纳米粒脂质体，其特征在于所述的双氢青蒿素磷脂复合物中的磷脂或纳米粒脂质体中的磷脂各自独立为下列之一大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰乙醇胺。
4.一种制备如权利要求1所述的程序性释放多种药物的纳米粒脂质体的方法，其特征在于所述的方法按照以下步骤进行(1)阿霉素纳米粒的制备取组方量双十二烷基二甲基溴铵配制质量浓度0.01% 5%的双十二烷基二甲基溴铵水溶液，加入组方量的聚乳酸羟基乙酸共聚物及组方量的阿霉素溶于有机溶剂A中，7000 ^OOOr/min乳化均质15 30分钟，加水将乳化体系分散， 分散后旋转蒸发除去有机溶剂，然后30000 lOOOOOr/min离心20 60min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒；所述的有机溶剂A为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮；所述的有机溶剂A与双十二烷基二甲基溴铵水溶液体积之比为0.2 1 1;(2)程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备取组方量的双氢青蒿素磷脂复合物与组方量的磷脂及组方量的胆固醇共混，加入有机溶剂B至混合液澄清，旋转蒸发成膜，再与步骤(1)制得的阿霉素纳米粒子共混，以缓冲溶液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，制得纳米粒脂质体溶液，然后以lOOOOr/min离心10 30分钟，离心除去未融合的脂质体纳米粒，冷冻干燥，即得程序性释放药物的纳米粒脂质体；所述的有机溶剂B为乙酸乙酯、二氯甲烷、 甲醇、乙醇或丙酮。
5.如权利要求4所述的程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备方法，其特征在于所述的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液、蒸馏水、硼酸缓冲溶液、生理盐水或5%葡萄糖注射液。
6.如权利要求5所述的程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备方法，其特征在于所述的缓冲溶液为PH值为5. 0 7. 4磷酸盐缓冲溶液。
7.一种制备如权利要求1所述的程序性释放多种药物的纳米粒脂质体的方法，其特征在于所述的方法按照以下步骤进行a)阿霉素纳米粒的制备取组方量双十二烷基二甲基溴铵配制质量浓度0.01% 5% 的双十二烷基二甲基溴铵水溶液，取组方量的的聚乳酸羟基乙酸共聚物及组方量的阿霉素溶于有机溶剂C中，7000 ^OOOr/min乳化均质15 30分钟，加水将乳化体系分散，分散后旋转蒸发除去有机溶剂，然后30000 lOOOOOr/min离心20 60min，除去多余的双十二烷基二甲基溴铵，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，冷冻干燥，即得阿霉素纳米粒；所述的有机溶剂C为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮；所述的有机溶剂C与双十二烷基二甲基溴铵水溶液体积之比为0.2 1 1;b)程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备取组方量的双氢青蒿素磷脂复合物与组方量的磷脂及组方量的胆固醇共混，加入有机溶剂D至混合液澄清，旋转蒸发成膜，缓冲液充分水化，并均质，过碳酸酯膜，均一粒径为50 300nm，制得双氢青蒿素磷脂复合物脂质体溶液，然后将双氢青蒿素磷脂复合物脂质体溶液与步骤a)制得的阿霉素纳米粒共混，加热至30 70°C，孵育30 90分钟，以10000转离心10 30分钟，离心除去未融合的纳米粒脂质体，冷冻干燥，即得程序性释放药物的纳米粒脂质体，所述的有机溶剂D为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或丙酮。
8.如权利要求7所述的程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备方法，其特征在于所述的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液、蒸馏水、硼酸缓冲溶液、生理盐水或5%葡萄糖注射液。
9.如权利要求7所述的程序性释放药物的纳米粒脂质体的制备方法，其特征在于所述的缓冲溶液为PH5. 0 7. 4磷酸盐缓冲溶液。
10.如权利要求1所述的程序性释放多种药物的纳米粒脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种程序性释放多种药物的纳米粒脂质体及其制备与应用，所述纳米粒脂质体主要由如下质量配比的组分制成19.34～50.79份聚乳酸羟基乙酸共聚物、5.78～25.73份双氢青蒿素磷脂复合物、0.01～25.27份磷脂、0.01～15.38份双十二烷基二甲基溴铵、0.01～20.0份胆固醇和0.01～10.16份阿霉素；所述的聚乳酸羟基乙酸共聚物分子量为0.5～30万，所述磷脂为天然磷脂或合成磷脂；本发明所述负载不同性质药物的纳米粒脂质体可用于对阿霉素耐药的乳腺癌，白血病的治疗，逆转肿瘤的耐药性，可提高药物的利用率，减少病人痛苦和医疗成本。
文档编号A61K47/24GK102188439SQ20111006626
公开日2011年9月21日 申请日期2011年3月18日 优先权日2011年3月18日
发明者李博, 李贞 , 王成润, 金 一 申请人:浙江大学