专利名称：一种抗菌肽组合物及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物药物制剂领域，特别涉及一种稳定抗菌肽制剂组方及其制备方法。
背景技术：
抗菌肽(antibacterial peptides, ABP)是生物体产生的一种具有强抗菌作用的阳离子小肽，是生物先天免疫的重要组成成分。迄今为止，已在许多生物包括昆虫、鸟类、动物、植物及原核生物中发现2000多种抗菌活性肽。效果研究表明，抗菌肽不但广谱抗菌，能抑杀耐药性菌株，而且它的杀菌机制使病原菌不易产生耐药性突变，从而成为最具开发前景的抗生素替代品之一。 抗菌肽具有广谱抗菌活性，并且发现其中有些种类具有抗肿瘤、病毒、真菌的能力。近年实验研究表明，抗菌肽能促进伤口愈合。抗菌肽能刺激纤维母细胞、淋巴细胞和血管内皮细胞的增殖，促进肉芽组织增生，加快创面愈合，用抗菌肽Cytoporin和磺胺喃Pg银制成的软膏治疗小白鼠烧伤，比单纯用磺胺嘧啶银伤口愈合快，疤痕小。Shahabuddin等(1998)发现昆虫抗菌肽对感染蚊子的疟原虫发育的不同时期有不同的作用，主要对疟原虫的卵囊期和子孢子期造成明显损伤。Efron等(2002)报道，从南美叶泡蛙皮肤得到的抗菌多肽demasepin对痕原虫显示抑制作用。由于抗菌肽独特的抗菌机制，成为最具开发前景的抗生素替代品。现在国内外研究比较热的抗菌肽，包括有天蚕素(cecropin)，哺乳动物和人的防御素，人的BPI (杀菌/渗透-增强蛋白)，两栖动物的magainins等，蜜蜂的蜂毒中提取的蜂毒素等等。而通过DNA重组技术来获得基因工程抗菌肽，则成为抗菌肽研究的热点。抗菌肽结构特点各种抗菌肽有相似的一级结构，由二十几至五十几个氨基酸组成的短肽，一端为亲水性，另一端为疏水性。二级结构形成两亲a螺旋或￠-折叠。属于碱性肽，带多个正电荷，水溶性好。研制长效、稳定的抗菌肽缓释制剂，是制剂专家不断研发的重要课题。本发明通过系统研究，研制出了长效一种稳定、透皮效果好的抗菌肽组合物，此组合物在临床使用中既可以涂抹、浇泼、喷洒，也可以注射，使用途径多样，并且透皮稀释效果明显增强，具有重要的应用价值。
发明内容
发明人经过深入、细致试验，研发出了在pH5. 0-7. 0之间稳定的抗菌肽组合物，该组合物不需要添加血清白蛋白，主要成分容易获得，组合物稳定大大提高，透皮效果更好。本发明涉及一种稳定、透皮效果好的抗菌肽组合物及其制备方法，含有抗菌肽或修饰后的抗菌肽、保护剂、张力剂、促渗剂、PH缓冲物质、辅料；各组分重量含量为抗菌肽0.5 20% (WAV)
保护剂0.1%-10% (W/W)
张力剂0.1%-1% (W/W)
促渗剂0.1% 5% (WAV)
pH 缓冲物质 0.1%-18% (WAV)
辅料补至100% (W/W)。本发明所包含的抗菌肽可以是从动物、植物、微生物中分离得到的，可以是基因工程方式表达的，可以是修饰过的或未修饰过的。 本发明所选用的保护剂为甘氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘露醇、山梨醇中的一种或多 种；保护剂的优选比例为甘氨酸、精氨酸、赖氨酸0. 1% -1.0% (W/W)，甘露醇、山梨醇1% -10% (W/W)。本发明所选用的张力剂为0. 1% -1% (W/W)的氯化钠或氯化钾。本发明所选用的促渗剂选自中链脂肪酸钠盐、胆酸盐中的一种或多种；其中中链脂肪酸钠盐选自辛酸钠、癸酸钠、月桂酸钠和油酸钠中的一种或多种，胆酸盐选自去氧胆酸钠、鹅去氧胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠中的一种或多种。本发明的组合物要包括pH缓冲物质，所选用的pH缓冲物质选自NaH2P04-Na2HP04、柠檬酸-柠檬酸钠两种缓冲体系，使用比例为0. 1-18% (W/W)。所述辅料选自葡萄糖、果寡糖、壳寡糖中的一种或两种以上组合。本发明通过以下制备方法获得①先将张力剂、pH缓冲盐、促渗剂与适宜的辅料进行等量倍比稀释，充分混合均匀；②将保护剂与抗菌肽充分混合均匀；然后用辅料倍比稀释两次；③将上述两种混合物和剩余的全部辅料进行混合，混合均匀后，即得所述组合物。本发明所述的抗菌肽组合物，在2_8°C下贮藏24个月后仍然保持着抗菌肽的高化学、生物学稳定性。本文在说明用于本发明制剂中的抗菌肽时，使用的术语“高化学稳定性”指制剂中的抗菌肽在2-8°C下贮藏24个月后，化学完整性保持至少85%。使用的术语“高生物学稳定性”指本发明制剂中的抗菌肽在2-8°C下贮藏24个月后，生物学活性保持至少85%，(参见实施例2表I中的结果)，该生物学活性采用抑制液体生长菌活性测定方法(具体见附件I)进行。本发明的技术优势本发明所述的抗菌肽组合物，不用小牛血清或白蛋白作为保护剂，避免了这些蛋白携带病毒的潜在危险，节约了成本，利于更准确的监测产品的质量。该组合物既可以涂抹、浇泼、喷洒，也可以注射，使用途径多样。长效、透皮效果增强的抗菌肽组合物在2-8°C贮藏24个月后仍然保持着抗菌肽的高活性。
具体实施例方式结合以下实施例可以观察到本发明的有益性质，这些实施例是说明性的，不会对本发明构成限制。
实施例I、一种抗菌肽组合物及其制备方法除非另外说明，所述样品包含
组分每kg用量
a.抗菌肽IOg
d.甘氨酸3g
b.NaH2PO4^H2O0.26g
c.Na2HPO4-12H203.9g
e.低聚壳寡糖IOg
f.山梨醇5g
g.癸酸钠0.6g
h.甘氨胆酸钠1.2g
i.氯化钠5.Og
j.无水葡萄糖加至IOOOg组合物的配制方法是①先用无水葡萄糖分别等量倍比稀释氯化钠、NaH2PO4 2H20、Na2HPO4 12H20、癸酸钠、甘氨胆酸钠两次，然后把几个成分充分混合得混合物A ；②用无水葡萄糖分别等量倍比稀释甘氨酸、山梨醇、低聚壳寡糖、抗菌肽两次，然后把几个成分充分混合得混合物B ；③将上述混合物A、B和剩余的全部无水葡萄糖进行混合，混合均匀后，即得所述组合物。实施例2、一种抗菌肽组合物及其制备方法
组分每kg用量
a.抗菌肽IOg
b.梓檬酸0.3g
c.朽1檬酸钠5.5g
d.精氨酸Ig
e.低聚壳寡糖IOg ￡山梨醇6g
g.月桂酸钠0.24g
h.去氧胆酸钠0.8g
i.氯化钾3.0g
j.无水葡萄糖加至IOOOg组合物的配制方法是
①先用无水葡萄糖分别等量倍比稀释氯化钾、柠檬酸、柠檬酸钠、月桂酸钠、去氧胆酸钠两次，然后把几个成分充分混合得混合物A ；
②用无水葡萄糖分别等量倍比稀释精氨酸、山梨醇、低聚壳寡糖、抗菌肽两次，然后把几个成分充分混合得混合物B ；③将上述混合物A、B和剩余的全部无水葡萄糖进行混合，混合均匀后，即得所述组合物。实施例3、抗菌肽组合物稳定性考察评价方法和稳定性考察结果除非有另外说明，否则都采用以下的步骤进行稳定性评价。将实施例I中的样品分别置于温度为4°C ±2°C的冰箱、温度为25°C ±2°C和湿度为60% ±5%的恒温恒湿箱中。稳定性考察过程中测量所述组合物的外观性状、抗菌肽活性，并与初始配制组合物进行比较。采用“抑制液体生长菌活性测定”方法检测抗菌肽活性，具体方法见附件I。实施例I中的组合物在4°C ±2°C的冰箱条件下放置24个月后，与初始配制样品 无外观性状上、活性上的明显差异，在25°C ±2°C和湿度为60% ±5%条件下放置6个月内，制剂没有明显外观性状和活性上的变化。因此制剂在4°C条件下放置24月是稳定的。活性测定方法见附件一，具体活性测定结果见下表I所示。表I实施例I中抗菌肽组合物稳定性考察数据
权利要求
1.一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述组合物中各组分的重量含量为抗菌肽0.5 20% (WAV)保护剂0.1%-10% (W/W)张力剂0.1%-1% (W/W)促渗剂0.1% 5% (WAV)pH 缓冲物质 0.1%-18% (WAV)辅料补至100% (W/W)。
2.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述组合物中的抗菌肽选自动物、植物、微生物中分离得到的、基因工程方式表达的、修饰过的或未修饰过的。
3.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述组合物中使用的保护剂选自甘氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘露醇、山梨醇中的一种或两种以上组合；添加比例为甘氨酸、精氨酸、赖氨酸0. I %-1.0% (W/W)，甘露醇、山梨醇1%-10% (W/W)。
4.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述组合物中使用的张力剂选自氯化钠或氯化钾中的一种。
5.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述促渗剂选自中链脂肪酸钠盐、胆酸盐中的一种或两种以上组合。
6.根据权利要求5所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述中链脂肪酸钠盐选自辛酸钠、癸酸钠、月桂酸钠和油酸钠中的一种或两种以上组合。
7.根据权利要求5所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述胆酸盐选自去氧胆酸钠、鹅去氧胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠中的一种或两种以上组合。
8.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述辅料选自葡萄糖、果寡糖、壳寡糖中的一种或两种以上组合。
9.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，所述PH缓冲物质选自NaH2PO4-Na2HPO4、柠檬酸-柠檬酸钠两种缓冲体系，使用比例为0. 1-18% (W/W)。
10.根据权利要求I所述的一种抗菌肽组合物，其特征在于，其制备方法为 ①先将张力剂、PH缓冲盐、促渗剂适宜的辅料进行等量倍比稀释，充分混合均匀； ②将保护剂与抗菌肽充分混合均匀；然后用辅料稀释倍比两次； ③将上述两种混合物和剩余的全部辅料进行混合，混合均匀后，即得所述组合物。
全文摘要
本发明属于药物制剂领域，涉及一种稳定、透皮效果好的抗菌肽组合物及其制备方法。通过在抗菌肽制剂中加入保护剂、张力剂、促渗剂、pH缓冲物质，使制剂使用时pH值控制在5.0-7.0范围之间，大大提高抗菌肽的稳定性，增强渗透效果。
文档编号A61K38/17GK102727866SQ20111009272
公开日2012年10月17日 申请日期2011年4月13日 优先权日2011年4月13日
发明者刘桂兰, 王伟颖, 闫亮亮 申请人:瑞普(天津)生物药业有限公司