专利名称：一组鼠特异性抗生育作用的多肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及一组鼠特异性抗生育的多肽，特别是涉及包含鼠特异性附睾蛋白和精子蛋白的免疫抗生育多肽。
背景技术：
目前据世界卫生组织(WHO)统计，全世界有老鼠170亿只以上，我国有老鼠40亿只以上，对农业、林业、畜牧业及人类的健康造成了严重的危害。根据联合国粮农组织(FAO)报告，全世界由于鼠害造成粮食损失最高可达到收获量的15% -20%，相当于25个贫穷国家国民收入总值，够I. 5亿人全年的ロ粮。在我国毎年近千万亩森林和十亿亩草场被破坏成为沙漠或荒洲，损失超过30亿人民币。此外，老鼠能传播多种人畜共患传染性疾病，携帯得200余种病原体中能使人致病的就有57种。因此，研究低毒无害、不污染生态环境的特 异灭鼠技术和药品是具有非常重要的意义。目前灭鼠以化学灭鼠为主，但是化学灭鼠存在对人畜的毒副作用和鼠类抗药性等诸多问题，而且由于鼠类繁殖能力极强，往往杀灭快，鼠类数量恢复也快。近年来，澳大利亚科学家成功的构建了表达小鼠卵细胞透明带ZP3蛋白的鼠痘病毒，成功地抑制了鼠类的生育繁殖能力。但是，由于鼠的ZP3蛋白与人的ZP3蛋白高度同源，即靶标不具备特异性，从而引发了公众对这种鼠痘病毒在野外长期使用的安全性的担忧，限制了它的推广使用。因此，研究鼠特异性的抗生育靶标具有非常重要的意义。作为鼠特异性的抗生育靶标，首要条件是靶标蛋白必须是功能重要的生殖相关蛋白；其次是必须具有鼠特异性；最后是免疫抗生育靶标能够与抗体直接相互作用，最好是膜蛋白或分泌蛋白。此外，疫苗促使机体产生高滴度抗体的前提是疫苗具有强免疫原性。现代保护性免疫理论认为，有效的保护性免疫源于ー组表位的合理组合和搭配。蛋白质抗原并非通过其完整分子发挥功能，而是通过其表位体现其特异性。就某一蛋白质抗原而言，就含有与免疫识别密切相关的表位结构，产生免疫应答反应。由于许多天然抗原引发的免疫反应存在交叉反应，不能很好的满足临床实际需要，因此，为了提高蛋白质抗原的特异性，就必须在表位水平上做出选择，保留和改善特异性多肽片段，以得到更理想的疫苗靶标分子。
发明内容
本发明目的在于公开ー组包含鼠特异性附睾蛋白和精子蛋白的免疫抗生育多肽。本发明的目的是通过这样的技术方案实现ー组具有抗生育的多肽，包括SEQ ID :1_6中的任意多个等量混合的所示的氨基酸序列。ー种抗生育的药物制剂，包含上述SEQ ID 1-6中任意所述的多个等量混合的所示的氨基酸序列作为活性成分。ー种灭鼠制剂，包含上述SEQ ID 1-6中任一所述的多个等量混合的所示的氨基酸序列作为活性成分。
ー种具有抗生育作用的药物组合物，包含所述的多肽和药学上可接受的载体和赋形剂。一种来源于鼠的特异性精子蛋白Sp38免疫抗生育多肽，其氨基酸序列为SEQID :1 和 SEQ ID 2oー种来源于鼠的特异性附睾蛋白ΗΕ6免疫抗生育多肽，其氨基酸序列为SEQ ID 3 和 SEQ ID 4o
一种来源于鼠的特异性精子蛋白Slc26a8免疫抗生育多肽，其氨基酸序列为SEQID 5和 SEQ ID 6oー种具有抗生育的多肽，其氨基酸序列为SEQ ID 1-6中6个多肽以等量混合制成。ー种抗生育的蛋白，由所述多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联组成。上述SEQ ID 1-6中所述的多肽作为活性成分时，単位制剂中多肽总含量为100 μ g，単位制剂指注射剂的“毎支”，SEQ ID 1-6中所述的多条多肽混合时按等量进行混
ム
ロ ο本发明的6条多肽片段具有很好的免疫原性，能够刺激机体产生特异性抗体，诱导抗生育作用。从抗原多肽免疫小鼠与对照组(KLH对照组)免疫小鼠的生育对比发现，6条多肽抗原混合组免疫可使雄性和雌性小鼠的产仔率明显下降，产仔数分别下降62. 8%和50%。HE6多肽组或混合组免疫雄性小鼠能够显著降低精子的运动能力和活力。本发明所示的具有高效抗生育效果的多肽为鼠特异免疫抗生育疫苗的研究奠定了基础。本发明抗原在抗原特性上与天然抗原不同，但引起的免疫反应特异性和免疫效果与天然抗原无异，有针对性的筛选交叉反应性小或没有交叉反应性的优势表位进行研究，结果表明申请人筛选的6种鼠特异性抗生育多肽具有很好的免疫抗生育效果具有很乐观的应用前景。六种鼠特异性附睾蛋白和精子蛋白的免疫抗生育多肽，具有显著的抗原性，免疫抗生育效果明显，而且无毒副作用。下述实验例和实施例进ー步说明但不限于本发明。申请人:通过比较基因组学及生物信息学技术结合充分的文献调研发现，附睾HE6受体蛋白、精子Sp38和Slc26a8蛋白，它们均为膜蛋白，敲除后雄性小鼠均呈不育表型，均可作为免疫抗生育的潜在靶标，同时这三个蛋白由于分布的部位不同，分别參与精液的重吸收、精卵结合和精子运动发育等不同的过程，所以它们还可能具有协同作用。由于本合成多肽分子量太小，在动物体内不能诱导产生免疫反应，因此将多肽与载体蛋白交联后才能进行免疫，能显著增加抗原的免疫原性。选择匙孔血蓝蛋白(Keyholelimpet hemocyanin,KLH)进行交联,是由于它是ー种自身就能引发免疫反应的大分子载体蛋白，免疫原性优于BSA等其它的载体蛋白。因此，本发明均使用KLH与多肽片段进行偶联。实验例I抗生育多肽序列的筛选为了筛选到既具有鼠特异型，又具有良好抗原性的多肽片段，本发明使用了 Invitrogen 公司的在线多妝分析工具(http: //peptideselect. invitrogen. com/peptide)和DNAStar分析软件中Protean分析工具，对人/鼠附睾蛋白HE6、精子蛋白Sp38与Slc26a8的蛋白序列进行分析。根据选取特异性好、抗原性、亲水性强、避免位于螺旋区结构多肽的原则，最终选取Sp38蛋白的4-19位和40-54位氨基酸序列、Slc26a8蛋白的2-20位和36-51位氨基酸序列及HE6蛋白的3_14位和35-50位氨基酸序列进行研究，DNAStar分析软件中Protean分析工具分析多肽序列的结果见图I,选取多肽的序列结果见表I。表I本发明抗生育多肽中的氨基酸序列信息
权利要求
1.一种抗生育的多肽，其特征在于包括SEQ ID :1-6中的任意多个的氨基酸序列按照等量混合。
2.如权利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :1和SEQ ID :2以等量混合制成。
3.如权利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :3和SEQ ID :4以等量混合制成。
4.如权利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :5和SEQ ID :6以等量混合制成。
5.如权利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :1-6以等量混合制成。
6.—种抗生育的蛋白，其特征在于由SEQ ID 1-6多个等量混合的多肽与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联组成。
7.如权利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID :1和SEQ ID 2以等量混合制成。
8.如权利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID 3和SEQ ID 4以等量混合制成。
9.如权利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID :5和SEQ ID :6以等量混合制成。
10.如权利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID 1-6以等量混合制成。
11.如权利要求1-5所述的抗生育多肽，其特征在于所述多肽和药学上可接受的载体和赋形剂组成的药物组合物。
12.如权利要求6-10所述的抗生育蛋白，其特征在于所述蛋白和药学上可接受的载体和赋形剂组成的药物组合物。
全文摘要
本发明公开了6种免疫抗生育多肽片段均具有很好的免疫原性，能够刺激机体产生特异性抗体，诱导抗生育作用。从抗原多肽免疫小鼠与对照组(KLH对照组)免疫小鼠的生育对比发现，6条多肽抗原混合组免疫可使雄性和雌性小鼠的产仔率明显下降，产仔数分别下降62.8％和50％。HE6多肽组或混合组免疫雄性小鼠能够显著降低精子的运动能力和活力。本发明所示的具有高效抗生育效果的多肽为鼠特异免疫抗生育疫苗的研究奠定了基础。可以用于各种抗生育制剂的应用。
文档编号A61K38/10GK102827285SQ20111016245
公开日2012年12月19日 申请日期2011年6月16日 优先权日2011年6月16日
发明者王玉民, 汪莉, 田利源, 侯小强, 李秀丽 申请人:军事医学科学院生物工程研究所