专利名称：Hdac抑制剂与血小板减少症药物的组合的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种包含(a)组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi);和(b)用于治疗血小板减少症(TCP)的药物，的组合，该组合同时、并列、独立或相继使用，特别是用于增殖性疾病，例如癌症，如实体肿瘤或者血癌(如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)、霍奇金病、骨髓增生异常综合征(MDS)或急性髓细胞白血病(AML))的治疗。本发明还涉及包含这一组合的药用组合物、以及在接受组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂药物治疗的患者中治疗血小板减少症的方法。本发明还涉及一种包含这一组合的商业包装或产品。
背景技术：
可逆的组蛋白的乙酰化是基因表达的一个主要调控方法，该调控方法是通过改变转录因子对DNA的可达性而起作用。在正常细胞中，组蛋白去乙酰化酶(HDAC)与组蛋白乙酰转移酶共同地控制组蛋白的乙酰化水平从而维持平衡。对组蛋白去乙酰化酶的抑制导致过乙酰化组蛋白的蓄积，从而导致多种细胞反应。已有人对HDAC抑制剂(HDACi)针对癌细胞的治疗效果进行了研究。HDACi研究领域中的近期开发提供了高度有效且稳定的适于治疗肿瘤的活性化合物。逐渐增加的证据提示当与其它化学治疗剂联合使用时HDACi甚至更加有效。在疗效和安全性两个方面，均存在协同和相加的优点。化学治疗剂与HDACi的组合的治疗效果可以导致该组合中各组分的安全剂量范围较低。
发明内容
本发明涉及一种用于治疗增殖性疾病或者延迟该疾病发展的HDACi与血小板减少症(TCP)治疗药的药用组合。“增殖性疾病”包括实体肿瘤癌症或者血癌(诸如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病、骨髓增生异常综合征(MDS)或急性髓细胞白血病(AML))。优选地，增殖性疾病是多发性骨髓瘤、MDS和/或AML。更优选地，增殖性疾病是多发性骨髓瘤。当与抗血小板减少症药联合使用时HDAC抑制剂是有效的，特别是在患有组蛋白去乙酰化酶引起的血小板减少症的患者中。优选的HDAC抑制剂包括帕比司他(panobinostat)和伏立诺他(vorinostat)。最优选的是帕比司他。HDAC抑制剂可以任选地与其它活性剂(诸如蛋白酶体抑制剂、抗代谢药以及有效治疗多发性骨髓瘤、MDS和/或AML的药物)联合用药。与HDAC抑制剂联合用药的优选药物包括保特佐米(bortezomib)和地塞米松。优选的抗代谢药包括5-氮杂胞苷和/或地西他滨。适用于本发明的抗血小板减少症药包括:血小板生成素(TPO)模拟物,优选罗米司亭(romiplostim)和/或艾特博中白(etrombopag)。
在根据本发明的一个优选方法中，提供(a)N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受盐与(b)抗血小板减少症药的组合在制备用作多发性骨髓瘤药的药物中的用途。术语“用途”也可以包括治疗方法，例如提供治疗多发性骨髓瘤的方法，该方法包括帕比司他与保特佐米更优选地与地塞米松的联合用药。在本发明的又一优选实施方式中，提供用于治疗MDS和/或AML的方法，该方法包括帕比司他(panobinostat)与5_氮杂胞苷和/或地西他滨(decitabine)的联合用药。
图1示出了对血小板凋亡无效。图2提供证据证明HDACi引起的血小板减少症有可能是异常的血小板生成的结
果O图3提供证据证明TPO模拟物可有效地改善帕比司他引起的血小板减少症。
图4提供证据证明TPO模拟物可有效地改善罗米地辛(romidepsin)引起的血小板减少症。
具体实施例方式本发明提供一种用于延迟增殖性疾病(优选血癌，更优选MDS或AML，最优选多发性骨髓瘤)的发展或治疗该疾病的方法。该方法将可有效治疗增殖性疾病的药物与有效治疗TCP的药物的给药加以合并。优选地，该方法将HDAC抑制剂与抗TCP药的给药加以联合。更优选地，该方法将HDACi与抗TCP药进而与另一种抗癌药(诸如抗代谢药)的给药加以联合。本文中使用的术语疾病的“发展的延迟”是相对于在没有任何治疗存在下所观察或预计的发展。HDAC 抑制剂本发明的一个实施方式提供一种在需要这种治疗的对象中延迟增殖性疾病(优选多发性骨髓瘤)的发展或治疗该疾病的方法，该方法包括给该对象给予有效量的化学式
(I)的羟肟酸类的HDAC抑制剂:(a)化学式⑴的HDAC抑制剂:，其中，&是!1;卤素；或者直链C1-C6烷基，特别是甲基、乙基或正丙基，其中甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或者被下述的一个或多个烷基取代基取代；R2是选自H ;C「C1Q烷基，优选C1-C6烷基，例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH ；C4-C9环烷基；04-(]9杂环烧基；C4_C9杂环烧基烧基；环烧基烧基，例如环丙基甲基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；_(CH2)nC(O)R6 ；-(CH2)nOC(O)R6 ;氨基酰基；HON-C (O) -CH=C (R1)_ 芳基-烧基 _ ;和-(CH2) nR7 ；R3和R4是相同或不同的，并且独立为H ；CrC6烷基；酰基；或酰基氨基，或者R3和R4连同它们所键结的碳代表C=0、C=S或C=NR8,或者R2连同它所键结的氮与R3连同它所键结的碳可以形成(；_(:9杂环烷基；杂芳基；多杂芳基；非芳香族多杂环；或者芳基与非芳基混合的多杂环；R5是选自H K1-C6烷基；C4_C9环烷基；(；_(:9杂环烷基；酰基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；芳香族多环；非芳香族多环；芳基与非芳基混合的多环；多杂芳基；非芳香族多杂环；以及芳基与非芳基混合的多杂环；rKnpr^和n3是相同或不同的，并且独立地选自0_6，当Ii1为1_6时各碳原子可以任选地且独立地被R3和/或R4取代；X和Y是相同或不同的并且独立地选自H ;齒素;C1-C4烷基，诸如CH3和CF3 ；N02 ；C(O)R1 ；0R9 ；SR9 ;CN ;和 NR10R11 ；R6是选自H ;C「C6烷基;C4-C9环烷基；C4_C9杂环烷基；环烷基烷基，例如环丙基甲基、芳基、杂芳基；芳基烷基，例如苄基和2-苯基乙烯基；杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；OR12 ;和 NR13R14 ；R7 是选自 OR15 ；SR15 ；S (O) R16 ；SO2R17 ；NR13R14 ;和 NR12SO2R6 ；R8是选自H ；0R15 ；NR13R14 ;C「C6烷基；C4_C9环烷基；C4_C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；以及杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；R9 是选自 C1-C4 烷基，例如 CH3 和 CF3 ;C (O)-烷基，例如 C (O) CH3 ;和 C (O) CF3 ；R10和R11是相同或不同的并且独立地选自H ;C「C4烷基；和-C(O)-烷基；R12是选自H X1-C6烷基;C4-C9环烷基；C4_C9杂环烷基;C4-C9杂环烷基烷基；芳基；芳基与非芳基混合的多环；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；和杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；R13和R14是相同或不同的并且独立地选自H ；CrC6烷基;C4-C9环烷基;C4-C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳烷基，例如苄基； 杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；氨基酰基，或者R13和R14连同它们所键结的氮原子是C4-C9杂环烷基；杂芳基；多杂芳基；非芳香族多杂环；或者芳基与非芳基混合的多杂环；R15是选自H ；C1-C6烷基；C4_C9环烷基；C4_C9杂环烷基；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；和(CH2)mZR12 ；R16是选自C1-C6烷基；C4_C9环烷基；C4_C9杂环烷基；芳基；杂芳基；多杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；和(CH2)mZR12 ；R17是选自(^-(:6烷基；C4_C9环烷基；(；_(:9杂环烷基；芳基；芳香族多环；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；多杂芳基和NR13R14 ；M为选自0-6的整数；并且Z 是选自 O、NR13' S、和 S (O)，或者其药学上可接受盐，联合抗TCP药。该组合还可任选地包含给予抑制细胞增殖的抗癌药，如抗代谢药。适当时，药学上可接受盐包括:药学上可接受的碱加成盐和酸加成盐，例如金属盐(诸如碱金属盐和碱土金属盐)、铵盐、有机胺加成盐以及氨基酸加成盐和磺酸盐。酸加成盐包括:无机酸加成盐(诸如盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐)；以及有机酸加成盐(诸如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、醋酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐)。优选乳酸盐。金属盐的例子是:碱金属盐(诸如锂盐、钠盐和钾盐)；碱土金属盐(诸如镁盐和钙盐、铝盐和锌盐)。铵盐的例子是铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐的例子是与吗啉和哌啶形成的盐。氨基酸加成盐的例子是与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸形成的盐。磺酸盐包括:甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。在一实施方式中，达西司特(dacinostat)是HDAC抑制剂。在本发明的一个优选实施方式中，HDAC抑制剂是帕比司他(panobinostat)(即，N-轻基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺)或者其药学上可接受盐，优选化学式(III)的乳酸盐(即帕比司他)。本发明还延及非羟肟酸类的HDAC抑制剂的使用。例如，本发明涉及二环四肽Istodax (罗米地辛)和辛二酰苯胺异轻厢酸Zolinza (伏立诺他)的使用。杭TCP 药本发明涉及用于治疗血癌的抗血小板减少症药与HDAC抑制剂的组合。“抗血小板减少症药”包括血小板生成素(TPO)(包含重组ΤΡ0)和聚乙二醇化重组人巨核细胞生长发育因子(PEG-rhMGDF)以及所谓的TPO模拟物，该模拟物被设计作为TPO受体激动剂而有效地治疗血小板减少症。TPO模拟物包括非肽类分子以及肽类。Np〗ate (罗米司亭，AMG531碱金属盐)例如是最新开发的TPO模拟物之一并且是TPO受体结合肽以及IgGl抗体的Fe结构域的融合蛋白。艾曲波帕(Eltrombopag)是示例性的非肽类TPO模拟物。US7, 160, 870中描述了其它合适的TPO模拟物，例如:3’ - {N’ _[3_环丙基-1- (3，4- 二甲基苯基)-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]肼基} -2’-羟基联苯基_3_甲酸；[1- (4-氟-3-甲基苯基)-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-肼基} -2’-羟基联苯基-3-甲酸;3，-{N，-[3-甲基-5-氧代-1-(4-三氟甲基苯基)-1，5-二氢吡唑-4-亚基]肼基} -2’ -羟基联苯基-3-甲酸；3-{N’-[1-(3,4-二甲基苯基)-3-甲基_5_氧代-1，5_ 二氢吡唑_4_亚基]肼基}-2_羟基-3’ -四唑-5-基联苯基；3’ -{N’-1-(3, 4-二甲基苯基)-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]肼基}_2’ -羟基联苯基-3-甲酸；3’-{N’-[l_(3-氟-4-甲基苯基) _3_甲基_5_氧代_1，5_ 二氢吡唑_4_亚基]肼基}-2’-羟基联苯基-3-甲酸；3’_{N’-[1-(3，4-二甲基苯基)-3-乙基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚基]肼基}_2’ -羟基联苯基-3-甲酸；和3-{N，-[1-(3, 4- 二甲基苯基)-3_乙基_5_氧代-1, 5_ 二氢吡唑_4_亚基]-肼基} -2-羟基-3 ’ -四唑-5-基联苯基，优选3’ - {N’ - [1- (3，4- 二甲基苯基)_3_甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]肼基}_2’ -羟基联苯基-3-甲酸，以及它们的药学上可接受盐、水合物、溶剂化物、和酯。如本文中所述，HDAC抑制剂与抗血小板减少症药物的组合可以进一步与另一种药物(优选抗癌药)联合用药。更优选地，该抗癌药是有效地治疗血癌(诸如多发性骨髓瘤、MDS和/或AML)的药物。这种药物可以包括抗代谢药(诸如Vidaza (5-氮杂胞苷)和/或Dacogen (地西他滨)、以及蛋白酶体抑制剂(诸如Velcade (保特佐米))。血小板减少症是任何血小板数异常低的疾病，例如每微升血小板数低于50，000或者低于特定人群正常(平均值或中间值)血小板计数的2.5%。血小板减少症具有许多原因，但导致HDAC抑制剂引起的TCP的病因尚未得到阐明。本发明人已发现HDAC抑制剂引起的TCP是由于血小板生成或巨核细胞释放血小板的减少所致，而并非由于本领域所一般认为的骨髓抑制、骨髓细胞清除或血小板寿命(例如，凋亡)所致。因此，不受任何理论所束缚，本发明用特异性地解决血小板生成减少问题的抗TCP药提供对HDAC抑制剂治疗中观察到的TCP的治疗。这样，可以抑制或避免最常规抗TCP药物的给药中观察到的副作用。在本发明的一优选实施方式中，用于治疗TCP的药物是艾曲波帕或者罗米司亭。在一优选实施方式中，将艾曲波帕或罗米司亭与HDAC抑制剂(诸如帕比司他或其药学上可接受盐)联合用药。此外，本发明提供HDAC抑制剂或者其药学上可接受盐或前药在制备治疗增殖性疾病的与抗血小板减少症药联合用药的药物中的用途。“联合”是指把一定量的HDAC抑制剂与一定量的抗血小板减少症药组合起来用药，以便产生协同效果，在没有独立、同时或相继的抗血小板减少症药给药的情况下HDAC抑制剂的给药将不会获得该协同效果。抗血小板减少症药的给药可以是连续、相继或分散的。因此，本文中使用的“药物”不应局限于包含本发明组合的单个制剂，而是包括包含在不同剂型中的本发明组合的活性剂给药的方案或治疗。优选地，联合是指一定量的HDAC抑制剂与一定量的抗血小板减少症药的联合给药，以便产生协同的抗增殖效果和/或克隆源性细胞杀伤效果，如果在以下情况下不会获得该协同效果:a)在没有之前、同时或后继的抗TCP药给药的情况下施用HDAC，其中给药可以是连续、相继或分散的；b)在没有之前、同时或后继的HDAC抑制剂给药的情况下施用抗血小板减少症药，其中给药可以是连续、相继或分散的。因此，在下文中将包含下述组分的组合(产品)称为本发明组合(产品):(a)HDAC抑制剂，该抑制剂采用游离的形态或者采用药学上可接受盐的形态，还有任选的至少一种药学上可接受的载体；以及(b)抗血小板减少症药。
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在HDAC抑制剂与抗TCP药之间可以观察到协同作用，因而比没有HDAC抑制剂联合用药所需剂量更低剂量的抗TCP药可以有效地治疗TCP。例如，罗米司亭的推荐剂量在lmg/kg至10mg/kg的范围内。因此，抗血小板减少症药与HDAC抑制剂的彼此相对剂量优选地为产生协同效果的比率。在本发明的一实施方式中，HDAC抑制剂的联合用药可以减小TCP的有效剂量达5%或10%、优选15%或20%、最优选30%至40%。相反地，在HDAC抑制剂与抗TCP药之间也可以观察到协同作用，因而比没有抗TCP药联合给药所需剂量更低剂量的HDAC抑制剂可有效地治疗癌症。例如，帕比司他的推荐剂量可以表示为20-40mg每周三次或者15mg/kg至20mg/kg。在本发明的一优选实施方式中，抗TCP药的联合用药可以减小帕比司他的有效剂量达5%或10%、优选15%或20%、最优选30%至40%。例如，罗米司亭的联合用药可以将帕比司他的有效剂量从20mg/kg减小至15mg/kg。当把HDAC抑制剂与抗TCP药联合用药时，在HDAC抑制剂与另一种药物之间也可以观察到协同作用。例如，在帕比司他与地塞米松之间可观察到协同作用，因而比没有地塞米松联合用药所需剂量更低剂量的HDAC抑制剂可以有效地治疗多发性骨髓瘤。在本发明的一实施方式中，与另一药物(例如地塞米松)的进一步的组合可以减小HDAC抑制剂的有效剂量达5%或10%、优选15%或20%、最优选30%至40%。在本发明的组合中，HDAC抑制剂和药学上可接受盐及前药衍生物，优选地采用药物制剂的形态而使用，该药物制剂含有相关治疗有效量的活性成分、任选地连同或者与适合于施用的无机或有机的固体或液体的药学上可接受载体混合。优选地，HDAC药用组合物适合于口服给药。HDAC抑制剂与抗TCP药的药用组合物，在单独用药或者联合用药的情况下，可以是例如:用于肠内给药(例如口服给药、直肠给药、雾化吸入或鼻内给药)的组合物、用于胃肠外给药(例如静脉给药或皮下给药)的组合物、或者用于经皮给药(例如，被动的或离子电渗入)的组合物、或者用于局部给药的组合物。MM可以通过任何已知方式来制备根据本发明的药用组合物，并且本发明的药用组合物适合于对哺乳动物(温血动物)包括人的肠内给药(例如口服给药或直肠给药)和胃肠外给药，该药用组合物包含治疗有效量的至少一种具有药理学活性的组合成分(单独或者连同一种或多种药学上可接受载体)，并且特别适合于肠内或胃肠外使用。该新型药用组合物包含例如大约10%至大约100%、优选大约20%至大约60%的活性成分。用于肠内给药或胃肠外给药的联合治疗的药物制剂是例如采用单位剂型(诸如包糖衣片、片剂、胶囊或栓剂及安瓿)的制剂。除非另有说明，这些制剂是通过已知方式(例如通过常规的混合、制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥工艺)制备。应当理解的是，各剂型的单独剂量中所包含组合成分的单位含量无需自身为有效量，这是因为可以通过多个剂量单位的给药而达到必需的有效量。在制备用于口服剂型的组合物中，可使用任何常用的药用介质，诸如水、二醇类、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色剂；或者载体，诸如在口服固体制剂的情况下(例如粉剂、胶囊和片剂)为淀粉类、糖类、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，并且固体口服制剂优于液体制剂。由于给药方便，片剂和胶囊代表最有利的口服剂量单位剂型，在此情况下显然是使用固体药用载体。治疗有效量的本 发明组合的各组合组分可以同时或相继地按任意顺序给药，并且各组分可以独立地或者以固定组合产品的形式给药。例如，根据本发明的延迟疾病发展或者治疗疾病的方法可包括:(i)第一组合组分的给药；以及(ii)第二组合组分的给药，其中组合组分的给药可以以共同地治疗有效量、优选协同地有效量(例如对应于本文中所述量的每日或每周剂量)而同时给药或者按任何顺序相继给药。本发明组合的单个组合组分可以独立地在治疗过程中的不同时间给药或者同时给药。在一优选实施方式中，以预先给药的方式(即在开始HDAC抑制剂治疗之前)施用抗血小板减少症药；在规定的时段将抗血小板减少症药单独给患者施用。给藍此外，术语“给药”还包括HDAC抑制剂或抗血小板减少症药的前药的使用，该前药在体内转变成上述组合组分。因此，本发明应理解成包括所有这种同时或交替治疗的方案，并且如此解释术语“给药”。如果温血动物是人，那么化学式(I)的化合物的合适剂量优选在100-1，500mg/日(例如 200-1, OOOmg/ H )的范围内，诸如 200、400、500、600、800、900 或者 1，OOOmg/ 日，每
日一次或二次给药。死亡受体配体的合适剂量和给药频率将取决于如下因素:所治疗适应症的性质和严重程度、期望的反应、患者的状态等。
主治医师可基于患者的具体情况(特别是年龄、体重、生活方式、活动水平等)来向选择具体的给药模式以及HDAC抑制剂的剂量。类似地，HDAC抑制剂的剂量可取决于各种因素，诸如活性成分的有效性和作用持续时间、给药模式、电离辐射的有效性和作用持续时间以及/或者治疗对象的性别、年龄、体重和个体状况。电离辐射的剂量可取决于各种因素，诸如电离辐射的有效性和作用持续时间、给药模式、给药位置、HDAC抑制剂的有效性和作用持续时间以及/或者治疗对象的性别、年龄、体重和个体状况。一般是根据辐射吸收剂量、时间和分数来确定电离辐射的剂量，并且必须由主治医师仔细地确定该电离辐射剂量。在本发明的一优选实施方式中，本发明的组合包含抗血小板减少症药，诸如艾曲波帕以及上述化学式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚_3_基)-乙基]氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受盐。在本发明的另一优选实施方式中，本发明的组合包含抗血小板减少症药，诸如罗米司亭以及上述化学式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受盐。在这两个实施方式中，本发明的组合还可优先地包含抑制细胞增殖的药物(诸如保特佐米)。此外，本发明涉及一种对患有增殖性疾病的温血动物进行治疗的方法，该方法包括以共同地有效治疗增殖性疾病的方式给人类患者施用，并且其中组合组分也可以采用它们的药学上可接受盐的形式。该组合可以以抑制血小板减少症或其相关症状的方式而起作用。此外，本发明有关于用于延迟增殖性疾病的发展或治疗该疾病的本发明的组合在用于延迟增殖性疾病的发展或治疗该疾病的药物的制备中的用途。实施例以下的实施例仅仅是说明性的，而并非意图以任何方式限制本发明的范围:实施例1:霍奇金淋巴瘤患者中化学式III的化合物与艾曲波帕的组合向患有霍奇金淋巴瘤的患者给予推荐剂量的化合物III。该患者的血小板计数开始降低。然后向该患者给予艾曲波帕并且患者的血小板计数开始升高到可接受的水平。实施例2:霍奇金淋巴瘤患者中化学式III的化合物与艾曲波帕的组合对患有霍奇金淋巴瘤的患者的血小板减少症进行测试。发现该患者具有低血细胞计数或者血小板减少症的生物标记。对该患者实施化合物III联合艾曲波帕的治疗方案。患者不形成血小板减少症。实施例3:多发性骨髓瘤患者中化学式III的化合物与艾曲波帕的组合向患有多发性骨髓瘤的患者给予推荐剂量的化合物III。该患者的血小板计数开始降低。然后向该患者给予艾曲波帕并且该患者的血小板计数开始升高到可接受的水平。实施例4:多发性骨髓瘤患者中化学式III的化合物与艾曲波帕的组合对患有霍奇金淋巴瘤的患者的血小板减少症进行测试。发现该患者具有低血细胞计数或者血小板减少症的生物标记。对该患者实施化合物III连同艾曲波帕的治疗方案。患者不形成血小板减少症。实施例5:血小板清除分析和网织血小板染色
前后间隔I小时，用溶解于磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)和10% 二甲基亚砜(DMSO)的600 μ g NHS-生物素给小鼠静脉(IV)注射2次。在各时间点从尾部分离外周血，将I μ I的血在PBS和IOmM EDTA中清洗2次。在冰上用藻红蛋白结合的大鼠抗⑶41以及别藻蓝蛋白结合的链霉菌抗生物素蛋白(APC-A)对血小板进行30分钟染色。再次对该试样进行清洗并且在添加0.125 μ g/ml噻唑橙后进行90分钟保温培养，该试样对含有高RNA的血小板、染色幼小的网织血小板的摄取增加。然后，在LSR流式细胞仪中执行流式细胞分析。通过绘制生物素化血小板数与时间的关系图，而利用线性外推法获得寿命的估计值，同时利用噻唑橙阳性的非生物素化血小板数而提供新血小板生成的估计值。实施例6 =HDAC抑制剂引起的血小板减少症不归因于直接血小板凋亡为了进一步证实直接血小板凋亡并非HDAC抑制剂引起的血小板减少症的原因，在通过给小鼠静脉注射NHS-生物素而用HDAC抑制剂处理的小鼠中确定小鼠血小板寿命。然后，用10mg/kg的帕比司他(腹腔注射)或lmg/kg的罗米地辛(腹腔注射)每日或者赋形剂对小鼠进行7天处理，测定外周血中生物素化血小板数。随着时间的推移，帕比司他或罗米地辛处理的小鼠的标记的血小板的减小仍然类似于用赋形剂治疗的小鼠。相反，在用ABT-737处理小鼠后生物素化血小板数快速地减小，在施用该化合物2小时后发现血小板数减小50%。ABT-737是抑制Bcl_xL从而引起直接血小板凋亡的BH3模拟物。卡钼，一种能够通过巨核细胞清除而引起血小板减少症的化学治疗剂，不影响血小板寿命(图1)。巨核细胞是存在于骨髓中的负责血小板生成的造血细胞。实施例7 =HDAC抑制剂引起的血小板减少症是由于血小板生成减小所致 为了评价血小板生成，而用帕比司他、卡钼和ABT-737对C57BL/6小鼠进行处理，并且通过用噻唑橙进行染色而确定含RNA的血小板的分数(即新的血小板)(图2)。在赋形剂处理小鼠中，在6天的实验期间新的网织血小板数保持相对恒定。相反，在用帕比司他处理的小鼠中，网织血小板的绝对数显著减小。在整个实验过程中，血小板计数始终保持低于基线水平。作为快速引起血小板凋亡的补偿反应，ABT-737导致新血小板的生成显著增力口。用卡钼对小鼠进行处理在治疗的前4天内不显著影响新的血小板生成，然而在治疗开始6天后绝对网织血小板数显著减小。综合这些数据，表明ABT-737、卡钼和帕比司他通过不同的机制而导致血小板减少症。我们假设HDAC抑制剂引起的血小板减少症是由于血小板生成不足或巨核细胞释放血小板不良所致，而不是由于骨髓细胞清除或者直接血小板凋亡所致(如分别在同卡钼和ABT-737处理的小鼠中所见)。实施例7:帕比司他与罗米司亭的组合用10mg/kg帕比司他(腹腔注射)每日对野生型C57BL/6小鼠进行处理从而引起12天内持续的血小板减少症(与以前的结果一致)，或者在第3和第6天用血小板生成素模拟物AMP-4 (20yg/kg)进行处理。为了确定血小板生成素模拟物的给药是否可以改善血小板减少症，而于第O天和第6天对部分帕比司他处理小鼠实施与20 μ g/kg AMP-4的联合用药(图3)。AMP-4是另一个TPO模拟物，该模拟物具有与罗米司亭相同的结合肽但具有小鼠Fe受体。实施例8:罗米地辛与罗米司亭的组合类似地，用10mg/kg罗米地辛(腹腔注射)每日对野生型C57BL/6小鼠进行处理，从而在12天内引起持续的血小板减少症(与以前的结果一致)、或者于第3和第6天用20 μ g/kg血小板生成素模拟物AMP-4进行处理。为了确定血小板生成素模拟物的施用是否可以改善血小板减少症，而于第O天和第6天对部分罗米地辛处理小鼠实施与20 μ g/kgAMP-4的联合给药(图4)。AMP-4是另一个TPO模拟物，该模拟物具有罗米司亭相同的结合肽但具有小鼠Fe受体。这些数据提供第一 证据以证明该治疗方案可改善HDAC抑制剂引起的TCP。
权利要求
1.(a) N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受盐与(b)抗血小板减少症药的组合在制备用作多发性骨髓瘤药的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述抗血小板减少症药是TPO模拟物。
3.如权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述抗血小板减少症药是艾曲波帕、罗米司亭、或者两者。
4.如权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述组合还包含有效治疗多发性骨髓瘤的另一种药物。
5.如权利要求4所述的用途，其中所述药物是蛋白酶体抑制剂。
6.如权利要求5所述的用途，其中所述蛋白酶体抑制剂是保特佐米。
7.如权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述组合还包含地塞米松。
8.以下组合: (a)HDAC抑制剂，选自帕比司他、罗米地辛、伏立诺他、以及它们的组合； (b)抗血小板减少症药，选自艾曲波帕、罗米司亭、或者两者；以及任选的 (c)抗代谢药，选自5-氮杂胞苷、地西他滨、或者两者， 在制备用作MDS和 /或AML药的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种包含(a)HDAC抑制剂和(b)抗血小板减少症药的组合，该组合是用于同时、并列、独立或相继的使用，特别是用于增殖性疾病的治疗。本发明还涉及包含这一组合的药用组合物或产品，或者使用这一组合的方法。
文档编号A61P35/00GK103079551SQ201180042418
公开日2013年5月1日 申请日期2011年8月31日 优先权日2010年9月1日
发明者P·W·阿塔德亚, R·W·约翰斯通, H·M·普林斯, M·J·比什顿, S·J·哈里森 申请人:诺华有限公司