一种克拉霉素冻干脂质体及其制备方法

专利名称：一种克拉霉素冻干脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种克拉霉素冻干脂质体及其制备方法。
背景技术：
克拉霉素(clarithromycin，CLM)化学名为6_0_甲基红霉素，是1981年由日本大
正制药公司以红霉素为原料，将6位羟基用甲氧基取代而成。化学结构式如下所示克拉霉素属大环内酯类抗生素，其机制是通过阻碍细胞核蛋白50S亚基的联结， 抑制蛋白质的合成而产生抑菌作用。主要用于敏感细菌所致的上、下呼吸感染，生殖泌尿系感染，艾滋病患者的非典型分支杆菌感染等。克拉霉素的临床剂型多为口服制剂，包括片剂、胶囊、糖浆剂、混悬剂。其注射剂是美国雅培公司制造生产的，商品明为Klacid 。克拉霉素静脉使用刺激性较大，易引起化学性静脉炎；且由于药物本身具有较强刺激性，亦可引起血管痉挛，血液减少，相对局部药物浓度增大，加重静脉炎，且若输液速度大于血液流速，则静脉炎的发生率明显增高，在临床用于外周浅静脉输液时，发生浅静脉炎的比例相当高。因此，为了扩大克拉霉素的给药途径，降低静脉给药引起的刺激性，亟待开发出有市场前景的制剂。本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种克拉霉素冻干脂质体。该冻干脂质体冻干复溶后的粒径在200nm以下，冻干后的pH值，包封率，含量均保持稳定。与溶液剂相比，本发明的克拉霉素冻干脂质体可以显著的降低克拉霉素引起的给药部位疼痛和血管刺激性，其各项指标都达到了国家食品药品管理局关于新药研究开发的要求。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种克拉霉素冻干脂质体，其特征在于，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成，每IOOmL脂质体溶液中加入5g 20g 冻干保护剂；IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素O. 05g 2. Og,固醇类物质 O. Olg 2. Og,磷脂O. 2g IOg,脂肪酸O. Olg I. Og,余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干
发明内容保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或几种；所述固醇类物质为胆固醇和/或胆固醇硫酸钠盐；所述脂肪酸为己酸、己二酸和苯甲酸中的一种或几种；所述磷脂为天然磷脂和/或合成磷脂。上述的一种克拉霉素冻干脂质体，IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素I. 5g，固醇类物质I. 5g，磷脂5. 4g，脂肪酸O. 75g，余量为磷酸盐缓冲溶液。上述的一种克拉霉素冻干脂质体，所述天然磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和卵磷脂E-80中的一种或几种，所述合成磷脂为合成磷脂POPCd-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂)、合成磷脂SOPCd-硬脂酰基-2-油酰基卵磷脂)和合成磷脂MOPC (I-肉豆蘧酰基-2-油酰基卵磷脂)中的一种或几种。上述的一种克拉霉素冻干脂质体，所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐，所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T，所述脂肪酸为己酸。本发明还提供了制备上述克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂和脂肪酸，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的有机溶剂，然后用氮气吹干， 得到薄膜；步骤三、配制pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至 50°C 80°C ；步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜完全水化， 得到初乳；步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液定容，然后置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；步骤六、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤五中所述脂质体溶液中，超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。上述的方法，步骤五中所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为 30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤五中所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。本发明提供了另一种制备上述克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂、脂肪酸和冻干保护剂，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；步骤二、配制pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取的冻干保护剂溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至50°C 80°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中有机溶剂完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为50°C 80°C ；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，然后将经均质后或超声后的脂质体混悬液超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。上述的方法，步骤四中所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为 30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤四中所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。本发明提供的第三种制备上述克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂和脂肪酸，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；步骤二、配制pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至 50°C 80°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉有机溶剂，制得脂质体混悬液；步骤四、对步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；步骤五、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤四中所述脂质体溶液中，超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。上述的方法，步骤四中所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为 30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤四中所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。本发明与现有技术相比具有以下优点I、本发明的克拉霉素冻干脂质体，其载药量最高可达20mg/mL，冻干复溶后的粒径在200nm以下,冻干后的pH值,包封率,含量均保持稳定；与溶液剂相比，本发明的克拉霉素冻干脂质体可以显著的降低克拉霉素引起的给药部位疼痛和血管刺激性，其各项指标都达到了国家食品药品管理局关于新药研究开发的要求。2、本发明提高了克拉霉素在脂质体中的载药量，同时在很大程度上降低了克拉霉素静脉给药的血管刺激性，为克拉霉素脂质体制剂的工业化生产和临床应用奠定了基础。3、本发明中经过深入的研究，发现脂肪酸，尤其是己酸可以与弱碱性的药物克拉霉素发生相互作用，加之固醇类的辅助作用，增加了克拉霉素在磷脂双分子层间的分布，为提高载药量起到了关键作用，大大的增加克拉霉素的在脂质体中的载药量，并且通过调整磷脂和固醇类物质的配比，可以使脂质体的包封率在95%以上，保证了对注射部位的静脉血管的保护作用。4、采用本发明的方法制备的克拉霉素冻干脂质体的含量、粒径、包封率、pH值等各项理化性质均符合静脉注射用要求，不仅长期储存物理化学稳定性良好，而且血管刺激性显著降低，提高患者顺应性，适于临床应用，同时可以满足工业化生产的要求5、本发明固醇类物质优选胆固醇硫酸钠盐(SCS)，SCS是由胆固醇经硫酸酯化后衍生而来的，其可作为一种新型膜稳定性材料参与脂质体的组成，在起到调节膜流动性功能的同时又具有乳化作用。6、本发明磷脂优选天然磷脂注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T，其磷脂酰胆碱含量 (PC)达98%以上，这种高纯特性使得克拉霉素冻干脂质体的稳定性得到显著提高。7、本发明的克拉霉素冻干脂质体长期稳定性考察的结果显示在25±2°C的条件下放置3个月，其外观、pH值、药物含量、包封率以及平均粒径都没有发生显著地变化，仍符合静脉用药的要求。下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案作进一步的详细描述。


图线。
I为本发明实施例I制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前的投射电镜照片。
2为本发明实施例I制备的克拉霉素冻干脂质体复溶前的投射电镜照片。
3为本发明实施例I制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前和复溶后的体外释放曲
4a为阴性对照组距离给药部位Icm处的病理切片图。
4b为阴性对照组距离给药部位2cm处的病理切片图。
4c为本发明待检组距离给药部位Icm处的病理切片图。
4d为本发明待检组距离给药部位2cm处的病理切片图。
具体实施例方式实施例I本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素I. 5g,固醇类物质I. 5g，磷脂5. 4g，脂肪酸O. 75g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖；所述冻干保护剂的用量为每 IOOmL脂质体溶液用12. 5g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T ;所述脂肪酸为己酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取I. 5g克拉霉素、I. 5g胆固醇硫酸钠盐、5. 4g注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和O. 75g己酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水乙醇中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己酸分散于无水乙醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的乙醇，然后用氮气吹干，得到薄膜；步骤三、配制pH值为7. O的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至65°C;步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜完全水化， 得到初乳；步骤五、将步骤四中所述初乳用步骤三中配制的pH值为7. O的磷酸盐缓冲溶液定
7容至IOOmL,然后转移至高压均质机中进行均质，得到脂质体溶液；所述均质过程中控制均质温度为20°C，均质压力为50MPa，均质循环次数为6次；步骤六、称取12. 5g蔗糖作为冻干保护剂，将称取的蔗糖溶解于步骤五中所述脂质体溶液中，然后用O. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。实施例2本实施例与实施例I相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、 合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。实施例3本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素2. Og，固醇类物质2. 0g，磷脂10g，脂肪酸I. 0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为甘露醇；所述冻干保护剂的用量为每 IOOmL脂质体溶液用20g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M ;所述脂肪酸为己二酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取2. Og克拉霉素、2. Og胆固醇、IOg注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和 LOg己二酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和胆固醇分散于无水甲醇中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己二酸分散于无水甲醇中全部溶解得到溶液B，将溶液 A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的甲醇，然后用氮气吹干，得到薄膜；步骤三、配制pH值为7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至80°C;步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜完全水化， 得到初乳；步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为7. 5的磷酸盐缓冲溶液定容至IOOmL,然后转移至高压均质机中进行均质，得到脂质体溶液；所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤六、称取20g甘露醇并将称取的甘露醇溶解于步骤五中所述脂质体溶液中， 用0. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。实施例4本实施例与实施例I相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、 卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂 PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述脂肪酸为己酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或麦芽糖，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水乙醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。实施例5本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素O. 05g,固醇类物质O. Olg，磷脂O. 2g，脂肪酸O. Olg，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖和葡萄糖(质量比I : I);所述冻干保护剂的用量为每IOOmL脂质体溶液用5g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为合成磷脂POPC ;所述脂肪酸为己酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取O. 05g克拉霉素、O. 2g合成磷脂P0PC、0. Olg胆固醇硫酸钠盐和
O.Olg己酸，将称取的合成磷脂POPC和胆固醇硫酸钠盐分散于氯仿和乙醚的混合溶剂(体积比I : I)中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己酸分散于氯仿和乙醚的混合溶剂(体积比I : I)中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的氯仿和乙醚，然后用氮气吹干，得到薄膜；步骤三、配制pH值为6. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至50°C;步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜完全水化， 得到初乳；步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为6. 5的磷酸盐缓冲溶液定容至IOOmL,然后转移至超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为 200W 600W，超声时间为2min 20min ；步骤六、称取蔗糖和葡萄糖各2. 5g，并将称取的蔗糖和葡萄糖溶解于步骤五中所述脂质体溶液中，用O. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。实施例6本实施例与实施例5相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或三种以上，或者为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的两种，或者为海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种与蔗糖的混合物；所述有机溶剂为无水乙醇、无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚， 或者为无水甲醇、无水乙醇、二氯甲烷和氯仿中的两种，或者为无水甲醇、无水乙醇和二氯甲烷中的一种与乙醚的混合物。实施例7本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素I. 5g,固醇类物质I. 5g，磷脂5. 4g，脂肪酸O. 75g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖；所述冻干保护剂的用量为每 IOOmL脂质体溶液用20g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T ;所述脂肪酸为己酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取I. 5g克拉霉素、I. 5g胆固醇硫酸钠盐、5. 4g注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、0. 75g己酸和20g蔗糖，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水乙醇中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己酸分散于无水乙醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、配制pH值为6. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取的蔗糖溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至70°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中乙醇完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为70°C ；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质，然后将经均质后的脂质体混悬液用O. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体；所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C,均质压力为30MPa 70MPa,均质循环次数为 2 10次。实施例8本实施例与实施例7相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、 合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。实施例9本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素2. Og,固醇类物质O. Olg，磷脂10g，脂肪酸I. 0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为海藻糖和麦芽糖(质量比2 3);所述冻干保护剂的用量为每IOOmL脂质体溶液用5g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80和合成磷脂SOPC (质量比 8:1:1);所述脂肪酸为苯甲酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取2. Og克拉霉素、O. Olg胆固醇硫酸钠盐、8. Og注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、I. Og卵磷脂E-80、I. Og合成磷脂S0PC、I. Og苯甲酸、2. Og海藻糖和3. Og麦芽糖，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80和合成磷脂SOPC分散于氯仿中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和苯甲酸分散于氯仿中全部溶解得到溶液B，将溶液 A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；
步骤二、配制pH值为7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取的冻干保护剂溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至50°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中氯仿完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为50°C ；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于超声仪中进行超声，然后将经均质后的脂质体混悬液用O. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体；所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。实施例10本实施例与实施例9相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的一种、两种或四种以上，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的三种，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、合成磷脂P0PC、 合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的两种与注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T的混合物，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、合成磷脂POPC和合成磷脂MOPC中的一种与注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和卵磷脂E-80的混合物；所述脂肪酸为己二酸或己酸，或者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或三种以上，或者为蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和甘露醇中的两种，或者为蔗糖、葡萄糖和甘露醇中的一种与海藻糖的混合物；所述有机溶剂为无水乙醇、无水甲醇、二氯甲烷或乙醚， 或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。实施例11本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素O. 05g，固醇类物质2. 0g，磷脂O. 2g，脂肪酸O. Olg,余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇(等质量比)；所述冻干保护剂的用量为每IOOmL脂质体溶液用IOg冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐(等质量比)；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T ;所述脂肪酸为己二酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取O. 05g克拉霉素、I. Og胆固醇、I. Og胆固醇硫酸钠盐、O. 2g注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、0. Olg己二酸、2. Og蔗糖、2. Og葡萄糖、2. Og海藻糖、2. Og麦芽糖和2. Og甘露醇，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、胆固醇和胆固醇硫酸钠盐分散于无水甲醇中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己二酸分散于无水甲醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、配制pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取的蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至80°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中甲醇完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为80°C ；
步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质，然后将经均质后的脂质体混悬液超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体；所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次。实施例12本实施例与实施例11相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至多四种；所述有机溶剂为无水乙醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。实施例13本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素I. 5g,固醇类物质I. 5g，磷脂5. 4g，脂肪酸O. 75g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖；所述冻干保护剂的用量为每 IOOmL脂质体溶液用5g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T ;所述脂肪酸为己酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取I. 5g克拉霉素、I. 5g胆固醇硫酸钠盐、5. 4g注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和O. 75g己酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水乙醇中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己酸分散于无水乙醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、配制pH值为7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至50°C;步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉乙醇，制得脂质体混悬液；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于超声仪中进行超声，得到IOOmL脂质体溶液；所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min ；步骤五、称取5g蔗糖并将称取的蔗糖溶解于步骤四中所述脂质体溶液中，用
O.22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。实施例14本实施例与实施例13相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、 合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。
实施例15本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素2. 0g，固醇类物质2. 0g，磷脂10g，脂肪酸O. Olg，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为麦芽糖；所述冻干保护剂的用量为每 IOOmL脂质体溶液用20g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T ;所述脂肪酸为苯甲酸。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取2. Og克拉霉素、2. Og胆固醇硫酸钠盐、IOg注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和O. Olg苯甲酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水甲醇和无水乙醇(体积比I : 2)中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和苯甲酸分散于无水甲醇和无水乙醇(体积比I : 2)中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液 B混合后搅拌均匀，得到油相；步骤二、配制pH值为6. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至80°C;步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉甲醇和乙醇，制得脂质体混悬液；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于超声仪中进行超声，得到脂质体溶液； 所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min ；步骤五、称取20g麦芽糖并将称取的麦芽糖溶解于步骤四中所述脂质体溶液中， 用O. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。实施例16本实施例与实施例15相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、 合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、 麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或三种以上，或者为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的两种，或者为氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种与无水乙醇的混合物。实施例17本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成； IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素O. 05g,固醇类物质O. Olg，磷脂0. 2g，脂肪酸1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为葡萄糖；所述冻干保护剂的用量为每IOOmL脂质体溶液用IOg冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T;所述脂肪酸为己酸、己二酸和苯甲酸(质量比I : 2 : 2)。本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤步骤一、分别称取0. 05g克拉霉素、0. Olg胆固醇硫酸钠盐、0. 2g注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、0. 2g己酸、0. 4g己二酸和0. 4g苯甲酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T分散于氯仿中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素、己酸、己二酸和苯甲酸分散于氯仿中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；
步骤二、配制pH值为7. O的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至65°C;步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉氯仿，制得脂质体混悬液；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质，得到脂质体溶液；所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C,均质压力为30MPa 70MPa,均质循环次数为2 10次；步骤五、称取IOg葡萄糖并将称取的葡萄糖溶解于步骤四中所述脂质体溶液中， 用O. 22 μ m滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。实施例18本实施例与实施例17相同，其中不同之处在于所述固醇类物质为胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、 合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC或合成磷脂M0PC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述脂肪酸为己酸、己二酸或苯甲酸；所述冻干保护剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。对本发明的克拉霉素冻干脂质体进行以下检测试验一、克拉霉素冻干脂质体的外观检测和体外释放检测对本发明的克拉霉素冻干脂质体进行肉眼观察，冻干脂质体形态为为海绵状团块，其外观不塌陷、不皱缩、颜色均匀、孔隙致密、表面光洁，体积保持冻干前的体积；将本发明的克拉霉素冻干脂质体复溶，复溶后的脂质体为半透明乳白色。图I为本发明实施例I制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前的透射电镜照片，图2 为本发明实施例I制备的克拉霉素冻干脂质体复溶前的投射电镜照片。由图可知，克拉霉素脂质体冻干前后均为多层结构，外形圆整。图3为本发明实施例I制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前和复溶后的体外释放曲线，两曲线十分相似，表明克拉霉素脂质体在冻干前后其状态并未发生较大改变。二、克拉霉素冻干脂质体的粒径分布考察用经0.22 μ m微孔滤膜超滤的注射用水将本发明实施例I、实施例7和实施例 13制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前样品和复溶后样品分别稀释至适宜浓度后立即放 Nicomp 380粒度测定仪中，测定粒径分布。与冻干前的脂质体溶液的粒径分布进行比较， 结果见表I。表I粒径分布测定结果
实施例冻干前的PSD(nm)复溶后的PSD(mn)I136. 9±57190. 9±767140±59196±77
1权利要求
1.一种克拉霉素冻干脂质体，其特征在于，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成,每IOOmL脂质体溶液中加入5g 20g冻干保护剂；IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素O. 05g 2. Og,固醇类物质O. Olg 2. 0g，磷脂O. 2g 10g，脂肪酸O. Olg 1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或几种；所述固醇类物质为胆固醇和/或胆固醇硫酸钠盐；所述脂肪酸为己酸、己二酸和苯甲酸中的一种或几种；所述磷脂为天然磷脂和/或合成磷脂。
2.根据权利要求I所述的一种克拉霉素冻干脂质体，其特征在于，IOOmL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素I. 5g，固醇类物质I. 5g，磷脂5. 4g，脂肪酸O. 75g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
3.根据权利要求I所述的一种克拉霉素冻干脂质体，其特征在于，所述天然磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和卵磷脂E-80中的一种或几种， 所述合成磷脂为合成磷脂P0PC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的一种或几种。
4.根据权利要求I，2或3所述的一种克拉霉素冻干脂质体，其特征在于，所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐，所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T，所述脂肪酸为己酸。
5.一种制备如权利要求I或2所述的克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂和脂肪酸，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的有机溶剂，然后用氮气吹干，得到薄膜；步骤三、配制pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至 50°C 80°C ；步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜完全水化，得到初乳；步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液定容，然后置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；步骤六、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤五中所述脂质体溶液中， 超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤五中所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤五中所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。
7.一种制备如权利要求I或2所述的克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂、脂肪酸和冻干保护剂，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；步骤二、配制pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取的冻干保护剂溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至50°C 80°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中有机溶剂完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为50°C 80°C ；步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，然后将经均质后或超声后的脂质体混悬液超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤四中所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤四中所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。
9.一种制备如权利要求I或2所述的克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂和脂肪酸，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；步骤二、配制pH值为6. 5 7. 5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶液预热至 50°C 80°C ；步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉有机溶剂，制得脂质体混悬液；步骤四、对步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；步骤五、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤四中所述脂质体溶液中， 超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤四中所述均质过程中控制均质温度为5°C 40°C，均质压力为30MPa 70MPa，均质循环次数为2 10次；步骤四中所述超声的温度为5°C 40°C，超声功率为200W 600W，超声时间为2min 20min。
全文摘要
本发明公开了一种克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成，每100mL脂质体溶液中加入5g～20g冻干保护剂；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成克拉霉素0.05g～2.0g，固醇类物质0.01g～2.0g，磷脂0.2g～10g，脂肪酸0.01g～1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或几种。本发明还公开了该脂质体的制备方法。本发明的克拉霉素冻干脂质体可显著降低克拉霉素引起的给药部位疼痛和血管刺激性，各项指标都达到国家食品药品管理局新药研究开发的要求，为克拉霉素脂质体制剂的工业化生产和临床应用奠定了基础。
文档编号A61K47/28GK102579352SQ20121008192
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月27日 优先权日2012年3月27日
发明者何海冰, 刘晓娜, 唐星, 张宇, 王亚轩 申请人:西安德天药业股份有限公司