专利名称：克拉霉素的脂质微球注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说本发明涉及一种克拉霉素的脂质微球注射液及其制备方法。
背景技术：
克拉霉素(clarithromycin，CAM)化学名为6-O-甲基红霉素，是大环内酯类第三代衍生物，如下面化学结构式所示。由于在C6位置增加了甲氧基团(-OCH3)，因此与红霉素相比克拉霉素对酸更稳定。
克拉霉素在临床上广泛应用于感染性疾病和非感染性疾病的治疗如幽门螺杆菌感染，呼吸道和皮肤软组织细菌感染、生物被膜病、抗结核、分支杆菌的感染、铜绿假单菌生物被膜感染、性传播疾病、抗肿瘤、治疗病态甲状腺综合症、动脉硬化、降低血清凝血因子、支气管哮喘。用克拉霉素治疗急慢性上、下呼吸道感染的总有效率为88.5-96.0％，对男性尿道炎和宫颈炎的有效率分别为91.7％和96.8％。对小儿中耳炎有效率为96％，前列腺炎为80.0％，皮肤软组织感染有效率为87.5％。临床上还可治疗军团病和麻风病等。据报道，克拉霉素干糖浆是唯一能控制主要革兰氏阳性、阴性和非典型致病菌的小儿口服抗生素。对支原体、衣原体感染的独特疗效，是其他抗生素望尘莫及的。
克拉霉素吸收好，半衰期长，组织和细胞内穿透力强、血药浓度均衡。口服生物利用度为约50％，血浆蛋白结合率约70％，尿中排泄量为35％。主要代谢产物为具有抗菌活性的14-OH克拉霉素。克拉霉素服用后很快分布在各组织和体液中，浓度高于血清。
1991年美国雅培公司推出克拉霉素，剂型有片剂、干糖浆、静脉注射剂、后期陆续有口服混悬剂和缓释片。而目前国内只有片剂、胶囊和颗粒剂。
应用克拉霉素现有剂型的问题是存在不良反应，主要有口腔异味(3％)、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等胃肠道刺激性反应(2％-3％)，头痛(2％)，偶见皮疹、皮痒等过敏反应对20例感染的患儿用药后，患儿中头晕、乏力、恶心、腹泻、粒细胞下降个一例，碱性磷酸酶升高2例，乳酸脱氢酶和肌酸激酶同时升高、单独升高个一例。静脉注射克拉霉素乳糖酸注射液对血管壁有严重的刺激性，易引起化学性静脉炎；且由于药物本身具有较强刺激性，亦可引起血管痉挛，血液减少。这些问题严重影响该药物的推广使用。
中国专利申请号200410012384.5披露了一种“克拉霉素注射乳剂及其制备方法”。但该专利中所阐述的克拉霉素及其乳剂的制备方法具有严重的缺陷。克拉霉素在水中和油中的溶解度均不好，水中为200ug/ml(ph＝6.8)，油中＜2mg/ml，通过试验30％的油相只能溶解大约100mg的药物，这种剂量远远达不到500mg/100ml的药用规格。如果把克拉霉素的油混悬液作为油相加入到水中，成乳后克拉霉素会从油中析出，沉降出来。如果将乳剂的pH值调节为4.0，在灭菌的过程中，克拉霉素也会析出，沉降出来，乳剂也会破乳。由上可知由该专利根本无法也不可能制备成克拉霉素的乳剂或是克拉霉素脂质微球注射液。
因此鉴于上述情况，为使克拉霉素更好地发挥临床疗效，研究和开发新剂型，以新剂型的高效、低毒的优势充分发挥克拉霉素抗菌活性并降低毒副作用，这无疑将对进一步促进和推广克拉霉素在临床中的应用具有重要意义。
发明内容
本发明的目的就是克服现有克拉霉素剂型存在的缺陷，提供一种供静脉注射的克拉霉素脂质微球注射液(水包油乳剂)，同时还提供了其制备方法。本发明提供的这种克拉霉素脂质微球注射液，其中克拉霉素能很好地溶解在其中的油相中，由此，该脂质微球注射液稳定性好，疗效显著，降低了克拉霉素对血管的刺激性及毒副作用。
本发明的一个目的就是提供一种克拉霉素的脂质微球注射液。
本发明的另一目的是提供一种制备所述克拉霉素的脂质微球注射液的方法。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的一种克拉霉素的脂质微球注射液，以该制剂的质量计，其包含注射用油2％～50％，克拉霉素0.1％～2％，表面活性剂 0.2％～10％，甘油0.2％～10％，
油相增溶剂0.1％～5％，金属螯合剂0％～2％，注射用水 40～90％本发明所用的油相增溶剂为C5-C18饱和脂肪酸，优选戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、油酸或其任意的混合物。最优选为己酸、油酸，及其任意比例的混合物。按所述的制剂的质量计，油相增溶剂的用量为0.1-5％，优选0.2-2％。
本发明使用的术语“注射用油”是指一大类生理可接受的油性物质，包括矿物油，植物油，动物油，精油或合成油，或其混合物。按所述的制剂的质量计，注射用油的用量为2％-50％，优选5％-30％，更优选10％-20％。矿物油可源自石油，包括脂肪或蜡基烃，芳香烃或混合的脂肪与芳香基烃，矿物油还包括石油衍生的油如精制石蜡油等。植物油主要来源于种子或坚果，包括干性油如亚麻子油和桐油；半干性油如红花油，大豆油和玉米油；不干性油如蓖麻油、棉籽油、棕榈油和椰子油。动物油通常来自作为牛羊脂，猪油和硬脂酸的脂肪。液状动物油包括鱼油，油酸，鲸蜡油等。液状脂肪油如单、双、三甘油酯，或其混合物。
根据本发明，优选，注射用油选自红花油，大豆油，玉米油，蓖麻油，C6-C12脂肪酸甘油三酯，及其混合物。最优选选自大豆油，C7-C9脂肪酸甘油三酯，及其混合物。
所用表面活性剂可为药用的任何表面活性剂，通常为磷脂，胆固醇，吐温(Tween)，普朗尼克F68(poloxamer)，油酸钠，油酸，胆酸，去氧胆酸及其混合物。所述磷脂选自卵磷脂，豆磷脂，及其混合物。所述吐温选自吐温20，吐温40，吐温60，吐温80，吐温85，及其混合物。优选，所用的表面活性剂选自卵磷脂，豆磷脂，胆固醇，油酸钠，油酸，吐温80，普朗尼克F68，及其混合物。按所述的制剂的质量计，表面活性剂的用量为0.2-10％，优选0.5％-5％。
所述的金属螯合剂为依地酸二钠(乙二胺四乙酸二钠盐)，依地酸钠钙(乙二胺四乙酸钠钙盐)，及其混合物。按所述的制剂的质量计，金属螯合剂的用量为0％-2％，优选0.1-1％。
按所述的制剂的质量计，克拉霉素的用量为0.1-2％，优选0.1-1％；甘油的用量为0.2％～10％，优选0.5％-5％。
本发明的克拉霉素的脂质微球注射液还可以含有适量的药用酸或碱，所述的酸优选为盐酸，所述的碱优选为氢氧化钠。
本发明还提供了所述克拉霉素脂质微球注射液的制备方法，其包括以下步骤
1)将处方量的克拉霉素溶解在油相增溶剂中，再与处方量的注射用油混合，形成油相，磁力搅拌并加热至30-100℃；2)将表面活性剂、金属螯合剂和甘油分散在部分注射用水中，磁力搅拌使之分散均匀，并加热至30-100℃，作为水相；3)在磁力搅拌下，将油相加入到水相中，加完后继续搅拌，得初乳；4)将制备的初乳在15000-30000rpm条件下匀浆，直到获得乳白色的乳状液；5)向此乳状液中加入其余的注射用水，在700-900bar高压下采用高压均质机进行均质，形成粒径在150-260nm的微粒，即得本发明的克拉霉素乳剂。
本发明的注射剂中包含的克拉霉素是难溶性药物，在水中和油相中的溶解度都不好，在水中pH7.0时溶解度为0.4mg/ml，在长链和中链油中的溶解度小于2mg/ml。为了增加克拉霉素在油相中的溶解度，本发明采用了油相增溶剂，该油相增溶剂带有与克拉霉素相反的电荷，会与克拉霉素相结合，抵消克拉霉素带有的电性，屏蔽了克拉霉素的极性基团，由此增加了克拉霉素在油相中的溶解度，达到临床用药规格。本发明还通过使克拉霉素药物粉末在高压的撞击下变为超微颗粒，增大其比表面积，从而增加了克拉霉素在油相中的溶解度。首先，在高速搅拌下可得到一种超微的油滴与药物细小颗粒同时分散在水中的粗分散体系。第二步，对该分散体系进行一个高压匀化过程，高速的气流撞击形成一种超音速搅拌，使药物颗粒迅速变小并以细小微晶形式渗透到油中或是油水界面膜中。
本发明的克拉霉素脂质微球注射剂，由于克拉霉素包裹于油相或油水界面膜中，这种“隔离”起到了增加稳定性的作用，避免了与体液的直至接触，因而降低了药物自身可能产生的局部及血管刺激性。另外，克拉霉素在体内是由油相中缓慢释放，可避免药物在注射用时由于初期浓度过高而引起的不良反应。本发明的克拉霉素脂质微球注射剂是粒径在200nm左右的小微粒，其能被机体的网状组织系统的吞噬细胞所吞噬而滞留在网状组织系统(如肝脏、肺等)中，具有靶向性，对提供药效、降低毒副作用尤为重要。
本发明提高了克拉霉素在乳剂中的载药量、保证了疗效、降低了其毒性和刺激性，同时本发明制得的克拉霉素脂质微球注射剂具有良好的稳定性，为临床用药提供了新途经。
图1是药物浓度与时间关系图。
具体实施例方式
下列实施例是为了进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1一种克拉霉素脂质微球注射液，其包含以下组份注射用蓖麻油10g克拉霉素0.5g卵磷脂 3g甘油2.5g己酸0.6g注射用水100ml其制备方法如下1)将0.5g克拉霉素溶解在0.6g己酸中，再与10g注射用蓖麻油混合，形成油相，磁力搅拌并加热至60℃；2)将3g卵磷脂和2.5g甘油分散在80ml注射用水中，磁力搅拌使之分散均匀，并加热至60℃，作为水相；3)在磁力搅拌下，将油相加入到水相中，加完后继续搅拌10分钟，得初乳；4)将制备的初乳在30000rpm条件下匀浆10分钟，重复进行3次，获得乳白色的乳状液；5)向此乳状液中加入其余的20ml注射用水，在900bar高压下采用高压均质机进行均质，形成粒径在200nm左右的微粒，即得本发明的克拉霉素乳剂，灌装，充氮气，封口制得成品。
实施例2一种克拉霉素脂质微球注射液，其包含以下组份注射用玉米油33g克拉霉素0.7g豆磷脂 0.3g甘油8.8g油酸3g注射用水64ml其制备方法如下
1)将0.7g克拉霉素溶解在3g油酸中，再与33g注射用玉米油混合，形成油相，磁力搅拌并加热至50℃；2)将0.3g豆磷脂和8.8g甘油分散在50ml注射用水中，磁力搅拌使之分散均匀，并加热至50℃，作为水相；3)在磁力搅拌下，将油相加入到水相中，加完后继续搅拌15分钟，得初乳；4)将制备的初乳在20000rpm条件下匀浆15分钟，重复进行3次，获得乳白色的乳状液；5)向此乳状液中加入其余的14ml注射用水，在900bar高压下采用高压均质机进行均质，形成粒径在200nm左右的微粒，即得本发明的克拉霉素乳剂，灌装，充氮气，封口制得成品。
实施例3一种克拉霉素脂质微球注射液，其包含以下组份C7-C9脂肪酸甘油三酯 10g克拉霉素 1g吐温803g甘油 5g壬酸 2g注射用水 79ml其制备方法如下1)将1g克拉霉素溶解在2g壬酸中，再与10g C7-C9脂肪酸甘油三酯混合，形成油相，磁力搅拌并加热至80℃；2)将3g吐温80和5g甘油分散在60ml注射用水中，磁力搅拌使之分散均匀，并加热至80℃，作为水相；3)在磁力搅拌下，将油相加入到水相中，加完后继续搅拌12分钟，得初乳；4)将制备的初乳在20000rpm条件下匀浆15分钟，重复进行3次，获得乳白色的乳状液；5)向此乳状液中加入其余的19ml注射用水，在800bar高压下采用高压均质机进行均质，形成粒径在200nm左右的微粒，即得本发明的克拉霉素乳剂，灌装，充氮气，封口制得成品。
实施例4一种克拉霉素脂质微球注射液，其包含以下组份C7-C9脂肪酸甘油三酯6g克拉霉素 1g胆固醇 2g甘油 1g癸酸 1gEDTA 1g注射用水 88ml其制备方法如下1)将1g克拉霉素溶解在1g癸酸中，再与6g C7-C9脂肪酸甘油三酯混合，形成油相，磁力搅拌并加热至70℃；2)将2g胆固醇、1gEDTA和1g甘油分散在70ml注射用水中，磁力搅拌使之分散均匀，并加热至70℃，作为水相；3)在磁力搅拌下，将油相加入到水相中，加完后继续搅拌15分钟，得初乳；4)将制备的初乳在15000rpm条件下匀浆15分钟，重复进行3次，获得乳白色的乳状液；5)向此乳状液中加入其余的18ml注射用水，在800bar高压下采用高压均质机进行均质，形成粒径在200nm左右的微粒，即得本发明的克拉霉素乳剂，灌装，充氮气，封口制得成品。
药效学实施例以下通过药效学实验说明本发明的克拉霉素脂质微球注射液的效果一.克拉霉素脂质微球注射液刺激性试验(1)血管刺激性实验选用新西兰白兔6只，3只白兔于右耳耳缘静脉注射克拉霉素注射液Qs，左耳注射相同剂量无菌的5％葡萄糖注射液作为对照；另3只白兔于右耳耳缘静脉注射本发明克拉霉素脂质微球注射液Qz(实施例1)，左耳注射相同剂量无菌的5％葡萄糖注射液作为对照。每日一次，连续三天，末次给药24小时后，处死白兔，肉眼观察注射部位的反应情况，并解剖兔耳血管及周围组织做石蜡切片，染色，光镜检查。
结果显示克拉霉素注射液和本发明克拉霉素脂质微球两种剂型血管刺激性实验肉眼观察结果表明Qz的血管刺激性弱于Qs；镜检报告表明Qs组对新西兰白兔耳血管有一定程度的血管刺激性，Qz组对新西兰白兔耳血管未见明显刺激性。
(2)肌肉刺激性实验选用新西兰白兔4只，每种剂型2只，分别在右侧股四头肌注射Qs和Qz注射液1ml，左侧股四头肌注射等量的无菌5％葡萄糖注射液作为对照，注射48小时后，处死白兔，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉组织的反应情况，确定反应级数。
0级无变化。
1级轻度充血，其范围在0.5cm×1.0cm以下。
2级中度充血，其范围在0.5cm×1.0cm以上。
3级重度充血，伴有肌肉变性。
4级出现坏死，有褐色变性。
5级出现广泛性坏死。
然后算出4块股四头肌反应级数总和，如果股四头肌反应级数的最高值和最低值之差大于2，则应另取2只健康白兔重新实验。得到结果后，若4块股四头肌反应级数总和小于10，则认为供试品的局部刺激性实验符合规定。
结果表明Qz的肌肉刺激性弱于Qs。
二.溶血性实验自新西兰白兔的颈总动脉取血20ml，置于烧瓶内，用玻璃棒轻轻搅动，数分钟后，除去纤维蛋白，取出血液，加等量5％葡萄糖注射液，离心，除去上清液；沉淀的红细胞再加5％葡萄糖注射液清洗，离心。如此反复直至上清液透明，按红细胞的容量用5％葡萄糖注射液配成2％的混悬液。
取干净试管7支，分别编号，依次加入下表内各液，第6管不加供试液作为空白对照管，第7管用蒸馏水代替5％葡萄糖注射液，摇匀，置于37℃水浴中，分别于0.5小时、1小时、2小时、3小时观察是否有溶血现象发生。
结果表明Qs、Qz都未见溶血现象发生，两种剂型的溶血性实验都合格。
三.过敏性实验取健康豚鼠8只，Qs、Qz两种剂型各4只，每只豚鼠腹腔注射相应供试液0.5ml，隔日一次，共三次。在首次注射后的第14、21天于每只豚鼠的后脚掌外侧静脉注入相应供试药液1ml(剂量折算同前)，进行攻击。每次静脉给药观察2小时，如出现抓鼻、竖毛、咳嗽、呼吸困难中的两种或两种以上者判为阳性；如有痉挛、大小便失禁、虚脱、休克、死亡现象之一者判为阳性。一切正常为阴性。
结果表明Qs、Qz两种剂型都符合过敏性实验标准。
四.小鼠血浆药代动力学研究给药方案小鼠随机分成二组，试验前禁食12小时，自由饮水，分别尾静脉注射本发明克拉霉素脂质微球注射液(实施例1)和自制对照品溶液，给药剂量为15mg/Kg，分别于30min，，1h，2h，4h，6h，8h，12h，16h取点，每个时间点取6只小鼠。置预先肝素化的尖底离心试管中，离心，精密吸取上层血浆1000μL，按一定方法处理后，取20μL进样，以当日的标准曲线计算各时间点样品中克拉霉素的浓度。实验结果参见说明书附图1。
药物动力学参数用3P97药物动力学程序处理本发明克拉霉素脂质微球注射液(实施例1)和克拉霉素注射液的平均血药浓度数据。结果表明，克拉霉素脂质微球注射液和克拉霉素注射液的血药浓度数据均符合一级消除过程。
由血药浓度-时间实测数据描述体内过程，计算药物动力学参数。结果显示，主要药动学参数AUC0-∞，AUMC0-∞，AUC0-t，AUMC0-t，S2，MRT，VRT无显著性差异。
由大鼠体内血浆药动学试验结果显示，本发明克拉霉素脂质微球注射液在小鼠体内并无明显缓释作用。克拉霉素脂质微球注射液与自制的克拉霉素溶液剂药物动力学特征相似。
权利要求
1.一种克拉霉素的脂质微球注射液，以该制剂的质量计，其包含注射用油2％～50％，克拉霉素0.1％～2％，表面活性剂 0.2％～10％，甘油0.2％～10％，油相增溶剂 0.1％～5％，金属螯合剂 0％～2％，注射用水40～90％。
2.根据权利要求1的克拉霉素的脂质微球注射液，其中油相增溶剂为C5-C18饱和脂肪酸，其用量为0.2-2％。
3.根据权利要求2的克拉霉素的脂质微球注射液，其油相增溶剂为戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、油酸或其任意的混合物，优选为己酸、油酸，及其任意比例的混合物。
4.根据权利要求3的克拉霉素的脂质微球注射液，其中注射用油包括矿物油，植物油，动物油，精油或合成油，或其混合物，注射用油的用量为5％-30％；表面活性剂为磷脂，胆固醇，吐温(Tween)，普朗尼克F68(poloxamer)，油酸钠，油酸，胆酸，去氧胆酸及其混合物，表面活性剂的用量为0.5％-5％。
5.根据权利要求4的克拉霉素的脂质微球注射液，其中注射用油选自红花油，大豆油，玉米油，蓖麻油，C6-C12脂肪酸甘油三酯，及其混合物；注射用油的用量为10％-20％；表面活性剂选自卵磷脂，豆磷脂，胆固醇，油酸钠，油酸，吐温80，普朗尼克F68，及其混合物；金属螯合剂为依地酸二钠(乙二胺四乙酸二钠盐)，依地酸钠钙(乙二胺四乙酸钠钙盐)，及其混合物；金属螯合剂的用量为0.1-1％。
6.根据权利要求5的克拉霉素的脂质微球注射液，其中注射用油选自大豆油，C7-C9脂肪酸甘油三酯，及其混合物；克拉霉素的用量为0.1-1％；甘油的用量为0.5％-5％。
7.根据权利要求6的克拉霉素的脂质微球注射液，其还可包含药用酸或碱。
8.根据权利要求7的克拉霉素的脂质微球注射液，其中所述的药用酸为盐酸，所述的碱为氢氧化钠。
9.根据权利要求1-8任一项的克拉霉素的脂质微球注射液的制备方法，其包括以下步骤1)将处方量的克拉霉素溶解在油相增溶剂中，再与处方量的注射用油混合，形成油相，磁力搅拌并加热至30-100℃；2)将表面活性剂、金属螯合剂和甘油分散在部分注射用水中，磁力搅拌使之分散均匀，并加热至30-100℃，作为水相；3)在磁力搅拌下，将油相加入到水相中，加完后继续搅拌，得初乳；4)将制备的初乳在15000-30000rpm条件下匀浆，直到获得乳白色的乳状液；5)向此乳状液中加入其余的注射用水，在700-900bar高压下采用高压均质机进行均质，形成粒径在150-260nm的微粒，即得本发明的克拉霉素乳剂。
全文摘要
本发明涉及一种克拉霉素的脂质微球注射液及其制备方法，该注射液包含注射用油、克拉霉素、表面活性剂、甘油、油相增溶剂、金属螯合剂、注射用水。本发明采用了油相增溶剂，由此增加了克拉霉素在油相中的溶解度，克拉霉素被包裹于油相或油水界面膜中，增加稳定性，保证了疗效、降低了其毒性和刺激性。
文档编号A61P31/00GK1947720SQ20051010931
公开日2007年4月18日 申请日期2005年10月14日 优先权日2005年10月14日
发明者刘玉辉, 谢瑞钢 申请人:刘玉辉