专利名称：含有依托泊苷的脂质微球注射液及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体地说涉及一种含有依托泊苷的脂质微球注射液(水包油乳剂)的制备工艺及配方。
背景技术：
癌症是人类最难以治愈而又常见的病症之一，攻克癌症这个顽固的堡垒，造福人类，是当前世界上的一个极其迫切的重大课题。目前，癌症患者逐年增加，而且癌症的死亡率在不断上升，我国近年来统计，每年大约有80万人死于癌症，全国平均每分钟有1.5人死于癌症。大量事实证明癌症治疗的进展甚微，癌症越来越严重的威胁人类的生命。所以寻找抗癌的新药，改变剂型提高其抗癌的疗效，降低其毒副作用，已成当务之急。
依托泊苷(etoposide，4-去甲基表鬼臼毒素-β-D-乙吡喃葡萄糖苷，简称Vp16-213)为鬼臼毒素的糖代谢产物，属于细胞周期特异性抗肿瘤药物，具有广谱抗癌活性和相当高的治疗指数，尤其对早期扩散、预后恶劣的小细胞癌症效果良好，是治疗小细胞癌和睾丸癌的最强活性单体。依托泊苷通过抑制哺乳类动物DNA拓扑异构酶II的活性发挥抗肿瘤效应，是拓扑异构酶的嵌入型抑制剂，它作用于DNA拓扑酶，使单链或双链DNA断裂，双链DNA断裂数是单链断裂数的2～3倍，这表明细胞毒性机制是该药的作用机制，这使该药的毒副作用也很大，其主要毒性为骨髓抑制嗜中性白细胞的减少，且该药在水中溶解度极小，有待于改进剂型。
依托泊苷临床上常用的剂型为注射液和口服软胶囊，剂量为每支50-100mg和每粒50-100mg。血管给药的剂量是每3-5天300-600mg/m2(相当于体重为70kg的成人450-900mg)。目前，临床上使用的注射剂型属于非水溶液系统，静脉给药时，一般先用生理盐水稀释，而在5％葡萄糖液中不稳定，可形成微细沉淀，注射血管处引起较强的局部刺激。口服制剂的应用限于非急症患者，其绝对生物利用度低，只有50％，血中浓度仅为静脉注射的52±8％，不同患者之间口服生物利用度差异很大(25％-74％)，其主要原因是依托泊苷的水溶性差及在酸性和碱性介质中分解为无活性产物。在pH2-6的水溶液中，依托泊苷37℃的水中溶解度仅为148.5-167.25μg/ml。而且依托泊苷的水溶液化学稳定性差，在pH1.3和10的溶液中，依托泊苷迅速降解，降解半衰期分别为2.88和3.83小时；pH7.30的水溶液中，降解半衰期为27.72天；在pH5-6.15的范围相对最为稳定，降解半衰期分别为63天和49.5天。依托泊苷临床应用的不良反应主要是骨髓抑制较明显，最快2～3周才能恢复，可产生消化道反应和脱发症状，快速滴注时可能出现位置性低血压。
鉴于上述特性，为使依托泊苷更好地发挥临床疗效，提高依托泊苷的稳定性，研究和开发新剂型，以新剂型的高效、低毒的优势充分发挥依托泊苷抗肿瘤活性并降低毒副作用，这无疑将对进一步促进和推广依托泊苷在临床中的应用具有重要意义。
脂肪乳剂作为肠外能量的重要补给方式应用于临床已近半个世纪。1920～1930年间，日本学者曾用蓖麻油为原料、卵磷脂为乳化剂，首先人工合成脂肪乳剂试用于动物；美国50年代推出了以棉花籽油为基础的Lipomul应用于病人但均因严重毒性而未能推广。1964年，美国停止生产和应用脂肪乳剂。但在欧洲，以Wretling为代表的一批学者不懈地研究和应用以大豆油为基础、以卵黄磷脂为乳化剂、以甘油为等张剂的脂肪乳剂Introlipid。1962年，Introlipid在瑞典被正式批准用于临床。1967年，由Hallberg等发表的文章“脂肪乳剂应用于完全静脉营养”全面总结了Introlipid的实验和临床研究，证明它应用于临床是安全、可靠的，并提出了Introlipid临床应用的准则。此文与1968年Dudrick等发表的“长期完全肠外营养下获生长、发育和正氮平衡”一文，被公认为是对肠外营养发展为常规临床应用有重大影响的两篇经典著作。此后20多年，Introlipid在世界各地得到了广泛应用，德、法、日、美等发达国家相继发展了本国的脂肪乳剂。1976年，美国有关当局又批准了脂肪乳剂可在临床常规应用。目前，全世界至少已有20余种脂肪乳剂面市。我国亦于80年代末与瑞典Kabi公司合资，大量生产Introlipid供临床应用。1973年，Solassol等首先介绍了三合一(All-in-one，AIO)溶液的概念，证明脂肪乳剂和所有其它营养液可混合于一个瓶内或袋内，在一定条件和时间内可保持稳定和营养支持效果。此后推广了AIO输液塑料袋，这一简单但又有重大意义的改进大大简化了肠外营养液的配制和输注，为脂肪乳剂的临床广泛应用拓宽了道路。到目前为止，通常的脂肪乳剂是指以脂肪酸甘油酯作为分散相，以蛋黄卵磷脂为乳化剂的水包油型(oil in water，o/w)亚微乳剂。由于脂肪乳剂乳滴的组成及粒径与口服脂肪类食物后在血液内存在的乳糜微粒十分类似，因此通常认为脂肪乳剂的乳滴在人体内的行为同乳糜微粒亦相似。随着对脂肪乳剂的深入研究，其在制药领域也正发挥着越来越重要的作用。
脂肪乳剂的特殊的理化特性和低毒性决定了其可以作为脂溶性药物，特别是抗癌药物、麻醉药物及抗炎药物的良好载体。常采用的方法是将药物包裹于脂肪乳剂的脂质核心部分，由于该结构亦类似于微球，因此脂质微球(Lipid Microsphere，LM)的名称也应运而生。一般认为脂质微球是通过将药物溶于脂肪油中，并经磷脂乳化分散于水相后制成，是一种以脂肪油为软基质而被磷脂膜包封的微粒分散体系，平均粒径在200nm左右。
LM具有许多物理化学及生物学上的优点1.是脂溶性药物的良好载体。临床不少药物水溶性差，必须依靠有机溶剂才能发挥作用，而有机溶剂不仅本身有一定毒性，还可能干扰药物效果。
2.可有效增加药物的稳定性。含药脂质微球中，有相当一部分药物分布在油相或油水界面膜中，避免了直接与水接触。对于易水解或对pH变化敏感的药物，这种“隔离”起到了增加稳定性的作用。
3.LM中药物部分包裹于油相或界面膜中，避免了与体液的直接接触，因而降低了药物自身可能产生的局部及血管刺激性。另外，药物在体内是由油相中缓慢释放，可避免药物在注射用时由于初期浓度过高而引起的不良反应。
4.粒径在200nm左右的小微粒能被机体的网状组织系统的吞噬细胞所吞噬而滞留在网状组织系统(如肝脏、肺等)中，具有靶向性，这种特点对于抗肿瘤药物提高药效、降低毒副作用尤为重要。
Takahashi等人的有关文献报道用博莱霉素试制成LM，并用水剂作对照，以荷瘤大鼠作试验。进行静脉或肿瘤内给药，然后分别测定肿瘤大小和肿瘤中药物浓度，结果显示LM组的肿瘤缩小50％以上，给药后10小时仍可检出药物；而水剂组的肿瘤无明显缩小，30分钟到1小时后已检测不出药物。以上说明药物的剂型不同，效果也不同，表明了LM具有选择性分布并缓慢释放的特点，对肝脏、淋巴组织系统的疾病和癌症化疗都是一个较适宜的载体剂型。研究证明这种特点对于抗肿瘤药物提高药效、降低毒副作用尤为重要。
近几年来，以LM作为药物载体的靶向转移作用逐渐受到人们的重视。药物脂肪乳剂一经开发，便在临床上广泛应用，收到了良好的效益。日本的水岛裕研制的Lipo PGE1和Lipo PGI2等一系列载药脂肪乳剂产品的开发上市预示了此类制剂广阔的前景。尤其是已臻成熟的乳剂生产工艺和合成的或天然的表面活性剂的应用以及乳剂生产技术的提高，促进了具有商业价值、稳定外形的乳剂产品的发展(稳定期大约为2年)，为含药脂肪乳的开发生产创造了更好的条件。如依托米酯、异丙酚、棕榈酸地塞米松脂肪乳剂、氟比洛芬乙氧基α-乙酯脂质乳剂、前列腺素E1脂质乳等。
发明内容
本发明提供一种含有依托泊苷的脂质微球注射液(水包油型乳剂的组合物)。并提供制备方法。旨在提高依托泊苷的稳定性、临床使用的方便性、改善患者的顺应性、降低其对血管的刺激性，更好发挥临床疗效。
该组合物包含依托泊苷，脂溶性介质，水和表面活性剂。
此处使用术语“油”指示一大类生理可接受性物质，为矿物油，植物油，动物油，精油或合成油，或其混合物。因此，此处使用术语“油”用以指一个宽范围的具有十分不同化学性质的物质。在以类型或功能分类油时，如矿物油源自石油并包含脂肪或蜡基烃，芳香烃或混合的脂肪与芳香基烃。在矿物油类别中也包含石油衍生的油如精制石蜡油等。在植物油类别中，油主要来源于种子或坚果，并包含干性油如亚麻子和桐油；半干性油如红花油和大豆油；不干性油如蓖麻油、棉籽油和椰子油和可用作的皂料如棕榈油和椰子油。在动物油类别中，油通常来自作为牛羊脂，猪油和硬脂酸的脂肪。液状动物油包含鱼油，油酸，鲸蜡油等。它们通常含大量脂肪酸。包含一些植物油，如橄榄油，棉籽油，谷物油和花生油，也包含一些特殊的鱼油，它们由于富含维生素而被广泛的用作药物，如鳕鱼肝，鲨鱼肝油等。液状脂肪油如单、双、三甘油酯，或其混合物为优选的油。根据本发明，中等链长的三甘油酯也为有用的油。优选为长链脂肪酸甘油酯、中链脂肪酸甘油酯，及其混合物。
所用表面活性剂可为任何表面活性剂，通常为磷脂，吐温(Tween)，普朗尼克(poloxamer)，油酸钠，油酸，胆酸，去氧胆酸及其混合物。所述磷脂选自卵磷脂，豆磷脂，及其混合物。所述吐温选自吐温20，吐温40，吐温60，吐温80，吐温85，及其混合物。优选为卵磷脂，豆磷脂，油酸钠，油酸，吐温80，普朗尼克F68，及其混合物。所选用的渗透压调节剂为甘油、乙二醇、异丙醇及氯化钠等药学上允许的盐。
典型地，以制剂质量计本发明的配方组成为油相 5％～30％依托泊苷 0.001％～0.5％表面活性剂 0.5％～5％渗透压调节剂 0.5％～5％其余为注射用水如果需要，组合物中也可以添加多种添加剂。如可能含有金属螯合剂。一般金属螯合剂为依地酸二钠(乙二胺四乙酸二钠盐)，依地酸钠钙(乙二胺四乙酸钙二钠盐)，及其混合物。金属螯合剂以制剂质量计用量为0％至1％。也可以含有抗氧剂，一般抗氧剂为维生素E，维生素C，亚硫酸钠，焦亚硫酸钠，半胱氨酸，一种或两种以上混合注射液常用的抗氧剂。抗氧剂以制剂质量计用量为0.001％至0.2％。pH调节剂为氯化钠，氢氧化钠，常用缓冲盐等，一种或两种以上混合pH调节剂。pH调节剂以制剂质量计用量为0.005％至2％。
本发明也涉及含有依托泊苷的脂质微球注射液(水包油乳剂)的制备方法。具体包含以下操作步骤的一种或几种1.将依托泊苷溶液或粉末加入至不含依托泊苷的空白乳剂经混合制得依托泊苷脂质微球注射液和水包油乳剂。
2.或者将依托泊苷溶液或粉末加入至含有部分依托泊苷的乳剂中经混合制得依托泊苷脂质微球注射液和水包油乳剂。
3.或者将依托泊苷加入至含有表面活性剂的水溶性介质中，然后与油相混合，经过高速搅拌制备初乳。
4.或者将依托泊苷溶液或粉末加入至含有表面活性剂的油溶性介质中，然后与水相混合，经过高速搅拌制备初乳。
5.鉴于依托泊苷的水溶液化学稳定性差，制备过程应控制水相pH值始终保持在4-8之间。
6.制剂的制备方法主要包括高速搅拌过程及高压均质过程或超声分散和乳化过程。
7.制剂的灭菌采用蒸汽旋转灭菌法。
依托泊苷为超微颗粒混悬液或者是超微的粉末。
本发明所述制剂应用界面膜载药的原理，把依托泊苷包裹于油相和界面膜中，降低其血管刺激性及毒性，增强其疗效。由于依托泊苷是油水均难溶解的药物，且在水中几乎不溶，经过高压均质，高速的气流撞击形成一种超音速搅拌，使药物迅速溶解并以分子形式渗透到油水界面膜中。其中，依托泊苷在油水两相的界面膜中有一定的分布(约20～80％)。本制剂为一种抗肿瘤药物的制剂，经注射给药后在体内的特征主要表现为较高的化学物理稳定性、低毒性、低刺激性和高效性。
本发明制备的依托泊苷脂质微球注射液(水包油乳剂)，降低了依托泊苷的血管刺激性，提高了药物化学稳定性和疗效并降低毒副作用，因而具有一定的创新性和较强的实用性。
图1为LM结构示意2为实施例6中大鼠血浆中药物浓度-时间曲线图3为实施例7中大鼠肝中药物浓度-时间曲线图4为实施例7中大鼠脾中药物浓度-时间曲线图5为实施例7中大鼠肾中药物浓度-时间曲线图6为实施例7中大鼠肺中药物浓度-时间曲线图7为实施例7中大鼠心中药物浓度-时间曲线图8为实施例7中大鼠脑中药物浓度-时间曲线■依托泊苷脂质微球；○依托泊苷普通注射液■依托泊苷脂质微球；◆依托泊苷普通注射液
具体实施例方式实施例1依托泊苷制剂的处方制备工艺处方1注射用红花油 20g依托泊苷 0.2g卵磷脂 1.8g甘油 2.5g注射用水加至100ml制备方法1(1)将处方量的甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂加至处方量红花油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(3)将依托泊苷药物粉末加入此初乳中，搅拌10分钟，加入预热至40-100℃的注射用水至全量；(4)转移至高压均质机中，高压均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(5)灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中灭菌。
处方2注射用大豆油 20g依托泊苷 0.2g豆磷脂 1.2g甘油 2.5g
Tween-80 0.02g油酸钠 0.05g注射用水加至100ml制备方法2(1)将处方量的Tween-80、油酸钠、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将豆磷脂加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(3)将依托泊苷药物粉末加入此初乳中，搅拌10分钟，加入预热至40-100℃的注射用水至全量；(4)转移至高压均质机中，高压均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(5)灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中灭菌。处方3油相(大豆油/MCT) 20g依托泊苷 0.1g卵磷脂 1.8g甘油 2.5g油酸 0.03gTween-80 0.02gEDTA 0.05g注射用水加至100ml制备方法3(1)将处方量的Tween-80、EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中，灭菌。处方4油相(大豆油/MCT) 30g依托泊苷 0.1g卵磷脂 1.8g甘油 2.5g油酸 0.06gEDTA 0.05g注射用水加至100mL制备方法4(1)将处方量的EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中，灭菌。处方5油相(大豆油/MCT) 20g依托泊苷 0.1g卵磷脂 1.5g甘油 2.5g油酸 0.06gEDTA 0.05g司盘20 0.02g注射用水加至100mL制备方法5(1)将处方量的EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、司盘20、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于高压旋转灭菌器中，灭菌。
除以上所列处方中组合物外，按以上方法另外制备4个制剂，它们的组成如下
实施例2 依托泊苷脂质微球稳定性的考察根据文献报道实验方法将依托泊苷脂质微球样品分别以重蒸水、缓冲盐(Na2HPO4，0.017M；KH2PO4，0.0014M；NaCl，0.1370M，pH7.4)和甘油(2.21％w/w)稀释，测定稀释后1h，2h，4h，24h，和48h后的粒径、ζ-电位及药物包裹率。依托泊苷脂质微球分别于4-8℃和25℃贮藏6个月，不同时间点测定样品的粒径及包裹率，试验结果显示，依托泊苷脂质微球的粒径未受重蒸水、缓冲盐(pH7.4)和甘油(2.21％w/w)稀释的影响。48h后，重蒸水和甘油中的粒径几乎没有改变，而在缓冲盐(pH7.4)中粒径增加了50nm。4-8℃和25℃留样六个月实验结果表明，依托泊苷脂质微球的粒径和药物包封率没有显著改变。
实施例3 依托泊苷脂质微球注射液刺激性试验(1)血管刺激性实验将依托泊苷注射液的两种不同剂型按临床用药量(100mg/次)进行体表面积换算得出实验兔用剂量(5.2mg/kg)。试验前按2ml/kg的给药量用无菌的生理盐水注射液新鲜配制。选用体重2.5-3.0kg的健康新西兰白兔6只，雌雄兼有。注射部位用碘酊和乙醇消毒后，3只白兔于右耳耳缘静脉注射依托泊苷水针注射液(Cs)，左耳注射相同剂量无菌的生理盐水注射液作为对照；另3只白兔于右耳耳缘静脉注射依托泊苷脂质微球注射液(Cz)，左耳注射相同剂量无菌的生理盐水注射液作为对照，注射速度为2.8ml/min(相当于人临床注射速度)。每日一次，连续三天，末次给药24小时后，由耳缘静脉注入空气处死白兔，肉眼观察注射部位的反应情况，并解剖兔耳血管及周围组织做石蜡切片(注射部位下向心端1cm及5cm处)，HE染色，光镜检查。肉眼观察注射部位反应情况的结果如表-1所示，病理切片由辽宁省疾病预防控制中心检查，并呈递检查报告。
结果如表-1所示，依托泊苷注射液两种剂型血管刺激性试验肉眼观察结果表明Cz的血管刺激性弱于Cs；镜检报告表明Cs组对新西兰白兔耳血管有一定程度的血管刺激性，Cz组对新西兰白兔耳血管未见明显刺激性。镜检结果见报告。
表-1 血管刺激性试验肉眼观察
(2)肌肉刺激性实验依托泊苷注射液的剂量换算、药物配制、新西兰白兔的选择同上(共4只，每种剂型2只)。剪去白兔两侧股四头肌部位的兔毛，用碘酊和乙醇消毒后，分别在右侧股四头肌注射Cs和Cz注射液1ml，左侧股四头肌注射等量的无菌生理盐水注射液作为对照，注射48小时后，由耳缘静脉入空气处死白兔，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉组织的反应情况，确定反应级数。
0级无变化。
1级轻度充血，其范围在0.5cm×1.0cm以下。
2级中度充血，其范围在0.5cm×1.0cm以上。
3级重度充血，伴有肌肉变性。
4级出现坏死，有褐色变性。
5级出现广泛性坏死。
然后算出4块股四头肌反应级数总和，如果股四头肌反应级数的最高值和最低值之差大于2，则应另取2只健康白兔重新试验。得到结果后，若4块股四头肌反应级数总和小于10，则认为供试品的局部刺激性试验符合规定。
结果依托泊苷两种剂型注射液的肌肉刺激性试验结果如表-2所示。结果表明Cz的肌肉刺激性弱于Cs。
表-2 肌肉刺激性试验结果
实施例4 溶血性实验自新西兰白兔的颈总动脉取血20ml，置于烧瓶内，用玻璃棒轻轻搅动，数分钟后，除去纤维蛋白，取出血液，加等量生理盐水注射液，离心(1500r/min，10min)，除去上清液；沉淀的红细胞再加生理盐水注射液清洗，离心。如此反复直至上清液透明，按红细胞的容量用生理盐水配成2％的混悬液。
取干净试管7支，分别编号，依次加入下表内各液，第6管不加供试液作为空白对照管，第7管用蒸馏水代替生理盐水，摇匀，置于37℃水浴中，分别于0.5小时、1小时、2小时、3小时观察是否有溶血现象发生。
结果表明Qs、Qz都未见溶血现象发生，两种剂型的溶血性实验都合格。
实施例5 过敏性实验取健康豚鼠8只，体重250-280g，雌雄各半，Qs、Qz两种剂型各4只(雌雄各半)，按依托泊苷注射液的临床应用剂量(100mg/次)折算豚鼠用量(2.0mg/200g)并用生理盐水注射液配制，每只豚鼠ip(腹腔注射)相应供试液0.5ml，隔日一次，共三次。在首次注射后的第14、21天于每只豚鼠的后脚掌外侧静脉注入相应供试药液1ml(剂量折算同前)，进行攻击。每次静脉给药观察2小时，如出现抓鼻、竖毛、咳嗽、呼吸困难中的两种或两种以上者判为阳性；如有痉挛、大小便失禁、虚脱、休克、死亡现象之一者判为阳性。未出现上述症状的为阴性。
结果表明Qs、Qz两种剂型都符合过敏性实验标准。
实施例6 大鼠血浆药代动力学研究给药方案12只大鼠随机分成二组，每组6只，实验前禁食一夜。甲组为对照组，于右后股静脉注射依托泊苷普通注射液(1mg·mL-1)，乙组为受试组，于右后股静脉注射依托泊苷脂质微球，分别于5min，10min，15min，30min，45min，1h，2h，4h，6h眼眶取0.5mL血，置预先肝素化的尖底离心试管中，离心，精密吸取上层血浆200μL，加入20μL注射用水，按一定方法处理后，取20μL进样，以当日的标准曲线计算各时间点样品中依托泊苷的浓度。
实验结果隔室模型药物动力学参数用3P97药物动力学程序处理依托泊苷脂质微球和注射液的平均血药浓度数据。根据AIC和拟合度判断两者的模型归属，结果表明，依托泊苷脂质微球和注射液的血药浓度数据均符合双隔室模型。
非隔室模型药物动力学参数其中ETP依托泊苷脂质微球；EPT依托泊苷普通注射液
Values are mean±SD.
ap＜0.01.
bp＜0.05.
实施例7 大鼠组织分布动力学研究给药方案84只大鼠随机分成二组，每组42只。甲组为对照组，于右后股静脉注射依托泊苷普通注射液，乙组为受试组，于右后股静脉注射依托泊苷脂质微球，分别于0.5h，1h，2h，4h，6h，12h，24h(每点12只大鼠，甲、乙组各6只)断头处死动物，取出心，肝，脾，肺，肾，脑，用生理盐水冲洗干净，用滤纸吸干，称取0.2g，加1mL缓冲盐(pH7.4)匀浆，离心，取上清液，按“组织样品处理与测定”项下处理后，取20μL进样，以当日的标准曲线计算各时间点样品中依托泊苷的浓度。
实验结果实验动物静脉注射依托泊苷脂质微球和依托泊苷普通注射液后AUC测定结果见表3，实验动物各时间点各组织药物浓度的平均值与时间的关系见图1～6。
表-3 ETP与EPE组织分布曲线的AUC0.05-24h
Data are preaented as mean±SD(n＝6).
aAUC0.05-24hof EPE was compared with that of ETP in correeponding tissue.
由大鼠体内血浆药动学试验结果显示，在各个时间点的血中药物浓度均高于普通市售注射液。说明脂质微球注射液具有高效性。组织分布动力学考察实验结果显示，依托泊苷在各组织中的分布情况由大到小依次是肝、肺、肾脏、心脏和脑。其中，心脏和脑部的AUC0.05-24h均高于普通剂型。最近有研究显示，肺部小细胞癌常向脑部转移和扩散，因此依托泊苷脂质微球注射液在脑部的聚集，很有可能对于肿瘤细胞的脑转移产生疗效，从而具有更广泛的抗肿瘤功效。
权利要求
1.一种含依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于该注射液包含依托泊苷，脂溶性介质，水和表面活性剂，以制剂质量计本发明的配方组成为油相5％～30％，依托泊苷0.001％～0.5％，表面活性剂0.5％～5％，渗透压调节剂0.5％～5％，其余为注射用水。
2.根据权利要求1所述的一种含有依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于油选自矿物油，植物油，动物油，精油和合成油，及其混合物；表面活性剂选自磷脂，吐温，司盘，普朗尼克，油酸钠，油酸，胆酸，去氧胆酸及其混合物。
3.根据权利要求2所述的一种含有依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于所述的油选自红花油，大豆油，玉米油，中链脂肪酸甘油三酯(MCT)，薏苡仁油，鸦胆子油，及其混合物。
4.根据权利要求2所述的一种含有依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于所述的油是大豆油，中链脂肪酸甘油三酯(MCT)，或者是二者混合物。
5.根据权利要求2所述的一种含依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于所述吐温选自吐温20，吐温40，吐温60，吐温80，吐温85，或者是以上不同规格的混合物；所述普朗尼克是普朗尼克F68；所述磷脂选自卵磷脂，豆磷脂，或者是二者混合物。
6.根据权利要求1所述的一种含依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于还可含有甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖，及其混合物；氢氧化钠，盐酸，及其混合物；缓冲盐；金属螯合剂；抗氧剂。
7.根据权利要求6所述的一种含依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于缓冲盐为醋酸、醋酸钠、枸橼酸、枸橼酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，及其混合物；金属螯合剂为依地酸二钠，依地酸钠钙，及其混合物；。抗氧剂为维生素E，维生素C，亚硫酸钠，焦亚硫酸钠、半胱氨酸，及其混合物。
8.根据权利要求6所述的一种含依托泊苷的脂质微球注射液，其特征在于所述甘油以制剂计用量为0.5％至5％；缓冲盐为0.005％至2％；金属螯合剂为0％至1％；抗氧剂为0.001％至0.2％。
9.一种含有依托泊苷的脂质微球注射液的制备方法，其特征在于包含以下步骤a)将依托泊苷超微颗粒混悬液或者是超微的粉末加入至不含依托泊苷的空白乳剂或者是含有部分依托泊苷的乳剂中经混合制得依托泊苷脂质微球注射液或依托泊苷的水包油乳剂；b)将依托泊苷加入至含有表面活性剂的水溶性介质中，然后与油相混合，经过高速搅拌制备初乳；c)将依托泊苷溶液或粉末加入至含有表面活性剂的油溶性介质中，然后与水相混合，经过高速搅拌制备初乳，鉴于依托泊苷的水溶液化学稳定性差，制备过程应控制水相pH值始终保持在4-8之间；制剂的制备方法主要包括高速搅拌过程及高压均质过程，制剂的灭菌采用高压旋转灭菌法，构成脂质微球注射液的组合物与水包油乳剂的组合物相同，制剂中依托泊苷在油水两相的界面膜中有一定的分布，约20～80％，其余部分依托泊苷分布于水相及油相中，
10.根据权利要求9所述含有依托泊苷的脂质微球注射液的制备方法，其特征在于(1)将处方量的EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、司盘20、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于高压旋转灭菌器中，灭菌；(1)将处方量的Tween-80、油酸钠、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将豆磷脂加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(3)将依托泊苷药物粉末加入此初乳中，搅拌10分钟，加入预热至40-100℃的注射用水至全量；(4)转移至高压均质机中，高压均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(5)灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中灭菌；(1)将处方量的Tween-80、EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中，灭菌；(1)将处方量的EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于蒸汽旋转灭菌器中，灭菌；(1)将处方量的EDTA、甘油与预热至40-100℃的适量注射用水进行混合，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至各成份溶解，得水相；同时将卵磷脂、油酸、司盘20、依托泊苷加至处方量大豆油中40-100℃加热溶解，得油相；(2)将油相加入水相中，转入组织捣碎机内，搅拌数分钟，1-5次，直至油相均匀分散，得初乳，调pH值至4-8；(4)将初乳加入高压均质机中均质1-10次，取样镜检，至油滴在0.5微米以下；(6)取依托泊苷亚微乳剂灌封于输液瓶中，充氮，置于高压旋转灭菌器中，灭菌。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，涉及含依托泊苷的脂质微球注射液(水包油乳剂)及其制备方法。该注射液包含依托泊苷，脂溶性介质，水和表面活性剂，以制剂质量计本发明的配方组成为油相5％～30％，依托泊苷0.001％～0.5％，表面活性剂0.5％～5％，渗透压调节剂0.5％～5％，其余为注射用水。将依托泊苷经过高压均质，高速的气流撞击形成一种超音速搅拌，使药物迅速溶解并以分子形式渗透到油水界面膜中。使依托泊苷在油水两相的界面膜中有一定的分布(约20～80％)。本发明所述制剂应用界面膜载药的原理，提高了油水中均难溶的药物依托泊苷在乳剂中的载药量和稳定性并降低其毒性和血管刺激性。提高了药物化学稳定性和疗效。使本制剂应用在临床上具有低毒性、低刺激性和高效性的特点。
文档编号A61K31/7048GK1973826SQ200610169149
公开日2007年6月6日 申请日期2006年12月18日 优先权日2006年12月18日
发明者唐星, 田玲玲, 张洪瑶 申请人:沈阳药科大学