专利名称：链霉菌和吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于工业微生物领域，具体涉及一种能够产生多种吲哚倍半萜类抗生素的海洋来源的链霉菌(Sti^ptomyces sp. ) SCSIO 02999，以及该菌生产的吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
近年来，发现新型海洋放线菌资源，并从中筛选新型的活性次生代谢产物成为国际上海洋微生物研究的重要方向。从海洋放线菌中寻找结构新颖、高效、低毒的代谢产物逐渐成为药物寻找的新源泉。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一株海洋来源的链霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO02999，该菌于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO M 2012145。本发明的海洋来源的链霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 02999是从南海(E109° 53.171'，N16° 3.576')水深880的海底沉积物中分离获得的。常规方法提取其16S rRNA，其16S rRNA序列如SEQ ID NO. I所示，将16S rRNA进行BLAST比对，并进行系统发育树分析，系统发育树如图I所示。由此该菌株被鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 02999，该菌于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为=CCTCC NO M 2012145。本发明发现海洋来源的链霉菌(Sti^ptomyces sp. ) SCSIO 02999能够产生多种卩引哚倍半職类抗生素，包括 dixiamycin A(I), dixiamycin B (2), oxiamycin (3),chloroxiamycin(4)和 xiamycin A(5)。因此本发明的第二个目的是提供吲哚倍半萜类抗生素，其结构式如式(I)所示
权利要求
1.链霉菌(Sti^ptomycessp. ) SCSIO 02999，保藏编号为CCTCC NO M 2012145。
2.吲哚倍半萜类抗生素，其结构式如式(I)所示o^^cooh R1 R21R1 = A(aR) R2 = H X-Y = C-C 2R1 = A(a-S) R, = H X-Y = C-C 3R1 = H R; = H X-Y = C-O-C 4R1 = H R2 = Cl X-Y = C-C 其中化合物I为dixiamycin A,化合物2为dixiamycin B,化合物3为oxiamycin,化合物 4 为 chloroxiamycin。
3.一种权利要求2所述的卩引哚倍半職类抗生素dixiamycin A, dixiamycin B,oxiamycin, chloroxiamycin 和 xiamycin A 的制备方法，其特征在于，所述的 dixiamycinA, dixiamycinB, oxiamycin, chloroxiamycin 和 xiamycinA 是从权利要求 I 所述的链霉菌(Streptomycessp. ) SCSIO 02999的发酵培养物中分离得到的。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其具体步骤如下 (a)制备链霉菌(Streptomycessp. ) SCSIO 02999的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏A ;菌丝体先用甲醇浸提，浸取液回收甲醇后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏B; (b)将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经正相硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比 100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32、100/50、100/100 和 0/100 梯度洗脱，分别收集氯仿/甲醇体积比100/8、100/16、100/32、100/50洗脱的馏分，记为馏分Fr. 5、Fr. 6、Fr. 7、Fr. 8 ;懼分Fr. 5经凝胶柱层析,用体积比I : I的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比10 I的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0.3-0. 4和0.6-0. 7的馏分Fr. 5-1和Fr. 5-2, Fr. 5-1经纯化得到化合物5，Fr. 5-2经纯化得到化合物4 ;馏分Fr. 6经凝胶柱层析，用体积比I : I的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比15 I的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0. 35和0. 75的馏分Fr. 6-1和Fr. 6-2，馏分Fr. 6-1经纯化得到化合物1，Fr. 6-2经纯化得到化合物3 ;将馏分Fr. 7和Fr. 8合并过凝胶柱层析，用体积比I I的氯仿/甲醇洗脱，收集在TLC上，用体积比10 I的氯仿/甲醇作为展开剂，Rf值为0. 6的馏分Fr. 7-1，馏分Fr. 7-1用HPLC跟踪，用中压液相分离得粗品，粗品再经纯化得到化合物2。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的(a)步骤的制备链霉菌SCSIO02999的发酵培养物是通过以下方法制备将活化的链霉菌SCSIO 02999接入种子培养基中，28° C，200rpm，培养48h制得种子液，将种子液以10%的接种量接入到发酵培养基中，28° C，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方为，按质量分数100%计，包括可溶性淀粉2%，葡萄糖1%，细菌学蛋白胨0. 5%，酵母提取物0.5%, CaCO3O. 2%，海盐 3%，余量为水，pH 7. O。
6.权利要求I所述的链霉菌(Streptomycessp. ) SCSIO 02999在制备权利要求2所述的 dixiamycin A> dixiamycin B、oxiamycin、chloroxiamycin 或 xiamycin A 中的应用。
7.权利要求2 所述的 dixiamycin A, dixiamycin B, oxiamycin, chloroxiamycin 或xiamycin A在制备抗菌药物中的应用。
8.权利要求2所述的dixiamycinA或xiamycinA在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于，当为dixiamycinA时,所述的抗肿瘤药物为抗人乳腺癌药物。
10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于，当为xiamycinA时,所述的抗肿瘤药物为抗人神经胶质瘤药物。
全文摘要
本发明公开了一种链霉菌和吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用。本发明的链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 02999能够产生具有抗菌活性的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A，这些吲哚倍半萜类抗生素dixiamycin A，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycin A具有一定的抑菌作用，能够用于制备抗菌药物，并且dixiamycinA对人乳腺癌细胞MCF7具有细胞毒活性，xiamycinA对人神经胶质瘤SF268具有细胞毒活性，因此能够用于制备抗肿瘤药物。因此本发明为制备具有抗菌和抗肿瘤活性的吲哚倍半萜类抗生素dixiamycinA，dixiamycin B，oxiamycin，chloroxiamycin和xiamycinA的生产制备提供了一种新的方法，为开发高效、低毒的抗菌抗肿瘤药物提供了理想的侯选化合物。
文档编号A61K31/403GK102757908SQ20121014695
公开日2012年10月31日 申请日期2012年5月11日 优先权日2012年5月11日
发明者张偲, 张庆波, 张文军, 张海波, 张长生, 李惠贤, 李苏梅, 田新朋, 鞠建华 申请人:中国科学院南海海洋研究所