专利名称：阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体、制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及改性大分子聚合物及蛋白构建的药物和基因载体、制备方法及应用，进一步的说是一种转铁蛋白修饰的阳离子高分子脂质基因载体、制备方法及应用，属于功能化脂质体的制备及应用技术。
背景技术：
近年来，基因组学、蛋白质组学等领域取得了大量的进展，获得了很多有望用于肿瘤基因治疗的抑瘤基因、micr0RNA、siRNA等。但是由于缺乏安全、高效的基因治疗载体，这些基因还难以用于肿瘤的临床基因治疗。因此，基因载体是肿瘤基因治疗成功的关键；而构建一个高效、安全的基因治疗载体仍然是目前亟需解决的问题。理想的肿瘤基因载体应具备以下特征(I)肿瘤靶向性，且不易被免疫系统识别；
(2)闻度稳定，容易制备；(3)无毒；(4)基因转染效率闻；(5)基因表达稳定并具有肿瘤选择性。非病毒性载体具有毒性低、免疫原性低、易靶向改造和制备等优点，因此有望成为肿瘤临床基因治疗载体的选择。但是，非病毒载体也存在转染效率低、生物相容性差、体内肿瘤靶向性差等问题，因此仍需进一步改进。目前所研究的非病毒载体主要包括阳离子聚合物(PEI、壳聚糖、PLL等)、脂质材料、聚合物嵌段共聚物和胶束等；常用的阳离子聚合物作为转基因的载体有其优越性，然而存在转染效率低、稳定性差、部分材料毒性大及制备工艺复杂等问题。脂质材料中的阳离子脂质体(CL)因具有优良的特性(无免疫原性、制备简单、使用方便、转染效率高等)在科研及临床实验中被广泛应用，其通常由一个阳离子、两个亲化合物和一个中性脂质组成；但阳离子脂质体也存在制备不稳定性、细胞毒性大、体内转染效率差等突出问题。为解决这些问题，可将阳离子脂质体技术与阳离子聚合物技术相结合，将二者的优势互补，开发新型的阳离子高分子脂质体(CPL)系统；CPL技术主要采用阳离子聚合物来制备具有双层膜结构的脂质体纳米粒；与CL和阳离子聚合物相比，CPL具有更高的理化稳定性，易于靶向组装改造，设计灵活，且适合体内基因递送。本发明为CPL系统的进一步延伸和发展。常津，梁晓飞等人报道的壳聚糖长链烷基季铵盐及阳离子高分子脂质体为本发明提供了相关研究基础(一类双亲性壳聚糖长链烷基季铵盐及其制备方法，申请号200710056993. 4 ;一种高分子脂质体及其应用，专利申请号200810052465)。
发明内容
本发明目的是提供一种阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体，主要为构建一种制备简单、成本低廉、安全性好、转染效率高、肿瘤靶向性强的非病毒基因载体系统。本发明的目的还是提供一种上述阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体制备方法。本发明另一目的是提供一种上述阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的应用。本发明采用具有双亲性特性的转铁蛋白阳性大分子物质来代替普通阳离子脂质体中的阳性成分，再与普通阳离子脂质体的脂质成分组合来制备转铁蛋白大分子阳离子脂质基因载体，该转铁蛋白大分子阳离子脂质基因载体具有与普通脂质体相类似的双层膜结、构，可包载药物、结合基因，并介导DNA/siRNA的转染，可转染的细胞种类多，转染效率高，肿瘤靶向性强，可在含血清的培养液中使用，制备和操作简单。本发明所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体，其关键特征在于使用转铁蛋白阳性大分子物质来代替普通阳离子脂质体中所含有的阳性成分，因此可以称之为阳离子大分子蛋白脂质体。阳离子大分子蛋白脂质体是将阳离子脂质体技术、蛋白大分子技术和纳米胶束技术相结合所开发的一种与阳离子脂质体结构相同的纳米基因载体系统，其具有更优良的特性，并有脂质体和高分子胶束的优点，可将二者的优势互补。本发明的阳离子大分子蛋白脂质体不仅具备小分子脂质体的优点，且制备方法简单，稳定性好，药物渗漏少，同时含有氨基和羧基等官能团，易进行多功能化组装。本发明中的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体由转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分组成，其中，转铁蛋白-长链烷基季铵盐与脂质成分的质量比为O. 05^20:1,转铁蛋白和长链烷基季铵盐的质量比O. Ofl :1、优先选择的转铁蛋白-长链烷基季铵盐 与脂质成分的质量比为广8 :1。转铁蛋白-长链烷基季铵盐作为主膜材构成阳离子大分子蛋白脂质体的主体，所述的基因载体为具有类似脂质体双层膜结构的纳米粒，粒径在I lOOOOOnm，优选 l(T500nm。本发明中所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐是可溶于极性有机溶剂(氯仿、二氯甲烷、乙醇等)和水，转铁蛋白-长链烷基季铵盐在极性有机溶剂或水溶液中的溶解度均大于0. lmg/mL，转铁蛋白-长链烷基季铵盐的蛋白分子量在100(Tl000000之间，优选为200(Γ200000，转铁蛋白-长链烷基季铵盐的分子结构中可以含有氨基、羧基、羟基等官能团，具体为转铁蛋白-长链烷基季铵盐；其中的转铁蛋白可用牛血清白蛋白、Protein A、Protein G、甲胎蛋白、表皮生长因子受体(EGFR)的抗体、英夫利西单抗、人纤维蛋白单链抗体、癌胚抗原、组织多肽抗原、淀粉酶、乳酸脱氢酶、核糖核酸酶、5-核苷酸酶、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、生长激素、转化生长因子、雌激素、孕激素代替。本发明中所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体中，其中构成转铁蛋白-长链烷基季铵盐的长链烷基季铵盐为十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、二甲基双十八烷基溴化铵、I，2- 二油酰-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、I，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、I，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟丙基溴化铵、I，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟丁基溴化铵、I，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟戊基溴化铵、I，2- 二掠榈酸氧丙基-3- 二甲基_轻乙基溴化铵、I，2- 二硬脂酸氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、1，2_ 二肉豆蘧酰氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵及其上述季铵盐相应的氯化物；或者是含环氧基团的长链烷基季铵盐二甲基十八烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十六烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十四烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十二烷基环氧丙基氯化铵及其上述季铵盐相应的溴化物。本发明中所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的制备方法为脂质体的通用制备方法包括薄膜分散法、逆向蒸发法、复乳法、离心法、PH梯度法、注入法和混溶法等，其中可优选为薄膜分散法和逆向蒸发法；薄膜分散法的基本步骤为将转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分共溶于极性有机溶剂中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分的质量比为0. 05^20 :1，所述的极性有机溶剂指二氯甲烷、氯仿、丙酮；混匀作为有机相，除去有机溶剂使成薄膜，然后加入水相使脂质膜水化，水相为O. 9%的生理盐水或pH=5、的缓冲溶液；逆向蒸发法的基本步骤为将转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分共溶于极性有机溶剂中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分的质量比为O. 05^20 :1，所述的极性有机溶剂指二氯甲烷、 氯仿、丙酮；混匀作为有机相；水相为O. 9%的生理盐水或pH=6 9的缓冲溶液；将水相与有机相混合，水相和有机相的体积比为I :6飞1，超声乳化后，旋转蒸发除去有机溶剂；透析法的基本步骤为将转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分共溶于极性有机溶剂中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分的质量比为O. 05^20 :1，所述的极性有机溶剂指二氯甲烷、氯仿、丙酮；，混匀作为极性有机相；将极性有机相放入透析袋中在水相溶液中透析1飞00小时，水相溶液为O. 9%的生理盐水或pH=6、的缓冲溶液；本发明中所述的脂质成分为构成普通脂质体和阳离子脂质体的基本成分，具体为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺(DOPE)、3i3- [N-(N’，N’_ 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种，如2-3种的脂质成分，优选为胆固醇、DOPE和DC-Chol。本发明所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体可以用于制备基因药物。所述的基因药物可为有机药物、水溶性药物、水不溶性药物、基因DNA/siRNA、探针和诊断试剂，如抑癌基因(如乙酰胆碱酯酶基因)、RB基因和p53基因、紫杉醇、消炎痛、抗叶酸类(如甲氨蝶呤)、抗嘌呤类(如巯嘌呤)、抗嘧啶类(如氟尿嘧啶、替加氟)、核苷酸还原酶抑制药(如羟基脲)、脱氧核糖核苷酸多聚酶抑制药(如环胞苷)、直接影响和破坏DNA结构及其功能的药物(如氮芥、环磷酰胺、氮甲、顺钼、丝裂霉素、喜树碱)、抑制蛋白质合成的药(如阿霉素、柔红霉素、光辉霉素)、影响微管蛋白质组装和纺锤丝形成的药物(长春碱、依托泊苷)。本发明所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体可通过对转铁蛋白阳离子脂质基因载体进行修饰或组装而增加纳米粒的使用功能，所用的修饰制剂包括抗体配体(肿瘤相关抗原标志物)、蛋白和酶(酶类标志物)、转铁蛋白、激素、肽类、聚乙二醇(PEG)、基因和小分子制剂等；优选为甲胎蛋白、癌胚抗原、组织多肽抗原、淀粉酶、乳酸脱氢酶、核糖核酸酶、5-核苷酸酶、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、生长激素、转化生长因子、雌激素、孕激素、儿茶酚胺类及其衍生物、ras基因家族及其表达产物、myc基因家族及其表达产物、表皮生长因子受体、叶酸、三苯氧胺、磁性颗粒。使用以上物质对基因载体进行改性时所使用的方法包括直接对基因载体纳米粒的表面修饰或先制备含活性成分的前体物质再进行组装等方法。其中PEG修饰的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体具有体内长循环功能和被动靶向功能，其制备方法优选为a:制备前体物质PEG修饰的大分子季铵盐即转铁蛋白-长链烷基季铵盐的制备方法将转铁蛋白溶解到去离子水和醇的混合溶液中；再将长链烷基季铵盐缓慢的加入到体系中，其中去离子水和醇的质量比为I :(Γ3 ;体系中转铁蛋白和长链烷基季铵盐的质量比为I :0. OflOO ;所述的醇为甲醇、乙醇、或异丙醇；在室温下搅拌24小时后将反应液透析1飞00小时，最后冻干，得转铁蛋白-长链烷基季铵盐的白色粉末；b:将大分子季铵盐(质量浓度1°/Tl00%)和脂质成分(质量浓度0. 1%"60%)溶于氯仿中，将PEG修饰的大分子季铵盐(质量浓度0. 19^39%)溶于水相，然后使用薄膜分散法或逆向蒸发法制备PEG修饰的大分子蛋白季铵盐阳离子脂质纳米粒。其中EGFR抗体修饰的阳离子大分子蛋白脂质纳米粒对EGFR受体高表达的肿瘤细胞具有靶向性，如肿瘤细胞SMMC-7721和MCF-7等；EGFR抗体修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒的制备方法优选为可先制备在水相当中浓度为0. r5mg/mL的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体纳米粒，然后使用偶联剂将EGFR抗体偶联到高分子季铵盐阳离子脂质基因载体的表面既得EGFR抗体修饰的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体，其中高分子季铵盐、脂质成分和EGFR抗体的质量组成依次为1% 100%，0. 1% 60%，0. 1% 39%。
本发明所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的用途，包括对药物和基因的递送、缓控释、逆转肿瘤细胞的耐药特性及对疾病的诊断和治疗；阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体作为基因转染的非病毒载体时，与商用阳离子脂质体Lipofectamine 2000相t匕，具有更低的细胞毒性和更高的基因转染效率。本发明所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体纳米粒，采用与阳离子脂质体具有更大相似性的阳离子蛋白脂质基因载体来构建功能化的、安全性好、效率高的纳米基因载体系统，并充分利用大分子脂质体所具有的优点以克服阳离子脂质体的缺点。本发明所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体系统具有以下特点(I)将功能强大的阳离子大分子蛋白脂质用做基因载体。(2)阳离子大分子蛋白脂质体具有灵活多样、基因转染效率高、毒性低、制备方法简便等优点。(3)将阳离子大分子蛋白脂质体进行靶向性设计可得到专一性好的基因载体系统。为提高载体系统针对特定肿瘤的基因递送效率，即专一性，则可充分利用阳离子大分子蛋白脂质体相对阳离子脂质体所具有的功能化修饰容易的优点。利用肿瘤细胞表面的特异性受体配体结合原理，可选择对肝癌具有较好靶向功能的叶酸或EGFR抗体对阳离子大分子蛋白脂质体进行修饰来增强其针对肝癌的基因转染效果，同时也采用多靶点联用的方法来提高载体的专一性。
图I为转铁蛋白-十六烷基季铵盐的核磁(1H-NMR)图谱；由图可见转铁蛋白和十六烷基季铵盐的特征吸收峰均存在，说明转铁蛋白-十六烷基季铵盐的成功制备。图2为使用逆向蒸发法所制备的阳离子大分子转铁蛋白脂质体的原子力显微镜照片；由图可见阳离子大分子转铁蛋白脂质体的粒径较小，且分布均匀。图3是转铁蛋白-十六烷基季铵盐和阳离子大分子蛋白脂质体的SDS-PAGE电泳；其中从右到左依次为I =Marker ；2 :阳离子大分子转铁蛋白脂质体(薄膜法)；3 :阳离子大分子转铁蛋白脂质体(反向法)；4 :阳离子大分子转铁蛋白脂质体(反向法，Tf-HQ量为3的2倍)；5 :转铁蛋白-十六烷基季铵盐；6 :转铁蛋白；由图可见阳离子大分子转铁蛋白脂质体表面所存在的转铁蛋白和十六烷基季铵盐改性后的转铁蛋白均可用SDS-PAGE电泳跑出，说明转铁蛋白存在于大分子蛋白脂质体的表面。图4是使用荧光素酶报告基因检测阳离子大分子转铁蛋白脂质体的体内(荷瘤裸鼠，肝癌SMMC-7721细胞)基因递送能力。
由图可见，阳离子大分子转铁蛋白脂质体(Tf-CPL)对荷肝癌裸鼠的体内基因递送能力高于阳离子高分子脂质体(CPL)，且肿瘤内的基因表达水平明显高于CPL。图4中Tf_CPL :阳离子大分子转铁蛋白脂质体；CPL :阳离子高分子脂质体；RLU 相关光数 Relative light unit ;DNA:脱氧核糖核酸 Deoxyribonucleic acid ;Heart:心脏，Liver:肝脏，Spleen:脾脏，Lung:肺，kidney:肾脏，Tumor:肿瘤。
具体实施例方式下面的实施例中将对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。实施例中，DOPE :二油酰脂酰乙醇胺；DC_Chol :3 P - [N_(N’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇；TQCMC :十四烷基羧甲基壳聚糖季铵盐。实施例I :本实施例探讨转铁蛋白-长链烷基季铵盐的制备方法将转铁蛋白(Tf) IOmg溶解到去离子水和异丙醇的混合溶液IOml (水和异丙醇的体积比为1:1)中；再将二甲基十六烷基环氧丙基氯化铵IOOmg缓慢的加入到该体系中；室温下搅拌24小时后将反应液用去离子水透析3天，冻干，得转铁蛋白-十六烷基季铵盐(Tf-HQ)的白色粉末12. Omg。其中二甲基十六烷基环氧丙基氯化铵可用其他长链烷基季铵盐代替，其它的长链烷基季铵盐成分包括二甲基十八烷基环氧丙基氯化铵、二甲基二十二烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十四烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十二烷基环氧丙基氯化铵。实施例2 本实施例探讨采用逆向蒸发法时转铁蛋白-十六烷基季铵盐(Tf-HQ)、十四烷基羧甲基壳聚糖季铵盐(TQCMC)和胆固醇的不同配比对阳离子大分子转铁蛋白脂质体粒径产生的影响。将不同配比的Tf-HQ (蛋白分子量为79，000)、TQCMC和胆固醇共溶于二氯甲烷中，混匀得溶液I ;准备去离子水溶液II，其中溶液I和溶液II的比例为I :2 ;将两种溶液混合后，充分超声乳化，在旋转蒸发仪上减压蒸馏除尽二氯甲烷得转铁蛋白脂质体溶液。由表2可见，调整Tf-HQ和胆固醇的质量配比可以得到不同粒径大小的转铁蛋白脂质体，所得的阳离子转铁蛋白脂质体在水溶液中的粒径大小分布也都比较均匀。其中图2为Tf-HQ/胆固醇阳离子转铁蛋白脂质体的原子力显微镜照片。表 权利要求
1.一种阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体，其特征在于所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体由转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分组成，其中，转铁蛋白和长链烷基季铵盐的质量比为O. Ofl 1 ;转铁蛋白-长链烷基季铵盐与脂质成分的质量比为O. 05 20 1 ;粒径在 I IOOOOOnm ； 所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐是在极性有机溶剂或水中的溶解度大于O. lmg/mL,蛋白分子量在100(Γ1000000之间，其中的季铵盐为氯化物和溴化物； 所述的脂质成分为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺、3 β- [Ν-(Ν’，Ν’_ 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或2-3种，优选为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺或3β- [Ν-(Ν’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇； 所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐中的长链烷基季铵盐为十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、二甲基双十八烷基溴化铵、I，2- 二油酰-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、1，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、1，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟丙基溴化铵、I，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟丁基溴化铵、I，2- 二油酰氧丙基-3- 二甲基-羟戊基溴化铵、I，2- 二棕榈酰氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、I，2- 二硬脂酰氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵、I，2- 二肉豆蘧酰氧丙基-3- 二甲基-羟乙基溴化铵及其上述季铵盐相应的氯化物；或者是含环氧基团的长链烷基季铵盐二甲基十八烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十六烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十四烷基环氧丙基氯化铵、二甲基十二烷基环氧丙基氯化铵及其上述季铵盐相应的溴化物。
2.如权利要求I所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体，其特征在于所述的转铁蛋白-长链烧基季铵盐中的转铁蛋白可由牛血清白蛋白、ProteinA、Protein G、甲胎蛋白、表皮生长因子受体EGFR的抗体、英夫利西单抗、人纤维蛋白单链抗体、癌胚抗原、组织多肽抗原、淀粉酶、乳酸脱氢酶、核糖核酸酶、5-核苷酸酶、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、生长激素、转化生长因子、雌激素或孕激素代替。
3.—种如权利要求书I所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的制备方法，其特征在于通过步骤I)及2)获得 1)转铁蛋白-长链烷基季铵盐的制备方法 将转铁蛋白溶解到去离子水和醇的混合溶液中；再将长链烷基季铵盐缓慢的加入到体系中，其中去离子水和醇的质量比为I :(Γ3 ;体系中转铁蛋白和长链烷基季铵盐的质量比为I :0. OflOO ;所述的醇为甲醇、乙醇、或异丙醇；在室温下搅拌24小时后将反应液透析Γ500小时，最后冻干，得转铁蛋白-长链烷基季铵盐的白色粉末； 2)转铁蛋白-长链烷基季铵盐与脂质成分进行组装；组装的方法为薄膜分散法、逆向蒸发法或透析法 薄膜分散法的基本步骤为 将步骤I)获得的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分共溶于极性有机溶剂中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分的质量比为O. 05^20 :1，所述的极性有机溶剂指二氯甲烷、氯仿、丙酮；混匀作为有机相，除去有机溶剂使成薄膜，然后加入水相使脂质膜水化，水相为O. 9%的生理盐水或pH=5、的磷酸盐缓冲溶液；逆向蒸发法的基本步骤为 将步骤I)获得的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分共溶于极性有机溶剂中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分的质量比为O. 05^20 :1，所述的极性有机溶剂指二氯甲烷、氯仿、丙酮；混匀作为有机相；水相为O. 9%的生理盐水或pH=6、的磷酸盐缓冲溶液；将水相与有机相混合，水相和有机相的体积比为I :6飞1，超声乳化后，旋转蒸发除去有机溶剂； 透析法的基本步骤为 将步骤I)获得的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分共溶于可与水互溶的极性有机溶剂中，所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分的质量比为O. 05^20 :1，所述的极性有机溶剂指丙酮、异丙醇、乙醇、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺；混匀作为极性有机相；将极性有机相放入透析袋中在水相溶液中透析1飞00小时，水相溶液为O. 9%的生理盐水或pH=6、的磷酸盐缓冲溶液；所述的转铁蛋白-长链烷基季铵盐、脂质成分和长链烷基季铵盐同权利要求I或2所述。
4.如权利要求书3所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的制备方法，其特征在于步骤I)中所述的长链烷基季铵盐为二甲基十八烷基环氧丙基氯化铵。
5.一种如权利要求I或2所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的用途，其特征是用于制备基因药物。
6.如权利要求5所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体的用途，其特征是所述的基因药物为乙酰胆碱酯酶抑癌基因、RB基因和p53基因、siRNA、mRNA、紫杉醇、消炎痛、甲氨蝶呤、巯嘌呤、氟尿嘧啶、氮芥、环磷酰胺、顺钼、丝裂霉素、喜树碱、阿霉素、柔红霉素、光辉霉素、长春碱、依托泊苷中的一种或几种。
全文摘要
本发明公开了阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体、制备方法及应用。其中阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体为由转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分按质量比为0.05~201制备的大分子转铁蛋白脂质体。基因转染实验的结果表明大分子转铁蛋白脂质体在293T、NIH-3T3、肝癌Huh-7、SMMC-7721、肺癌A549细胞中的基因转染效率与阳性对照阳离子脂质体LipofectamineTM2000相当。所述的阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体系统具有较好的生物相容性，细胞毒性低，可作为优良的非病毒基因给药载体。
文档编号A61P35/00GK102716500SQ20121021960
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月28日 优先权日2012年6月28日
发明者李宗海, 梁晓飞, 石必枝 申请人:上海市肿瘤研究所