专利名称：脂质、脂质复合物及其应用的制作方法
脂质、脂质复合物及其应用本申请是申请日为2005年5月6日、题为“脂质、脂质复合物及其应用”的中国专利申请号2005800141579的分案申请。本发明涉及阳离子脂质、包含其的组合物及其应用以及将化学化合物转移到细胞中的方法。分子生物学和分子医学在很大程度上依赖于生物活性化合物向细胞内的引入。这些生物活性化合物典型地分别包括，特别是，DNA、RNA以及肽和蛋白质。典型地，要克服的屏障是脂双层，其具有带负电荷的外表面。在本领域，已经开发了许多技术来渗透细胞膜并且由此将生物活性化合物引入。然而，构思用于实验室的一些方法不能用在医学领域并且更特别地，不适合于药物递送。例如，本领域已知的电穿孔和冲击法，如果应用的话，仅容许生物活性化合物的局部递送。除此之外，所述脂双层细胞膜还包括运送系统。因此，尝试使用这种运送系统来将生物活性化合物递送通过细胞膜。然而，由于这种递送系统的特异性或交叉反应性，它们的应用通常不是可应用的方法。本领域描述的将生物活性化合物转移到细胞中的更通用的方法是使用病毒载体。然而，病毒载体仅能用于将基因有效地转移到一些细胞类型中；但是它们不能用于将化学上合成的分子引入细胞。一种备选的方法是使用所谓的脂质体(Bangham，J. Mol. Biol. 13，238-252)。脂质体是在两亲性脂质在水中缔合后产生的小泡。脂质体典型地包括磷脂的同心排列的双分子层。取决于层数，可将脂质体分类为小的单层脂质体、多层脂质体和大的多层脂质体。已经证明脂质体是有效的递送试剂，因为它们容许亲水性化合物结合到水性中间层中，而将疏水性化合物结合到脂质层中。本领域众所周知的是，脂质制剂的组合物以及制备它们的方法对于得到的脂质聚集体的结构和大小具有影响，并且因此影响脂质体。还已知脂质体结合阳离子脂质。除了作为脂质体的成分之外，阳离子脂质还引起了相当多的关注，因为它们可以象这样用于生物聚合体的细胞递送。使用阳离子脂质，由于静电相互作用，可以将任何阴离子化合物基本上以定量方式进行包封。此外，认为阳离子脂质与带负电荷的细胞膜相互作用，启动细胞膜转运。已经发现，如此与生物活性化合物一起使用含有阳离子脂质的脂质体制剂或使用阳离子脂质需要探索式方法，每种制剂应用有限，因为通常在缺乏血清的情况 下，其典型地可以将质粒递送到一些但是不是所有的细胞类型中。已经证实脂质和由它们转运的生物活性化合物的电荷和/或质量比率是递送不同类型的所述生物活性化合物的极其重要的因素。例如，已经显示适合于包括5，000到10，000个碱基大小的质粒递送的脂质制剂，通常对于递送寡核苷酸诸如典型地包括约10到约50个碱基的合成的核酶或反义分子是无效的。此外，最近已经显示指出反义寡核苷酸和核酶的优选递送条件甚至在相同的细胞类型中也是不同的。美国专利6，395，713公开了基于阳离子脂质的组合物和将这些组合物用于将生物活性化合物转移到细胞中的应用，所述组合物由亲脂性基团、接头和头部基团组成。本发明待解决的问题是提供将生物活性化合物引入细胞，优选地动物细胞的方式。本发明待解决的另一个问题是提供核酸的递送试剂，特别是小核酸诸如siRNA，siNA和RNAi 或适体和 spiegelmers。这些问题通过后附的独立权利要求的主题得以解决。优选的实施方案可以从其后附的附属权利要求获得。在第一个方面，本发明待解决的问题通过按照式(I)的化合物得以解决，
权利要求
1.一种组合物，其包含脂质成分、药物活性化合物和载体，其中所述脂质成分是按照式(I)的阳离子脂质化合物
2.按照权利要求I的组合物，其中凡和民各自并且独立地选自包含十二烷基、十四烷基、十TK烧基和油基的组。
3.按照权利要求I和2中任一项的组合物，其中R1是十二烷基且R2是十四烷基；或 R1是十六烷基，且R2是油基。
4.按照权利要求1-3任一项的组合物，其中m是I或2。
5.按照权利要求1-4任一项的组合物，其中所述化合物是与阴离子Γ缔合的阳离子脂质。
6.按照权利要求1-5任一项的组合物，其中Y—选自包括卤化物、乙酸根和三氟乙酸根的组。
7.按照权利要求1-6任一项的组合物，其中所述化合物选自包括下列各项的组-β -精氨酰_2，3- 二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-酰胺三盐酸盐
8.按照权利要求1-7任一项的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
9.按照权利要求1-8任一项的组合物，其中所述核酸选自包括下列各项的组寡核苷酸和多核苷酸。
10.按照权利要求1-9任一项的组合物，其中所述核酸选自包括DNA，RNA,PNA和LNA的组。
11.按照权利要求1-10任一项的组合物，其中所述核酸是双链核酸。
12.按照权利要求1-11任一项的组合物，其中所述核酸与阳离子脂质的摩尔比是O. 02_0· 05 ο
13.按照权利要求12的组合物，其中所述核酸与阳离子脂质的摩尔比是O.037。
14.按照权利要求1-13任一项的组合物，其中所述核酸主链与阳离子脂质氮的电荷比是 I : 4。
15.按照权利要求1-14任一项的组合物，所述组合物还包括至少一种辅助脂质成分。
16.按照权利要求15的组合物，其中所述辅助脂质成分选自包括磷脂和类固醇的组。
17.按照权利要求15-16任一项的组合物，其中所述辅助脂质成分选自包括下列各项的组1，2_ 二植烷酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和I，2- 二油基-sn_甘油基_3_磷酸乙醇胺。
18.按照权利要求15-17任一项的组合物，其中所述辅助脂质成分的含量是从所述组合物的总脂质含量的约20mol%到约80mol%。
19.按照权利要求18的组合物，其中所述辅助脂质成分的含量是从约35mol%到约65mol %。
20.按照权利要求1-19任一项的组合物，其中所述脂质是β-精氨酰-2，3-二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-酰胺三盐酸盐，所述辅助脂质是1，2- 二植烷酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
21.按照权利要求20的组合物，其中所述脂质是所述组合物的总脂质含量的50mol%，所述辅助脂质是所述组合物的总脂质含量的50mol%。
22.按照权利要求1-21任一项的组合物，其中所述组合物包含至少两种辅助脂质。
23.按照权利要求22的组合物，其中至少一种辅助脂质包含选自包括下列各项的组的部分PEG部分、HEG部分、聚羟乙基淀粉(polyHES)部分和聚丙烯部分，其中该部分优选地提供约500-10000Da的分子量、更优选地约2000_5000Da的分子量。
24.按照权利要求22或23的组合物，其中包含所述PEG部分的辅助脂质选自包括下列各项的组1，2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1,2- 二烷基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和神经酰胺-PEG。
25.按照权利要求24的组合物，其中所述PEG部分具有约500Da到IOOOODa的分子量、优选地约2，000到5，OOODa的分子量、更优选地2，OOODa的分子量。
26.按照权利要求25的组合物，其中所述组合物包含作为脂质成分的β-精氨酰-2，3- 二氨基丙酸-N-十六烧基-N-油基-酰胺二盐酸盐，作为第一辅助脂质的I，2- 二植烧酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和作为第二辅助脂质的1，2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-PEG2000。
27.按照权利要求26的组合物，其中所述第二辅助脂质的含量是约O.05mol %到4.9mol %、优选地约I到3mol %。
28.按照权利要求27的组合物，其中所述脂质的含量是45m0l%到50mOl%，第一辅助脂质的含量是45到50mol %，并且在存在PEG化的第二辅助脂质的条件下，所述第二辅助脂质的含量是约O. Imol %到约5mol %,优选地约l_4mol %,且更优选地约2%，其中所述脂质、所述第一辅助脂质和所述第二辅助脂质的含量的总和是IOOmol %，并且其中所述第一辅助脂质和所述第二辅助脂质的总和是50mOl%。
29.按照权利要求22-28任一项的组合物，所述组合物含有 a)50mol %的β -精氨酰-2，3- 二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-酰胺三盐酸盐， 48m0l%的I，2-二植烷酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和 2mol% 1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基_3_磷酸乙醇胺-PEG2000， 或 b)50mol %的β -L-精氨酰-2，3-L- 二氨基丙酸-N-十六烷基-N-油基-酰胺三盐酸盐， 49mol% 1,2- 二植烷酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和 Imol % N (羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-I，2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，优选其钠盐。
30.按照权利要求1-29任一项的组合物，其中所述化合物和/或所述辅助脂质成分是作为在水性介质中的分散体存在。
31.按照权利要求1-29任一项的组合物，其中所述化合物和/或所述辅助脂质成分作为在水混溶性溶剂中的溶液存在。
32.按照权利要求31的组合物，其中所述溶剂选自包括乙醇和叔丁醇的组。
33.按照权利要求30的组合物，其中所述分散体包含尺寸为120nm的颗粒。
34.按照权利要求1-33任一项的组合物用于制备药物的应用，所述药物用于治疗和/或预防疾病。
35.按照权利要求34的应用，其中所述组合物包含适合于治疗和/或预防所述疾病的药物活性化合物。
36.按照权利要求34-35任一项的应用，其中所述药物用于治疗癌症和/或心血管相关的疾病。
37.按照权利要求35-36任一项的应用，其中所述药物用于治疗癌症。
38.按照权利要求37的应用，其中所述癌症选自包括实体瘤和非实体瘤的组。
39.按照权利要求38的应用，其中所述实体瘤选自包括下列各项的组胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌和肝细胞癌。
40.按照权利要求36-39任一项的应用，其中所述癌症涉及选自包括血管发生和新血管发生的组的过程。
41.按照权利要求34-40任一项的应用，其中所述药物用于将所述核酸施用到细胞中，所述细胞选自包括下列各项的组内皮细胞、上皮细胞和肿瘤细胞。
42.按照权利要求41的应用，其中所述细胞是内皮细胞。
43.按照权利要求42的应用，其中所述内皮细胞是血管系统的内皮细胞。
44.按照权利要求43的应用，其中所述血管系统是来自新血管发生的血管系统。
45.按照权利要求44的应用，其中所述血管系统是来自肿瘤相关的新血管发生。
46.按照权利要求43的应用，其中所述血管系统选自包括下列各项的组肝血管系统、心脏血管系统、肾脏血管系统、胰腺血管系统和肺血管系统。
47.按照权利要求34-46任一项的应用，其中所述药物用于系统给药。
48.按照权利要求34-46任一项的应用，其中所述药物用于局部给药。
49.按照权利要求34-48任一项的应用，其中所述药物是诊断剂。
50.按照权利要求1-33任一项的组合物在制备转移剂中的应用。
51.按照权利要求50的应用，其中所述转移剂将药物活性组分转移到哺乳动物细胞中。
52.按照权利要求51的应用，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。
53.按照权利要求51-52任一项的应用，其中所述细胞是内皮细胞。
54.按照权利要求53的应用，其中所述内皮细胞是血管相关的内皮细胞。
55.按照权利要求1-33任一项的组合物用于系统给药的应用。
56.按照权利要求55的应用，其中所述系统给药是对脊椎动物的系统给药。
57.按照权利要求55-56任一项的应用，其中所述脊椎动物是哺乳动物。
58.按照权利要求57的应用，其中所述哺乳动物选自包括下列各项的组小鼠、大鼠、豚鼠、猫、狗、猴和人。
全文摘要
本发明是脂质、脂质复合物及其应用。其涉及按照式(I)的化合物，其中R1和R2各自并且独立地选自包含烷基的组；n是介于1和4之间的任何整数；R3是选自包含赖氨酰、鸟氨酰、2，4-二氨基丁酰、组氨酰的组的酰基和按照式(II)的酰基部分，其中m是1-3之间的任何整数且Y-是药用阴离子。
文档编号C07C237/22GK102940891SQ20121047282
公开日2013年2月27日 申请日期2005年5月6日 优先权日2004年5月5日
发明者O·凯尔, J·考夫曼, 安斯加尔·桑特尔 申请人:赛伦斯治疗公司