表皮生长因子复合物脂质体及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药领域，公开了一种表皮生长因子复合物脂质体及其制备方法和应用。该表皮生长因子复合物脂质体由下述按质量份数计的原料制备而成：表皮生长因子0.1～5份、水飞蓟宾5～30份、薏仁油5～30份、酵母提取物5～30份、微生物多糖5～30份、氢化卵磷脂30～200份、胆固醇10～80份、甘油5～30份。本发明工艺简单、安全无毒，对皮肤刺激性小，性质平和，效果稳定。
【专利说明】表皮生长因子复合物脂质体及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中药领域，特别涉及一种表皮生长因子复合物脂质体及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]目前，传统的化妆品只是对皮肤外在营养的补给和对衰老皮肤进行遮盖，无法阻止皮肤的衰老。而且一般方法制造的营养物和活性物化妆品实际效果不大，因为营养物和活性物不易渗入到皮肤深层，正常皮肤只能吸收一些小分子及脂溶性物质，对大分子蛋白质是不能吸收的，更难进入细胞内，活性物由于易受外界条件影响，在使用时也往往早巳失活了。表皮生长因子(EGF)作为多肽和蛋白质，对酶、光、PH值等敏感，具有稳定性差、易失活、生物利用度低等特点，这使其应用受到很大限制，为解决上述问题，很多化妆品单纯将表皮生长因子经脂质体包封后，形成单一的表皮生长因子脂质体来使用，虽然隔绝了酶、PH值等作用，对表皮生长因子的活性有了一定保护，但利用率仍不理想，还不能充分的发挥表皮生长因子的护肤健肤效果。针对这些问题，经过多年的研究，将表皮生长因子与营养精华结合，形成一种相互的协同作用，并做成脂质体运用于化妆品中，使营养物和活性物的有效时间极大延长.将各种营养物和活性物渗入到细胞内被充分吸收利用，使化妆品不仅具有护肤、滋养和保护的功效，同时还能参与细胞的新陈代谢，从根本上使皮肤光润富有弹性，保持肌肤自然健康。
【发明内容】
[0003]为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的首要目的在于提供一种表皮生长因子复合物脂质体。
[0004]本发明的又一目的在于提供一种上述表皮生长因子复合物脂质体的制备方法。
[0005]本发明的再一目的在于提供上述表皮生长因子复合物脂质体的应用。
[0006]本发明的目的通过下述技术方案实现:一种表皮生长因子复合物脂质体， 该表皮生长因子复合物脂质体由下述按质量份数计的原料制备而成:
[0007]表皮IiKW子0.1~5份
水飞蓟宾5~30份
+惹?:油5~30份
酵母IS取物5~30份
徵生物多糖5~30份
氪化卵_1130~200份
胆固醉10~80汾 貨_15~30份。
[0008]所述表皮生长因子复合物脂质体更加优选由下述按质量份数计的原料制备而成:
[0009]
'M 皮 ζ k K [?'| /.0.5 ~3 份
水飞蓟ft10~20份
惹f:油10~25份
+醇邛提取物8~20份
微物多糖8~20份`
M化卵磷脂50~150份
胆同醉15~50份 11'油10~20份。
`[0010]上述的一种表皮生长因子复合物脂质体的制备方法，包括以下操作步骤:
[0011](I)将30~200质量份氢化卵磷脂、10~80质量份胆固醇、5~30质量份水飞蓟宾和5~30质量份薏仁油溶于无水乙醇中配得膜材溶液；将0.1~5质量份表皮生长因子、5~30质量份酵母提取物、5~30质量份微生物多糖和5~30质量份甘油溶于磷酸盐缓冲液中配得EGF溶液；所述无水乙醇的用量为每30~200mg氢化卵磷脂使用50ml的无水乙醇；所述磷酸盐缓冲液的用量为每0.1~5mg表皮生长因子使用IOml的磷酸盐缓冲液；
[0012](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力10~30Mpa、温度30~60°C条件下乳化20~50分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为30~60V，分离压力为5~15Mpa ;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体。
[0013]步骤(1)所述磷酸盐缓冲液的pH为6.8。
[0014]步骤(2)所述乳化的压力为20Mpa，温度为45°C，乳化时间为35分钟。
[0015]上述的表皮生长因子复合物脂质体在制备护肤品中的应用。[0016]所述表皮生长因子复合物脂质体在护肤品中的质量百分含量为0.01~10%，更加优选为质量百分含量0.05~5%。
[0017]所述护肤品中含有美白剂、保湿剂、抗氧化剂、表面活性剂、醇类化合物或水。
[0018]所述护肤品为溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、奶液、护肤液、粉、香皂、油、干粉、粉底液、湿粉或喷剂。
[0019]各种原料的药理疗效如下:
[0020]表皮生长因子(EGF)是最早发现的生长因子，对调节细胞生长、增殖和分化起着重要作用。在临床上广泛应用于各种创伤的治疗，尤其是皮肤创伤的治疗，获得良好的疗效。表皮生长因子EGF通过与EGF受体高亲和力的结合剌激表皮细胞(包括多种组织来源的上皮细胞、各种间质细胞)进入细胞分裂周期，启动细胞内一些重要功能基因活化、表达、分泌生物活性蛋白质等。促使胶原纤维呈线状排列，表皮细胞快速规则生长并及时覆盖创面，启动创面修复的过程，明显加速美容、整容术后及其它皮肤创伤等伤口愈合，并保持创面平整光滑，减少癍痕和色素沉着。现代研究发现，表皮生长因子能剌激外胚层和内胚层起源的各种细胞如角膜上皮和内皮细胞、表皮、真皮层细胞(如纤维母细胞)、乳腺腺泡及间质细胞等，使其增殖迁移，加快新陈代谢，达到嫩肤的效果。同时能促进各种蛋白质的生物合成，促进细胞外大分子的合成(如透明质酸、弹性纤维蛋白等)，增加皮肤含水量，进而增加皮肤弹性，滋润肌肤。促进细胞营养物质从细胞外主动运至细胞内，增加细胞内的营养，促进真皮层细胞分泌合成胶原纤维、多糖、糖蛋白等功能分子，使皮下真皮组织饱满、肌纤维排列整齐紧密，从而减少和消除皱纹。对表皮细胞的增殖有较强的促进作用，使表皮细胞变得年轻化，使得表皮组织中较少有色素及死亡细胞的残留等累积，使皮肤表现出嫩白无暇，消除色斑及色素沉着等异常皮肤表现，能有效遏制色斑的复发。
[0021]水飞蓟宾是菊科药用植物水飞蓟种子的种皮中提取所得的一种黄酮木脂素类化合物，能促进细胞的再生和修复，具有稳定细胞及细胞内生物膜的作用。作为强抗氧化剂，具有抗氧化和抗衰老的功效，能够清除人体内的自由基，延缓衰老。
[0022]薏仁油中富含薏仁酯、薏仁素、不饱和脂肪酸、蛋白质、维生素等，能清热排水减轻肌肤疲劳，能有效阻止不良细胞生长，修护细胞维持细胞弹性，促进皮肤的新陈代谢，令肌肤美白而富有弹性。同时也是中国特有的基础油，皮肤对薏仁油的吸收力强，兼具调和及功效的作用。
[0023]酵母提取物采用来自于酵母的天然原料精制而成，是酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的物质。其中含有丰富的氨基酸、肽、核酸(核苷酸)等生物活性成分，具有滋养皮肤、抗衰老等功能。
[0024]微生物多糖是来源于微生物的一种活性多糖，多糖作为人体皮肤真皮层重要组成成分，在皮肤新陈代谢过程中具有突出的调节作用，应用于化妆品中，能产生保湿、稳定、改善肤色、抗衰老和抗菌，保护血管，促进上皮细胞的细胞增殖和美化皮肤等功效，具有多效性、无毒性、来源广 泛、天然绿色等优点。
[0025]本发明的原理是:
[0026]表皮生长因子的护肤健肤作用主要依赖于它独特的生物活性，要充分利用它的生理特性，使它在皮肤新陈代谢过程中最大限度的发挥作用，一方面要保护其充分活性，另一方面还要保护皮肤的充分水分。在表皮生长因子复合物中，水飞蓟宾和薏仁油除具有本身的营养成分功效外，由于具有强的抗氧化性和抗紫外线的能力，对表皮生长因子的活性起到很好的保护作用。同时研究还发现表皮生长因子EGF与肽类化合物等保湿因子具有优良的正协同作用，因此在配制含表皮生长因子复合物中添加酵母提取物和微生物多糖，很好的起到保护EGF生物活性和皮肤充分的水分，从而提高EGF的透渗性和有利皮肤吸收EGF的作用。根据表皮生长因子复合物所具有的良好生理特性和脂质体的特点，将表皮生长因子复合物做成一种脂质体化妆品，由于脂质体的磷脂双分子膜和细胞有着相同的基本结构，两者有很强的亲合力，使脂质体及其所包含的表皮生长因子复合物容易进入到细胞内。脂质体进入皮肤深层后.有的进入细胞内，有的在细胞间停留。由于磷脂双分子膜的围绕，脂质体内的表皮生长因子复合物能缓慢地通过脂质体膜渗透出来，从而较长时间发挥作用.可较长时间保持活力，大大的提高了表皮生长因子复合物的生物利用度，从而对细胞进行修复和调整，全面的改善和更新代谢过程，促进皮肤细胞的生长，调节细胞中色素的平衡，合理调整皮肤结构，使皮肤细胞年轻化，达到滋润、抗皱、美白、嫩肤、祛痘斑等目的，通过细胞本身新陈代谢从根本上使皮肤光润富有弹性，保持肌肤自然健康。
[0027]本发明的表皮生长因子复合物脂质体是采用二氧化碳超临界技术制备。在超临界状态下二氧化碳兼有气液两相的双重特点，处于不同相态的二氧化碳有不同的密度，因而有不同的溶剂强度。利用超临界二氧化碳溶融、膨胀、沉析的性质，将含有EGF、酵母提取物和微生物多糖活性成分的溶液与含有水飞蓟宾和薏仁油营养成分的膜材溶液混合，在一定条件下通入超临界二氧化碳，使二氧化碳渗透并溶胀磷脂双分子层，保持一定时间后，然后快速释放压力，分离出表皮生长因子复合物脂质体。传统的多种制备脂质体的方法，如逆向蒸发法、薄膜分散法、超声波分散法、有机溶剂注入法等，这些方法在制备的过程中都必需加入对人体有害的有机溶剂，而超临界二氧化碳是一种无毒、惰性、不燃、廉价易得又环保的反应介质，采用超临界二氧化碳代替有机溶剂制备表皮生长因子复合物脂质体，其主要优点有:节约资源、没有有机溶剂残留，操作简单可行，提高了 EGF的利用率。
[0028]本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果:本发明工艺简单、安全无毒，对皮肤刺激性小，性质平和，效果稳定。
【具体实施方式】
[0029]下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0030]实施例1
[0031](I)将30mg氢化卵磷脂、IOmg胆固醇、5mg水飞蓟宾和5mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将0.1mg表皮生长因子、5mg酵母提取物、5mg微生物多糖和5mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0032](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达lOMpa、温度达30°C中乳化20分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为30°C，分离压力为5Mpa ;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体I。
[0033]实施例2
[0034](I)将50mg氢化卵磷脂、15mg胆固醇、IOmg水飞蓟宾和IOmg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将0.5mg表皮生长因子、8mg酵母提取物、8mg微生物多糖和IOmg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0035](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达15Mpa、温度达35°C中乳化25分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为35°C，分离压力为6Mpa ;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体II。
[0036]实施例3
[0037](I)将80mg氢化卵磷脂、25mg胆固醇、12mg水飞蓟宾和20mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将Img表皮生长因子、IOmg酵母提取物、IOmg微生物多糖和15mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0038](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达15Mpa、温度达40°C中乳化30分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为40°C，分离压力为SMpa ;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体III。[0039]实施例4
[0040](I)将IOOmg氢化卵磷脂、35mg胆固醇、15mg水飞蓟宾和20mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将2mg表皮生长因子、15mg酵母提取物、15mg微生物多糖和15mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0041](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达20Mpa、温度达45°C中乳化35分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为40°C，分离压力为IOMpa;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体IV。
[0042]实施例5
[0043](I)将150mg氢化卵磷脂、50mg胆固醇、20mg水飞蓟宾和25mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将3mg表皮生长因子、20mg酵母提取物、20mg微生物多糖和20mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0044](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达20Mpa、温度达50°C中乳化40分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为50°C，分离压力为IOMpa ;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体V。
[0045]实施例6
[0046](I)将180mg氢化卵磷脂、60mg胆固醇、25mg水飞蓟宾和25mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将4mg表皮生长因子、25mg酵母提取物、25mg微生物多糖和25mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0047](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达25Mpa、温度达55°C中乳化45分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为55°C，分离压力为12Mpa ；)收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体VI
[0048]实施例7[0049](I)将200mg氢化卵磷脂、80mg胆固醇、30mg水飞蓟宾和30mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将5mg表皮生长因子、30mg酵母提取物、30mg微生物多糖和30mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；[0050](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达30Mpa、温度达60°C中乳化50分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为60°C，分离压力为15Mpa;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体νπ。
[0051]对比例I
[0052](I)将IOOmg氢化卵磷脂、35mg胆固醇、15mg水飞蓟宾溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将2mg表皮生长因子、15mg酵母提取物、15mg微生物多糖和15mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0053](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达20Mpa、温度达45°C中乳化35分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为40°C，分离压力为IOMpa;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体A。
[0054]对比例2
[0055](I)将IOOmg氢化卵磷脂、35mg胆固醇、20mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将2mg表皮生长因子、15mg酵母提取物、15mg微生物多糖和15mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0056](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达20Mpa、温度达45°C中乳化35分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为40°C，分离压力为IOMpa;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体B。
[0057]对比例3
[0058](I)将IOOmg氢化卵磷脂、35mg胆固醇、15mg水飞蓟宾和20mg薏仁油溶于50ml的无水乙醇中配得膜材溶液；将2mg表皮生长因子和15mg甘油溶于IOml磷酸盐缓冲液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0059](2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力达20Mpa、温度达45°C中乳化35分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为40°C，分离压力为IOMpa;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体C。
[0060]通过对以上实施例1-7所得表皮生长因子复合物脂质体的粒径大小和包封率的测定，结果见表1。
[0061]表1表皮生长因子复合物脂质体粒径大小和包封率
[0062]
I实施例1~I实施例2~I实施例3~I实施例4~I实施例5~I实施例6 I实施例7 平均粒径 106.2nm 108.6nm 109.1nm 100.2nm 100.8nm 105.8nm 110.8nm
包封率 40%42%44%42%40%38%38%[0063]本发明表皮生长因子复合物脂质体的外观形态是直观地反映了脂质体质量的标准，上述实验结果表明，采用二氧化碳超临界技术制备的表皮生长因子复合物脂质体颗粒形态均为球形，边缘平整光滑，粒径为正态分布，各实验例之间的颗粒形态无明显差异，表明其制备方法合理稳定。采用超临界法制备脂质体的过程中，磷脂的乳化是非常重要的步骤，控制合适的乳化条件(压力、温度和时间)是脂质体粒径大小和包封率的质量关键，此时二氧化碳形成超临界流体，溶解磷脂的能力和非极性有机溶剂相似，将溶解于超临界二氧化碳中的磷脂溶液和水相均匀混合形成乳剂，减压除去二氧化碳后就可以得到均匀的脂质体溶液，同时也解决了有机溶剂残留的问题。最佳的乳化条件为压力20Mpa，温度45°C，时间35分钟。
[0064]应用实施示例
[0065](I)含表皮生长因子复合物脂质体的润肤霜的制备
[0066]取上述实施例和对比例所得表皮生长因子复合物脂质体分别配制成润肤霜，配方如下(按质量百分比计):
[0067]
【权利要求】
1.一种表皮生长因子复合物脂质体，其特征在于:该表皮生长因子复合物脂质体由下述按质量份数计的原料制备而成:
表皮生长因了0.1-5份
水飞蓟ft:5~30份惹仁油5~30 ?分 醇母提取物5~30份 微生物多糖5~30份氢化卵磷脂3 O~200份胆固醇10~80 f分廿油5~30份^
2.根据权利要求1所述的一种表皮生长因子复合物脂质体，其特征在于:该表皮生长因子复合物脂质体由下述按质量份数计的原料制备而成: 表皮生长因子0.5~3份水飞蓟宾IO~20份着仁油10~25份酵母提取物8~20份微生物多糖8~20份氢化卵磷脂50~150份 胆同醇15~50份 货油10~20份。
3.根据权利要求1所述的一种表皮生长因子复合物脂质体的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤: (1)将30~200质量份氢化卵磷脂、10~80质量份胆固醇、5~30质量份水飞蓟宾和5~30质量份薏仁油溶于无水乙醇中配得膜材溶液；将0.1~5质量份表皮生长因子、5~30质量份酵母提取物、5~30质量份微生物多糖和5~30质量份甘油溶于磷酸盐缓冲液中配得EGF溶液；所述无水乙醇的用量为每30~200mg氢化卵磷脂使用50ml的无水乙醇；所述磷酸盐缓冲液的用量为每0.1~5mg表皮生长因子使用IOml的磷酸盐缓冲液； (2)将上述膜材溶液和EGF溶液装入超临界高压釜中，密闭超临界高压釜，经二氧化碳高压泵通入CO2，在压力10~30Mpa、温度30~60°C条件下乳化20~50分钟，CO2流速为15L/h ;减压分离出乳化产物，分离温度为30~60°C，分离压力为5~15Mpa ;收集分离后的乳化产物，即得表皮生长因子复合物脂质体。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于:步骤(1)所述磷酸盐缓冲液的pH为6.8。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)所述乳化的压力为20Mpa，温度为45°C，乳化时间为35分钟。
6.根据权利要求1所述的一种表皮生长因子复合物脂质体在制备护肤品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于:所述表皮生长因子复合物脂质体在护肤品中的质量百分含量为0.01~10%。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于:所述表皮生长因子复合物脂质体在护肤品中的质量百分含量为0.05~5%。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于:所述护肤品中含有美白剂、保湿剂、抗氧化剂、表面活性剂、醇类化合物或水。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于:所述护肤品为溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、奶液、护肤液、粉、香皂、油、干粉、粉底液、湿粉或喷剂。
【文档编号】A61K8/73GK103505403SQ201310456300
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年9月29日 优先权日:2013年9月29日
【发明者】侯秋红 申请人:广州市娇兰化妆品有限公司