专利名称：海芦笋阿魏酸酯化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于海洋生物技术领域，涉及海芦笋阿魏酸酯化合物及其制备方法和用途。
背景技术：
盐生海芦笑俗称海蓬子或海豆,学名盐角草(Salicornia bigelovii),是一种鲜美多汁、口感咸脆的绿色海水蔬菜。研究证实海芦笋降低血压、血脂，促进脂肪向肌肉细胞转化，促进肝脏的新陈代谢，提高人体免疫力及预防帕金森病。体外活性研究表明，海芦笋提取物具有显著的抗氧化活性和抗肿瘤活性。阿魏酸是植物界普遍存在的一种酚酸，在植物中主要与细胞壁多糖和木质素交联构成细胞壁的一部分，是当归、川芎等中药的有效成分之一。由于其具有抗氧化活性和抑菌作用、且毒性较低，因而在医药、保健品、化妆品原料和食品添加剂等方面有着广泛的用途。有文献报道称，阿魏酸及其衍生物具有抗血拴、降血脂、消炎、防癌等生物活性。研究表明，阿魏酸钠和阿魏酸酯是阿魏酸的主要衍生物，这两种衍生物基本上保持了阿魏酸的生物学特性，而且，经过分子改造得到的阿魏酸衍生物比阿魏酸有着更强的生理活性和较低的毒性，这是由于阿魏酸分子中烷烃较短而且含有双键，亲水性强难以深入生物膜脂质双分子层结构中发挥抗氧化活性。目前，某些人工合成的抗氧化剂如二叔丁基对甲酚、叔丁基对苯二酚等会产生毒性物质，具有致癌性。所以，为了保护人体免受自由基的损伤并且延缓慢性疾病的发生，从植物中寻找高效无副作用的天然自由基清除剂具有重要意义。
发明内容
本发明旨在提供一种结构独特的具有强抗氧化活性的新天然产物。本发明的目的还在于提供一类新天然产物的制备方法及其新化合物在制备天然自由基清除剂中的用途。海芦笋阿魏酸酯化合物，即阿魏酸十五烷酯，结构式如式(I )所示
O
4 ^ —
HO
5式(I)分子中含有长链烷烃结构，由一分子阿魏酸与一分子十五烷醇缩合形成，是阿魏酸的衍生物之一。本发明所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，将新鲜采摘的海芦笋捣碎，以体积比为15飞:2的丙酮与水萃取2 3次，取丙酮层，抽滤，真空浓缩得到丙酮提取物；然后，将丙酮提取物用乙酸乙酯萃取2 3次，取乙酸乙酯层，真空浓缩得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物经300 400目常压硅胶柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱分离，洗脱组分真空浓缩后经薄层色谱法检测后，将Rf值相同，遇5%的硫酸溶液显色剂显色相同的合并，得到4个组分Fr. I、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3显黑色；取组分Fr. 3经常压硅胶柱，体积比为10(Γ80:1的环己烷-乙酸乙酯洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5 %的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1, Fr. 3-1用Sephadex LH_20纯化,体积比I 2:1的氯仿-甲醇洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1-1，组分Fr. 3-1-1再经常压硅胶柱分离，体积比50:1的环己烷-乙酸乙酯洗脱，薄层色谱法检测，得到Rf = O. 4的组分即为式(I)化合物。本发明所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，优选将新鲜采摘的海芦笋捣碎，以体积比为8:2的丙酮与水萃取三次，取丙酮层，抽滤，真空浓缩得到丙酮提取物；然后，将丙酮提取物用乙酸乙酯萃取三次，取乙酸乙酯层，真空浓缩得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物经300 400目常压硅胶柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱分离，洗脱组分真空浓缩后经薄层色谱法检测后，将Rf值相同，遇5%的硫酸溶液显色剂显色相同的合并，得到4个组分Fr. I、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3显黑色；取组分Fr. 3经常压硅胶柱，体积比为100:1的环己烷-乙酸乙酯洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1, Fr. 3-1用Sephadex LH-20纯化,体积比I: I的氯仿_甲醇洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1-1，组分Fr. 3-1-1再经常压硅胶柱分离，体积比50:1的环己烷-乙酸乙酯洗脱，薄层色谱法检测，得到Rf = O. 4的组分即为式(I)化合物。其中，所述的石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱的梯度为开始纯石油醚洗脱，逐渐增加丙酮比例，减少石油醚比例，直到纯丙酮洗脱，再逐渐增加甲醇比例，减少丙酮比例，直到纯甲醇洗脱。所述的薄层色谱法为(I)显色剂5%的硫酸溶液(乙醇配置)；(2)展开剂环己烷乙酸乙酯=10 :1，式(I )化合物所在斑点显黑色，可根据TLC斑点显色对式(I )化合物进彳了追踪。所述的常压硅胶柱的硅胶目数为300 400目。本发明所述的阿魏酸十五烷酯在制备抗氧化剂和/或天然自由基清除剂中的应用。有益效果本发明从海芦笋中分离出的阿魏酸十五烷酯为首次从天然资源中得到的化合物，具有强氧化活性及很强的清除自由基活性，可作为海芦笋中的标志性抗氧化活性成分和天然自由基清除剂。
图I不同浓度下阿魏酸十五烷酯的总抗氧化活性图2不同浓度下阿魏酸十五烷酯的DPPH自由基清除活性图3不同浓度下阿魏酸十五烷酯的超氧阴离子清除活性
具体实施例方式实施例I化合物的制备新鲜采摘的海芦笋26. 4kg，用匀浆搅拌机捣碎，置于20L的容量瓶中，加8:2的丙酮与水进行萃取，放置24h，萃取三次。用布氏漏斗抽滤，得到的溶液用旋转蒸发仪在30°C真空浓缩得丙酮提取物。然后，丙酮提取物用乙酸乙酯萃取三次，用旋转蒸发仪在30°C真空浓缩得乙酸乙酯层提取物。乙酸乙酯层(71g)用50g硅胶干法拌样后上装有200g硅胶(300-400目)的常压柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱分离，即开始纯石油醚洗脱，逐渐增加丙酮比例，减少石油醚比例，直到纯丙酮洗脱，再逐渐增加甲醇比例，减少丙酮比例，直到纯甲醇洗脱。洗脱的组分真空浓缩后进行TLC检测，TLC条件为(I)显色剂为5%的硫酸溶液，溶剂为乙醇；(2)展开剂环己烷乙酸乙酯=10 1 ;将Rf值相同，遇硫酸显色剂显色相同的进行合并，得到4个组分，分别用Fr. I、Fr. 2、Fr. 3和Fr. 4表示，其中，Fr. 3显黑色。
组分Fr. 3 (2. 2g)，进一步上常压硅胶柱，环己烷-乙酸乙酯(体积比100:1)洗脱，TLC检测，条件同上，将Rf值相同，遇硫酸显色剂显色相同的进行合并，得到组分Fr. 3-1和Fr. 3-2，其中，组分Fr. 3-1遇硫酸显黑色；组分Fr. 3-1用S印hadex LH-20纯化，氯仿-甲醇(体积比1:1)洗脱，TLC检测，条件同上，得到遇硫酸显黑色的组分Fr. 3-1-1，组分Fr. 3-1-1继续用常压硅胶柱(300-400目)分离，环己烷-乙酸乙酯(体积比50:1)洗脱，得纯化合物，TLC检测，条件同上，得到Rf = O. 4，遇硫酸显黑色的斑点，即为式(I )化合物阿魏酸十五烷酯(30. 5mg)。阿魏酸十五烷酯黄色固体；阳离子低分辨ESI-MS m/z 405[M+H]+ ；UVAmax(CH3OH)nm(log ε )214,236,320 ；IR_KBr, cnT1) :3416,3204,2042,1700，1678，1585，1510，1431，1300，1263，1168，1123，1033,730,632 及 13C NMR 数据见表 I。表I化合物的核磁数据
权利要求
1.阿魏酸十五烷酯，其特征在于结构式如式(I)所示
2.权利要求I所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，其特征在于将新鲜采摘的海芦笋捣碎，以体积比为15飞:2的丙酮与水萃取2 3次，取丙酮层，抽滤，真空浓缩得到丙酮提取物；然后，将丙酮提取物用こ酸こ酯萃取2 3次，取こ酸こ酯层，真空浓缩得到こ酸こ酯提取物；こ酸こ酯提取物经300 400目常压硅胶柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱分离，洗脱组分真空浓缩后经薄层色谱法检测后，将Rf值相同，遇5 %的硫酸溶液显色剂显色相同的合并，得到4个组分Frl、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3显黑色；取组分Fr. 3经常压硅胶柱，体积比为10(Γ80:1的环己烷-こ酸こ酯洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1, Fr. 3_1用Sephadex LH-20纯化,体积比1 2:1的氯仿-甲醇洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1-1，组分Fr. 3-1-1再经常压硅胶柱分离，体积比50:1的环己烷-こ酸こ酯洗脱，薄层色谱法检测，得到Rf = O. 4的组分即为式(I)化合物。
3.根据权利要求2所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，其特征在于将新鲜采摘的海芦笋捣碎，以体积比为8:2的丙酮与水萃取三次，取丙酮层，抽滤，真空浓缩得到丙酮提取物；然后，将丙酮提取物用こ酸こ酯萃取三次，取こ酸こ酯层，真空浓缩得到こ酸こ酯提取物；こ酸こ酯提取物经300 400目常压硅胶柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱分离，洗脱组分真空浓缩后经薄层色谱法检测后，将Rf值相同，遇5 %的硫酸溶液显色剂显色相同的合并，得到4个组分Frl、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3显黑色；取组分Fr. 3经常压硅胶柱，体积比为100:1的环己烷-こ酸こ酯洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1, Fr. 3-1用Sephadex LH-20纯化,体积比I: I的氯仿_甲醇洗脱，经薄层色谱法检测得到遇5%的硫酸溶液显色剂显黑色的组分Fr. 3-1-1，组分Fr. 3-1-1再经常压硅胶柱分离，体积比50:1的环己烷-こ酸こ酯洗脱，薄层色谱法检测，得到Rf = O. 4的组分即为式(I)化合物。
4.根据权利要求3所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，其特征在于所述的石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脱是开始纯石油醚洗脱，逐渐增加丙酮比例，減少石油醚比例，直到纯丙酮洗脱，再逐渐增加甲醇比例，減少丙酮比例，直到纯甲醇洗脱。
5.根据权利要求3所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，其特征在于所述的薄层色谱法条件为(I)显色剂为5%的硫酸溶液，溶剂为こ醇；(2)展开剂环己烷こ酸こ酷=10 :1。
6.根据权利要求3所述的阿魏酸十五烷酯的制备方法，其特征在于所述的常压硅胶柱的娃胶目数为300 400目。
7.权利要求I所述的阿魏酸十五烷酯在制备抗氧化剂和/或天然自由基清除剂中的应用。
全文摘要
本发明属于海洋生物技术领域，公开了海芦笋阿魏酸酯化合物及其制备方法和用途。海芦笋阿魏酸酯化合物，即阿魏酸十五烷酯，结构式如式(Ⅰ)所示式(Ⅰ)。本发明从海芦笋中分离出的阿魏酸十五烷酯为首次从天然资源中得到的化合物，具有强氧化活性及很强的清除自由基活性，可作为海芦笋中的标志性抗氧化活性成分和天然自由基清除剂。
文档编号A61K31/216GK102850220SQ201210384769
公开日2013年1月2日 申请日期2012年10月11日 优先权日2012年10月11日
发明者辛志宏, 王惠, 张敏, 赵育卉, 王晓敏 申请人:南京农业大学