专利名称：一种从野生石龙芮里提取总黄酮的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生石龙芮里提取总黄酮的方法，特别是涉及一种利用超声波提取、超滤分离并与聚酰胺-大孔树脂技术藕联，纯化总黄酮的新方法。
背景技术：
石龙苘学名Ranunculus sceleratus L.是毛茛科植物石龙苘的全草,一年生或二年生草本，高10-50cm。须根簇生。茎直立，上部多分枝，无毛或疏生柔毛。基生叶有长柄，长3-15cm;叶片轮廓肾状圆形，长l-4cm，宽1. 5_5cm，茎下部叶与基生叶相同，上部叶较小，3全裂，裂片披针形或线形，无毛，基部扩大成膜质宽鞘，抱茎。聚伞花序有多数花；花梗长l-2cm,无毛；萼片5,椭圆形,长2-3. 5mm,外面有短柔毛；花瓣5,倒卵形,长1. 5_3mm,淡黄色，基部有短爪，蜜槽呈棱状袋穴；花期4-6月，果期5-8月。国内一般用水提取，正丁醇萃取，或乙醇热回流提取生产总黄酮，存在着提取时间长、收率低，活性成分损失大等缺点。本发明的不同之处在于采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术的新方法。
发明内容
本发明优点本发明主要采用超声波提取、超滤分离并与聚酰胺-大孔树脂技术藕联的新方法，纯化总黄酮，总黄酮纯度高；本发明方法简单易操作，适合大生产，成本低，选用食品添加剂允许使用的乙醇做提取溶剂，无化学残留。为实现上述目的，本发`明采用的技术方案是—种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其步骤如下(I)超声提取石龙芮干燥根茎粉碎至40-60目，加入体积浓度70-75%乙醇，在一定料液比下超声波提取，超声频率50-200KHZ，超声时间40-60min ；(2)过滤回收乙醇溶剂，将经步骤(I)处理的提取液走管道过滤机，得初提物；(3)超滤稀释初提物，截留分子量10000-20000，过滤压力O. 2-0. 3MPa，膜过滤提取液并保持一定的回收率(4)聚酰胺初步精制将所得溶液拌入干燥的聚酰胺树脂，先以水洗去水溶性杂质，再用20%、40%、60%、80%乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化
将提取液初步浓缩，加少量乙醇与1/4-1/6药材用量的聚酰胺树脂拌合，挥去溶齐U，将聚酰胺放置树脂柱中，水洗脱至无色，取出铺在填充于3倍至5倍于药材用量的大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为3 1-5 1，流速为3-5BV/h ;(6)乙醇洗脱在常温常压下，以l_3BV/h流速，用一定体积浓度乙醇液洗脱，洗脱体积为5-7BV ；(7)重结晶取纯化的总黄酮按一定比例加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的总黄酮，纯度在98%以上。
具体实施例方式实施案例1:一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其步骤如下(I)超声提取IOOkg石龙芮干燥根茎粉碎至40目，加入70%乙醇，超声波提取，超声频率50KHZ，料液比1: 6，超声时间40min;(2)过滤回收乙醇溶剂，将经步骤(I)处理的提取液走管道过滤，得初提物；(3)超滤稀释初提物，走截留分子量10000的超滤膜，过滤压力O. 2MPa，过滤温度控制在30°C，回收率控制在80% ；(4)聚酰胺初步精制将所得溶液与干燥的60目聚酰胺树脂混合，先以水洗去水溶性杂质，再用20%、40%,60%,80%乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/4药材用量的聚酰胺粉拌合，挥去溶剂，将聚酰胺放置树脂柱中，水洗脱至无色，取出铺在填充3倍于药材用量的NKA-1I大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为3 1，流速为3BV/h;(6)乙醇洗脱在常温常压下，以lBV/h流速，用乙醇液洗脱，洗脱体积为5BV，乙醇浓度为70% ；(7)重结晶取纯化的石龙芮总黄酮按1: 50的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的总黄酮256kg，纯度为98. 03%。实施案例2 :—种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其步骤如下(1)超声提取50kg石龙芮干燥根茎粉碎至20目，加入75%乙醇，超声波提取，超声频率100KHZ，料液比1: 8，超声时间50min;(2)过滤回收乙醇溶剂，将经步骤(I)处理的提取液走管道过滤，得初提物；(3)超滤稀释初提物，走截留分子量15000的超滤膜，过滤压力O. 2MPa，过滤温度控制在40°C，回收率控制在90% ；(4)聚酰胺初步精制将所得溶液与干燥的80目聚酰胺树脂混合，先以水洗去水溶性杂质，再用20%、40%,60%,80%乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/5药材用量的聚酰胺粉拌合，挥去溶剂，将聚酰胺放置树脂柱中，水洗脱至无色，取出铺在填充于4倍于药材用量的HPD100大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为4 1，流速为4BV/h;(6)乙醇洗脱在常温常压下，以3BV/h流速，用乙醇液洗脱，洗脱体积为6BV，乙醇浓度为80% (7)重结晶 取纯化的石龙芮总黄酮按1: 100的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的总黄酮1. 31kg，纯度为98.1 %。实施案例3 :—种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其步骤如下(I)超声提取200kg石龙芮干燥根茎粉碎至40目，加入75%乙醇，超声波提取，超声频率80KHZ，料液比1: 10，超声时间60min ;(2)过滤回收乙醇溶剂，将经步骤(I)处理的提取液走管道过滤，得初提物；(3)超滤稀释初提物，走截留分子量20000的超滤膜，过滤压力O. 3MPa，过滤温度控制在45 °C，回收率控制在95% ；(4)聚酰胺初步精制将所得溶液与干燥的80目聚酰胺树脂混合，先以水洗去水溶性杂质，再用20%、40%,60%,80%乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/6药材用量的聚酰胺粉拌合，挥去溶剂，将聚酰胺放置树脂柱中，水洗脱至无色，取出铺在填充于5倍于药材用量的AB-8大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为5 1，流速为5BV/h;(6)乙醇洗脱在常温常压下，以2BV/h流速，用乙醇液洗脱，洗脱体积为7BV，乙醇浓度为85% ；(7)重结晶取纯化的石龙芮总黄酮按1: 100的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的总黄酮5. 03kg，纯度为98. 42%。
权利要求
1.一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其步骤如下 (1)超声提取 石龙芮干燥根茎粉碎至40-60目，加入体积浓度70-75%乙醇，超声波提取，超声频率50-200KHZ，超声时间 40-60min ； (2)过滤 回收乙醇溶剂，将经步骤(I)处理的提取液走管道过滤机，得初提物； (3)超滤 稀释初提物，截留分子量10000-20000，过滤压力0. 2-0. 3MPa，膜过滤提取液； (4)聚酰胺初步精制 将所得溶液拌入干燥的聚酰胺树脂，先以水洗去水溶性杂质，再用20 %、40 %、60 %、80%乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液； (5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化 将提取液初步浓缩，加少量乙醇与1/4-1/6药材用量的聚酰胺树脂拌合，1/5挥去溶剂，，将聚酰胺放置树脂柱中，水洗脱至无色，取出铺在填充于3倍至5倍于药材用量的大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为3 1-5 1，流速为3-5BV/h ; (6)乙醇洗脱 在常温常压下，以l-3BV/h流速，用一定体积浓度乙醇液洗脱，洗脱体积为5-7BV ； (7)重结晶 取纯化的总黄酮按一定比例加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的总黄酮，纯度在98 以上。
2.根据权利要求1所述的一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其特征是在所述的步骤(I)中，酶解过程中料液比为1: 6-10。
3.根据权利要求2所述的一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其特征是在所述的步骤(3)中，过滤温度控制在30-45 V，回收率控制在80-95 %。
4.根据权利要求3所述的一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其特征是在所述的步骤(4)中，聚酰胺树脂为60-80 目。
5.根据权利要求4所述的一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其特征是在所述的步骤(5)中，大孔树脂型号为NKA-11、HPD100、AB-8 树脂中的一种。
6.根据权利要求5所述的一种采用超声波提取法，超滤分离藕联聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术提纯石龙芮总黄酮的新方法，其特征是在所述的步骤￠)中，洗脱乙醇体积浓度为 70-85%。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生石龙芮里提取总黄酮的方法，特别是涉及一种利用超声波提取、超滤分离并与聚酰胺-大孔树脂技术藕联，纯化总黄酮的新方法。本发明优点提取方便快捷，提取纯度高，适用于大生产。1、应用超声波提取技术，有效成分提取速度快，含量高。2、超滤分离是在常温下进行的，避免了因热效应引起的有效成分结构变化及生理活性降低的问题。3、聚酰胺-大孔树脂藕联技术，进一步提高了有效成分的纯度，可使总黄酮有效成分活性更高。本发明先用乙醇做溶剂经过超声波预处理，低温超滤分离，再经聚酰胺-大孔树脂二次纯化，有效成分总黄酮纯度提高到98.42％。
文档编号A61K36/71GK103040965SQ20121059563
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者张亚红, 姚德坤, 姚德利, 万莉 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司