一种三棵针提取物的制备方法
【专利摘要】本发明属于中药提取【技术领域】，具体涉及一种三棵针提取物的制备方法。该方法包括以下步骤：a、三颗针破壁粉碎，于沸水中提取至少两次，每次30-40分钟，过滤；b、合并滤液，滤液浓缩为浸膏；c、浸膏干燥得粗提物；d、粗提物用大孔树脂层析柱进行纯化，纯化时先用碱水洗涤除杂，然后用乙醇对层析柱洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液浓缩、干燥得盐酸小檗碱含量≥80%的三棵针提取物。本发明的能够实现三颗针中盐酸小檗碱的提取分离，并且工艺简单，能耗小，时间短，实施容易，对设备配置要求低，同时提取效率高，并且纯度好。
【专利说明】一种三棵针提取物的制备方法
[0001]【技术领域】
本发明属于中药提取【技术领域】，具体涉及一种三棵针提取物的制备方法。
[0002]【背景技术】
三棵针又名细叶小檗、针雀、铜针刺、刺黄连，是小檗科，小檗属类植物的俗称，落叶灌木。三棵针的提取物以其天然性、无抗药性、多功能性及毒副作用较小等优点成为抗生素的替代品之一。
[0003]三棵针提取物的主要活性成分为小檗碱，又称黄连素，在临床上常作为广谱抗生素使用，近年来，研究发现黄连素还有许多新用途，特别是心内科、肿瘤科、器官移植方面的研究应用有新的发现(宋君，小檗碱临床应用及研究新进展，现代医药卫生2008年24卷第11 期，1652-1654)。
[0004]考虑到小檗碱在三棵针中具有上述特殊功效，有必要进行提取分离。而国内对三棵针活性物质的提取分离研究较少，主要采用酸溶碱沉盐析的方法进行提取，如下:取三棵针根，切片，加8倍量水，加硫酸调节pH值至I-2，浸溃2次，每次24小时，滤过，滤液合并，用石灰乳调节PH值至12，静置12小时，滤过，滤液加3倍量8%氯化钠溶液，用盐酸调节pH值至8-9，静置12小时，滤过，取沉淀，干燥，即得粗制品。将粗制品加15倍 量水，加热至80°C搅拌使溶解，滤过，滤液加盐酸调节pH值至I-2，静置24小时，滤过，沉淀用水洗去多余的盐酸，在80°C以下干燥，即得。有人用正交法对提取液的浓度，浸泡提取时间，盐析时的PH值和盐析液的含盐量4个因素进行了优化(赵永生，胡大泽，三棵针提取工艺的优化选择，中国民族民间医药杂志2003年总第64期，299-300)，该工艺周期长，一般需要3_4天，收率低，且设备必须耐酸，要求高。
[0005]
【发明内容】
本发明涉及一种提取时间短的三棵针提取物的制备方法。
[0006]本发明采用以下技术方案:
一种三棵针提取物的制备方法，包括以下步骤:a、三颗针破壁粉碎，于沸水中提取至少两次，每次30-40分钟，过滤；b、合并滤液，滤液浓缩为浸膏；c、浸膏干燥得粗提物；d、粗提物用大孔树脂层析柱进行纯化，纯化时先用碱水洗涤除杂，然后用乙醇对层析柱洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液浓缩、干燥得盐酸小檗碱含量> 80%的三棵针提取物。
[0007]进一步精制，步骤d得到的三棵针提取物还可继续采用C18反相硅胶填料色谱柱进一步纯化，用85-95% (v/v)乙醇流动相洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩、干燥得盐酸小檗碱含量> 95%的三棵针提取物。
[0008]步骤a中沸水用量为三颗针质量的8-15倍。
[0009]步骤d中碱水为浓度0.5mol/L的氢氧化钠溶液，碱水的用量为层析柱填料体积的10-15倍，乙醇体积浓度为85-95%。
[0010]步骤d中大孔树脂层析柱中的填料为HP600大孔树脂。
[0011]步骤a中破壁粉碎时采用超微粉碎机。
[0012]本发明的能够实现三颗针中盐酸小檗碱的提取分离，并且工艺简单，能耗小，时间短，只需24h左右，实施容易，对设备配置要求低，同时提取效率高，并且纯度好。
[0013]【具体实施方式】 实施例1:
a、称取IOkg三棵针饮片，通过超微粉碎机进行破壁打碎；于8倍质量的纯化水中蒸汽煮沸，动态搅拌，时间30分钟，过100目筛网，提取2次；
b、将滤液合并，真空浓缩为浸膏；
C、浸膏喷雾干燥得粗提物；
d、粗提物用HP600大孔树脂层析柱进行纯化，先用层析柱填料体积10倍的0.5mol/L的氢氧化钠溶液洗涤除杂，再用90% (v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液真空浓缩成浸膏，浸膏喷雾干燥得提取物，其中盐酸小檗碱的含量达80.9% ；
e、精制纯化，将上述提取物进行反相硅胶色谱分离，固定相为C18反相硅胶，洗脱流动相90% (v/v)乙醇，收集洗脱液，洗脱液浓缩、干燥得纯度达96.1%的三棵针提取物。
[0014]实施例2:
a、称取IOkg三棵针饮片，通过超微粉碎机进行破壁打碎；于12倍质量的纯化水中蒸汽煮沸，动态搅拌，时间30分钟，过100目筛网，提取2次；
b、将滤液合并，真空浓缩为浸膏；
C、浸膏喷雾干燥得粗提物；
d、粗提物用HP600大孔树脂层析柱进行纯化，先用层析柱填料体积12倍的0.5mol/L的氢氧化钠溶液洗涤除杂，再用95% (v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液真空浓缩成浸膏，浸膏喷雾干燥得提取物，其中盐酸小檗碱的含量达81.6% ；
e、精制纯化，将上述提取物进行反相硅胶色谱分离，固定相为C18反相硅胶，洗脱流动相95% (v/v)乙醇，收集洗脱液，洗脱液浓缩、干燥得纯度达97.3%的三棵针提取物。
[0015]实施例3:
a、称取IOkg三棵针饮片，通过超微粉碎机进行破壁打碎；于15倍质量的纯化水中蒸汽煮沸，动态搅拌，时间30分钟，过100目筛网，提取2次；
b、将滤液合并，真空浓缩为浸膏；
C、浸膏喷雾干燥得粗提物；
d、粗提物用HP600大孔树脂层析柱进行纯化，先用层析柱填料体积15倍的0.5mol/L的氢氧化钠溶液洗涤除杂，再用85% (v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液真空浓缩成浸膏，浸膏喷雾干燥得提取物，其中盐酸小檗碱的含量达82.1% ；
e、精制纯化，将上述提取物进行反相硅胶色谱分离，固定相为C18反相硅胶，洗脱流动相85% (v/v)乙醇，收集洗脱液，洗脱液浓缩、干燥得纯度达96.9%的三棵针提取物。
【权利要求】
1.一种三棵针提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤:a、三颗针破壁粉碎，于沸水中提取至少两次，每次30-40分钟，过滤；b、合并滤液，滤液浓缩为浸膏；c、浸膏干燥得粗提物；d、粗提物用大孔树脂层析柱进行纯化，纯化时先用碱水洗涤除杂，然后用乙醇对层析柱洗脱，收集乙醇洗脱液，乙醇洗脱液浓缩、干燥得盐酸小檗碱含量> 80%的三棵针提取物。
2.如权利要求1所述的三棵针提取物的制备方法，其特征在于，步骤d得到的三棵针提取物采用C18反相硅胶填料色谱柱进一步纯化，用85-95%乙醇流动相洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩、干燥得盐酸小檗碱含量> 95%的三棵针提取物。
3.如权利要求1或2所述的三棵针提取物的制备方法，其特征在于，步骤a中沸水用量为三颗针质量的8-15倍。
4.如权利要求1或2所述的三棵针提取物的制备方法，其特征在于，步骤d中碱水为浓度0.5mol/L的氢氧化钠溶液，碱水的用量为层析柱填料体积的10-15倍，乙醇体积浓度为85-95%。
5.如权利要求1或2所述的三棵针提取物的制备方法，其特征在于，步骤d中大孔树脂层析柱中的填料为HP600大孔树脂。
6.如权利要 求1或2所述的三棵针提取物的制备方法，其特征在于，步骤a中破壁粉碎时采用超微粉碎机。
【文档编号】A61K36/29GK103446214SQ201310363150
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年8月20日 优先权日:2013年8月20日
【发明者】何胜利, 程永科, 李俊霞, 白艳鹤 申请人:天津药业集团新郑股份有限公司