一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，为硫酸铵梯度法，包括：取磷脂、胆固醇和吐温-80，加入乙醇中超声混合，使其充分溶解；将混合后的溶液于43.5℃下恒速滴入硫酸铵溶液中，于旋转蒸发仪减压蒸发，除去溶液中的乙醇，装于透析袋中，用100倍体积的PBS溶液透析24h；透析后，过0.45μm微孔滤膜，0.22μm微孔滤膜，即得空白脂质体；取绞股蓝皂苷溶液加入空白脂质体中，水浴振荡载药，即制得绞股蓝皂苷脂质体。该制备方法操作方便，步骤少，当工艺选择的脂药比为8：1，膜材比为6:1，载药温度为55℃，载药时间为11min时，包封率可达90.17±0.38%。所制备的脂质体包封率高，载药量大，粒径小，形态均一，适合大批量生产，能提高绞股蓝皂苷的临床应用价值。
【专利说明】一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物制备【技术领域】，具体涉及一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法。【背景技术】
[0002]现代药理学研究证明，绞股蓝皂苷具有降低血脂、降血压、防止衰老、抑制肿瘤、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏、保护血管等作用。但是，绞股蓝皂苷味苦，适口性差，口服给药效果较差，且其水溶液大多会破坏红血球，有溶血现象，一般不宜制成注射剂，造成给药困难，生物利用度非常低，大大降低了绞股蓝皂苷的临床应用价值。脂质体作为一种新型药物载体，可以明显改善药物的体内动力学特性和组织分布，达到靶向定位和缓释的效果，还能减少药物的用量及降低毒副作用。
【发明内容】
[0003]发明目的:针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法。
[0004]技术方案:为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下:
[0005]一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，为硫酸铵梯度法，包括如下步骤:
[0006]I)取磷脂、胆固醇和吐温-80，加入乙醇中超声混合，使其充分溶解；
[0007]2)将混合后的溶液于43.5°C下恒速滴入硫酸铵溶液中，于旋转蒸发仪减压蒸发，除去溶液中的乙醇，装于透析袋中，用100倍体积的PBS溶液透析24h ；
[0008]3)透析后，过0.45 y m微孔滤膜，0.22 U m微孔滤膜，即得空白脂质体；
[0009]4)取绞股蓝皂苷溶液加入空白脂质体中，40~60°C水浴振荡5~25min载药，即制得绞股蓝皂苷脂质体；
[0010]其中，乙醇与硫酸铵体积比为6~14:10 ;硫酸铵浓度分别为0.15~0.35mol/L ；大豆磷脂与绞股蓝皂苷的质量比为2~10:1 ;大豆磷脂和胆固醇的质量比为3~8:1。
[0011 ] 乙醇与硫酸铵体积比优选为8:10。
[0012]步骤4)中，温度优选为55 °C。
[0013]硫酸铵浓度优选为0.25mol/L。
[0014]大豆磷脂与绞股蓝皂苷的质量比优选为8:1。
[0015]大豆磷脂和胆固醇的质量比优选为6:1。
[0016]载药时间优选为10~llmin。
[0017]优选的工艺参数为:大豆磷脂与绞股蓝皂苷的质量比为8: 1，大豆磷脂和胆固醇的质量比为6: 1，载药温度为55°C，载药时间为llmin。
[0018]有益效果:与现有技术相比，本发明的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，操作方便，步骤少，当工艺选择的脂药比为8:1，膜材比为6:1，载药温度为55°C，载药时间为I Imin时，包封率可达90.17±0.38% (n=3)，具有很好的工业实用性。所制备的脂质体包封率高，载药量大，粒径小，形态均一，适合大批量生产，能提高绞股蓝皂苷的临床应用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是绞股蓝皂苷纳米脂质体的电镜图。
【具体实施方式】
[0020]下面结合具体实施例进一步阐明本发明，本【具体实施方式】在以本发明技术方案为前提下进行实施，应理解这些方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0021]以下实施例中所使用的主要药物、试剂、设备和计算方法具体如下:
[0022]试验药物:绞股蓝提取物购于西安开来生物工程有限公司(批号K120212)，经检验绞股蓝阜苷(the total gypenosides in Gynostemma pentaphyllum, GPS)含量高于98%。
[0023]主要试剂:大豆卵磷脂(批号20120728)，上海太伟磷脂有限公司；胆固醇(批号20120908)，天津市博迪化学有限公司；Triton-100(批号9002-93-1 )，上海源叶生物科技有限公司；Sephadex G_50中性(批号9048_71_9)，上海源叶生物科技有限公司；香草醛,天津市科密欧化学试剂开发中心。
[0024]主要仪器设备:旋转蒸发器RE-52A，上海亚荣生化仪器厂；SHZ_ III型循环水真空泵，上海亚荣生化仪器厂；HH-2数显恒温水浴锅，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；KQ5200B型超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司；TDL — 880 一 2B离心机，上海安亭科学仪器厂；754紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司。
[0025]实施例1
[0026]绞股蓝皂苷脂质体的制备:采用硫酸铵梯度法制备绞股蓝皂苷脂质体。精确称取磷脂240mg、胆固醇40mg和60mg吐温-80，加入乙醇8mL(乙醇用量按照实际制备的脂质体终浓度计算即可)中超声混合，使其充分溶解。将混合后的溶液于43.5°C下恒速滴入IOmL硫酸铵溶液(0.25mol/L)中，于旋转蒸发仪减压蒸发，除去溶液中的乙醇，装于透析袋中，用100倍体积的PBS溶液透析24h。透析后，过0.45 ii m微孔滤膜2次，0.22 u m微孔滤膜2次，即得IOmL空白脂质体。精确吸取10mL3mg/mL绞股蓝皂苷水溶液加入等体积空白脂质体中，55°C (载药温度)水浴振荡Ilmin (载药时间)载药，即制得20mLl.5mg/mL绞股蓝皂苷纳米脂质体。
[0027]标准曲线的制备:精确称取干燥至恒重的绞股蓝皂苷标准品10mg，用蒸馏水溶解，使其浓度为2mg/mL，取0、40、80、120、160、200ii L分别置于IOmL具塞试管中，蒸馏水稀释至0.2mL，分别加入现配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，摇匀，置于60°C恒温水浴加热15min后取出，流水冷却，再各加5mL冰醋酸并摇匀，随行试剂做空白在550nm波长处分别测其吸光值A55tlt5以吸光值(Y)与绞股蓝皂苷浓度(X) (mg/mL)做回归处理，作标准曲线，得回归方程 Y=0.4585X-0.0013 (R2=0.9997，n=5)。
[0028]Sephadex G-50 —微柱离心法:
[0029]I)微型S印hadex G-50柱的制备:将S印hadex-50 (中性)置于生理盐水中室温溶胀5h以上,装于2.5mL注射器中，1500r ? mirT1离心5min,除去水分,备用。
[0030]2)除去游离的绞股蓝皂苷:精密量取0.5mL绞股蓝皂苷脂质体混悬液滴入凝胶床顶部，1500r ? mirT1离心5min,游离的绞股蓝阜苷吸附于Sephadex G-50微柱上,收集离心液，即包封的绞股蓝皂苷纳米脂质体。
[0031]样品包封率及载药量的计算:精密吸取微柱离心后的脂质体溶液IOOiiL,用20 u L体积分数为10%Triton X-100溶解，加蒸馏水至0.2mL,以同样处理的空白脂质体做空白对照，按上述方法测定样品吸光值A55tl，将吸光值求平均数后代入回归方程，计算。
[0032]包封率=CL/CT
[0033]式中Q为包封的皂苷量；CT为脂质体中包封的皂苷与游离皂苷之和。
[0034]载药量=ffL/ffP
[0035]式中\为包封皂苷的质量；WP为大豆卵磷脂和胆固醇的质量之和。
[0036]实施例2绞股蓝皂苷脂质体制备工艺的优化
[0037]按实施例1的方法制备绞股蓝皂苷脂质体。在其他条件不变的情况下，加入的乙醇体积分别为6、8、10、12、14mL，观察不同体积乙醇对绞股蓝皂苷脂质体包封率和载药量的影响。
[0038]不同体积乙醇对绞股蓝皂苷脂质体包封率和载药量的影响见表1，由表1可知，乙醇与硫酸铵体积比为8:10时包封率与载药量均为最大值。
[0039]表1成膜有机溶剂对包封率和载药量的影响
[0040]
【权利要求】
1.一种绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于，为硫酸铵梯度法，包括如下步骤: 1)取磷脂、胆固醇和吐温-80，加入乙醇中超声混合，使其充分溶解； 2)将混合后的溶液于43.5°C下恒速滴入硫酸铵溶液中，于旋转蒸发仪减压蒸发，除去溶液中的乙醇，装于透析袋中，用100倍体积的PBS溶液透析24h ； 3)透析后，过0.45 um微孔滤膜、0.22 u m微孔滤膜，即得空白脂质体； 4)取绞股蓝皂苷溶液加入空白脂质体中，4(T60°C水浴振荡5~25min载药，即制得绞股蓝皂苷纳米脂质体； 其中，乙醇与硫酸铵体积比为6~14:10 ;硫酸铵浓度分别为0.15^0.35mol/L ;大豆磷脂与绞股蓝皂苷的质量比为2~10:1 ;大豆磷脂和胆固醇的质量比为31:1 ;大豆磷脂与吐温-80的质量比是4:1。
2.根据权利要求1所述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:乙醇与硫酸铵体积比为8:10。
3.根据权利要求1所述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:步骤4)中，温度为55°C。
4.根据权利要求1所 述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:步骤I)中，硫酸铵浓度为0.25 mol/L。
5.根据权利要求1所述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:大豆磷脂与绞股蓝皂苷的质量比为8:1。
6.根据权利要求所述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:大豆磷脂和胆固醇的质量比为6:1。
7.根据权利要求6所述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:步骤4)中，振荡10~11 min。
8.根据权利要求1所述的绞股蓝皂苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于:大豆磷脂与绞股蓝皂苷的质量比为8: 1，大豆磷脂和胆固醇的质量比为6: 1，载药温度为55°C，载药时间为I Imin。
【文档编号】A61P9/12GK103520254SQ201310456074
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月29日 优先权日:2013年9月29日
【发明者】王德云, 余韵, 胡元亮, 刘家国, 黄叶娥, 陶阳, 武毅 申请人:南京农业大学