纳米级颗粒型辅料的制作方法
【专利摘要】本发明公开了纳米级颗粒及其制备方法，该方法包括，合成琥珀酰化葡聚糖；合成胺基化叶酸类似物；合成叶酸-葡聚糖缀合物；以及，将药物化合物混合入叶酸-葡聚糖缀合物中。本发明还公开了该纳米级颗粒在制备适用于脂溶性药物化合物、抗肿瘤和／或药物耐受性增强并且毒性降低的药物组合物中的应用等。
【专利说明】纳米级颗粒型辅料
【技术领域】
[0001]本发明是中国专利申请第201210543504.9号分案的发明，享有2012年12月14
日的申请日。
[0002]本发明属于药物制剂领域，具体而言，本发明涉及纳米级颗粒，除了其药物理化性质得以提升外，其中辅料和紫杉醇等药物化合物甚至可以协同起效，并能提高药物的耐受性。另外，本发明还涉及该纳米级颗粒在制备适用于脂溶性药物化合物、抗肿瘤和/或药物耐受性增强并且毒性降低的药物组合物中的应用以及该纳米级颗粒的制备方法等。
【背景技术】
[0003]目前临床使用的大多数抗癌药物，如紫杉醇，Docetaxel(多西他赛)，阿霉素等在生理盐水中的溶解度比较差，无法在临床上直接使用，需要一些辅料配合。例如，Taxol?用聚氧乙烯蓖麻油和乙醇的混合物来配制紫杉醇，Taxotere? (泰索帝)用聚山梨酯和乙醇来配制，但是都会 引起强烈的副作用，如过敏反应、肾脏毒性、神经和心脏毒性等；最近的Abraxane?使用血清白蛋白为载体来配制紫杉醇，毒副作用也明显降低，然而血清白蛋白无论是提取还是DNA重组获得，纯化难度大，造成成本居高不下，一个剂量就需US $ 5，100，而一个疗程需要至少3剂，无法在我国推广。
[0004]日本专利JP2010126533A披露了，把紫杉醇与葡聚糖等共价缀合在一起，然后再通过非共价吸附在药物颗粒表面固定叶酸，以达到靶向抗肿瘤的目的，然而本发明人发现，紫杉醇作为药效活性化合物，与葡聚糖缀合，尤其是与葡聚糖上大量基团的副反应，由于化学结构的改变，会显著降低紫杉醇的药效，如果要消除结构相近的副产物，需要复杂的纯化过程(如层析过柱)，成本降不下来，而且叶酸吸附在表面，容易洗脱。中国专利20121002970.5公开了共价结合的叶酸-葡聚糖-氧化铁纳米颗粒，其具有体外靶向作用，其没有报道这种颗粒本身的抗肿瘤效果(实际基本没有)，而且本发明人发现其是先合成葡聚糖-氧化铁纳米颗粒，然后再进行叶酸缀合，合成效率低，且辅料对药物的适应性丧失。
[0005]为此，本发明人经过艰苦的研究，并结合一些运气，偶然发现通过一些连接基团将叶酸直接共价结合到葡聚糖上，虽然一定程度上丧失了叶酸对肿瘤的靶向性，目前其经测试体外没有抗肿瘤细胞的毒性(活性)，但是却能够很稳定地非共价地包裹住诸如紫杉醇等药物，复溶性和稳定性俱佳，且不必改变紫杉醇的化学结构，还无需使用复杂的纯化工艺(如，柱层析)。更令人意想不到的是，该辅料本身虽然没有体外抗肿瘤细胞的毒性，但是能够协同紫杉醇起效，提高体内的抗肿瘤的效果，并且能提高受试动物的药物耐受性，使得在临床使用中可以更大剂量地给药，从而进一步提高抗肿瘤效果。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供新的纳米级颗粒，其最终形成的药物组合物复溶性和稳定性俱佳，其制备无需复杂的纯化工艺，药物适应性良好，甚至其中的辅料能与紫杉醇等药物化合物协同起效，提高疗效以及药物耐受性。另外，本发明还提供了该纳米级颗粒在制备适用于脂溶性药物化合物、抗肿瘤和/或药物耐受性增强并且毒性降低的药物组合物中的应用以及该纳米级颗粒的制备方法等。
[0007]具体而言，在第I方面，本发明提供了纳米级颗粒，其由如下制备方法制备，该方法包括，
[0008](I)按流程式I合成琥珀酰化葡聚糖
[0009]
【权利要求】
1.纳米级颗粒，其由如下制备方法制备，该方法包括， (1)按流程式I合成琥珀酰化葡聚糖
2.权利要求1所述的纳米级颗粒，其中药物化合物是脂溶性药物化合物，优选是紫杉醇。
3.权利要求1所述的纳米级颗粒，其中步骤(4)中的药物化合物和叶酸-葡聚糖缀合物的重量比为0.5~2: I~10，优选为0.8~1.2: 3~6，如1: 4。
4.权利要求1所述的纳米级颗粒，其中步骤(1)中的葡聚糖的平均分子量为5~30KDa，优选为 10 ~20KDa，如 10KDa、15KDa 或 20KDa。
5.权利要求1所述的纳米级颗粒，其中所述方法包括，(1)取平均分子量20KDa、Mw/ Mn=L 3的葡聚糖10.0g溶于无水DMF中，搅拌20分钟形成澄清的溶液，然后加入1670mg琥珀酸酐和200.0mg4_ 二甲基氨基吡啶(DMAP)，快速搅拌至所有的固体溶解；置于室温下使得整个反应液反应24小时，之后将反应液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到白色的琥珀酰化葡聚糖； (2)取3g叶酸溶于120mLDMSO中，向其中加入930mg DCC和770mgNHS，反应液在室温暗室处放置12小时，然后副产物D⑶沉淀被过滤去除，再向反应液加入1000mL V:V=30: 70的丙酮/乙醚混合液并进行搅拌，收集黄色沉淀并用V:V=30: 70的丙酮/乙醚混合液洗涤后晾干；取2.78g晾干的黄色沉淀再溶于20mLDMS0中，取6.0lg乙二胺快速加入到该溶液中，将两者混合后在室温暗室处放置12小时，加入50mL V:V=30: 70的丙酮/乙醚混合液并进行搅拌，收集黄色沉淀并在DMSO溶液中重结晶提纯，获得胺基化叶酸类似物； (3)取步骤⑴制备的琥珀酰化葡聚糖2000mg溶于40ml无水DMF中，加入50mgDMAP和579.7mg DCC,在室温下放置12小时后，再加入2mL含300mg步骤(2)制备的胺基化叶酸类似物的EDC溶液，反应液在室温下搅拌12小时后，将反应液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到黄色的叶酸-葡聚糖缀合物； (4)取1000mg步骤(3)制备的叶酸-葡聚糖缀合物，溶于100mll5mM的磷酸缓冲液(pH=7.4)中，溶解后，置于磁力搅拌器上以400rpm搅拌；在搅拌过程中，将250mg紫杉醇溶于5mL乙醇中，逐滴加入到搅拌的溶液中，加完后置于FS-1型高速匀浆机中，以最大功率匀浆6次，每次1分钟，停2分钟，之后将匀浆液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于15mM pH=7.4的磷酸缓冲液中透析12小时以除去乙醇，然后加入2500mg甘露醇调节渗透压，并经过0.2 μ m滤膜除菌，即得叶酸-葡聚糖缀合物包裹的紫杉醇颗粒溶液。
6.权利要求1~5之任一所述的纳米级颗粒的制备方法，其包括权利要求1~5之任一中所述的制备步骤。
7.权利要求1~5之任一所述的纳米级颗粒在制备含有脂溶性药物化合物(优选是紫杉醇)的药物组合物(优选是注射剂，更优选是冻干粉针剂)中的应用。
8.权利要求1~5之任一所述的纳米级颗粒在制备抗肿瘤药物组合物(优选是注射剂，更优选是冻干粉针剂)中的应用。
9.权利要求8所述的应用，其中肿瘤是非小叶肺癌。
10.权利要求1~5之任一所述的纳米级颗粒在制备药物耐受性增强并且毒性降低的药物组合物(优选是注射剂，更优选是冻干粉针剂)中的应用。
【文档编号】A61K47/36GK103936880SQ201410064409
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2012年12月14日 优先权日:2012年12月14日
【发明者】李军, 游绍进, 陈琼 申请人:苏州友林生物科技有限公司